Uso da polpa desidratada do fruto de Mauritia flexuosa como suplemento ao diluente de congelação do sêmen caprino / Use of dehydrated pulp of Mauritia flexuosa fruit as supplement to freezing extender of goat semen

Objetivou-se avaliar a qualidade in vitro do sêmen caprino descongelado utilizando diluentesuplementado com a polpa desidratada do fruto de Mauritia flexuosa. O experimento foi dividido emduas etapas. Na primeira, foram utilizados 15 pools,fracionados em 13 tratamentos com diferentesconcentrações do extrato bruto. Os melhores resultados de viabilidade espermática obtidos na primeiraetapa foram utilizadas na segunda etapa (criopreservação). Para isto, foram formados dois gruposutilizando 15 pools, sendo um diluente constituído (TRIS + 7% glicerol + melhores concentrações doextrato bruto) e outro pelo diluente (TRIS + 2,5% gema de ovo + 7% glicerol + melhores concentraçõesdo extrato bruto). Na primeira etapa os grupos contendo baixa quantidade do extrato não diferiram dogrupo controle (P≤0,05). Todavia na segunda etapa, após descongelação, os grupos TRIS contendo 2,5%ou 0% de gema de ovo apresentaram diferença significativa, onde o grupo TB06GLGE foi superior aogrupo controle. Portanto, a polpa desidratada do fruto de Mauritia flexuosa,nas concentrações de 0,25% a1%, não atuou de forma benéfica sobre parâmetros espermáticos do sêmen caprino após acriopreservação/descongelação.(AU)

The objective was to evaluate the in vitro quality of the thawed goat semen using diluentsupplemented with the dehydrated pulp of the Mauritia flexuosa fruit. The experiment was divided intotwo stages. In the first, 15 fractionated pools were used in 13 treatments with different concentrations ofthe crude extract. The best results of sperm viability obtained in the first experimental stage were used inthe second experimental stage (cryopreservation). Afterwards, two groups were formed using 15 pools,one constituent (TRIS + 7% glycerol + best concentrations of the crude extract) and another by thediluent (TRIS + 2,5% egg yolk + 7% glycerol + best concentrations of the crude extract). In the firststage, the groups containing low amount of extract did not differ from the control group (P≤0.05).However, in the second stage, after thawing, TRIS groups containing 2.5% or 0% egg yolk presented asignificant difference, where the TB06GLGE group was superior to the control group. Therefore, thedehydrated fruit pulp of Mauritia flexuosa at concentrations of 0.25% to 1% did not benefit goat semenparameters after cryopreservation/thawing.(AU)

Uso da polpa desidratada do fruto de Mauritia flexuosa como suplemento ao diluente de congelação do sêmen caprino / Use of dehydrated pulp of Mauritia flexuosa fruit as supplement to freezing extender of goat semen

Objetivou-se avaliar a qualidade in vitro do sêmen caprino descongelado utilizando diluentesuplementado com a polpa desidratada do fruto de Mauritia flexuosa. O experimento foi dividido emduas etapas. Na primeira, foram utilizados 15 pools,fracionados em 13 tratamentos com diferentesconcentrações do extrato bruto. Os melhores resultados de viabilidade espermática obtidos na primeiraetapa foram utilizadas na segunda etapa (criopreservação). Para isto, foram formados dois gruposutilizando 15 pools, sendo um diluente constituído (TRIS + 7% glicerol + melhores concentrações doextrato bruto) e outro pelo diluente (TRIS + 2,5% gema de ovo + 7% glicerol + melhores concentraçõesdo extrato bruto). Na primeira etapa os grupos contendo baixa quantidade do extrato não diferiram dogrupo controle (P≤0,05). Todavia na segunda etapa, após descongelação, os grupos TRIS contendo 2,5%ou 0% de gema de ovo apresentaram diferença significativa, onde o grupo TB06GLGE foi superior aogrupo controle. Portanto, a polpa desidratada do fruto de Mauritia flexuosa,nas concentrações de 0,25% a1%, não atuou de forma benéfica sobre parâmetros espermáticos do sêmen caprino após acriopreservação/descongelação.

The objective was to evaluate the in vitro quality of the thawed goat semen using diluentsupplemented with the dehydrated pulp of the Mauritia flexuosa fruit. The experiment was divided intotwo stages. In the first, 15 fractionated pools were used in 13 treatments with different concentrations ofthe crude extract. The best results of sperm viability obtained in the first experimental stage were used inthe second experimental stage (cryopreservation). Afterwards, two groups were formed using 15 pools,one constituent (TRIS + 7% glycerol + best concentrations of the crude extract) and another by thediluent (TRIS + 2,5% egg yolk + 7% glycerol + best concentrations of the crude extract). In the firststage, the groups containing low amount of extract did not differ from the control group (P≤0.05).However, in the second stage, after thawing, TRIS groups containing 2.5% or 0% egg yolk presented asignificant difference, where the TB06GLGE group was superior to the control group. Therefore, thedehydrated fruit pulp of Mauritia flexuosa at concentrations of 0.25% to 1% did not benefit goat semenparameters after cryopreservation/thawing.

Sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken egg yolk as a functional test for sperm evaluation in dogs / Teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinha como avaliação funcional do sêmen de cães

During fertilization, spermatozoa interact with the zona pellucida (ZP) through the binding between the acrosome and proteins 2 and 3 (ZP2 and ZP3). The perivitelline membrane of chicken egg yolk is homologous to the mammalian ZP3, which allows the binding of sperm of several species. The aim of this study was to standardize and evaluate the efficiency of sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken eggs as a functional method for canine semen evaluation. For this purpose, nine post-thaw sperm samples were used, which were divided into two aliquots: the first was kept in water bath at 37ºC (live sample) and the second was submitted to cold shock to induce cellular damage (dead sample). The two aliquots were mixed on five proportions, corresponding to 0%, 25%, 50%, 75%, and 100% of viable cells, and the binding test was performed by analyzing the number of spermatozoa bonded to the perivitelline membrane by means of computerized assessment of sperm motility (CASA) or conventional microscopy. Additionally, samples were submitted to sperm motility analysis, evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, and sperm mitochondrial activity. The sperm-binding test to the perivitelline membrane of chicken egg yolk was considered a feasible sperm analysis test for both fertilizing capacity and overall sperm attributes evaluation, mainly when the analysis is performed by a conventional microscope, which expands its practicality to the majority of canine reproduction laboratories.(AU)

Durante a fecundação, os espermatozoides interagem com a zona pelúcida (ZP) por meio da ligação entre o acrossomo e as proteínas 2 e 3 (ZP2 e ZP3). A membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas é homóloga à ZP3 de mamíferos, possibilitando a ligação espermática de diversas espécies. Este trabalho padronizou e avaliou a eficiência do teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas como avaliação funcional do sêmen de cães. Para tal, foram utilizadas nove amostras seminais previamente criopreservadas. Cada amostra foi dividida em duas alíquotas: a primeira foi mantida em banho-maria à 37ºC (vivos) e a segunda submetida a choque térmico com o intuito de induzir dano celular (mortos). As duas alíquotas foram misturadas, correspondendo a 0, 25, 50, 75 e 100% de células viáveis. As amostras foram avaliadas quanto ao número de espermatozoides ligados à membrana perivitelínica por meio da análise computadorizada da motilidade (CASA) ou microscopia convencional. Ademais, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade espermática, integridade das membranas acrossomal e plasmática e atividade mitocondrial espermática. O teste de ligação espermática à membrana perivitelínica de ovos de galinha foi considerado um teste de análise seminal exequível tanto para avaliar a capacidade fecundante dos espermatozoides como atributos seminais gerais, especialmente quando realizado em microscopia convencional, expandindo sua praticidade para a maioria dos laboratórios de análise de sêmen canino.(AU)

Sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken egg yolk as a functional test for sperm evaluation in dogs / Teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinha como avaliação funcional do sêmen de cães

During fertilization, spermatozoa interact with the zona pellucida (ZP) through the binding between the acrosome and proteins 2 and 3 (ZP2 and ZP3). The perivitelline membrane of chicken egg yolk is homologous to the mammalian ZP3, which allows the binding of sperm of several species. The aim of this study was to standardize and evaluate the efficiency of sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken eggs as a functional method for canine semen evaluation. For this purpose, nine post-thaw sperm samples were used, which were divided into two aliquots: the first was kept in water bath at 37ºC (live sample) and the second was submitted to cold shock to induce cellular damage (dead sample). The two aliquots were mixed on five proportions, corresponding to 0%, 25%, 50%, 75%, and 100% of viable cells, and the binding test was performed by analyzing the number of spermatozoa bonded to the perivitelline membrane by means of computerized assessment of sperm motility (CASA) or conventional microscopy. Additionally, samples were submitted to sperm motility analysis, evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, and sperm mitochondrial activity. The sperm-binding test to the perivitelline membrane of chicken egg yolk was considered a feasible sperm analysis test for both fertilizing capacity and overall sperm attributes evaluation, mainly when the analysis is performed by a conventional microscope, which expands its practicality to the majority of canine reproduction laboratories.(AU)

Durante a fecundação, os espermatozoides interagem com a zona pelúcida (ZP) por meio da ligação entre o acrossomo e as proteínas 2 e 3 (ZP2 e ZP3). A membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas é homóloga à ZP3 de mamíferos, possibilitando a ligação espermática de diversas espécies. Este trabalho padronizou e avaliou a eficiência do teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas como avaliação funcional do sêmen de cães. Para tal, foram utilizadas nove amostras seminais previamente criopreservadas. Cada amostra foi dividida em duas alíquotas: a primeira foi mantida em banho-maria à 37ºC (vivos) e a segunda submetida a choque térmico com o intuito de induzir dano celular (mortos). As duas alíquotas foram misturadas, correspondendo a 0, 25, 50, 75 e 100% de células viáveis. As amostras foram avaliadas quanto ao número de espermatozoides ligados à membrana perivitelínica por meio da análise computadorizada da motilidade (CASA) ou microscopia convencional. Ademais, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade espermática, integridade das membranas acrossomal e plasmática e atividade mitocondrial espermática. O teste de ligação espermática à membrana perivitelínica de ovos de galinha foi considerado um teste de análise seminal exequível tanto para avaliar a capacidade fecundante dos espermatozoides como atributos seminais gerais, especialmente quando realizado em microscopia convencional, expandindo sua praticidade para a maioria dos laboratórios de análise de sêmen canino.(AU)

Influência do tempo de resfriamento e soluções diluentes sobre a congelabilidade do sêmen de Prochilodus brevis / Influence of cooling time and diluents on the freezability of Prochilodus brevis semen

Background: Prochilodus brevis is a rheophilic fish of economic and ecological importance. However, anthropic action has made its population vulnerable. Thus, the development of reproductive biotechnologies, such as seminal conservation, is necessary to subsidize their fish farming. However, seminal collections are often performed in places with few laboratory resources, demanding studies to determine the maximum time for which sperm can be cooled, as well as its process until frozen. Thus, the present study aimed to evaluate the influence of cooling time and the presence of dilution solutions on cryopreservation of P. brevis semen.Material, Methods & Results: After seminal collection, nine pools were formed and analyzed for seminal pH, concentration, membrane integrity, morphology and spermatic kinetics - motility, curvilinear velocity (VCL), average path velocity (VAP) and straight line velocity (VSL). After the analysis of the pools in natura (control 1), they were processed as follows: 1)- immediate freezing (control 2); 2)- cooling: undiluted, diluted in coconut water powder (ACP-104) or diluted in 5% glucose, followed by cooling at different times (6, 12, 24 or 48 h); 3)- Post-refrigeration freezing: the pools were diluted in their respective diluents and 10% dimethyl sulfoxide. After 15 days, the samples were thawed and analyzed for the aforementioned parameters. For the cooled and post-thawed semen, a completely randomized design with 2 (diluent × cooling time) and 3 (storage form × cooling time and storage form × diluent) factors, respectively, was utilized. ANOVA and Dunnett tests were applied to compare the means. In case of seminal cooling, there was no difference (P > 0.05) in sperm motility between control 1 and the undiluted and diluted treatments in ACP-104 for up to 24 h. After 48 h, only the VCL of the sample diluted in ACP-104 was similar (P > 0.05) to that of control 1.[...](AU)

Influência do tempo de resfriamento e soluções diluentes sobre a congelabilidade do sêmen de Prochilodus brevis / Influence of cooling time and diluents on the freezability of Prochilodus brevis semen

Background: Prochilodus brevis is a rheophilic fish of economic and ecological importance. However, anthropic action has made its population vulnerable. Thus, the development of reproductive biotechnologies, such as seminal conservation, is necessary to subsidize their fish farming. However, seminal collections are often performed in places with few laboratory resources, demanding studies to determine the maximum time for which sperm can be cooled, as well as its process until frozen. Thus, the present study aimed to evaluate the influence of cooling time and the presence of dilution solutions on cryopreservation of P. brevis semen.Material, Methods & Results: After seminal collection, nine pools were formed and analyzed for seminal pH, concentration, membrane integrity, morphology and spermatic kinetics - motility, curvilinear velocity (VCL), average path velocity (VAP) and straight line velocity (VSL). After the analysis of the pools in natura (control 1), they were processed as follows: 1)- immediate freezing (control 2); 2)- cooling: undiluted, diluted in coconut water powder (ACP-104) or diluted in 5% glucose, followed by cooling at different times (6, 12, 24 or 48 h); 3)- Post-refrigeration freezing: the pools were diluted in their respective diluents and 10% dimethyl sulfoxide. After 15 days, the samples were thawed and analyzed for the aforementioned parameters. For the cooled and post-thawed semen, a completely randomized design with 2 (diluent × cooling time) and 3 (storage form × cooling time and storage form × diluent) factors, respectively, was utilized. ANOVA and Dunnett tests were applied to compare the means. In case of seminal cooling, there was no difference (P > 0.05) in sperm motility between control 1 and the undiluted and diluted treatments in ACP-104 for up to 24 h. After 48 h, only the VCL of the sample diluted in ACP-104 was similar (P > 0.05) to that of control 1.[...]

Biotécnicas aplicadas a reprodução de ciprinídeos / Biotechs applied the reproduction of cyprinids

Esta revisão relata as variações de cada etapa que abrange o processo de crioprervação seminal e fertilização assistida artificial em ciprinídeos. Os diluidores mais utilizados para a criopreservação do sêmen de carpa são uma combinação de sais e açucares associados aos crioprotetores DMSO ou metanol. Para o armazenamento em nitrogênio líquido as amostras podem ser envasadas em palhetas de diferentes volumes e congeladas em caixas térmicas de poliestireno, refrigeradores programáveis, dry shippers ou botijões criogênicos. Após o descongelamento, uma alíquota do sêmen criopreservado é retirada para o cálculo da dose inseminante e realização da fertilização assistida artificial. Em seguida, os ovos fertilizados são tratados com uréia, NaCl e ácido tânico e transferidos para um sistema de incubação. Diante de uma variedade de protocolos relatados pela literatura, ainda é fundamental o aperfeiçoamento continuado destas biotécnicas para permitir o aprimoramento dos programas de reprodução de ciprinídeos.

This review reports the variations of each stage which covers the process of sperm cryopreservation and artificial fertilization in cyprinids. The most commonly used extenders for sperm cryopreservation of carp are a combination of salts and sugars associated with DMSO or methanol. The samples can be packaged in straws of different volumes for storage in liquid nitrogen and frozen in styrofoam boxes, computer-controlled freezer, dry shippers or cryogenic vessel. After thawing an aliquot of cryopreserved semen is taken for the calculation of insemination dose and realization of artificial assisted fertilization. Then fertilized eggs are treated with urea, NaCl and tannic acid and transferred to incubation system. Faced with a variety of protocols reported in the literature, it is still essential to continued improvement of these biotechnologies to enable the improvement of breeding programs for cyprinids.

Biotécnicas aplicadas a reprodução de ciprinídeos / Biotechs applied the reproduction of cyprinids

Esta revisão relata as variações de cada etapa que abrange o processo de crioprervação seminal e fertilização assistida artificial em ciprinídeos. Os diluidores mais utilizados para a criopreservação do sêmen de carpa são uma combinação de sais e açucares associados aos crioprotetores DMSO ou metanol. Para o armazenamento em nitrogênio líquido as amostras podem ser envasadas em palhetas de diferentes volumes e congeladas em caixas térmicas de poliestireno, refrigeradores programáveis, dry shippers ou botijões criogênicos. Após o descongelamento, uma alíquota do sêmen criopreservado é retirada para o cálculo da dose inseminante e realização da fertilização assistida artificial. Em seguida, os ovos fertilizados são tratados com uréia, NaCl e ácido tânico e transferidos para um sistema de incubação. Diante de uma variedade de protocolos relatados pela literatura, ainda é fundamental o aperfeiçoamento continuado destas biotécnicas para permitir o aprimoramento dos programas de reprodução de ciprinídeos.(AU)

This review reports the variations of each stage which covers the process of sperm cryopreservation and artificial fertilization in cyprinids. The most commonly used extenders for sperm cryopreservation of carp are a combination of salts and sugars associated with DMSO or methanol. The samples can be packaged in straws of different volumes for storage in liquid nitrogen and frozen in styrofoam boxes, computer-controlled freezer, dry shippers or cryogenic vessel. After thawing an aliquot of cryopreserved semen is taken for the calculation of insemination dose and realization of artificial assisted fertilization. Then fertilized eggs are treated with urea, NaCl and tannic acid and transferred to incubation system. Faced with a variety of protocols reported in the literature, it is still essential to continued improvement of these biotechnologies to enable the improvement of breeding programs for cyprinids.(AU)

Efeito de diferentes taxas de diluição e protocolos de congelação sobre a cinética e morfologia de espermatozoides de carpa comum (Cyprinus carpio) criopreservados em água de coco em pó (ACP 104) / Effect of different rates of dilution and freezing protocols on the kinetics and morphology of sperm of common carp (Cyprinus carpio) cryopreserved in powdered coconut water (ACP - 104)

A carpa comum, Cyprinus carpio, é considerada uma das espécies domesticadas com grande tolerância e resistência a uma ampla variedade de habitats aquáticos, tendo sida introduzida no nordeste do Brasil pelo Departamento Nacional de Obras Contras às Secas (DNOCS) no ano de 1977. A carpa comum é uma espécie de alto valor comercial, forte apelo culinário e esportivo, sendo uma das espécies mais cultivadas em todo o mundo. O objetivo desse trabalho foi avaliar um protocolo de criopreservação de sêmen de carpa comum em ACP-104 e CCSE2 (NaCl e sacarose) utilizando dois métodos de congelação. A partir do sêmen coletado de 30 machos maduros foram determinadas as características seminais. Para a avaliação da concentração espermática, o sêmen fresco foi diluído na proporção de 1:4000 em solução de citrato-formol 4%. Para verificar o efeito dos diluentes e métodos de congelação foram formados onze pools e diluídos em ACP-104 + DMSO 10% ou CCSE2 + DMSO 10%, na taxa de diluição de 1:3 e envasados em palhetas de 0,25 mL. Para cada tratamento resultante foram congeladas quatro palhetas em vapores de nitrogênio líquido em dry shipper ou caixa térmica de poliestireno, sendo depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. Para verificar o efeito das taxas de diluição os pools também foram diluídos em ACP-104 + DMSO 10% e submetido às diluições de 1:1 e 1:3. As amostras foram envasadas em palhetas de mesmo volume e número de replicatas, sendo congeladas em vapores de nitrogênio líquido em caixa térmica de poliestireno e depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. O sêmen foi descongelado em banho Maria a 25C por 30 segundos e os parâmetros de motilidade e velocidade seminal foram avaliados com uso do Sperm Class Analyser (SCA). A análise das patologias espermáticas do sêmen fresco, diluído em 1:500, e pós-descongelado, diluído em 1:250 em citrato- formol 4%, foram realizados utilizando o corante azul de bromofenol. Os dados foram agrupados como média desvio padrão e comparados utilizando ANOVA e teste de Games-Howell, adotando um nível de significância de 0,05. Não houve diferença significativa (p<0,05) entre os diluentes, os métodos de congelação e as taxas de diluição empregadas sobre os parâmetros espermáticos e morfológicos de sêmen pós-descongelação de carpa comum. Embora todos os parâmetros espermáticos e morfológicos analisados entre os tratamentos tenham apresentado diferença significativa (p<0,05) em relação ao sêmen fresco (controle), os resultados foram favoráveis para a criopreservação do sêmen de Cyprinus carpio.

The common carp, Cyprinus carpio, is considered one of domesticated species with high tolerance and resistance to a wide variety of aquatic habitats, being introduced in northeastern Brazil by the National Department of Works Cons Drought (DNOCS) in 1977. The common carp is a species of high commercial value, strong appeal culinary and sports, one of the most cultivated species in the world. The aim of this study was to evaluate a protocol for semen cryopreservation of common carp in ACP-104 and CCSE2 using two freezing methods. The semen collected from 30 sexually mature males were analysed seminal characteristics.The fresh semen was diluted 1:4000 in solution in the proportion of citrate-formaldehyde 4% for the evaluation of sperm concentration. Eleven pools were diluted in 10% DMSO combined with ACP-104 or CCSE2 the dilution rate of 1:3 using 0.25 ml straws to determine the effect of diluent and freezing methods. For each treatment resulting four straws were frozen in liquid nitrogen vapors in dry shipper or styrofoam cooler, and later transferred to cryogenic cylinders. The pools were also diluted in 10% DMSO and ACP-104 at dilutions of 1:1 and 1:3 to check the effect of dilution rates. These samples were packaged into straws same volume and number of replicates, and frozen in liquid nitrogen vapors in styrofoam cooler and then transferred to cryogenic cylinders. The semen was thawed in a water bath at 25 C for 30 seconds and evaluated parameters of motility and velocity through the seminal program computerized semen analysis (SCA). The analysis of sperm pathologies of fresh semen, diluted 1:500, and post-thawed, diluted 1:250 in citrate-formaldehyde 4%, were performed using the bromophenol blue dye. All data were expressed as mean standard deviation and compared using ANOVA and Games-Howell test, considered at 5% of significance level. No significant difference (p<0.05) between the two extenders, two freezing methods and the two dilution rates on sperm and morphological parameters post-thawed semen of common carp. Although all sperm and morphological parameters analyzed between treatments showed significant differences (p<0.05) compared to fresh semen (control), they were favorable results for the cryopreservation of semen of Cyprinus carpio.

Efeito da glutationa reduzida (GSH) na criopreservação de espermatozóides da espécie canina: avaliação in vitro e in vivo / Effect of reduced glutathione (GSH) in the cryopreservation of canine spermatozoa: in vitro and in vivo evaluation

O presente experimento teve por objetivos comparar a adição de diferentes concentrações de glutationa reduzida (GSH) no diluidor para criopreservação do sêmen de cães, considerando-se as características morfofuncionais pós-descongelação; e verificar os índices de gestação e número de filhotes por ninhada obtidos a partir da inseminação artificial intra-uterina, por cateterização cervical endoscópica, com sêmen criopreservado contendo diferentes concentrações de glutationa. Na primeira fase do experimento, foram realizadas duas colheitas seminais de 11 reprodutores com intervalo mínimo de uma semana entre os procedimentos. Foram empregadas três concentrações diferentes de glutationa reduzida (0, 10 e 20 mM) ao meio de congelação tris-gema-citrato. O sêmen fresco, refrigerado, glicerolizado e descongelado foram avaliados por citometria de fluxo com uso de sondas específicas para determinar a integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial e fragmentação de DNA. Também foi realizada dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) para avaliar os níveis de estresse oxidativo. Na segunda fase do experimento, foram inseminadas 6 fêmeas, alocadas em dois grupos: inseminação intra-uterina com sêmen congelado em diluidor contendo 10 mM (IA-GSH10, n=3) e sem a adição de glutationa (IA-GSH0, n=3). O acompanhamento do ciclo estral foi realizado por citologia vaginal, vaginoscopia, dosagem de progesterona e LH. Foram realizadas duas inseminações no 5o e 6o dias após pico de LH e a gestação diagnosticada aos 30 dias. A adição de 10 e 20 mM de GSH ao diluidor para criopreservação promoveu queda na motilidade espermática nas amostras descongeladas, sendo o maior prejuízo observado na concentração de 20 mM. Foi detectada maior porcentagem de acrossomos íntegros nos grupos tratados. A glicerolização e, principalmente, a exposição do espermatozóide ao nitrogênio líquido e posterior descongelação foram responsáveis pela diminuição da motilidade espermática, em consequência ao prejuízo da função mitocondrial promovida pela produção de radicais livres durante o processamento seminal. A gestação foi diagnosticada em duas fêmeas do grupo IA-GSH10 e duas do grupo IA-GSH0. Em conclusão, a adição de 10 e 20 mM de GSH ao diluidor para criopreservação seminal não promoveu os efeitos protetores esperados na espécie canina, sendo a concentração de 20 mM responsável por maiores prejuízos à amostra seminal. A adição de 10 mM de GSH ao diluidor para criopreservação seminal na espécie canina manteve o índice de fertilidade semelhante ao obtido com sêmen criopreservado sem a suplementação antioxidante

The present experiment aimed to compare the addition of different concentrations of reduced glutathione (GSH) on frozen-thawed canine semen, considering the morphofunctional characteristics; and to verify the pregnancy rate and number of puppies per litter obtained from intrauterine insemination by endoscopic catheterization of the cervix, with frozen-thawed semen containing different concentrations of glutathione. During the first phase of the experiment, two seminal samples collected weekly from 11 mature dogs were used. Three different concentrations of reduced glutathione (0, 10 and 20 mM) were supplemented in a tris-citrate egg yolk extender. The fresh, chilled, glycerolized and post-thawed semen were assessed by flow cytometry using specific probes to determine plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay was also performed to assess the occurrence of oxidative stress. In the second phase of the experiment, six canine females were allocated into two groups: intrauterine insemination with frozen-thawed semen containing 10 mM GSH (IA-GSH10, n = 3) and without the addition of glutathione (IA-GSH0, n = 3). Bitches were monitored by vaginal cytology, vaginoscopy, progesterone and LH assays. Two inseminations were performed on days 5 and 6 post LH peak. We verified that the addition of 10 and 20 mM of GSH to semen extender promoted a decrease in post-thaw sperm motility, as well as a higher damage degree at the 20 mM concentration. We also detected a higher percentage of acrossomal integrity in treated groups. At glycerolization and moreover, the sperm exposure to liquid nitrogen and further thawing, were responsible for the decrease in sperm motility, due to the loss of mitochondrial function through the free radicals production. Gestation was diagnosed in two female from IA-GSH10 group and two bitches of the IA-GSH0 group. In conclusion, we did not observe the expected protective effects of the addition of 10 and 20 mM GSH to semen extender. Furthermore, the concentration of 20 mM was responsible for the more extreme damage to semen sample. The supplementation of 10 mM GSH to semen extender for cryopreservation maintained the fertility rates similar to the ones observed for cryopreservation without antioxidant supplementation in dogs

Desafios para o desenvolvimento da tecnologia da criopreservação de sêmen felino / Challenges for the development of feline semen cryopreservation technology

O objetivo deste trabalho é levantar os pontos mais importantes que podem comprometer o resultado final do procedimento de criopreservação seminal em felinos.(AU)

The aim of this work is to raise the most important points that can affect the outcome of semen cryopreservation procedure in cats.(AU)

Desafios para o desenvolvimento da tecnologia da criopreservação de sêmen felino / Challenges for the development of feline semen cryopreservation technology

O objetivo deste trabalho é levantar os pontos mais importantes que podem comprometer o resultado final do procedimento de criopreservação seminal em felinos.

The aim of this work is to raise the most important points that can affect the outcome of semen cryopreservation procedure in cats.