Determinação de fumonisina B1 por CLAE: estudo da estabilidade do derivado fumonisina B1-orto-ftaldialdeído / Determination of fumonisin B1 by HPLC: stability study of the fumonisin B1-ortho-phthaldialdehyde derivative

Este estudo avaliou a estabilidade do derivado fumonisina B1-orto-ftaldialdeído sob diferentes condições de pH, tempo e temperatura, durante a reação de derivatização e as análises cromatográficas. Na derivatização, a máxima fluorescência emitida pelo derivado foi obtida empregando-se a solução de tetraborato de sódio 0,1 M em pH 9,0, e esta não diferiu significativamente das emitidas em pH 8,0, 8,5,9,5 e 10,0. Em 2 minutos de reação, obteve-se a máxima fluorescência, e esta não diferiu significativamente das emitidas em 4, 6 e 8 minutos de reação. A variação de 0,5 unidade no pH da solução tampão fosfato de sódio 0,1 M, empregada como fase móvel, influenciou significativamente na separação cromatográfica e na detecção do derivado fumonisina B1-orto-ftaldialdeído; em pH entre 3,3 e 3,8, obtiveram-se as maiores intensidades de fluorescência. O aumento na temperatura da coluna cromatográfica resultou na redução de intensidade da fluorescência. O derivado fumonisina B1-orto-ftaldialdeído manteve-se estável entre 20 e 27 °C. A 30 °C, houve redução significativa em 26,5% na intensidade da fluorescência emitida pelo derivado.

Determinação de fumonisina B1 por CLAE: estudo da estabilidade do derivado fumonisina B1-orto-ftaldialdeído / Determination of fumonisin B1 by HPLC: stability study of the fumonisin B1-ortho-phthaldialdehyde derivative

Este estudo avaliou a estabilidade do derivado fumonisina B 1 - orto -ftaldialdeído sob diferentes condições de pH, tempo e temperatura, durante a reação de derivatização e as análises cromatográficas. Na derivatização, a máxima fluorescência emitida pelo derivado foi obtida empregando-se a solução de tetraborato de sódio 0,1 M em pH 9,0, e esta não diferiu significativamente das emitidas em pH 8,0, 8,5, 9,5 e 10,0. Em 2 minutos de reação, obteve-se a máxima fluorescência, e esta não diferiu significativamente das emitidas em 4, 6 e 8 minutos de reação. A variação de 0,5 unidade no pH da solução tampão fosfato de sódio 0,1 M, empregada como fase móvel , influenciou significativamente na separação cromatográfica e na detecção do derivado fumonisina B 1 - orto -ftaldialdeído; em pH entre 3,3 e 3,8, obtiveram-se as maiores intensidades de fluorescência. O aumento na temperatura da coluna cromatográfica resultou na redução de intensidade da fluorescência. O derivado fumonisina B 1 - orto -ftaldialdeído manteve-se estável entre 20 e 27 °C. A 30 °C, houve redução significativa em 26,5% na intensidade da fluorescência emitida pelo derivado.(AU)

The present study aimed at evaluating the stability of fumonisin B 1 - ortho -phthaldialdehyde derivative under different conditions of pH, time and temperature, during the derivatization reaction and chromatographic analysis. In the derivatization, the maximum fluorescence emitted by the derivative product was obtained employing a 0.1 M sodium tetraborate solution at pH 9.0, and this did not differ significantly from those emitted at pH 8.0, 8.5, 9.5 and 10.0. Within 2 minutes of reaction, the maximum fluorescence was observed and no significant difference was found when compared with those emitted at 4, 6 and 8 minutes of reaction. The 0.5 unit variation in the pH of 0.1 M sodium phosphate buffer solution, which was used as mobile phase , caused a significant effect on the chromatographic separation and on the fumonisin B 1 - ortho -phthaldialdehyde derivative detection . The highest fluorescence intensities were found at pH from 3.3 to 3.8 . Reduction in the fluorescence intensity was causes by increasing the chromatographic column temperature . The fumonisin B 1 - ortho -phthaldialdehyde derivative remained stable from 20 ºC to 27 ºC. At 30 °C, it was found a significant reduction in 26.5% in the fluorescence intensity emitted by the derivative product.(AU)

Determination of apramycin in oral soluble powder by a HPLC method using pre-column derivatization with o-phthalaldehyde and UV detection / Determinação da apramicina em pó solúvel oral por um método de HPLC utilizando pré-coluna de derivação com o de detecção de ftalaldeído e UV

A high-performance liquid chromatographic method employing pre-column derivatization with o-phthalaldehyde (OPA) and 2-mercaptoacetic acid was developed for the determination of apramycin, an aminoglycoside antibiotic used in veterinary medicine, in the oral soluble powder form. The chromatographic separation was done by ion-pair HPLC using a C18 reversed-phase column, Synergy Hydro (150 mm x 4.6 mm x 4 µm) and mobile phase composed of 0.005 mol/L sodium octanosulfonate in a mixture of acetonitrile: water: acetic acid (45:55:2) (v/v/v) with a flow rate of 1.0 mL/min; the UV detector was operated at 332 nm. The developed method was validated according to official compendia guidelines, having demonstrated robustness, selectivity and linearity for the concentration range of 0.02 to 0.05 mg/mL, precision (with RSD < 2.0 percent both for intra and inter-day precision) accuracy (average recuperation of 99.33 percent) and detectivity (quantification and detection limits of 0.08 and 0.02 µg/mL, respectively). Three batches of commercial apramycin oral soluble powder were analyzed by both the proposed method and the official microbiological method, where all the results obtained were in the acceptable range (95 percent to 105 percent of labeled value of apramycin). Both methods were statistically compared by the t test, which yielded no significant differences (α = 0.05) thereby confirming the equivalence of the methods.

Foi desenvolvido um método por cromatografia líquida alta eficiência empregando derivatização pré-coluna com o-ftalaldeído (OPA) e ácido mercaptoacético para determinação de apramicina, um antibiótico aminoglicosídeo de uso veterinário, em pó oral solúvel. A separação cromatográfica foi feita por fase reversa com pareamento iônico utilizando-se coluna Synergy Hydro C18 (150 x 4,6 mm x 4 µm) e fase móvel composta por octanossulfonato de sódio 0,005 mol/L em mistura de acetonitrila:água:ácido acético nas proporções 45:55:2 (v/v/v), numa vazão de 1.0 mL/min; efetuou-se detecção por UV a 332 nm. O método foi validado de acordo com os compêndios oficiais e demonstrou robustez, seletividade, linearidade na faixa de 0,02 a 0,05 mg/mL, precisão (com DPR < 2,0 por cento tanto para a precisão intra-dia quanto para a precisão inter-dia), exatidão (recuperação média de 99,33 por cento) e detectabilidade (limite de quantificação e de detecção iguais a 0,08 e 0,02 µg/mL, respectivamente). Analisaram-se 3 lotes de apramicina pó oral solúvel pelo método proposto e pelo método microbiológico oficial e todos os resultados obtidos estavam dentro do limite de aceitação (95 por cento-105 por cento valor rotulado de apramicina). Ambos os métodos foram comparados estatisticamente pelo teste t, não sendo encontradas diferenças significativas entre eles para α=0,05, sendo os dois equivalentes.