Effects of Gundelia tournefortii L. on biochemical parameters, antioxidant activities and DNA damage in a rat model of experimental obesity / Efeitos de Gundelia tournefortii L. em parâmetros bioquímicos, atividades antioxidantes e danos ao DNA em um modelo de obesidade experimental de rato

Abstract The present study was designed to investigate the effects of Gundelia tournefortii L. plant extract on different tissues in terms of DNA damage, biochemical and antioxidant parameter values in rats with high-calorie diets. With this aim, Wistar albino male rats were divided into 4 groups containing 6 rats each and the study was completed over 12 weeks duration. At the end of the implementation process over the 12 weeks, rats were sacrificed and blood and tissue samples were obtained. Analyses were performed on blood and tissue samples. According to results for DNA damage (8-OHdG), in brain tissue the OG2 group was significantly reduced compared to the NC group. For MDA results in liver tissue, OG1 and OG2 groups were determined to increase by a significant degree compared to the control group, while the OG2 group was also increased significantly compared to the obese group. In terms of the other parameters, comparison between the groups linked to consumption of a high calorie diet (HCD) and administration of Gundelia tournefortii L. in terms of antioxidant activities and serum samples obtained statistically significant results. Gundelia tournefortii L. plant extracts had effects that may be counted as positive on antioxidant parameter activity and were especially identified to improve DNA damage and MDA levels in brain tissues. Additionally, consumption of Gundelia tournefortii L. plant extract in the diet may have antiobesity effects; thus, it should be evaluated for use as an effective weight-loss method and as a new therapeutic agent targeting obesity.

Resumo O presente estudo foi desenhado para investigar os efeitos do extrato da planta Gundelia tournefortii L. em diferentes tecidos em termos de danos ao DNA, valores de parâmetros bioquímicos e antioxidantes em ratos com dietas hipercalóricas. Com esse objetivo, ratos Wistar albinos machos foram divididos em 4 grupos contendo 6 ratos cada e o estudo foi concluído ao longo de 12 semanas de duração. No final desse processo de implementação, os ratos foram sacrificados e amostras de sangue e tecido foram obtidas. As análises foram realizadas em amostras de sangue e tecido. De acordo com os resultados para danos ao DNA (8-OHdG), no tecido cerebral o grupo OG2 foi significativamente reduzido em comparação com o grupo NC. Para os resultados de MDA no tecido hepático, os grupos OG1 e OG2 aumentaram significativamente em comparação ao grupo controle, enquanto o grupo OG2 também aumentou significativamente em comparação ao grupo obeso. Quanto aos demais parâmetros, a comparação entre os grupos ligados ao consumo de dieta hipercalórica (DC) e à administração de Gundelia tournefortii L. em termos de atividades antioxidantes e amostras de soro obteve resultados estatisticamente significativos. Os extratos de plantas de Gundelia tournefortii L. tiveram efeitos que podem ser considerados positivos na atividade dos parâmetros antioxidantes e foram especialmente identificados para melhorar os danos ao DNA e os níveis de MDA nos tecidos cerebrais. Além disso, o consumo de extrato vegetal de Gundelia tournefortii L. na dieta pode ter efeitos antiobesidade; portanto, deve ser avaliado para uso como um método eficaz de perda de peso e como um novo agente terapêutico voltado para a obesidade.

In vitro cytotoxicity of curcuminoids against head and neck cancer HNO97 cell line / Citotoxicidade in vitro de curcuminoides contra a linhagem de células HNO97 de câncer de cabeça e pescoço

Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a malignant tumour of Head and Neck Cancer (HNC). The recent therapeutic approaches used to treat cancer have adverse side effects. The natural agents exhibiting anticancer activities are generally considered to have a robust therapeutic potential. Curcuminoids, one of the major active compounds of the turmeric herb, are used as a therapeutic agent for several diseases including cancer. In this study, the cytotoxicity of curcuminoids was investigated against OSCC cell line HNO97. Our data showed that curcuminoids significantly inhibits the proliferation of HNO97 in a time and dose-dependent manner (IC50=35 μM). Cell cycle analysis demonstrated that curcuminoids increased the percentage of G2/M phase cell populations in the treated groups. Treating HNO97 cells with curcuminoids led to cell shrinking and increased detached cells, which are the typical appearance of apoptotic cells. Moreover, flow cytometry analysis revealed that curcuminoids significantly induced apoptosis in a time-dependent manner. Furthermore, as a response to curcuminoids treatment, comet tails were formed in cell nuclei due to the induction of DNA damage. Curcuminoids treatment reduced the colony formation capacity of HNO97 cells and induced morphological changes. Overall, these findings demonstrate that curcuminoids can in vitro inhibit HNC proliferation and metastasis and induce apoptosis.

O carcinoma de células escamosas oral (OSCC) é um tumor maligno do câncer de cabeça e pescoço (HNC). As recentes abordagens terapêuticas usadas para tratar o câncer têm efeitos colaterais adversos. Os agentes naturais que exibem atividades anticâncer são geralmente considerados como tendo um potencial terapêutico robusto. Curcuminoides, um dos principais compostos ativos da erva cúrcuma, são usados como agente terapêutico para várias doenças, incluindo câncer. Neste estudo, a citotoxicidade dos curcuminoides foi investigada contra a linha de células OSCC HNO97. Nossos dados mostraram que os curcuminoides inibem significativamente a proliferação de HNO97 de forma dependente do tempo e da dose (IC50 = 35 μM). A análise do ciclo celular demonstrou que os curcuminoides aumentaram a porcentagem de populações de células da fase G2 / M nos grupos tratados. O tratamento das células HNO97 com curcuminoides levou ao encolhimento celular e ao aumento das células destacadas, que são a aparência típica das células apoptóticas. Além disso, a análise de citometria de fluxo revelou que os curcuminoides induziram significativamente a apoptose de uma maneira dependente do tempo. Além disso, em resposta ao tratamento com curcuminoides, caudas de cometa foram formadas nos núcleos das células devido à indução de danos ao DNA. O tratamento com curcuminoides reduziu a capacidade de formação de colônias das células HNO97 e induziu alterações morfológicas. No geral, esses achados demonstram que os curcuminoides podem inibir in vitro a proliferação e metástase de HNC e induzir apoptose.

Effects of Gundelia tournefortii L. on biochemical parameters, antioxidant activities and DNA damage in a rat model of experimental obesity / Efeitos de Gundelia tournefortii L. em parâmetros bioquímicos, atividades antioxidantes e danos ao DNA em um modelo de obesidade experimental de rato

The present study was designed to investigate the effects of Gundelia tournefortii L. plant extract on different tissues in terms of DNA damage, biochemical and antioxidant parameter values in rats with high-calorie diets. With this aim, Wistar albino male rats were divided into 4 groups containing 6 rats each and the study was completed over 12 weeks duration. At the end of the implementation process over the 12 weeks, rats were sacrificed and blood and tissue samples were obtained. Analyses were performed on blood and tissue samples. According to results for DNA damage (8-OHdG), in brain tissue the OG2 group was significantly reduced compared to the NC group. For MDA results in liver tissue, OG1 and OG2 groups were determined to increase by a significant degree compared to the control group, while the OG2 group was also increased significantly compared to the obese group. In terms of the other parameters, comparison between the groups linked to consumption of a high calorie diet (HCD) and administration of Gundelia tournefortii L. in terms of antioxidant activities and serum samples obtained statistically significant results. Gundelia tournefortii L. plant extracts had effects that may be counted as positive on antioxidant parameter activity and were especially identified to improve DNA damage and MDA levels in brain tissues. Additionally, consumption of Gundelia tournefortii L. plant extract in the diet may have antiobesity effects; thus, it should be evaluated for use as an effective weight-loss method and as a new therapeutic agent targeting obesity.

O presente estudo foi desenhado para investigar os efeitos do extrato da planta Gundelia tournefortii L. em diferentes tecidos em termos de danos ao DNA, valores de parâmetros bioquímicos e antioxidantes em ratos com dietas hipercalóricas. Com esse objetivo, ratos Wistar albinos machos foram divididos em 4 grupos contendo 6 ratos cada e o estudo foi concluído ao longo de 12 semanas de duração. No final desse processo de implementação, os ratos foram sacrificados e amostras de sangue e tecido foram obtidas. As análises foram realizadas em amostras de sangue e tecido. De acordo com os resultados para danos ao DNA (8-OHdG), no tecido cerebral o grupo OG2 foi significativamente reduzido em comparação com o grupo NC. Para os resultados de MDA no tecido hepático, os grupos OG1 e OG2 aumentaram significativamente em comparação ao grupo controle, enquanto o grupo OG2 também aumentou significativamente em comparação ao grupo obeso. Quanto aos demais parâmetros, a comparação entre os grupos ligados ao consumo de dieta hipercalórica (DC) e à administração de Gundelia tournefortii L. em termos de atividades antioxidantes e amostras de soro obteve resultados estatisticamente significativos. Os extratos de plantas de Gundelia tournefortii L. tiveram efeitos que podem ser considerados positivos na atividade dos parâmetros antioxidantes e foram especialmente identificados para melhorar os danos ao DNA e os níveis de MDA nos tecidos cerebrais. Além disso, o consumo de extrato vegetal de Gundelia tournefortii L. na dieta pode ter efeitos antiobesidade; portanto, deve ser avaliado para uso como um método eficaz de perda de peso e como um novo agente terapêutico voltado para a obesidade.

In vitro cytotoxicity of curcuminoids against head and neck cancer HNO97 cell line

Abstract Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a malignant tumour of Head and Neck Cancer (HNC). The recent therapeutic approaches used to treat cancer have adverse side effects. The natural agents exhibiting anticancer activities are generally considered to have a robust therapeutic potential. Curcuminoids, one of the major active compounds of the turmeric herb, are used as a therapeutic agent for several diseases including cancer. In this study, the cytotoxicity of curcuminoids was investigated against OSCC cell line HNO97. Our data showed that curcuminoids significantly inhibits the proliferation of HNO97 in a time and dose-dependent manner (IC50=35 M). Cell cycle analysis demonstrated that curcuminoids increased the percentage of G2/M phase cell populations in the treated groups. Treating HNO97 cells with curcuminoids led to cell shrinking and increased detached cells, which are the typical appearance of apoptotic cells. Moreover, flow cytometry analysis revealed that curcuminoids significantly induced apoptosis in a time-dependent manner. Furthermore, as a response to curcuminoids treatment, comet tails were formed in cell nuclei due to the induction of DNA damage. Curcuminoids treatment reduced the colony formation capacity of HNO97 cells and induced morphological changes. Overall, these findings demonstrate that curcuminoids can in vitro inhibit HNC proliferation and metastasis and induce apoptosis.

Resumo O carcinoma de células escamosas oral (OSCC) é um tumor maligno do câncer de cabeça e pescoço (HNC). As recentes abordagens terapêuticas usadas para tratar o câncer têm efeitos colaterais adversos. Os agentes naturais que exibem atividades anticâncer são geralmente considerados como tendo um potencial terapêutico robusto. Curcuminoides, um dos principais compostos ativos da erva cúrcuma, são usados como agente terapêutico para várias doenças, incluindo câncer. Neste estudo, a citotoxicidade dos curcuminoides foi investigada contra a linha de células OSCC HNO97. Nossos dados mostraram que os curcuminoides inibem significativamente a proliferação de HNO97 de forma dependente do tempo e da dose (IC50 = 35 M). A análise do ciclo celular demonstrou que os curcuminoides aumentaram a porcentagem de populações de células da fase G2 / M nos grupos tratados. O tratamento das células HNO97 com curcuminoides levou ao encolhimento celular e ao aumento das células destacadas, que são a aparência típica das células apoptóticas. Além disso, a análise de citometria de fluxo revelou que os curcuminoides induziram significativamente a apoptose de uma maneira dependente do tempo. Além disso, em resposta ao tratamento com curcuminoides, caudas de cometa foram formadas nos núcleos das células devido à indução de danos ao DNA. O tratamento com curcuminoides reduziu a capacidade de formação de colônias das células HNO97 e induziu alterações morfológicas. No geral, esses achados demonstram que os curcuminoides podem inibir in vitro a proliferação e metástase de HNC e induzir apoptose.

Effects of Gundelia tournefortii L. on biochemical parameters, antioxidant activities and DNA damage in a rat model of experimental obesity

Abstract The present study was designed to investigate the effects of Gundelia tournefortii L. plant extract on different tissues in terms of DNA damage, biochemical and antioxidant parameter values in rats with high-calorie diets. With this aim, Wistar albino male rats were divided into 4 groups containing 6 rats each and the study was completed over 12 weeks duration. At the end of the implementation process over the 12 weeks, rats were sacrificed and blood and tissue samples were obtained. Analyses were performed on blood and tissue samples. According to results for DNA damage (8-OHdG), in brain tissue the OG2 group was significantly reduced compared to the NC group. For MDA results in liver tissue, OG1 and OG2 groups were determined to increase by a significant degree compared to the control group, while the OG2 group was also increased significantly compared to the obese group. In terms of the other parameters, comparison between the groups linked to consumption of a high calorie diet (HCD) and administration of Gundelia tournefortii L. in terms of antioxidant activities and serum samples obtained statistically significant results. Gundelia tournefortii L. plant extracts had effects that may be counted as positive on antioxidant parameter activity and were especially identified to improve DNA damage and MDA levels in brain tissues. Additionally, consumption of Gundelia tournefortii L. plant extract in the diet may have antiobesity effects; thus, it should be evaluated for use as an effective weight-loss method and as a new therapeutic agent targeting obesity.

Resumo O presente estudo foi desenhado para investigar os efeitos do extrato da planta Gundelia tournefortii L. em diferentes tecidos em termos de danos ao DNA, valores de parâmetros bioquímicos e antioxidantes em ratos com dietas hipercalóricas. Com esse objetivo, ratos Wistar albinos machos foram divididos em 4 grupos contendo 6 ratos cada e o estudo foi concluído ao longo de 12 semanas de duração. No final desse processo de implementação, os ratos foram sacrificados e amostras de sangue e tecido foram obtidas. As análises foram realizadas em amostras de sangue e tecido. De acordo com os resultados para danos ao DNA (8-OHdG), no tecido cerebral o grupo OG2 foi significativamente reduzido em comparação com o grupo NC. Para os resultados de MDA no tecido hepático, os grupos OG1 e OG2 aumentaram significativamente em comparação ao grupo controle, enquanto o grupo OG2 também aumentou significativamente em comparação ao grupo obeso. Quanto aos demais parâmetros, a comparação entre os grupos ligados ao consumo de dieta hipercalórica (DC) e à administração de Gundelia tournefortii L. em termos de atividades antioxidantes e amostras de soro obteve resultados estatisticamente significativos. Os extratos de plantas de Gundelia tournefortii L. tiveram efeitos que podem ser considerados positivos na atividade dos parâmetros antioxidantes e foram especialmente identificados para melhorar os danos ao DNA e os níveis de MDA nos tecidos cerebrais. Além disso, o consumo de extrato vegetal de Gundelia tournefortii L. na dieta pode ter efeitos antiobesidade; portanto, deve ser avaliado para uso como um método eficaz de perda de peso e como um novo agente terapêutico voltado para a obesidade.

Biomarcadores da homeostase redox em saliva e alterações nucleares no epitélio da mucosa jugal de indivíduos com diabetes mellitus tipo 2 e periodontite / Oxidative stress biomarkers in saliva and nucear changes in epithelial cells of indivudals with type e Diabetes Mellitus and periodontitis

O presente estudo é composto por dois capítulos, sendo o primeiro um artigo de revisão sistemática que abordou as evidências científicas para a diferença de biomarcadores do estresse oxidativo em indivíduos com diabetes mellitus tipo 2 com e sem periodontite. Foram incluídos 9 estudos na análise final, pesquisados através das seguintes bases de dados: PubMed, Scopus, Embase, Web of Science, Cochrane Library, Biblioteca Virtual da Saúde e por outras fontes. Os estudos relataram elevadas concentrações de agentes oxidantes e baixos níveis de antioxidantes em indivíduos com diabetes mellitus tipo 2 e periodontite quando comparados aos indivíduos sem periodontite. Considerando os poucos estudos encontrados, as falhas metodológicas, poucos marcadores estudados e ausência de homogeneidade na avaliação dos marcadores do balanço redox, bem como, a baixíssima certeza da evidência entre os estudos incluídos nesta revisão sistemática, não foi possível determinar se há ou não diferenças nos níveis de estresse oxidativo em indivíduos com diabetes mellitus tipo 2 associado ou não à periodontite e, portanto, estudos observacionais prospectivos e de intervenção são recomendados. O segundo capítulo é um artigo de pesquisa que retrata a periodontite e o diabetes mellitus tipo 2 como doenças com características de inflamação crônica e com estresse oxidativo permanentemente elevado, o que afeta o padrão de funcionamento do sistema imunológico e resulta em danos a importantes macromoléculas biológicas. Trata-se de um estudo observacional, que objetivou avaliar biomarcadores da homeostase redox em saliva e a presença de alterações nucleares em pacientes com periodontite com ou sem diabetes tipo 2 e em indivíduos periodontalmente e sistemicamente saudáveis. Um total de 60 participantes foram divididos igualmente em três grupos: diabetes tipo 2 com periodontite (DPE); sem diabetes com periodontite (PE); saudáveis sem doença periodontal (HC). Após as medições clínicas periodontais, as células epiteliais da mucosa jugal e a amostra de saliva foram coletadas. O dano ao DNA foi determinado pela contagem de micronúcleos e anormalidades nucleares em células epiteliais. Os níveis de estresse oxidativo foram determinados por glutationa reduzida (GSH), ácido úrico (UA), capacidade antioxidante total (TAC), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARs) e proteínas totais. Os dados numéricos foram testados pelos testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis, as variáveis numéricas pelo teste do qui-quadrado e as correlações pelo coeficiente de Spearman, regressões linear e logística foram realizadas, adotando o nível de significância de 5%. As frequências de micronúcleos, cariorrexia, cromatina condensada e células picnóticas, e dos biomarcadores GSH e UA foram significativamente maiores no grupo DPE seguido dos grupos PE e HC (p<0,05). Glicemia em jejum, hemoglobina glicada, frequência de micronúcleos (MN), anormalidades nucleares (NA - cariorrexia, cromatina condensada e células picnóticas), GSH e UA apresentaram de leve a moderada correlação positiva com os parâmetros de progressão da periodontite (p<0,05). A análise de regressão linear mostrou que GSH categorizada teve correlação com sangramento gengival (p = 0,002) e TBARs (p = 0,020) e UA com sangramento à sondagem (p = 0,001) e TAC (p = 0,001). A análise de regressão logística mostrou que os níveis categorizados de GSH tiveram correlação com sangramento à sondagem (OR = 1,121 [95% CI, 1,025-1,225]) e supuração (OR = 0,155 [95% CI, 0,029-0,838]). Portanto, as correlações positivas entre os parâmetros periodontais, MN, NA (cromatina condensada, células cariorréticas e picnóticas), e os parâmetros redox na saliva (GSH e UA) refletem piores condições periodontais e dos parâmetros do diabetes mellitus tipo 2. Os biomarcadores na saliva (GSH e UA) apresentaram um importante papel na detecção de alteração no funcionamento do balanço redox e dos danos nucleares em células epiteliais da mucosa jugal. (AU)

This study consists of two chapters, the first is a systematic review article which addressed the scientific evidence for the difference of oxidative stress biomarkers in individuals with type 2 diabetes mellitus with and without periodontitis. Nine studies were included in the final analysis, searched through the following databases: PubMed, Scopus, Embase, Web of Science, Cochrane Library, Virtual Health Library and other sources. The studies reported high concentrations of oxidizing agents and low antioxidants levels in individuals with type 2 diabetes mellitus and periodontitis when compared to with no periodontitis. Considering the few studies found, the methodological flaws, few markers studied and absence homogeneity in the evaluation of redox balance markers, as well as, the very low certainty of the evidence among included studies in this systematic review, it was not possible to determine whether there are or not differences in the oxidative stress levels in individuals with type 2 diabetes mellitus associated or no with periodontitis and further prospective observational and interventional studies are recommended. The second chapter is a research article that describe the periodontitis and type 2 diabetes mellitus as diseases with features of chronic inflammation and with oxidative stress permanently elevated which affects the pattern of functioning of the immune system and results in damage to important biological macromolecules. This is an observational study, which aimed to evaluate redox homeostasis biomarkers in saliva and the presence of nuclear changes in patients with periodontitis with and without type 2 diabetes and periodontally and systemically healthy individuals. A total of 60 participants were allotted into three groups equally: type 2 diabetes with periodontitis (DPE); non-diabetes with periodontitis (PE); healthy without periodontal disease (HC). After periodontal measurements, cheek epithelial cells and saliva samples were collected. DNA damage was determined by counting micronucleus and nuclear abnormalities in epithelial cells. Oxidative stress levels were determined by reduced glutathione (GSH), uric acid (UA), total antioxidant capacity, thiobarbituric acid reactive substances, and total proteins. Numeric data were tested by Mann-Whitney and Kruskal-Whallis tests, qualitative variables by chi-square test and correlations by the spearman coeficiente, and linear and logistic regression were performed, adopting the significance level of 5%. The frequencies of micronucleus (MN), karyorrhectic, condensed chromatin, pyknotic cells, GSH and UA were significantly higher in DPE group followed PE and HC groups (p<0.05). Fasting blood glucose, glycated hemoglobin, MN and nuclear abnormalities (NA) frequencies (karyorrhectic, condensed chromatin and pyknotic cells), GSH and UA showed a positive mild to moderate correlation with periodontitis progression parameters (p<0.05). Linear regression analysis showed that categorized GSH had correlation with gingival bleeding (p = 0.002) and TBARs (p = 0.020) and UA with bleeding on probing (p = 0.001) and TAC (p = 0.001). Logistic regression analysis showed that categorized GSH levels had correlation with bleeding on probing (OR = 1.121 [95% CI, 1.025-1.225]) and supuration (OR = 0.155 [95% CI, 0.029-0.838]). Therefore, positive correlations among periodontal parameters, MN, NA, and salivary oxidative stress biomarkers (GSH and UA) reflects worse periodontal conditions and of the type 2 diabetes mellitus parameters. Salivary biomarkers (GSH and UA) played an important role in the detection the functioning of the redox balance and nuclear damage in cheek epithelial cells. (AU)

Ameliorative effects of morel mushroom (Morchella esculenta) against Cadmium-induced reproductive toxicity in adult male rats

Abstract Cadmium (Cd) is one of the major toxicants, which affects human health through occupational and environmental exposure. In the current study, we evaluated the protective effects of morel mushrooms against Cd-induced reproductive damages in rats. For this purpose, 30 male rats were divided into 6 groups (n=5/group), the first group served as the control group, second group was treated with an intraperitoneal (i.p) injection of 1 mg/kg/day of Cd. Third and fourth groups were co-treated with 1 mg/kg/day of Cd (i.p) and 10 and 20 mg/kg/day of morel mushroom extract (orally) respectively. The final 2 groups received oral gavage of 10 and 20 mg/kg/day of morel mushroom extract alone. After treatment for 17 days, the animals were euthanized, and testes and epididymis were dissected out. One testis and epididymis of each animal were processed for histology, while the other testis and epididymis were used for daily sperm production (DSP) and comet assay. Our results showed that Cd and morel mushrooms have no effect on animal weight, but Cd significantly decreases the DSP count and damages the heritable DNA which is reversed in co-treatment groups. Similarly, the histopathological results of testes and epididymis show that morel mushrooms control the damage to these tissues. Whereas the morel mushroom extract alone could enhance the production of testosterone. These results conclude that morel mushrooms not only control the damage done by Cd, but it could also be used as a protection mechanism for heritable DNA damage.

Resumo O cádmio (Cd) é um dos principais tóxicos, que afeta a saúde humana por meio da exposição ocupacional e ambiental. No presente estudo, avaliamos os efeitos protetores dos cogumelos morel contra os danos reprodutivos induzidos pelo Cd em ratos. Para tanto, 30 ratos machos foram divididos em 6 grupos (n = 5 / grupo); o primeiro grupo serviu de controle, o segundo grupo foi tratado com injeção intraperitoneal (i.p) de 1 mg / kg / dia de Cd. O terceiro e o quarto grupos foram cotratados com 1 mg / kg / dia de Cd (i.p) e 10 e 20 mg / kg / dia de extrato de cogumelo morel (por via oral), respectivamente. Os dois grupos finais receberam gavagem oral de 10 e 20 mg / kg / dia de extrato de cogumelo morel sozinho. Após o tratamento por 17 dias, os animais foram sacrificados e os testículos e o epidídimo foram dissecados. Um testículo e epidídimo de cada animal foram processados para histologia, enquanto o outro testículo e epidídimo foram usados para produção diária de esperma (DSP) e ensaio cometa. Nossos resultados mostraram que os cogumelos Cd e morel não têm efeito sobre o peso do animal, mas o Cd diminui significativamente a contagem de DSP e danifica o DNA hereditário, que é revertido em grupos de cotratamento. Da mesma forma, os resultados histopatológicos dos testículos e do epidídimo mostram que os cogumelos morel controlam os danos a esses tecidos. Considerando que o extrato de cogumelo morel sozinho pode aumentar a produção de testosterona. Esses resultados concluem que os cogumelos morel não apenas controlam os danos causados pelo Cd, mas também podem ser usados como um mecanismo de proteção para danos hereditários ao DNA.

Ameliorative effects of morel mushroom (Morchella esculenta) against Cadmium-induced reproductive toxicity in adult male rats / Efeitos benéficos do cogumelo morel (Morchella esculenta) contra a toxicidade reprodutiva induzida por cádmio em ratos machos adultos

Cadmium (Cd) is one of the major toxicants, which affects human health through occupational and environmental exposure. In the current study, we evaluated the protective effects of morel mushrooms against Cd-induced reproductive damages in rats. For this purpose, 30 male rats were divided into 6 groups (n=5/group), the first group served as the control group, second group was treated with an intraperitoneal (i.p) injection of 1 mg/kg/day of Cd. Third and fourth groups were co-treated with 1 mg/kg/day of Cd (i.p) and 10 and 20 mg/kg/day of morel mushroom extract (orally) respectively. The final 2 groups received oral gavage of 10 and 20 mg/kg/day of morel mushroom extract alone. After treatment for 17 days, the animals were euthanized, and testes and epididymis were dissected out. One testis and epididymis of each animal were processed for histology, while the other testis and epididymis were used for daily sperm production (DSP) and comet assay. Our results showed that Cd and morel mushrooms have no effect on animal weight, but Cd significantly decreases the DSP count and damages the heritable DNA which is reversed in co-treatment groups. Similarly, the histopathological results of testes and epididymis show that morel mushrooms control the damage to these tissues. Whereas the morel mushroom extract alone could enhance the production of testosterone. These results conclude that morel mushrooms not only control the damage done by Cd, but it could also be used as a protection mechanism for heritable DNA damage.

O cádmio (Cd) é um dos principais tóxicos, que afeta a saúde humana por meio da exposição ocupacional e ambiental. No presente estudo, avaliamos os efeitos protetores dos cogumelos morel contra os danos reprodutivos induzidos pelo Cd em ratos. Para tanto, 30 ratos machos foram divididos em 6 grupos (n = 5 / grupo); o primeiro grupo serviu de controle, o segundo grupo foi tratado com injeção intraperitoneal (i.p) de 1 mg / kg / dia de Cd. O terceiro e o quarto grupos foram cotratados com 1 mg / kg / dia de Cd (i.p) e 10 e 20 mg / kg / dia de extrato de cogumelo morel (por via oral), respectivamente. Os dois grupos finais receberam gavagem oral de 10 e 20 mg / kg / dia de extrato de cogumelo morel sozinho. Após o tratamento por 17 dias, os animais foram sacrificados e os testículos e o epidídimo foram dissecados. Um testículo e epidídimo de cada animal foram processados para histologia, enquanto o outro testículo e epidídimo foram usados para produção diária de esperma (DSP) e ensaio cometa. Nossos resultados mostraram que os cogumelos Cd e morel não têm efeito sobre o peso do animal, mas o Cd diminui significativamente a contagem de DSP e danifica o DNA hereditário, que é revertido em grupos de cotratamento. Da mesma forma, os resultados histopatológicos dos testículos e do epidídimo mostram que os cogumelos morel controlam os danos a esses tecidos. Considerando que o extrato de cogumelo morel sozinho pode aumentar a produção de testosterona. Esses resultados concluem que os cogumelos morel não apenas controlam os danos causados pelo Cd, mas também podem ser usados como um mecanismo de proteção para danos hereditários ao DNA.

Ameliorative effects of morel mushroom (Morchella esculenta) against Cadmium-induced reproductive toxicity in adult male rats / Efeitos benéficos do cogumelo morel (Morchella esculenta) contra a toxicidade reprodutiva induzida por cádmio em ratos machos adultos

Cadmium (Cd) is one of the major toxicants, which affects human health through occupational and environmental exposure. In the current study, we evaluated the protective effects of morel mushrooms against Cd-induced reproductive damages in rats. For this purpose, 30 male rats were divided into 6 groups (n=5/group), the first group served as the control group, second group was treated with an intraperitoneal (i.p) injection of 1 mg/kg/day of Cd. Third and fourth groups were co-treated with 1 mg/kg/day of Cd (i.p) and 10 and 20 mg/kg/day of morel mushroom extract (orally) respectively. The final 2 groups received oral gavage of 10 and 20 mg/kg/day of morel mushroom extract alone. After treatment for 17 days, the animals were euthanized, and testes and epididymis were dissected out. One testis and epididymis of each animal were processed for histology, while the other testis and epididymis were used for daily sperm production (DSP) and comet assay. Our results showed that Cd and morel mushrooms have no effect on animal weight, but Cd significantly decreases the DSP count and damages the heritable DNA which is reversed in co-treatment groups. Similarly, the histopathological results of tests and epididymis show that morel mushrooms control the damage to these tissues. Whereas the morel mushroom extract alone could enhance the production of testosterone. These results conclude that morel mushrooms not only control the damage done by Cd, but it could also be used as a protection mechanism for heritable DNA damage.

O cádmio (Cd) é um dos principais tóxicos, que afeta a saúde humana por meio da exposição ocupacional e ambiental. No presente estudo, avaliamos os efeitos protetores dos cogumelos morel contra os danos reprodutivos induzidos pelo Cd em ratos. Para tanto, 30 ratos machos foram divididos em 6 grupos (n = 5 / grupo); o primeiro grupo serviu de controle, o segundo grupo foi tratado com injeção intraperitoneal (i.p) de 1 mg / kg / dia de Cd. O terceiro e o quarto grupos foram cotratados com 1 mg / kg / dia de Cd (i.p) e 10 e 20 mg / kg / dia de extrato de cogumelo morel (por via oral), respectivamente. Os dois grupos finais receberam gavagem oral de 10 e 20 mg / kg / dia de extrato de cogumelo morel sozinho. Após o tratamento por 17 dias, os animais foram sacrificados e os testículos e o epidídimo foram dissecados. Um testículo e epidídimo de cada animal foram processados para histologia, enquanto o outro testículo e epidídimo foram usados para produção diária de esperma (DSP) e ensaio cometa. Nossos resultados mostraram que os cogumelos Cd e morel não têm efeito sobre o peso do animal, mas o Cd diminui significativamente a contagem de DSP e danifica o DNA hereditário, que é revertido em grupos de cotratamento. Da mesma forma, os resultados histopatológicos dos testículos e do epidídimo mostram que os cogumelos morel controlam os danos a esses tecidos. Considerando que o extrato de cogumelo morel sozinho pode aumentar a produção de testosterona. Esses resultados concluem que os cogumelos morel não apenas controlam os danos causados pelo Cd, mas também podem ser usados como um mecanismo de proteção para danos hereditários ao DNA.

Perspectiva bioética para México, España y Estados Unidos en los modelos in vivo de inducción de daño al ADN

En la actualidad, la investigación biomédica se ha centrado en el estudio de enfermedades como el cáncer, que causan un elevado índice de mortalidad. Existen diferentes modelos animales, empleados para generar diversos tipos de carcinogénesis; el daño directo al ADN es uno de los mecanismos más utilizados. Sin embargo, en la normatividad nacional e internacional vigente, no se señalan los aspectos bioéticos que se deben seguir para desarrollar un modelo experimental de daño al ADN. Además, no se realiza una correcta semejanza de la enfermedad. Debido a lo anterior, esta revisión analiza los avances en cuanto a normatividad que se han generado en diferentes países, comparando los estudios encontrados en Estados Unidos, México y España. La perspectiva a futuro es poder contar con guías de experimentación actualizadas, que permitan pautar las normas necesarias para el adecuado desarrollo de los modelos de investigación animal de daño al ADN y que cumplan con la regla de las 3R en la experimentación animal. Esta iniciativa se debe de realizar en conjunto entre la Organización Mundial de la Salud y los organismos especializados en manejo y cuidado de animales de laboratorio en los ámbitos nacional e internacional.

Currently, biomedical research has focused on the study of diseases such as cancer that causes a high mortality rate. Different animal models are used to generate different types of carcinogenesis; direct DNA damage is one of the most used mechanisms. However, current national and international regulations do not indicate the bioethical aspects that must be followed to develop an experimental model of DNA damage. In addition, they do not perform a correct resemblance of the disease. Due to the above, this review analyzes the advances in regulations generated in different countries, comparing the studies found in the United States, Mexico, and Spain. The future perspective is to be able to count on updated experimentation guidelines, which allow the establishment of the necessary norms for the adequate development of animal research models of DNA damage that comply with the 3R rule in animal experimentation. This initiative should be carried out jointly by the World Health Organization and organizations specialized in managing and caring laboratory animals at the national and international levels.

Na atualidade, a pesquisa biomédica vem se focando no estudo de doenças que causam um elevado índice de mortalidade, como o câncer. Existem diferentes modelos animais utilizados para gerar diversos tipos de carcinogêneses; o dano direto ao DNA é um dos mecanismos mais utilizados. Contudo, na legislação nacional e internacional vigente, não são sinalizados os aspectos bioéticos que devem ser seguidos para desenvolver um modelo experimental de dano ao DNA, além de não ser realizada uma correta semelhança da doença. Devido a isso, esta revisão analisa o avanço quanto à legislação que vem sendo gerada em diferentes países, comparando os estudos encontrados nos Estados Unidos, no México e na Espanha. A perspectiva para o futuro é poder contar com atualizadas, que permitam estabelecer as normas necessárias para desenvolver os modelos de pesquisa animal de dano ao DNA e que cumpram com a regra das 3R na experimentação animal. Essa iniciativa se deve realizar em conjunto entre a Organização Mundial da Saúde e as organizações especializadas na gestão e cuidado de animais de laboratório nos contextos nacional e internacional.

Evaluation of cell damage and modulation of cytokines TNF-α, IL-6 and IL-10 in macrophages exposed to PpIX-mediated photodynamic therapy / Avaliação do dano celular e da modulação das citocinas TNF-α, IL-6 e IL-10 em macrófagos expostos à terapia fotodinâmica mediada pela PpIX

Abstract Little is known regarding whether photodynamic therapy (PDT)-induced cell death can substantially compromise macrophages (MΦ), which are important cells in PDT-induced immune responses. Here, parameters of PDT-mediated MΦ cytotoxicity and cytokine production in response to protoporphyrin IX (PpIX) were evaluated. Peritoneal MΦ from BALB/c mice were stimulated in vitro with PDT, light, PpIX, or lipopolysaccharide (LPS). After that, cell viability, lipid peroxidation, Nitric Oxide (NO), DNA damage, TNF-α, IL-6 and IL-10 were evaluated. Short PDT exposure reduced cell viability by 10-30%. There was a two-fold increase in NO and DNA degradation, despite the non-increase in lipoperoxidation. PDT increased TNF-α and IL-10, particularly in the presence of LPS, and decreased the production of IL-6 to 10-fold. PDT causes cellular stress, induces NO radicals and leads to DNA degradation, generating a cytotoxic microenvironment. Furthermore, PDT modulates pro- and anti-inflammatory cytokines in MΦ.

Resumo Pouco se sabe se a morte celular induzida pela terapia fotodinâmica (PDT) compromete os macrófagos (MΦ), envolvidos nas respostas imunes induzidas pela PDT. Neste estudo, foram avaliados parâmetros de citotoxicidade dos MΦ mediada pela PDT e a produção de citocinas, frente à protoporfirina IX (PpIX). MΦ peritoneais de camundongos BALB/c foram estimulados in vitro com PDT, luz, PpIX ou lipopolissacarídeo (LPS). Após isto, a viabilidade celular (VC), a lipoperoxidação, os níveis de óxido nítrico (NO), de DNA degradado, de TNF-α, IL-6 e IL-10 foram avaliados. A exposição curta à PDT reduziu a VC em 10-30%. Os níveis de NO e de DNA degradado duplicaram, sem aumento da lipoperoxidação. Houve aumento de TNF-α e IL-10, sendo maior na presença de LPS. Já a produção de IL-6 reduziu em dez vezes. A PDT induz estresse celular, gera radicais NO e causa dano ao DNA, tornando o microambiente citotóxico. Ainda, modula citocinas pró e anti-inflamatórias em MΦ.

Quantification of DNA Damage in Different Tissues in Rats with Heart Failure / Quantificação de Dano em DNA em Diferentes Tecidos em Ratos com Insuficiência Cardíaca

Abstract Background: Chronic heart failure (CHF) is a complex syndrome which comprises structural and functional alterations in the heart in maintaining the adequate blood demand to all tissues. Few investigations sought to evaluate oxidative DNA damage in CHF. Objective: To quantify the DNA damage using the comet assay in left ventricle (LV), lungs, diaphragm, gastrocnemius and soleus in rats with CHF. Methods: Twelve male Wistar rats (300 to 330 g) were selected for the study: Sham (n = 6) and CHF (n = 6). The animals underwent myocardial infarction by the ligation of the left coronary artery. After six weeks, the animals were euthanized. It was performed a cell suspension of the tissues. The comet assay was performed to evaluate single and double strand breaks in DNA. Significance level (p) considered < 0.05. Results: The CHF group showed higher values of left ventricle end-diastolic pressure (LVEDP), pulmonary congestion, cardiac hypertrophy and lower values of maximal positive and negative derivatives of LV pressure, LV systolic pressure (p < 0.05). CHF group showed higher DNA damage (% tail DNA, tail moment and Olive tail moment) compared to Sham (p < 0.001). The tissue with the highest damage was the soleus, compared to LV and gastrocnemius in CHF group (p < 0.05). Conclusion: Our results indicates that the CHF affects all tissues, both centrally and peripherically, being more affected in skeletal muscle (soleus) and is positively correlated with LV dysfunction.

Resumo Fundamento: A insuficiência cardíaca crônica (ICC) é uma síndrome complexa que compreende alterações estruturais e funcionais no coração, mantendo demanda sanguínea adequada a todos os tecidos. Poucas investigações procuraram avaliar o dano oxidativo ao DNA na ICC. Objetivo: Quantificar o dano ao DNA utilizando o ensaio cometa no ventrículo esquerdo (VE), pulmões, diafragma, gastrocnêmio e sóleo em ratos com ICC. Métodos: Doze ratos Wistar machos (300 a 330 g) foram selecionados para o estudo: placebo (n = 6) e ICC (n = 6). Os animais foram submetidos a infarto do miocárdio através de ligadura da artéria coronária esquerda. Após seis semanas, os animais foram sacrificados. Foi realizada uma suspensão celular dos tecidos. O ensaio cometa foi realizado para avaliar as quebras de fita simples e dupla no DNA. Nível de significância (p) < 0,05. Resultados: O grupo ICC apresentou maiores valores de pressão diastólica final do ventrículo esquerdo (PDFVE), congestão pulmonar, hipertrofia cardíaca e menores valores de derivados máximos positivos e negativos da pressão do VE, pressão sistólica do VE (p < 0,05). O grupo ICC apresentou maior dano ao DNA (% de DNA da cauda, momento da cauda e momento da cauda de Olive) em comparação ao placebo (p < 0,001). O tecido com maior dano foi o sóleo, comparado ao VE e ao gastrocnêmio no grupo ICC (p < 0,05). Conclusão: Nossos resultados indicam que a ICC afeta todos os tecidos, de maneira central e periférica, sendo mais afetada no músculo esquelético (sóleo) e está positivamente correlacionada com a disfunção do VE.

Análise da imunoexpressão de 8-Hidroxi-2'-Deoxiguanosina em liquen plano oral / Analysis of the immunoexpression of 8-Hydroxy-2'-Deoxyguanosine in oral lichen planus

O Líquen Plano Oral (LPO) é uma doença mucocutânea crônica imunomediadae relativamente comum na mucosa oral. Diversas pesquisas têm sido desenvolvidas com intuito de elucidar a patogênese dessa lesão, destacando-se aquelas que utilizam biomarcadores de estresse oxidativo. O objetivo deste estudo foi avaliar o dano oxidativo ao DNA no LPO por meio da expressão imuno-histoquímica da 8-OHdG, para verificar o possível envolvimento deste biomarcador na patogênese desta lesão. A imunoexpressão da proteína 8-OHdG foi avaliada semiquantitativamente no epitélio de 46 casos de LPO e 17 amostras de mucosa oral clinicamente normal e os dados submetidos à análise estatística por meio dos testes nãoparamétricos de Kruskall-Wallis e Mann Whitney. O nível de significância foi estabelecido em 5% (p> 0,05). Ao analisar a imunoexpressão do 8-OHdG nas formas erosivas e reticulares do LPO e na mucosa oral normal, foi observada tendência à maior imunoexpressão nuclear da 8-OHdG nos LPOs erosivos, em comparação aos LPOs reticulares e à mucosa oral normal. Contudo, o teste não-paramétrico de Kruskall-Wallis não evidenciou diferenças estatisticamente significativas entre os grupos (p=0,088). Também foi observada tendência à maior intensidade de marcação para a 8-OHdG em casos de LPO reticular e erosivo, se comparados à mucosa oral normal, embora também não tenha sido encontrada significância estatística (p=0,085). Em relação à sintomatologia, foi observada maior imunomarcação tanto citoplasmática quanto nuclear (p=0,004 e p=0,016, respectivamente) da 8-ÓHdG nos casos sintomáticos, em comparação com os casos assintomáticos. Os resultados deste estudo indicam uma elevada expressão imuno-histoquímica da 8-OHdG em LPO, sugerindo o papel do estresse oxidativo em sua patogênese, podendo constituir um alvo terapêutico adicional para essa doença (AU).

The Oral Lichen Planus (OLP) is a chronic immune mediated mucocutaneous disease and relatively common in the oral mucosa. Several researches have been carried out with the intention of identifying pathogens of this lesion, standing out as research that uses oxidative stress biomarkers. Among these biomarkers, there is an 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine (8- OHdG), which is generated after oxidative damage in DNA. The aim of this study was to evaluate the oxidative damage to DNA in the OLP through the immunohistochemical expression of 8-OHdG, to verify the possible involvement of this biomarker in the pathogenesis of this lesion. An immunoexpression of 8-OHdG protein was evaluated in a semi-quantitative way in the epithelium of 46 cases of OLP and 17 samples of clinically normal oral mucosa and with statistical analysis data using Kruskall-Wallis and Mann Whitney non-parametric tests. The level of significance was established at 5% (p> 0.05). When analyzing an immunoexpression of 8-OHdG in the erosive and reticular forms of OLP and normal oral mucosa, there was a trend of greater nuclear immunoexpression of 8-OHdG was observed in erosive OLP, compared to reticular OLP and normal oral mucosa. However, the Kruskall-Wallis non-parametric test did not show statistically significant differences between groups (p = 0.088). There was also a trend of greater intensity of marking for 8- OHdG in cases of reticular and erosive OLP, when compared to the normal oral mucosa, although no statistical significance was found (p = 0.085). In relation to symptomatology, greater immunomarking was observed, both cytoplasmic and nuclear (p = 0.004 and p = 0.016, respectively) of 8ÓHdG in symptomatic cases, in comparison with asymptomatic cases. The results of this study indicate a high immunohistochemical expression of 8-OHdG in OLP, suggesting an oxidative stress role in its pathogenesis, which may constitute an additional therapeutic target for this disease (AU).

Resistance exercise protocol does not cause acute genotoxic effects in trained individuals / Protocolo de exercício resistido não provoca efeito genotóxico agudo em sujeitos treinados / Protocolo de ejercicio resistido no provoca efecto genotóxico agudo en sujetos entrenados

ABSTRACT Introduction: Resistance exercise, particularly strength training, has been progressively gaining more and more followers worldwide. Despite a considerable increase in the amount of research and literature available on this topic, resistance training is undergoing important developments. Anaerobic metabolism, which characterizes resistance training, enhances the ischemic process and blood reperfusion, thereby generating reactive oxygen species (ROS). The imbalance between the production of free radicals and antioxidant defenses may induce oxidative stress with subsequent protein oxidation, lipid peroxidation, DNA damage in several cells, and other effects. This process may be intensified at rest because the O2 deficit is counteracted by a process known as excess post-exercise oxygen consumption. Objective: To analyze the effects of ROS in strength training on the DNA of human lymphocyte, biomarkers of lipid damage (TBARS) and metabolism (triglycerides, protein, glycose, albumin and urea). Methods: Comet assay involving a count of 100 cells, which were divided into five classes of damage (no damage = 0, maximum damage = 4), thereby constituting an indication of DNA damage, and the micronucleus test, where the cell samples were centrifuged at 1000-1500 RPM for ten minutes at room temperature for the micronuclei analysis. Results: An elevation in triglyceride concentrations was observed 5h post-exercise (p=0.018), probably due to nutrition. There were no significant differences in the other biochemical parameters. In terms of the DNA damage measured by the Comet assay and micronucleus test, no statistical differences were observed until 5h post-exercise. Conclusion: The proposed training session did not cause oxidative or genotoxic damage in trained individuals under the proposed conditions. Level of Evidence II; Prognostic studies-Investigation of the effect of patient characteristics on the disease outcome.

RESUMO Introdução: O treinamento resistido, principalmente a musculação, vem progressivamente ganhando novos adeptos em todo o mundo. Apesar de haver um significativo aumento no número de pesquisas e na literatura disponível sobre o assunto, o treinamento resistido vem passando por um importante processo de evolução. O metabolismo anaeróbico, que caracteriza o treinamento resistido, acentua o processo de isquemia e a reperfusão sanguínea, gerando espécies reativas do oxigênio (ERO). O desequilíbrio entre a produção de radicais livres e as defesas antioxidantes pode desencadear estresse oxidativo e levar, entre outros, à oxidação de proteínas e à peroxidação de lipídios, além de danos no DNA de diversas células. Isso pode ser amplificado durante o repouso, pois o déficit de O2 é reposto por um processo denominado excesso de oxigênio consumido após exercícios. Objetivo: Analisar os efeitos de ERO em um treinamento de musculação sobre o DNA de linfócitos humanos, de biomarcadores de dano lipídico (TBARS) e de metabolismo (triglicerídeos, proteínas, glicose, albumina e ureia). Métodos: Teste Cometa mediante contagem de 100 células, as quais foram classificadas em cinco classes de dano (sem dano = 0, dano máximo = 4), constituindo, dessa maneira, um índice de dano no DNA e o teste de micronúcleo, no qual as amostras das células foram centrifugadas a 1000-1500 RPM por dez minutos em temperatura ambiente para a análise de micronúcleos. Resultados: Constatou-se elevação das concentrações de triglicerídeos após 5 horas do treinamento (p = 0,018), relacionada, provavelmente, à alimentação. Os demais parâmetros bioquímicos não mostraram diferenças significantes. Com relação ao dano provocado no DNA medido pelos testes Cometa e de micronúcleo, não se constatou diferença estatística até 5 horas após o treinamento. Conclusão: A sessão de treinamento proposto não provocou danos oxidativos nem genotóxicos em indivíduos treinados, nas condições propostas. Nível de Evidência II; Estudos prognósticos - Investigação do efeito de característica de um paciente sobre o desfecho da doença.

RESUMEN Introducción: El entrenamiento de resistencia, especialmente la musculación viene ganando progresivamente nuevos adeptos en todo el mundo. A pesar de haber un aumento significativo en el número de investigaciones y en la literatura sobre el tema, el entrenamiento de resistencia viene pasando por un importante proceso de evolución. El metabolismo anaeróbico, que caracteriza el entrenamiento de resistencia, acentúa el proceso de isquemia y la reperfusión sanguínea, generando especies reactivas de oxígeno (ERO). El desequilibrio entre la producción de radicales libres y las defensas antioxidantes puede desencadenar el estrés oxidativo y llevar, entre otros, a la oxidación de proteínas y peroxidación de lípidos, además de daño en el ADN de diferentes células. Eso puede ser amplificado durante el reposo, para el déficit de O2 es restablecido por un proceso denominado exceso de oxígeno consumido después de ejercicios. Objetivo: Analizar los efectos de ERO en un entrenamiento de musculación sobre el ADN de linfocitos humanos, de biomarcadores de daño lipídico (TBARS) y de metabolismo (triglicéridos, proteínas, glucosa, albúmina y urea). Métodos: Prueba Cometa a través de un recuento de 100 células, las cuales se clasificaron en cinco clases de daño (sin daño = 0, daño máximo = 4), constituyendo así un índice de daño en el ADN y la prueba de micronúcleo, en el cual las muestras de las células fueron centrifugadas a 1000-1500 RPM por diez minutos a temperatura ambiente para el análisis de micronúcleos. Resultados: Se constató elevación de las concentraciones de triglicéridos después de 5 horas del entrenamiento (p = 0,018), probablemente relacionada con la alimentación. Los demás parámetros bioquímicos no mostraron diferencias significativas. Con respecto al daño provocado en el ADN medido por las pruebas Cometa y de micronúcleos, no se constató diferencia estadística hasta 5 horas después del entrenamiento. Conclusión: La sesión de entrenamiento propuesto no provocó daño oxidativo ni genotóxico en individuos entrenados, en las condiciones propuestas. Nivel de evidencia II; Estudios pronósticos - Investigación del efecto de característica de un paciente sobre el desenlace de la enfermedad.

Expressão das proteínas CHK2, yH2AX e TP53 em carcinoma de células escamosas de boca de indivíduos fumantes e não fumantes / Expression of CHK2, γH2AX and TP53 proteins in smokers and non-smokers oral squamous cell carcinoma

O câncer de boca corresponde a cerca de 4% das doenças neoplásicas, e o carcinoma de células escamosas representa o tipo mais frequente, englobando cerca de 90 a 95% dos casos. O cigarro é o principal fator etiológico para o câncer de boca, causando danos ao DNA e mutações que se não reparadas levam ao surgimento de lesões. O dano ao DNA associado ao cigarro tem sido estudado em diferentes tipos de câncer, mas ainda pouco explorado em relação ao câncer de boca. Checkpoint kinase 2 (CHK2) e P53 são proteínas que estão envolvidas no processo de checagem do ciclo celular, sendo responsáveis pelo reparo ao dano ao DNA. A proteína H2AX é uma histona nuclear que sofre fosforilação em resposta aos danos ao DNA, principalmente às quebras da dupla cadeia. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta a danos no DNA através da expressão de CHK2, γH2AX e TP53 entre fumantes e não fumantes com carcinoma de células escamosas de boca (CCEB). Além disso, foram analisadas associações entre imuno-expressão das proteínas estudadas, dados clínico-patológicos e classificação histopatológica. Foram incluídos 35 indivíduos (18 não fumantes e 17 fumantes) com CCEB de língua e soalho bucal. Reação imuno-histoquímica foi realizada para γH2AX para identificação de quebras de fita dupla, CHK2 e TP53 para avaliação da indução de parada do ciclo celular. Análises descritivas e estatísticas foram realizadas. A pesquisa foi composta por 22 homens (62,8%) e 13 mulheres (37,2%), com idade média de 63,9 anos. Entre os não fumantes, 50% apresentaram tumores bem diferenciados, enquanto que fumantes mostraram maior número em moderadamente diferenciados e pouco diferenciados (35,3% cada). No geral, 31 (88,6%) casos foram positivos para CHK2, 27 (77,2%) foram positivos para γH2AX e 23 (65,7%) foram positivos para TP53. Não foi observada associação entre essas proteínas com hábitos de fumar e não fumar (p> 0,05). Semelhanças entre os padrões imuno-histoquímicos de CHK2, γH2AX e TP53 em fumantes e não fumantes com CCEB foram observadas neste estudo, assim como entre os parâmetros clínico-patológicos. De forma geral, os resultados indicaram expressão positiva para essas proteínas no CCEB. Este estudo fornece informaçãoes sobre o dano ao DNA na carcinogênese oral.

Oral cancer accounts for about 4% of neoplastic diseases, and squamous cell carcinoma is the most common type, accounting for about 90 to 95% of cases. Cigarette smoking is the main etiological factor for oral cancer, causing DNA damage and mutations that, if not repaired, lead to lesions. Cigarette-associated DNA damage has been studied in different cancers, but is still poorly explored in relation to oral cancer. Checkpoint kinase 2 (CHK2) and P53 are proteins that are involved in the cell cycle checking process and are responsible for repairing DNA damage. The H2AX protein is a nuclear histone that undergoes phosphorylation in response to DNA damage, especially double strand breaks. The aim of this study was to assess the DNA damage response through the expression of checkpoint kinase 2 (CHK2), γH2A histone family member X (γH2AX) and TP53 among smokers and non-smokers with oral squamous cell carcinoma (OSCC). In addition, associations amongst immunoexpression of studied proteins, clinicopathologic data and histopathological grading were analyzed. Thirty-five individuals (18 nonsmokers and 17 smokers) with OSCC of the tongue and/or floor of the mouth were included. Immunohistochemistry was carried out for γH2AX for identification of double-strand breaks, CHK2 and P53 for evaluation of the induction of cell cycle arrest. Descriptive and statistical analyses were performed. The survey consisted of 22 males (62.8%) and 13 females (37.2%), with a mean age of 63.9 years. Fifty percent of non-smokers OSCC were well-differentiated tumors, whereas for smokers, OSCC were moderately differentiated and poorly differentiate tumors, equally (35.3% each). Overall, 31 (88.6%) cases were CHK2-positive, 27 (77.2%) were γH2AX-positive and 23 (65.7%) were TP53-positive. No association among these proteins with smoking and non-smoking habits was observed (p>0.05). Similarities in the CHK2, γH2AX and P53 immunohistochemical staining pattern were observed between smokers and non-smokers with OSCC in this survey, and the immunoexpression was not associated with clinicopathologic parameters. Overall, the results indicated consistent expression of these proteins in OSCC. This study provides information about the DNA damage in oral carcinogenesis.

Efeito de um suplemento nutricional na proteção contra os danos decorrentes da poluição em queratinócitos: comprovação in vitro / Effect of a nutritional supplement in the protection against keratinocyte damage due to pollution: in vitro confirmation

Introdução: A interação da pele com poluentes atmosféricos tem demonstrado efeitos na barreira cutânea, assim como o desencadeamento de processos oxidativos relacionados ao envelhecimento prematuro da pele. O receptor de aril hidrocarbonetos (ArH) é proteína de transcrição que interage com os xenobióticos, regulando a transcrição de genes envolvidos com estresse oxidativo, inflamação, imunossupressão e pigmentação, além de levar a processos relacionados ao envelhecimento e carcinogênese. Objetivo: Avaliar a eficácia antipoluente de uma associação antioxidante na prevenção da translocação nuclear do receptor AhR Métodos: Um modelo in vitro (cultura de queratinócitos) foi exposto à fumaça de cigarro, e a presença de AhR foi medida por ensaio Elisa-sanduíche. Resultados: A cultura tratada demonstrou inibição da translocação nuclear do AhR em todas as concentrações avaliadas: aumentos de ArH de 75,38%; 59,88% e 117,79% são observados nas concentrações de 0,316; 0,100 e 0,0316mg/ml, respectivamente. Conclusão: Os resultados sugerem a capacidade da formulação avaliada em prevenir a ativação de genes responsáveis pelos efeitos nocivos da fumaça de cigarro.

Introduction: The interaction between the skin and air pollutants has demonstrated effects in the cutaneous barrier, as well as triggering oxidative processes related to premature ageing of the skin. The aryl hydrocarbon receptor (ArH) is a transcription protein that interacts with xenobiotics, regulating the transcription of genes involved with oxidative stress, inflammation, immunosuppression and pigmentation, besides leading to processes related to ageing and carcinogenesis. Objective: Evaluate the anti-pollution efficacy of an antioxidant association for the prevention of the nuclear translocation of the AhR receptor. Methods: A in vitro model (keratinocyte culture) was exposed to cigarette smoke and the presence of AhR was measured through sanduwich ELISA assay. Results: The treated culture demonstrated inhibition of the nuclear translocation of AhR in all concentrations evaluated: ArH increase of 75.38%; 59.88% and 117.79% are seen with the concentrations of 0.316; 0.100 and 0.0316mg / mL, respectively. Conclusion: The results suggest the ability of the formulation analyzed in preventing the activation of genes responsible for the damaging effects of cigarette smoke.

Avaliação da ingestão de Vitamina D e Cálcio em indivíduos pré-diabéticos e sua relação com a estabilidade genômica / The ingestion of Vitamins D and Calcium in pre-diabetic people and its relationship with genomic stability

Avaliar a ingestão de vitamina D e cálcio em indivíduos pré-diabéticos e verificar sua relação com a estabilidade genômica. Estudo transversal, com 51 indivíduos pré-diabéticos. A ingestão de vitamina D e cálcio foi determinada no programa DietWin® e a avaliação da prevalência de inadequação dos nutrientes foi classificada de acordo com as recomendações das Dietary Reference Intakes (DRIs). O ensaio de citoma de micronúcleos com bloqueio de citocinese (CBMN) e o ensaio cometa foram utilizados para avaliar a estabilidade genômica. A prevalência de inadequação de vitamina D e cálcio foi de 94,1% e 86,3%, respectivamente. O consumo de vitamina D associou-se à ingestão de cálcio (r=0,66 e p<0,01) e ambos os micronutrientes se associaram com glicose de jejum (p<0,05). Em relação ao ensaio CBMN, o consumo de cálcio associou-se negativamente com a frequência de brotos nucleares (r=-0,30 e p=0,04). Dentre os pré-diabéticos avaliados existe alta prevalência de inadequação de vitamina D e cálcio. Além disso, ambos os nutrientes pouco influenciaram na instabilidade genômica, pois apenas o consumo insuficiente de cálcio mostrou estar relacionado com danos no DNA, aumentando a formação de brotos nucleares.

The ingestion of vitamins D and calcium in pre-diabetic people and its relationship with genomic stability are analyzed by a transversal study with 51 pre-diabetic people. The ingestion of vitamins D and calcium was determined in the DietWin® program and the evaluation of the prevalence of nutrient inadequacy was classified according to recommendations by Dietary Reference Intakes (DRIs). Assay on micronucleus cytome with cytokinesis blockage (CBMN) and comet assay evaluated genomic stability. Inadequacy prevalence of vitamins D and calcium was 94.1% and 86.3%, respectively. The intake of vitamin D is associated with the ingestion of calcium (r=0.66; p<0.01) and the two micronutrients are associated with fasting glucose (p<0.05). In the case of CBMN, intake of calcium was associated negatively with the frequency of nuclear buds (r=-0.30; p=0.04). There is high inadequacy prevalence for vitamins D and calcium among pre-diabetic people. The two nutrients only slightly affect genomic instability since only the insufficient intake of calcium proved to be related with DNA damage, increasing the formation of nuclear buds.

Cúrcuma em combinação com os regimes de terapia tríplice melhora o estresse oxidativo e as alterações histopatológicas em gastrite crônica associada à infecçäo por Helicobacter pylori / Curcumin in combination with triple therapy regimes ameliorates oxidative stress and histopathologic changes in chronic gastritis-associated helicobacter pylori infection

ABSTRACT BACKGROUND Helicobacter pylori (H. pylori) gastric infection is a main cause of inflammatory changes and gastric cancers. OBJECTIVE The aim of this study was finding the effects of curcumin on oxidative stress and histological changes in chronic gastritis associated with H. pylori. METHODS In a randomized clinical trial, patients were divided into two groups: a standard triple therapy group and triple therapy with curcumin group. Endoscopic and histological examinations were measured for all patients before and after 8 weeks. RESULTS Triple therapy with curcumin treatment group significantly decreased malondialdehyde markers, glutathione peroxides and increased total antioxidant capacity of the gastric mucosa at the end of study compared to baseline and triple regimen groups. In addition, the oxidative damage to DNA was significantly decreased in triple therapy with curcumin group at the end of study compared to baseline and compared to triple therapy (P<0.05 for both). Triple therapy group in combination with Curcumin significantly decreased all active, chronic and endoscopic inflammation scores of patients compared to the baseline and triple therapy group (P<0.05 for both). The eradication rate by triple therapy + curcumin was significantly increased compared to triple therapy alone (P<0.05). CONCLUSION Curcumin can be a useful supplement to improve chronic inflammation and prevention of carcinogenic changes in patients with chronic gastritis associated by H. pylori.

RESUMO CONTEXTO A infecção gástrica pelo Helicobacter pylori (H. pylori) é principal causa de alterações inflamatórias e de câncer gástrico. OBJETIVO O objetivo deste estudo foi encontrar os efeitos da cúrcuma no estresse oxidativo e as alterações histológicas na gastrite crônica associada ao H. pylori. MÉTODOS Em um estudo randomizado clínico experimental, pacientes foram divididos em dois grupos: um grupo de terapia tríplice padrão e outro com terapia tríplice com e cúrcuma. Exames endoscópicos e histológicos foram analisados para todos os pacientes antes e depois de 8 semanas de tratamento. RESULTADOS A terapia tríplice com grupo de tratamento de cúrcuma diminuiu significativamente os marcadores de malondialdeído, de peróxidos de glutationa, com aumento da capacidade antioxidante total da mucosa gástrica ao final do estudo em comparação com grupos de regime basal e tríplice. Além disso, o dano oxidativo ao DNA diminuiu significativamente em terapia tríplice com grupo de cúrcuma no final do estudo em comparação com a linha de base e comparado à terapia tríplice (P<0,05 para ambos). No grupo de terapia tríplice em combinação com cúrcuma houve diminuição significativa de todas os escores ativos de inflamação crônica e endoscópica dos pacientes em relação ao grupo de terapia de base e tríplice (P<0,05 para ambos). A taxa de erradicação por terapia tríplice + cúrcuma aumentou significativamente em relação à terapia tríplice isolada (P<0,05). CONCLUSÃO A cúrcuma pode ser um complemento útil para melhorar a inflamação crônica e prevenção de alterações cancerígenas em pacientes com gastrite crônica associada ao H.pylori.

Genotoxicity assessment of fipronil (frontline plus®) in Canis familiaris / Avaliação de genotoxicidade do fipronil (frontline plus®) em cães

Fipronil is a pesticide widely used for controlling fleas and ticks in domestic animals, and its short-term exposure can lead to serious effects on animals. However, the possible genotoxic effect of this compound has not been investigated in target animals. Based on the hypothesis that fipronil can induce genotoxicity, this study evaluated the effect of fipronil on DNA damage in peripheral blood cells. For that purpose, ten dogs of both sexes were used in the study. The product (6.7mg/kg) was applied on the dorsal neck region of each animal. Peripheral blood samples were collected immediately prior to application of the product, and at 3, 8 and 24 hours after the application. Samples were processed for comet assay. No statistically significant differences were found among the four time points. The current study suggests for the first time that a single exposure to this pesticide does not induce systemic genotoxic effect in dogs.(AU)

O fipronil é um inseticida/herbicida amplamente utilizado para controle de pulgas e carrapatos em animais domésticos. Sua exposição a curto prazo tem acarretado efeitos deletérios em animais. Entretanto, o possível efeito genotóxico deste composto ainda não foi investigado em animais alvo. Baseando-se na hipótese de que o fipronil pode induzir genotoxicidade, o presente estudo avaliou o efeito deletério do fipronil no material genético de células de sangue periférico. Para isso, dez cães sadios, de ambos os sexos, foram utilizados neste estudo. O produto (6,7mg/kg) foi aplicado na região dorsal do pescoço de cada animal. As amostras de sangue foram coletadas imediatamente antes da aplicação do produto (controle) e após três, oito e 24 horas da aplicação. As amostras foram imediatamente processadas para condução do teste do cometa, a fim de se avaliar os danos basais no DNA. Não houve diferença significativa entre os quatro momentos de coleta em relação aos danos no material genético. O estudo sugere, pela primeira vez, que uma exposição única a este pesticida não induz efeito genotóxico sistêmico em cães.(AU)

Evaluation of cell damage and modulation of cytokines TNF-, IL-6 and IL-10 in macrophages exposed to PpIX-mediated photodynamic therapy

Abstract Little is known regarding whether photodynamic therapy (PDT)-induced cell death can substantially compromise macrophages (M), which are important cells in PDT-induced immune responses. Here, parameters of PDT-mediated M cytotoxicity and cytokine production in response to protoporphyrin IX (PpIX) were evaluated. Peritoneal M from BALB/c mice were stimulated in vitro with PDT, light, PpIX, or lipopolysaccharide (LPS). After that, cell viability, lipid peroxidation, Nitric Oxide (NO), DNA damage, TNF-, IL-6 and IL-10 were evaluated. Short PDT exposure reduced cell viability by 1030%. There was a two-fold increase in NO and DNA degradation, despite the non-increase in lipoperoxidation. PDT increased TNF- and IL-10, particularly in the presence of LPS, and decreased the production of IL-6 to 10-fold. PDT causes cellular stress, induces NO radicals and leads to DNA degradation, generating a cytotoxic microenvironment. Furthermore, PDT modulates pro- and anti-inflammatory cytokines in M.

Resumo Pouco se sabe se a morte celular induzida pela terapia fotodinâmica (PDT) compromete os macrófagos (M), envolvidos nas respostas imunes induzidas pela PDT. Neste estudo, foram avaliados parâmetros de citotoxicidade dos M mediada pela PDT e a produção de citocinas, frente à protoporfirina IX (PpIX). M peritoneais de camundongos BALB/c foram estimulados in vitro com PDT, luz, PpIX ou lipopolissacarídeo (LPS). Após isto, a viabilidade celular (VC), a lipoperoxidação, os níveis de óxido nítrico (NO), de DNA degradado, de TNF-, IL-6 e IL-10 foram avaliados. A exposição curta à PDT reduziu a VC em 10-30%. Os níveis de NO e de DNA degradado duplicaram, sem aumento da lipoperoxidação. Houve aumento de TNF- e IL-10, sendo maior na presença de LPS. Já a produção de IL-6 reduziu em dez vezes. A PDT induz estresse celular, gera radicais NO e causa dano ao DNA, tornando o microambiente citotóxico. Ainda, modula citocinas pró e anti-inflamatórias em M.