Determinación rápida de la identidad del polisacárido de Salmonella Typhi y toxoide diftérico en vacunas conjugadas / Rapid determination of the identity of Salmonella Typhi polysaccharide and diphtheria toxoid in conjugate vaccines

El polisacárido Vi (PsVi) de Salmonella Typhi es un antígeno T-independiente y ha demostrado ser protector en adultos jóvenes. Sin embargo, para aumentar la respuesta de anticuerpos y conferir propiedades T-dependientes al polisacárido, se ha conjugado a proteínas. Dentro de los controles exigidos por los organismos regulatorios para estas vacunas está la identidad antigénica de sus componentes y para eso se recomiendan el uso de técnicas de Resonancia Magnética Nuclear o técnicas serológicas. El objetivo del presente trabajo, fue establecer las condiciones óptimas de trabajo de un Dot Blot que permitiera determinar, rápidamente, la identidad de los antígenos en vacunas conjugadas contra S. Typhi. Para ello, se estudiaron los tiempos de incubación, las concentraciones óptimas de anticuerpo monoclonal (AcM) y del ingrediente farmacéutico activo (IFA), así como los volúmenes de aplicación óptimos para las IFAs y formulaciones vacunales, tanto para el PsVi como para el toxoide diftérico (TD). Los resultados mostraron que para la determinación de la identidad antigénica fueron suficientes 5 µL de muestras de los conjugados monovalentes en una dilución de 1/10 (vol/vol) e igual volumen para las formulaciones vacunales. Quedó demostrado que la concentración de 2,5 µg/mL para el AcM contra el PsVi y a 2 µg/mL para el AcM contra TD fueron suficientes para la determinación; mientras que los tiempos de incubación fueron ajustados a 15 min con incubación a 37 ºC. Como conclusión del trabajo se puede decir que quedaron establecidas las condiciones óptimas de trabajo para la determinación rápida de la identidad antigénica del PsVi y del TD presentes en IFA y formulaciones vacunales conjugadas(AU)

Vi polysaccharide from Salmonella Typhi is a T-independent antigen that has proven to be protective in young adults. However, it has been conjugated to proteins in order to confer T-dependent properties to the polysaccharide, and improving the antibody response. The regulatory agencies require knowing the identity of antigens included in vaccines. The Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy and serological techniques are recommended. The aim of this work was to establish the optimal working conditions of a Dot Blot that would allow to determine quickly the identity of the antigens in conjugate vaccines against S. Typhi. The incubation times, optimum concentrations of monoclonal antibodies (MAb) and active pharmaceutical ingredient (API), as well as optimum application volumes for APIs and vaccine formulations were studied for both, PsVi and diphtheria toxoid (DT). It was proven that 5 µL of samples of the monovalent conjugates were sufficient at a dilution of 1/10 (vol/vol) and an equal volume for the vaccine formulations. It was demonstrated that the concentration of 2.5 µg/mL for the MAb against PsVi and 2 µg/mL for the MAb against DT were suitable. The incubation times were adjusted to 15 min with incubation at 37 ºC. It was established a simple and rapid method for the specific identification of PsVi and DT present in API and conjugate vaccines(AU)

Determinación rápida de la identidad del polisacárido de Salmonella Typhi y toxoide diftérico en vacunas conjugadas / Rapid determination of the identity of Salmonella Typhi polysaccharide and diphtheria toxoid in conjugate vaccines

El polisacárido Vi (PsVi) de Salmonella Typhi es un antígeno T-independiente y ha demostrado ser protector en adultos jóvenes. Sin embargo, para aumentar la respuesta de anticuerpos y conferir propiedades T-dependientes al polisacárido, se ha conjugado a proteínas. Dentro de los controles exigidos por los organismos regulatorios para estas vacunas está la identidad antigénica de sus componentes y para eso se recomiendan el uso de técnicas de Resonancia Magnética Nuclear o técnicas serológicas. El objetivo del presente trabajo, fue establecer las condiciones óptimas de trabajo de un Dot Blot que permitiera determinar, rápidamente, la identidad de los antígenos en vacunas conjugadas contra S. Typhi. Para ello, se estudiaron los tiempos de incubación, las concentraciones óptimas de anticuerpo monoclonal (AcM) y del ingrediente farmacéutico activo (IFA), así como los volúmenes de aplicación óptimos para las IFAs y formulaciones vacunales, tanto para el PsVi como para el toxoide diftérico (TD). Los resultados mostraron que para la determinación de la identidad antigénica fueron suficientes 5 µL de muestras de los conjugados monovalentes en una dilución de 1/10 (vol/vol) e igual volumen para las formulaciones vacunales. Quedó demostrado que la concentración de 2,5 µg/mL para el AcM contra el PsVi y a 2 µg/mL para el AcM contra TD fueron suficientes para la determinación; mientras que los tiempos de incubación fueron ajustados a 15 min con incubación a 37 ºC. Como conclusión del trabajo se puede decir que quedaron establecidas las condiciones óptimas de trabajo para la determinación rápida de la identidad antigénica del PsVi y del TD presentes en IFA y formulaciones vacunales conjugadas(AU)

Vi polysaccharide from Salmonella Typhi is a T-independent antigen that has proven to be protective in young adults. However, it has been conjugated to proteins in order to confer T-dependent properties to the polysaccharide, and improving the antibody response. The regulatory agencies require knowing the identity of antigens included in vaccines. The Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy and serological techniques are recommended. The aim of this work was to establish the optimal working conditions of a Dot Blot that would allow to determine quickly the identity of the antigens in conjugate vaccines against S. Typhi. The incubation times, optimum concentrations of monoclonal antibodies (MAb) and active pharmaceutical ingredient (API), as well as optimum application volumes for APIs and vaccine formulations were studied for both, PsVi and diphtheria toxoid (DT). It was proven that 5 µL of samples of the monovalent conjugates were sufficient at a dilution of 1/10 (vol/vol) and an equal volume for the vaccine formulations. It was demonstrated that the concentration of 2.5 µg/mL for the MAb against PsVi and 2 µg/mL for the MAb against DT were suitable. The incubation times were adjusted to 15 min with incubation at 37 ºC. It was established a simple and rapid method for the specific identification of PsVi and DT present in API and conjugate vaccines(AU)

Evaluación de los Anticuerpos Monoclonales anti-polisacárido capsular de Neisseria meningitidis serogrupos A, C, Y, W y X para su uso en los ensayos de identidad / Evaluation of monoclonal antibodies to the capsular polysaccharide of Neisseria meningitidis serogroups A, C, Y, W and X to be used in the identity assays

Los serogrupos A, B, C, W, Y y X de Neisseria meningitidis (Nm) son los principales responsables de la enfermedad meningocóccica y contra ellos va dirigido actualmente el desarrollo de vacunas para la prevención de la enfermedad. El Instituto Finlay se encuentra desarrollando vacunas antimeningocóccicas polisacarídicas contra los serogrupos A, C, W, Y y X. En el desarrollo de estas vacunas, el ensayo de identidad constituye un requisito obligatorio para la liberación final del producto. Este ensayo se realiza mediante la técnica Dot Blot, utilizando anticuerpos policlonales (AcP) comerciales; sin embargo, el Instituto Finlay cuenta en este momento con una plataforma de Anticuerpos Monoclonales (AcM) contra los cinco polisacáridos (PsC) de Nm. El objetivo del trabajo fue evaluar la sensibilidad y especificidad de estos AcM para su uso en los ensayos de identidad de las vacunas antimeningocócicas polisacarídicas, con vista a sustituir los AcP comerciales empleados hasta el momento. La sensibilidad de los AcM se evaluó frente al PsC homólogo y la especificidad frente al resto de los PsC de Nm. Se realizó el ensayo de identidad por Dot Blot a cuatro vacunas polisacarídicas multivalentes, usando los AcM comparativamente con los AcP. Todos los AcM evaluados mostraron una alta sensibilidad y especificidad, no encontrándose reactividad cruzada y siendo capaces de identificar en las formulaciones vacunales multivalentes la presencia del PsC homólogo. Concluimos que los AcM obtenidos en nuestro instituto pueden ser usados para los ensayos de identidad de las vacunas(AU)

Neisseria meningitidis serogroups A, B, C, W, Y and X are the main responsible of meningococcal disease. Vaccines are necessary to prevent this disease. The Finlay Institute is developing polysaccharide vaccines against serogroups A, C, W, Y and X. In the development of vaccines, the identity assay is a mandatory requirement for final product release. This test is performed by Dot Blot technique using commercial polyclonal antibodies (PAb). However, the Finlay Institute has monoclonal antibodies (mAbs) against capsular polysaccharides from N. meningitidis (CPs). The objective of this work was to use these mAbs in identity tests to replace commercial PAb. The specificity of the mAbs, the cross-reactivity with other CPs and the identity of the CPs present in four multivalent polysaccharide vaccines, were evaluated. All tested mAbs showed high specificity, and no cross-reactivity was found. Also all mAbs were able to identify the presence of homologous PsC in multivalent vaccine formulations. We conclude that the mAbs obtained in our institution can be used for identity assays of vaccines(AU)