Obtención de celulasas bacterianas usando residuos orgánicos generados en plazas de mercado / Bacterial cellulases obtention from organic wastes generated in marketplaces

RESUMEN Los residuos agrícolas son una fuente de celulosa que puede ser aprovechada para producir enzimas hidrolíticas, como las celulasas, mediante acción microbiana. Estas celulasas son utilizadas en procesos extractivos de biomoléculas, en la producción de biogás, en la industria textil, detergente, alimentaria y del papel. El propósito del estudio es la obtención de celulasas bacterianas utilizando residuos orgánicos, generados en plazas de mercado. Se realizaron dos medios de cultivo (A1 y A2), a partir de ameros de mazorca y cáscaras de leguminosas, ajustando el pH del medio A1 a 7,0 y el de A2 a 5,0. Los medios fueron fermentados por 75 horas, mediante la cepa bacteriana C6M2, aislada de residuos de plazas de mercado, monitoreando la actividad enzimática, la concentración de azúcares reductores y la celulosa residual. La máxima actividad celulolítica se logró a las 56 horas de fermentación en A1 y a las 32 horas, en A2. El extracto enzimático se precipitó, dializó y ultrafiltró, obteniendo una actividad final de 9,07 ± 0,48 U/mL. Los ameros y las cáscaras de leguminosa se pueden aprovechar como sustratos en la producción de celulasas, con posibles aplicaciones en procesos donde requieran bajos grados de pureza.

ABSTRACT Agricultural wastes are a source of cellulose that could be used to produce hydrolytic enzymes such as cellulases by microbial action. Cellulases are used in the extractive process of biomolecules, in biogas production, textile, detergent, food, and paper industry. The study purpose is the obtention of bacterial cellulases using organic wastes generated in marketplaces. Two culture media were done (A1 and A2) with corn cob leaves and legume seed pods adjusting the A1 medium pH at 7.0 and the A2 pH at 5.0. The media were fermented for 75 hours by the bacterial strain C6M2, isolated from marketplace wastes, and the enzyme activity, reducing sugar concentration, and residual cellulose were monitored. The maximum cellulolytic activity was obtained at 56 hours of fermentation in A1 and in A2 it was at 32 hours. The enzyme extract was precipitated, dialyzed and ultra-filtrated obtaining a final activity of 9.07 ± 0.48 U/mL. The corn cob leaves and legume seed pods can be used as substrates in the production of cellulases which might be applied in processes with low requirements of enzyme purity.

Actividades enzimáticas séricas de la ceruplasmina y la mieloperoxidasa en diabéticos tipo 2

Introducción: La diabetes mellitus tipo 2 se caracteriza por la hiperglucemia debido a la insuficiente producción de insulina de las células β. La mieloperoxidasa promueve el estrés oxidativo durante la inflamación y la ceruloplasmina se considera su inhibidor endógeno. Objetivo: Evaluar la relación entre la ceruloplasmina y la mieloperoxidasa, determinadas simultáneamente en el suero de pacientes diabéticos tipo 2. Métodos: Se estudiaron 362 pacientes diabéticos tipo 2 y 110 sujetos sanos. La actividad sérica de la ceruloplasmina se determinó por el método de Siotto; y el de la mieloperoxidasa, por el de Kraeisz. Resultados: El 72 % de los pacientes diabéticos tenían hiperglucemia y el 77 % presentaba obesidad abdominal. Las actividades de ambas enzimas se incrementaron significativamente en relación con el grupo control. El coeficiente de correlación de la actividad enzimática resultó bajo. El cociente RMPO/CP de los pacientes diabéticos superó el de los controles. La ceruloplasmina no inhibió la mieloperoxidasa. Conclusiones: Predominó la mieloperoxidasa, por tanto, no se manifestó el efecto inhibitorio de la ceruloplasmina. La elevada actividad de la mieloperoxidasa se asocia con un agravamiento del cuadro clínico del paciente diabético.

Introduction: Type 2 diabetes mellitus is characterized by hyperglycemia due to insufficient insulin production by β cells. Myeloperoxidase promotes oxidative stress during inflammation and ceruloplasmin is considered its endogenous inhibitor. Objective: To evaluate the relationship between ceruloplasmin and myeloperoxidase, determined simultaneously in the serum of type 2 diabetic patients. Methods: A total of 362 type 2 diabetic patients and 110 healthy subjects were studied. Serum ceruloplasmin activity was determined by the Siotto KM method and myeloperoxidase by the Kraeisz JE method. Results: 72% of diabetic patients had hyperglycemia and 77% had abdominal obesity. The activities of both enzymes were significantly increased relative to the control group. The correlation coefficient of enzyme activity was low. The ORMO/CP ratio of diabetic patients exceeded that of controls. Ceruloplasmin did not inhibit myeloperoxidase. Conclusions: Myeloperoxidase predominated, therefore, the inhibitory effect of ceruloplasmin was not manifested. The high activity of myeloperoxidase was associated with a worsening of the clinical picture of the diabetic patient.

Ixodicidal effect of extracts from Cordia boissieri, Artemisia ludoviciana and Litchi chinensis on Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) / Efeito ixodicida de extratos de Cordia boissieri, Artemisia ludoviciana e Litchi chinensis sobre Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae)

The ixodicidal activity of the methanolic extracts of Artemisia ludoviciana (Astereceae), Cordia boissieri (Boraginaceae) and Litchi chinensis (Sapindaceae) against two field populations of Rhipicephalus (Boophilus) microplus from the state of Nuevo Leon (NL) and Veracruz (VER) was evaluated. The extract of L. chinensis in the concentration of 150 mg/ml showed efficacies of 100% and 99% against engorged females and mortalities of 98% and 99% against larvae. C. boissieri in the same concentration showed efficacies of 71% and 37% against engorged adults and mortalities of 33.04% and 10.33% against larvae and A. ludoviciana had efficacies of 94% and 83% in adults and mortalities of 89.39% and 89.21% against larvae in both populations respectively. The enzymatic activity of Acetylcholinesterase (AChE), Carboxylesterase (CaE), Glutathione-S-Transferase (GST) and Alkaline Phosphatase (ALP) was measured in both populations of ticks. As a result, a significant difference between both populations was shown, being the VER population the one that exhibited a higher enzymatic activity (p ≤ 0.05). It can be concluded that the methanolic extract of the seed of L. chinensis shows potential ixodicidal activity and can be used as an alternative source of tick control, however, prior characterization, toxicity and formulation studies are necessary.

No presente trabalho, a atividade ixodicida de extratos metanólicos de Artemisia ludoviciana (Astereceae), Cordia boissieri (Boraginaceae) e Litchi chinensis (Sapindaceae) contra Rhipicephalus (Boophilus) microplus foi avaliada em duas populações de campo nos estados de Nuevo León (NL) y Veracruz (VER). O extrato de L. chinensis na concentração de 150 mg/ml, apresentou eficácia de 100% e 99% contra fêmeas ingurgitadas, e taxas de mortalidade de 98% e 99% contra larvas. C. boissieri, na mesma concentração, apresentou eficácia de 71% e 37% contra adultas ingurgitados, e taxas de mortalidade de 33,04% e 10,33% contra larvas e A. ludoviciana apresentou eficácias de 94% e 83% em adultos e mortalidade de 89,39% e 89,21% contra larvas em ambas as populações respectivamente. Por outro lado, a atividade enzimática da Acetilcolinesterase (AChE), Carboxilesterase (CaE), Glutationa-S-Transferase (GST) e Fosfatase Alcalina (ALP) foi medida em ambas as populações de carrapatos. Como resultado, foi apresentada uma diferença significativa entre as populações, sendo a população VER a que apresentou maior atividade enzimática (p ≤ 0,05). Assim, pode-se concluir que o extrato metanólico da semente de L. chinensis apresenta potencial atividade ixodicida e pode ser utilizado como fonte alternativa de controle de carrapatos, porém estudos prévios de caracterização, toxicidade e formulação são necessários.

Estandarización y evaluación del desempeño de un inmunoensayo para la detección de anticuerpos contra el dominio de unión a receptor de la proteína de espícula del virus SARS-CoV-2 / Establishment and performance evaluation of an immunoassay for the antibody detection against the receptor binding domain of the SARS-CoV-2 spike protein

Resumen Objetivo: Establecer un inmunoensayo semicuantitativo para la detección de anticuerpos contra el dominio de unión al receptor de la proteína de espícula del coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave tipo 2 y la evaluación de su desempeño como herramienta de apoyo diagnóstico. Métodos: Se generó una proteína recombinante del dominio de unión a receptor de la proteína de espícula del coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave tipo 2. Dicha proteína se empleó como sustrato antigénico en la estandarización de dos ensayos semicuantitativos por inmunoadsorción ligados a enzima para la detección de inmunoglobulinas M e inmunoglobulinas G humanas. Se utilizó un conjunto de muestras de suero positivas (n=129), provenientes de donantes voluntarios con infección previa por el virus SARS-CoV-2, confirmada mediante reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa, y tomadas entre agosto de 2020 y noviembre de 2021. Además, se empleó un panel de muestras prepandémicas negativas (n=196) obtenidas antes de diciembre de 2019 para la evaluación del desempeño de los ensayos; se recibieron muestras múltiples seriadas de 99 donantes voluntarios para examinar la respuesta de la prueba ante la seroconversión y se estudió la posible asociación entre las seropositividades por coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave tipo 2 y por el virus del dengue para la evaluación de reacciones cruzadas inespecíficas. Resultados: El ensayo de detección de inmunoglobulina G mostró 81.4 % de sensibilidad, 86.2 % de especificidad y valores predictivos positivos y negativos de 79.5 % y 87.6 % respectivamente. Por su parte, el ensayo de detección de inmunoglobulina M mostró solamente 72.1 % de sensibilidad, 54.1 % de especificidad y valores predictivos positivos y negativos de 25.6 % y 89.8 % respectivamente. No se encontraron diferencias significativas entre las mediciones semicuantitativas según sexo ni correlación lineal entre esta variable y la edad. Los valores obtenidos para el inmunoensayo presentaron diferencias significativas según el autorreporte de presencia o ausencia de síntomas compatibles con COVID-19. No se encontró correlación entre las seropositividades contra el coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave tipo 2 y el virus del dengue. El ensayo de detección de inmunoglobulina G generó valores inferiores pero constantes en muestras de donantes voluntarios que autorreportaron no haber tenido contacto con el virus SARS-CoV-2. En contraste, las muestras de donantes expuestos al virus SARS-CoV-2 mostraron valores elevados pero variables en magnitud. Además, se observaron valores elevados y variables en muestras de voluntarios vacunados o con infección previa. Conclusiones: Nuestro ensayo de detección de inmunoglobulina M presenta escaso valor diagnóstico. Por el contrario, el ensayo de detección de inmunoglobulina G muestra un rendimiento satisfactorio y se apega al comportamiento reportado para este tipo de prueba según las características demográficas y clínicas de los usuarios; por lo tanto, este ensayo podría ser empleado como herramienta fiable y práctica en aplicaciones clínicas y como apoyo al diagnóstico. Es necesario desarrollar más estudios sobre reacciones cruzadas entre los anticuerpos contra el coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave tipo 2 con aquellos de otras entidades de interés clínico, sobre todo las presentes en países tropicales como el nuestro.

Abstract Aim: To establish a semiquantitative immunoassay for antibody detection against the RBD of the severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 spike protein and to evaluate its performance to be used as a diagnostic supporting tool. Methods: A recombinant severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 spike protein was produced. This protein was used as antigenic substrate in two semiquantitative enzyme-linked immunoassays for the detection of human immunoglobulins M and immunoglobulins G. A set of serum samples (N=129) from patients with prior viral infection confirmed by reverse transcription polymerase chain reaction, processed between August 2020 and November 2021, were used as positive samples. A panel of pre-pandemic samples (N=196), obtained prior to December 2019, were used as negative samples to evaluate the assay performance. Multiple samples from 99 volunteers were used to examine test response to seroconversion. The interference between seropositivity against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 and dengue virus was also evaluated. Results: The immunoglobulin G detection assay showed 81.4% sensitivity, 86.2% specificity, and positive and negative predictive values of 79.5% and 87.6% respectively. The immunoglobulin M detection assay yielded 72.1% sensitivity, 54.1% specificity, and positive and negative predictive values of 25.6% and 89.8% respectively. No significant differences were found between the measurements according to sex or linear correlation between this variable and age. The values presented significant differences according to the condition of self-reported presence or absence of COVID-19 like symptoms. No correlation was found between seropositivity for severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 and dengue virus. The immunoglobulin G detection assay generated lower but constant values on samples from voluntary donors who reported not having any contact with the virus compared to samples from donors exposed to it, and high but variable values in magnitude on samples from vaccinated volunteers or those with previous severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 infection compared to samples from donors without exposure to the viral antigen. Conclusions: Our established immunoglobulin M detection assay presents poor diagnostic value. On the other hand, the immunoglobulin G detection assay shows satisfactory performance, and coheres to the behavior reported for this type of test according to the demographic and clinic characteristics of the volunteer, so it could be used as a reliable and practical tool in clinical applications and as diagnostic complement. It is necessary to develop more studies on cross-reactions of antibodies against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 with other entities of clinical interest and present in our tropical area.

Biomasa residual de industria del Cannabis, una alternativa para la obtención de productos de alto valor agregado

A medida que como sociedad vamos dando más importancia a lograr una economía circular, se hace importante encontrar fuentes renovables aptas para la producción de biocombustibles y bioquímicos. En los últimos años, diversas fuentes de biomasa lignocelulósica han sido estudiadas para estos propósitos. Dentro de estas fuentes de biomasa se encuentra el cáñamo (Cannabis sativa L.), siendo parte de una industria que ha crecido a pasos agigantados en las últimas décadas, en Colombia, desde su legalización. Específicamente, la industria del cannabis medicinal es responsable de generar una enorme cantidad de residuos en forma de los tallos de la planta, considerados un subproducto de bajo valor. En esta revisión se compila la información de diferentes estudios sobre el aprovechamiento de la fracción de polisacáridos de biomasa cáñamo, mediante transformaciones químicas y bioquímicas, para la obtención de productos de valor agregado. Se encontró que la mayoría de estudios están enfocados en la obtención de bioetanol o biogás; se encontraron también reportes de otras moléculas como ácido succínico, ácido láctico, furfural, polihidroxialcanoatos y bisaboleno. La viabilidad a nivel industrial de todos estos procesos permanece siendo una incógnita, pues los pasos de pretratamiento, hidrólisis y de conversión final utilizados suelen ser costosos. Es necesario que los estudios que realicen en el futuro se enfoquen en optimizar las condiciones de estos procesos y hacerlos verdes y así asegurar que puedan ser escalados.

As we as a society, give more importance to achieving a circular economy, it becomes important to find renewable sources suitable for the production of biofuels and biochemicals. In the last years, several different sources of lignocellulosic biomass have been studied for these purposes. One of these biomass sources is hemp (Cannabis sativa L), being part of an industry that has grown through giant steps in the last decades, in Colombia, since its legalization. Specifically, the industry of medicinal hemp is responsible for the generation of huge amounts of residues in the form of the plant stalks, considered a low value subproduct. This review compiles the information of several studies about the exploitation of the polysaccharide portion of hemp biomass through chemical and biochemical transformations, obtaining value-added products. It was found that most of these studies focus on the production of bioetanol or biogas; reports of other molecules such as succinic acid, furfural, polyhydroxyalkanoates and bisabolene were also found. Industrial viability of these processes remains a question, since pretreatment, hydrolysis and final conversion steps are usually expensive. It necessary that future studies focus on optimizing conditions of these processes as well as making them green, ensuring that they can be scaled.

Inhibición de enzimas fosfolipasas A2 de venenos totales de serpientes como estrategia en la búsqueda de nuevos fármacos / Enzyme phospholipase A2 inhibition from snake venoms as strategy to search for new drug

Introducción: Los fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINEs) son ampliamente utilizados para la terapia del dolor, a pesar de sus efectos secundarios que ocurren a nivel renal, estomacal y coagulatorio. Las fosfolipasas A2 (PLA2) presentes en los venenos de serpientes, abejas e incluso en el organismo humano, son responsables de varios procesos fisiológicos y patológicos. Las enzimas hidrolizan fosfolípidos de membrana liberando ácido araquidónico, un precursor de los eicosanoides pro-inflamatorios, los cuales originan mediadores de la inflamación. Objetivo: El propósito de este trabajo es revisar nuevas moléculas capaces de bloquear la escisión de los fosfolípidos de membrana por acción de las PLA2, evitando la formación de mediadores de inflamación. Metodología: Se realizó una revisión bibliográfica de estudios publicados desde 2011 a 2021, que reportan compuestos con actividad inhibitoria frente a PLA2. El potencial de los estudios de relación estructura actividad se discute como estrategia para encontrar compuestos activos ante PLA2. Resultados: Se revisaron 26 estudios que incluyen compuestos naturales y sintéticos y se recopilaron 93 moléculas con actividad inhibitoria, destacando su potencial como inhibidores de PLA2. Conclusiones: La actividad inhibitoria de los compuestos revisados podría estar asociada a los patrones de sustitución en el anillo bencénico de las moléculas. La evaluación de características moleculares relevantes en la inhibición de PLA2 puede guiar a la identificación de candidatos para síntesis de nuevos inhibidores enzimáticos.

Introduction: Nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are widely used for pain therapy, despite its side effects in renal, stomach and coagulant systems. Phospholipases A2 (PLA2) enzymes, present in snakes and bees' venoms, and even in the human organism, are responsible for several physiological and pathological processes. These enzymes hydrolyze membrane phospholipids, releasing arachidonic acid, a precursor of pro-inflammatory eicosanoids, which give rise to inflammatory mediators. Objective: The aim of the present work is to review new molecules able to block the cleavage of membrane phospholipids by the action of phospholipases A2, preventing the formation of inflammatory mediators. Methodology: A bibliographic revision from literature published from 2011 to 2021 focused on PLA2 inhibitors was carried out. The potential of structure-activity relationship studies is discussed as a strategy to find active compounds against PLA2. Results: 26 studies including natural and synthetic compounds were reviewed and data from 93 molecules with inhibitory activity were collected, highlighting its potential as PLA2 inhibitors. Conclusion: The inhibitory activity of the reviewed compounds could be associated with the substitution patterns in the benzene ring of the molecules. The evaluation of molecular moieties with relevant capacity to inhibit PLA2 will lead to the identification of candidates for synthesis of new enzymes inhibitors.

Respostas fisiológicas e enzimáticas no milho sob diferentes concentrações de nitrogênio / Physiological and enzymatic responses in maize under different nitrogen concentrations

O estudo de aspectos químicos e bioquímicos associados ao desenvolvimento das diferentes partesdas plantas permite a observação e o entendimento de uma série de reações que levam à produção de fitomassa e grãos pela cultura de milho. Assim, objetivou-se estudar a diferença na eficiência de uso do nitrogênio nas raízes e parte aérea em dois genótipos de milho, na fase inicial de crescimento das plantas e avaliar as respostas bioquímico-fisiológicas desses órgãos quando as plantas são submetidas a distintas doses de N em condições hidropônicas. O experimento foi realizado em casa de vegetação, em solução nutritiva por20 dias, com dois genótipos (AS1522 e AS1596) submetidos a quatro concentrações de N (zero; 112; 224 e 448 mg dm-3). O delineamento utilizado foi em inteiramente casualizado com trêsrepetições. Houve diferença entre os genótipos estudados para as variáveis biométricas, massa de matéria seca, acúmulo de N e aminoácidos livres totais na parte aérea das plantas. Na raiz, a atividade da redutase do nitrato foi a variável que diferenciou a eficiência no uso do nitrogênio entre os genótipos. O genótipo AS1596 é mais eficiente no uso do nitrogênio.(AU)

The study of chemical and biochemical aspects associated with the development of different plant parts enables the assessment of a series of reactions leading to the production of biomass and grain culture. Thus, the objective of was to study the difference in nitrogen efficiency in roots and shoots of two corn genotypes in the initial stages of plants growth, and evaluate the biochemical and physiological responses of these organs, when plants are subjected to different doses of N, under hydroponic conditions. The experiment was conducted in a greenhouse in nutrient solution for 20 days, with two genotypes(AS1522 and AS1596) subjected to four N concentrations (zero, 112, 224 and 448 mg dm-3). Completely randomized desing with three replications das apply. The major differences among genotypes for biometric variables, dry matter, Nac cumulation and free amino acids were observed in the shoots. At root, the activity of nitrate reductase activity was the variable that stood out and provided the largest differences between genotypes. The genotype AS1596 is more efficient in N utilization.(AU)

Clinical management and diagnosis of CLN2 disease: consensus of the Brazilian experts group / Manejo clínico e diagnóstico da doença CLN2: consenso do grupo de especialistas brasileiros

Abstract Neuronal ceroid lipofuscinosis type 2 (CLN2) is a rare neurodegenerative genetic disease that affects children in early life. Its classic form is rapidly progressive, leading to death within the first 10 years. The urge for earlier diagnosis increases with the availability of enzyme replacement therapy. A panel of nine Brazilian child neurologists combined their expertise in CLN2 with evidence from the medical literature to establish a consensus to manage this disease in Brazil. They voted 92 questions including diagnosis, clinical manifestations, and treatment of the disease, considering the access to healthcare in this country. Clinicians should suspect CLN2 disease in any child, from 2 to 4 years old, with language delay and epilepsy. Even though the classic form is the most prevalent, atypical cases with different phenotypes can be found. Electroencephalogram, magnetic resonance imaging, molecular and biochemical testing are the main tools to investigateand confirm the diagnosis. However, we have limited access to molecular testing in Brazil, and rely on the support from the pharmaceutical industry. The management of CLN2 should involve a multidisciplinary team and focus on the quality of life of patients and on family support. Enzyme replacement therapy with Cerliponase α is an innovative treatment approved in Brazil since 2018; it delays functional decline and provides quality of life. Given the difficulties for the diagnosis and treatment of rare diseases in our public health system, the early diagnosis of CLN2 needs improvement as enzyme replacement therapy is available and modifies the prognosis of patients.

Resumo Lipofuscinose ceróide neuronal (CLN2) é uma doença genética neurodegenerativa rara que afeta crianças nos primeiros anos de vida. A sua forma clássica é rapidamente progressiva, levando à morte nos primeiros 10 anos. A necessidade de um diagnóstico precoce aumenta com a disponibilidade do tratamento de terapia enzimática. Um painel de nove neurologistas infantis brasileiros combinou sua experiência em CLN2 com evidências da literatura médica para estabelecer um consenso no manejo desta doença no Brasil. Eles votaram 92 questões abordando diagnóstico, manifestações clínicas e tratamento, considerando o acesso à saúde no Brasil. Deve-se suspeitar de CLN2 em qualquer criança de 2 a 4 anos de idade que apresente atraso de linguagem e epilepsia. Apesar da forma clássica ser a mais prevalente, podem ser encontrados casos atípicos com diferentes fenótipos. Eletroencefalograma, ressonância magnética, testes moleculares e bioquímicos são as principais ferramentas para investigar e confirmar o diagnóstico. No entanto, o acesso aos testes moleculares é limitado no Brasil, necessitando contar com o apoio da indústria farmacêutica. O manejo da CLN2 deve envolver uma equipe multidisciplinar e focar na qualidade de vida dos pacientes e no apoio familiar. A terapia de reposição enzimática com Cerliponase alfa é um tratamento inovador aprovado no Brasil desde 2018; ele retarda o declínio funcional e proporciona qualidade de vida. Diante das dificuldades para o diagnóstico e tratamento de doenças raras em nosso sistema público de saúde, o diagnóstico precoce de CLN2 precisa de melhorias pois a terapia de reposição enzimática está disponível e modifica o prognóstico dos pacientes.

Relación estructura-función de la enzima uroporfirinógeno descarboxilasa: implicancias para la comprensión y el tratamiento de la porfiria cutánea tarda / Structure-function relationship of the enzyme uroporphyrinogen decarboxylase: implications for the understanding and treatment of porphyria cutanea tarda / Relação estrutura-função da enzima uroporfirinogênio descarbioxilase: implicações para a compreensão e tratamento da porfiria cutânea tardia / Reconocimiento a la trayectoria del Prof. Dr. Juan Miguel Castagnino†

Resumen La uroporfirinógeno descarboxilasa humana (UROD-h) es la quinta enzima del camino biosintético del hemo y su actividad deficiente, relacionada a mutaciones en su gen, se encuentra asociada a un subgrupo de porfirias. El objetivo de este trabajo fue estudiar la relación entre la dimerización de la enzima y su actividad enzimática y comprobar si la dimerización de UROD-h es imprescindible tanto para la primera etapa de la reacción (urogen→heptagen), como para la segunda etapa (heptagen→coprogen). Con ese objetivo, se expresó y purificó la UROD-h hasta homogeneidad, se analizó el comportamiento dímero-monómero bajo distintas condiciones que pudieran desplazar el equilibrio de dimerización y se evaluó la actividad enzimática en dichas condiciones. Los resultados obtenidos sugieren que la especie activa para la primera etapa de la reacción es el homodímero y que tanto el dímero como el monómero se comportan como especies activas para la segunda etapa de la reacción. Se propone que mutaciones clínicas como la Y311C, existentes en pacientes con porfiria cutánea tarda, podrían afectar la estabilidad del dímero y podrían ser el blanco para futuras terapias génicas.

Abstract Human uroporphyrinogen decarboxylase (UROD-h) is the fifth enzyme in the heme biosynthetic pathway and its deficient activity, related to mutations in its gene, is associated with a subset of porphyrias. The objective of this work was to study the relationship between the dimerisation of the enzyme and its enzymatic activity and to verify if the dimerisation of UROD-h is essential both for the first stage of the reaction (urogen→heptagen), and for the second stage (heptagen→ coprogen). With this objective, the UROD-h was expressed and purified to homogeneity, the dimer- monomer behaviour was analysed under different conditions, which could shift the dimerisation equilibrium, and the enzymatic activity was evaluated under these conditions. The results obtained suggest that the active species for the first stage of the reaction is the homodimer, and both the dimer and the monomer behaved as active species for the second stage of the reaction. It is proposed that clinical mutations such as Y311C, existing in porphyria cutanea tarda patients, could affect dimer stability and could be the target of future gene therapies.

Resumo A enzima uroporfirinogênio descarboxilase humana (UROD-h) é a quinta enzima da via biossintética do heme e sua atividade deficiente, relacionada com mutações em seu gene, está associada a um subgrupo de porfirias. O objetivo deste trabalho foi estudar a relação entre a dimerização da enzima e sua atividade enzimática e comprovar se a dimerização da UROD-h é imprescindível tanto para a primeira etapa da reação (urogênio→heptagênio), quanto para a segunda etapa (heptagênio→coprogênio). Com esse objetivo, a UROD-h foi expressa e purificada até a homogeneidade, o comportamento de dímero-monômero foi analisado sob diversas condições, que puderam deslocar o equilíbrio de dimerização, e a atividade enzimática foi avaliada em tais condições. Os resultados obtidos sugerem que a espécie ativa para a primeira etapa da reação é o homodímero, e tanto o dímero quanto o monômero se comportam como espécies ativas para a segunda etapa da reação. Propõe-se que mutações clínicas como Y311C, existentes em pacientes com porfiria cutânea tardia, poderiam afetar a estabilidade do dímero e poderiam ser o alvo de futuras terapias gênicas em porfiria cutânea tardia.

Body composition, growth performance and enzyme activities of Labeo rohita fed different commercial fish feeds / Composição corporal, desempenho de crescimento e atividades enzimáticas de diferentes alimentos para peixes comerciais alimentados por Labeo rohita

We have evaluated the effects of different fish feeds on the body composition, growth, and enzyme activities of Labeo rohita (Rohu). In total, 240 fishes between the average weights of 24.77±2.15g were studied. The treatments were applied in a completely randomized design, with 4 treatments of 60 fishes each. Treatments consisted of four different fish feeds [Oryza (T1), AMG (T2), Aqua (T3), and Supreme (T4)]. Body composition, growth performance, and enzyme activities were evaluated. There was a significant variation in performance of fishes fed with different type of feed; as fishes having Oryza feed showed the highest weight gain, specific growth rate (SGR), and best feed conversion ratio (FCR) as compared to other groups that were considered to be significant (P ≤ 0.05). High net weight gain was obtained in T4 when compared with T2 and T3. FCR value of T4 was less than T1 but higher than T2, T3 and T2, which showed the lowest values. The specific growth rate was recorded as average in T4, but T2 led a high SGR than T3. Similarly, crude protein level and digestive enzymes activity was recorded significantly highest in fed with Oryza (T1) as compared to AMG (T2), Aqua (T3), and Supreme (T4). Water quality parameters were recorded significant in all treatments except pH and DO of treatment (T1), significantly different from other treatments. It was concluded that Rohu (Labeo rohita) could show a promising growth rate and protease enzyme activity when fed with the Oryza feed of 25% protein.(AU)

Avaliamos os efeitos de diferentes alimentos para peixes em relação à composição corporal, crescimento e atividades enzimáticas de Labeo rohita (Rohu). No total, foram estudados 240 peixes com pesos médios de 24,77 ± 2,15 g. Os tratamentos foram aplicados em delineamento inteiramente casualizado, com quatro tratamentos de 60 peixes cada. Os tratamentos consistiram em quatro alimentos diferentes para peixes: Oryza (T1), AMG (T2), Aqua (T3) e Supreme (T4). Foram avaliados a composição corporal, o desempenho de crescimento e as atividades enzimáticas. Houve uma variação significativa no desempenho dos peixes alimentados com diferentes tipos de ração. Peixes com alimentação Oryza apresentaram maior ganho de peso, taxa de crescimento específico (SGR) e melhor taxa de conversão alimentar (FCR) em comparação com outros grupos que foram considerados significativos (P ≤ 0,05). Elevado ganho de peso líquido foi obtido em T4 quando comparado com T2 e T3. O valor da FCR de T4 foi menor que T1, mas maior que T2 e T3, que apresentaram os menores valores. A taxa de crescimento específico foi registrada como média em T4, mas T2 teve uma SGR alta do que T3. Da mesma forma, o nível de proteína bruta e a atividade das enzimas digestivas foram registrados significativamente mais altos nos peixes alimentados com Oryza (T1) em comparação com AMG (T2), Aqua (T3) e Supreme (T4). Os parâmetros de qualidade da água foram registrados como significativos em todos os tratamentos, exceto pH e OD do tratamento (T1), significativamente diferente dos demais tratamentos. Concluiu-se que Rohu (Labeo rohita) pode apresentar uma taxa de crescimento promissora e atividade da enzima protease quando alimentado com Oryza de 25% de proteína.(AU)

Terapia de reposição enzimática para doença de Anderson-Fabry: revisão sistemática de ensaios clínicos randomizados / Enzyme synthesis therapy for Anderson-Fabry disease: systematic reviewof randomized clinical trials

A doença de Anderson-Fabry, uma doença rara, é causada por uma deficiência da enzima alfa-galactosidase A. Isso leva ao acúmulo de um material gorduroso denominado globotriaosilceramida em várias células do corpo. Globotriaosilceramida é uma substância gordurosa, formada por três açúcares, comumente denominada ceramida e é encontrada na maioria das células do corpo. Indivíduos não tratados podem apresentar dor, complicações na pele, olhos, e problemas gastrointestinais. A doença de Fabry pode causar complicações potencialmente fatais, como danos aos rins, ataque cardíaco e acidente vascular cerebral. Um dos tipos disponíveis de tratamento é a terapia de reposição enzimática com agalsidase alfa ou beta, que substitui a deficiência enzimática. Avaliamos a eficácia e segurança da terapia de reposição enzimática com agalsidase alfa ou beta para doença de Anderson-Fabry. Para realizar essa revisão analisamos revisões sistemática de ensaios clínicos randomizados (ECRs). Não houve restrições de idiomas. Pesquisamos o registro de ensaios clínicos de erros inatos do metabolismo do grupo Cochrane de fibrose cística e desordens genéticas, e as seguintes bases de dados: MEDLINE, EMBASE, LILACS, e clinicaltrials.gov. Os revisores examinaram de forma independente os artigos elegíveis, extraíram dados e avaliaram o risco de viés. Essa revisão está registrada na Cochrane e foi realizada juntamente com o grupo de Fibrose Cística e Doenças Genéticas. Foram selecionados onze estudos randomizados controlados, os resultados apontam para uma diminuição nos depósitos de Gb3 plasmático para os pacientes que receberam agalsidase beta, nos domínios do rim (MD -1,70 (95% CI -2,09 a -1,31) e coração (MD -0,90 95% CI (-1,18 a -0,62) e uma influência positiva na qualidade de vida relacionada à dor, porém, os estudos apresentam baixa qualidade metodológica e não fornecem evidências robustas que indiquem se a TRE é mais efetiva e segura quando comparada a outras terapias ativas, placebo, ou nenhuma intervenção (AU)

Anderson-Fabry disease, a rare disease, is caused by a deficiency of the enzyme alpha-galactosidase A. This leads to the accumulation of a fatty material called globotriaosylceramide in various cells of the body. Globotriaosylceramide is a fatty substance, made up of three sugars, commonly called ceramide and is found in most cells in the body. Untreated individuals may experience pain, skin, eye, and gastrointestinal problems. Fabry disease can cause life-threatening complications, such as kidney damage, heart attack, and stroke. One of the available types of treatment is enzyme replacement therapy with agalsidase alpha or beta, which replaces the enzyme deficiency. We evaluated the efficacy and safety of enzyme replacement therapy with agalsidase alfa or beta for Anderson-Fabry disease. To perform this review, we analyzed systematic reviews of randomized controlled trials (RCTs). There were no language restrictions. We searched the clinical trial registry ofinborn errors of metabolism from the Cochrane group of cystic fibrosis and genetic disorders, and the following databases: MEDLINE, EMBASE, LILACS, and clinicaltrials.gov. Reviewers independently screened eligible articles, extracted data, and assessed risk of bias. This review is registered in Cochrane and was carried out jointly with the Cystic Fibrosis and Genetic Diseases group. Eleven randomized controlled trials were selected, the results point to a decrease in plasma Gb3 deposits for patients receiving agalsidase beta, in the kidney domains (MD -1.70 (95% CI -2.09to -1.31) and heart (MD -0.90 95% CI (-1.18 to -0.62) and a positive influence on pain-related quality of life, however, studies have low methodological quality and do not provide robust evidence to indicate whether ERT is more effective and safer when compared to other active therapies, placebo, or no intervention (AU)

Análise da atividade fosfolipásica do veneno de serpentes do gênero Bothrops: um estudo comparativo

Snake envenomation was reintroduced as a neglected tropical disease by the World Health Organization (WHO) in 2017 and represents a serious public health problem for tropical and subtropical regions of developing countries. Species of the genus Bothrops are considered Category 1 of medical importance by the WHO, accounting for approximately 85% of snakebites that occur throughout the year in Brazil. Variations in the venom composition of snakes of the same species can be determined according to genetics, diet, gender, geographicaldistribution, age or even seasonality. The objective is to investigate the phospholipase activity comparatively in adult snakes of the species: Bothrops alternatus, Bothrops atrox, Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu, Bothrops leucurus, Bothrops moojeni, Bothrops neuwiedi and Bothrops pauloensis, as well as the identification of variations in the enzymatic activity of L - amino acid oxidase and immunoenzymatic variations of the toxins present in these venoms. Methods of characterization of biochemical activity and immunorecognition were used: proteindosage by the Bradford method; SDS- containing polyacrylamide gel electrophoresis; High Performance Liquid Chromatography – Reverse Phase; phospholipase activity with NOBA substrate; L-amino acid oxidase activity on L-methionine and Western Blotting. The results show interspecific and intraspecific differences. In the electrophoresis gel it was possible to observe differences involving absence, presence and intensity of bands. PLA2 and LAAO activities were notably higher in males although Balt1 and Bju1 were exceptions, with their phospholipase activity lower than that of females (Balt2 and Bju2). The commercial Bothrops antivenom produced by the Butantan Institute presents a good pattern of band recognition forming a profile similar to the gels, regardless of gender and only in the regions between 37 and 25 kDa there was a lack of recognition in bands. Although all the chromatograms presenteda very similar profile, it is noticeable that there was a notable gain in variability, some quantitative differences were observed in the chromatographic profiles of the venoms studied.

O envenenamento por serpentes foi reintroduzido como uma doença tropical negligenciada pela Organização Mundial da Saúde (OMS) em 2017 e representa um grave problema de saúde pública para as regiões tropicais e subtropicais de países em desenvolvimento. As espécies do gênero Bothrops são consideradas Categoria 1 de importância médica pela OMS, responsáveispor aproximadamente 85% dos acidentes ofídicos que ocorrem ao longo do ano no Brasil. Variações na composição do veneno das serpentes de uma mesma espécie podem ser determinadas segundo a genética, a dieta, o gênero, a distribuição geográfica, a idade ou até mesmo a sazonalidade. Objetivando investigar a atividade fosfolipásica comparativamente em serpentes adultas das espécies: Bothrops alternatus, Bothrops atrox, Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu, Bothrops leucurus, Bothrops moojeni, Bothrops neuwiedi e Bothrops pauloensis, assim como perfil da composição proteica e variações imunoenzimáticas das toxinas presentes nestes venenos, utilizaram-se os métodos de caracterização de atividade bioquímica e de imunorreconhecimento: dosagem de proteínas pelo método de Bradford; SDS- PAGE; cromatografia Líquida de Alta Performance – Fase Reversa; atividade fosfolipásica sobre NOBA; atividade de L-aminoácido oxidase sobre L- metionina e Western Blotting. Os resultados mostram diferenças interespecíficas e intraespecíficas. No gel de eletroforese foi possível observar diferenças envolvendo ausência, presença e intensidade de bandas. As atividades de PLA2 e LAAO foram notavelmente maiores em machos, apesar de B. alternatus e B. jararacussu terem sido exceções, com sua atividade fosfolipásica menor que a das fêmeas. O antiveneno botrópico comercial produzido pelo Instituto Butantan apresenta um bom padrãode reconhecimento de bandas formando um perfil semelhante aos géis, independente do gêneroe apenas nas regiões entre 37 e 25 kDa houve escassez de reconhecimento em bandas. Apesar de todos os cromatogramas terem apresentado um perfil bem semelhante, é perceptível, que houve um notável ganho de variabilidade foram observadas algumas diferenças quantitativas nos perfis cromatográficos dos venenos estudados.

Chromium supplemented carbohydrate diets for Cirrhinus mrigala: effects on body composition, gut enzyme activity and hematological parameters / Dietas com carboidratos suplementados com cromo para Cirrhinus mrigala: efeitos sobre a composição corporal, atividade enzimática intestinal e parâmetros hematológicos

A ninety days nutritional trial was directed to explore the effects of dietary chromium on body composition, gut enzyme activity and physiological status of Cirrhinus mrigala by using G & NG corn. Six experimental diets were prepared by using different levels of chromium chloride hexahydrate (0, 0.2, 0.4 mg/kg, each with G & NG corn). For this experimental trial, 480 fingerlings, irrespective of sex were distributed in six aquariums each with replicate. Results revealed that gelatinized corn along with increasing level of Cr2Cl3.6H2O have a positive impact upon body composition of fish. Hematology was positively correlated with chromium chloride hexahydrate supplementation in gelatinized corn. Amylase gut enzyme also showed significant (P<0.05) increase in group fed with chromium chloride hexahydrate supplemented diet (G corn). However, corn with chromium chloride hexahydrate supplementation did not revealed any significant impact on gut protease enzyme activity. From these results it can be concluded that both chromium chloride hexahydrate and gelatinized corn in fish feed are very beneficial to improve body composition, enzymes activity and physiological health status of fish.(AU)

Um ensaio nutricional de 90 dias foi dirigido para explorar os efeitos do cromo dietético na composição corporal, atividade enzimática intestinal e estado fisiológico de Cirrhinus mrigala usando milho G & NG. Seis dietas experimentais foram preparadas usando diferentes níveis de cloreto de cromo hexa-hidratado (0, 0,2, 0,4 mg/kg, cada um com milho G e NG). Para este ensaio experimental, 480 alevinos, independentemente do sexo, foram distribuídos em seis aquários, cada um com réplicas. Os resultados revelaram que o milho gelatinizado, juntamente com o aumento do nível de Cr2Cl3.6H2O, tem um impacto positivo na composição corporal dos peixes. A hematologia foi positivamente correlacionada com a suplementação de cloreto de cromo hexa-hidratado em milho gelatinizado. A enzima amilase intestinal também apresentou aumento significativo (P <0,05) no grupo alimentado com dieta suplementada com cloreto de cromo hexa-hidratado (milho G). No entanto, o milho com suplementação de hexahidrato de cloreto de cromo não revelou nenhum impacto significativo na atividade da enzima protease intestinal. Desses resultados, pode-se concluir que tanto o cloreto de cromo hexa-hidratado quanto o milho gelatinizado na alimentação de peixes são muito benéficos para melhorar a composição corporal, a atividade de enzimas e o estado fisiológico de saúde dos peixes.(AU)

Toxicity and larvicidal activity on Aedes aegypti of citronella essential oil submitted to enzymatic esterification / Toxicidade e atividade larvicida sobre Aedes aegypti de óleo essencial de citronella submetido à esterificação enzimática

The essential oil of citronella (Cymbopogon winterianus) has several biological activities, among them the insect repellent action. Some studies showed that cinnamic acid esters can be applied as natural pesticides, insecticides and fungicides. In this context, the objective of the present work was to evaluate the production of esters from citronella essential oil with cinnamic acid via enzymatic esterification. Besides, the essential oil toxicity before and after esterification against Artemia salina and larvicidal action on Aedes aegypti was investigated. Esters were produced using cinnamic acid as the acylating agent and citronella essential oil (3:1) in heptane and 15 wt% NS 88011 enzyme as biocatalysts, at 70 °C and 150 rpm. Conversion rates of citronellyl and geranyl cinnamates were 58.7 and 69.0% for NS 88011, respectively. For the toxicity to Artemia salina LC50 results of 5.29 μg mL-¹ were obtained for the essential oil and 4.36 μg mL-¹ for the esterified oils obtained with NS 88011. In the insecticidal activity against Aedes aegypti larvae, was obtained LC50 of 111.84 μg mL-¹ for the essential oil of citronella and 86.30 μg mL-¹ for the esterified oils obtained with the enzyme NS 88011, indicating high toxicity of the esters. The results demonstrated that the evaluated samples present potential of application as bioinsecticide.(AU)

O óleo essencial de citronela (Cymbopogon winterianus) possui diversas atividades biológicas, entre elas a ação repelente a insetos. Alguns estudos mostraram que os ésteres do ácido cinâmico podem ser aplicados como pesticidas naturais, inseticidas e fungicidas. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a produção de ésteres a partir do óleo essencial de citronela com ácido cinâmico via esterificação enzimática. Além disso, foi investigada a toxicidade do óleo essencial antes e após a esterificação contra Artemia salina e a ação larvicida sobre Aedes aegypti. Os ésteres foram produzidos utilizando ácido cinâmico como agente acilante e óleo essencial de citronela (3: 1) em heptano e 15% em peso da enzima NS 88011 como biocatalisadores, a 70 ° C e 150 rpm. As taxas de conversão de cinamatos de citronelil e geranil foram 58,7 e 69,0% para NS 88011, respectivamente. Para a toxicidade sobre Artemia salina foram obtidos CL50 de 5,29 μg mL-¹ para o óleo essencial e 4,36 μg mL-¹ para os óleos esterificados com NS 88011. Na atividade inseticida contra larvas de Aedes aegypti, obteve-se CL50 de 111,84 μg mL-¹ para o óleo essencial de citronela e 86,30 μg mL-¹ para os óleos esterificados com a enzima NS 88011, indicando alta toxicidade dos ésteres. Os resultados demonstraram que as amostras avaliadas apresentam potencial de aplicação como bioinseticida.(AU)

Toxicity and larvicidal activity on Aedes aegypti of citronella essential oil submitted to enzymatic esterification / Toxicidade e atividade larvicida sobre Aedes aegypti de óleo essencial de citronella submetido à esterificação enzimática

The essential oil of citronella (Cymbopogon winterianus) has several biological activities, among them the insect repellent action. Some studies showed that cinnamic acid esters can be applied as natural pesticides, insecticides and fungicides. In this context, the objective of the present work was to evaluate the production of esters from citronella essential oil with cinnamic acid via enzymatic esterification. Besides, the essential oil toxicity before and after esterification against Artemia salina and larvicidal action on Aedes aegypti was investigated. Esters were produced using cinnamic acid as the acylating agent and citronella essential oil (3:1) in heptane and 15 wt% NS 88011 enzyme as biocatalysts, at 70 °C and 150 rpm. Conversion rates of citronellyl and geranyl cinnamates were 58.7 and 69.0% for NS 88011, respectively. For the toxicity to Artemia salina LC50 results of 5.29 μg mL-¹ were obtained for the essential oil and 4.36 μg mL-¹ for the esterified oils obtained with NS 88011. In the insecticidal activity against Aedes aegypti larvae, was obtained LC50 of 111.84 μg mL-¹ for the essential oil of citronella and 86.30 μg mL-¹ for the esterified oils obtained with the enzyme NS 88011, indicating high toxicity of the esters. The results demonstrated that the evaluated samples present potential of application as bioinsecticide.

O óleo essencial de citronela (Cymbopogon winterianus) possui diversas atividades biológicas, entre elas a ação repelente a insetos. Alguns estudos mostraram que os ésteres do ácido cinâmico podem ser aplicados como pesticidas naturais, inseticidas e fungicidas. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a produção de ésteres a partir do óleo essencial de citronela com ácido cinâmico via esterificação enzimática. Além disso, foi investigada a toxicidade do óleo essencial antes e após a esterificação contra Artemia salina e a ação larvicida sobre Aedes aegypti. Os ésteres foram produzidos utilizando ácido cinâmico como agente acilante e óleo essencial de citronela (3: 1) em heptano e 15% em peso da enzima NS 88011 como biocatalisadores, a 70 ° C e 150 rpm. As taxas de conversão de cinamatos de citronelil e geranil foram 58,7 e 69,0% para NS 88011, respectivamente. Para a toxicidade sobre Artemia salina foram obtidos CL50 de 5,29 μg mL-¹ para o óleo essencial e 4,36 μg mL-¹ para os óleos esterificados com NS 88011. Na atividade inseticida contra larvas de Aedes aegypti, obteve-se CL50 de 111,84 μg mL-¹ para o óleo essencial de citronela e 86,30 μg mL-¹ para os óleos esterificados com a enzima NS 88011, indicando alta toxicidade dos ésteres. Os resultados demonstraram que as amostras avaliadas apresentam potencial de aplicação como bioinseticida.

Sensibilidad de la prueba ELISA para detectar los anticuerpos IgG contra el Strongyloides stercoralis en pacientes inmunocomprometidos

Objetivo: la sensibilidad subóptima de las pruebas coproparasitológicas dificulta el diagnóstico de la estrongiloidiasis. Los métodos serológicos son más sensibles, pero los estudios en pacientes inmunodeprimidos son escasos. El objetivo del estudio fue de evaluar la sensibilidad de una prueba ELISA comercial en pacientes inmunodeprimidos. Métodos: se realizó en Bolivia un estudio multicéntrico en pacientes con cáncer, VIH, enfermedades reumatológicas y hematológicas. 88 pacientes con larvas de S.stercoralis en heces identificadas mediante técnicas coproparasitológicas tuvieron una prueba serológica ELISA (Bordier Affinity Products). Resultados: la sensibilidad de la técnica ELISA fue de 77,3% (61/88) (CI95%: 67,7-85,1). La sensibilidad de este test serológico fue identificada más baja en pacientes HIV+ con CD4300 o una serología VIH desconocida (84,2%) (p=0,035). Conclusiones: la sensibilidad del ELISA es inversamente proporcional al grado de inmunosupresión. Este resultado refuerza la recomendación de diagnosticar la estrongiloidiasis mediante una combinación de técnicas serológicas y coproparasitológicas.

Objectives: the sensitivity of coproparasitological tests for the diagnosis of strongyloidiasis are suboptimal. Serological methods are more sensitive, but studies among immunocompromised patients are scarce. The aim of this study was to evaluate the sensitivity of a commercial ELISA test among immunocompromised patients. Methods: a multicenter study was conducted in Bolivia among patients with cancer, HIV, rheumatologic or hematologic diseases. 88 patients with S. stercoralis larvae in stool identified by coproparasitological techniques had an ELISA serological test (Bordier Affinity Products). Results: the sensitivity of the ELISA technique was 77,3% (61/88) (CI95%: 67,7-85,1), and was identified lower among HIV+ patients with CD4300 or unknown HIV serology (84,2%) (p=0,035). Conclusions: the sensitivity of ELISA is inversely proportional to the degree of immunosuppression. This result reinforces the recommendation to diagnose strongyloidiasis by a combination of serological and coproparasitological techniques.

Body composition, growth performance and enzyme activities of Labeo rohita fed different commercial fish feeds / Composição corporal, desempenho de crescimento e atividades enzimáticas de diferentes alimentos para peixes comerciais alimentados por Labeo rohita

Abstract We have evaluated the effects of different fish feeds on the body composition, growth, and enzyme activities of Labeo rohita (Rohu). In total, 240 fishes between the average weights of 24.77±2.15g were studied. The treatments were applied in a completely randomized design, with 4 treatments of 60 fishes each. Treatments consisted of four different fish feeds [Oryza (T1), AMG (T2), Aqua (T3), and Supreme (T4)]. Body composition, growth performance, and enzyme activities were evaluated. There was a significant variation in performance of fishes fed with different type of feed; as fishes having Oryza feed showed the highest weight gain, specific growth rate (SGR), and best feed conversion ratio (FCR) as compared to other groups that were considered to be significant (P ≤ 0.05). High net weight gain was obtained in T4 when compared with T2 and T3. FCR value of T4 was less than T1 but higher than T2, T3 and T2, which showed the lowest values. The specific growth rate was recorded as average in T4, but T2 led a high SGR than T3. Similarly, crude protein level and digestive enzymes activity was recorded significantly highest in fed with Oryza (T1) as compared to AMG (T2), Aqua (T3), and Supreme (T4). Water quality parameters were recorded significant in all treatments except pH and DO of treatment (T1), significantly different from other treatments. It was concluded that Rohu (Labeo rohita) could show a promising growth rate and protease enzyme activity when fed with the Oryza feed of 25% protein.

Resumo Avaliamos os efeitos de diferentes alimentos para peixes em relação à composição corporal, crescimento e atividades enzimáticas de Labeo rohita (Rohu). No total, foram estudados 240 peixes com pesos médios de 24,77 ± 2,15 g. Os tratamentos foram aplicados em delineamento inteiramente casualizado, com quatro tratamentos de 60 peixes cada. Os tratamentos consistiram em quatro alimentos diferentes para peixes: Oryza (T1), AMG (T2), Aqua (T3) e Supreme (T4). Foram avaliados a composição corporal, o desempenho de crescimento e as atividades enzimáticas. Houve uma variação significativa no desempenho dos peixes alimentados com diferentes tipos de ração. Peixes com alimentação Oryza apresentaram maior ganho de peso, taxa de crescimento específico (SGR) e melhor taxa de conversão alimentar (FCR) em comparação com outros grupos que foram considerados significativos (P ≤ 0,05). Elevado ganho de peso líquido foi obtido em T4 quando comparado com T2 e T3. O valor da FCR de T4 foi menor que T1, mas maior que T2 e T3, que apresentaram os menores valores. A taxa de crescimento específico foi registrada como média em T4, mas T2 teve uma SGR alta do que T3. Da mesma forma, o nível de proteína bruta e a atividade das enzimas digestivas foram registrados significativamente mais altos nos peixes alimentados com Oryza (T1) em comparação com AMG (T2), Aqua (T3) e Supreme (T4). Os parâmetros de qualidade da água foram registrados como significativos em todos os tratamentos, exceto pH e OD do tratamento (T1), significativamente diferente dos demais tratamentos. Concluiu-se que Rohu (Labeo rohita) pode apresentar uma taxa de crescimento promissora e atividade da enzima protease quando alimentado com Oryza de 25% de proteína.

Toxicity and larvicidal activity on Aedes aegypti of citronella essential oil submitted to enzymatic esterification / Toxicidade e atividade larvicida sobre Aedes aegypti de óleo essencial de citronella submetido à esterificação enzimática

Abstract The essential oil of citronella (Cymbopogon winterianus) has several biological activities, among them the insect repellent action. Some studies showed that cinnamic acid esters can be applied as natural pesticides, insecticides and fungicides. In this context, the objective of the present work was to evaluate the production of esters from citronella essential oil with cinnamic acid via enzymatic esterification. Besides, the essential oil toxicity before and after esterification against Artemia salina and larvicidal action on Aedes aegypti was investigated. Esters were produced using cinnamic acid as the acylating agent and citronella essential oil (3:1) in heptane and 15 wt% NS 88011 enzyme as biocatalysts, at 70 °C and 150 rpm. Conversion rates of citronellyl and geranyl cinnamates were 58.7 and 69.0% for NS 88011, respectively. For the toxicity to Artemia salina LC50 results of 5.29 μg mL-1 were obtained for the essential oil and 4.36 μg mL-1 for the esterified oils obtained with NS 88011. In the insecticidal activity against Aedes aegypti larvae, was obtained LC50 of 111.84 μg mL-1 for the essential oil of citronella and 86.30 μg mL-1 for the esterified oils obtained with the enzyme NS 88011, indicating high toxicity of the esters. The results demonstrated that the evaluated samples present potential of application as bioinsecticide.

Resumo O óleo essencial de citronela (Cymbopogon winterianus) possui diversas atividades biológicas, entre elas a ação repelente a insetos. Alguns estudos mostraram que os ésteres do ácido cinâmico podem ser aplicados como pesticidas naturais, inseticidas e fungicidas. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a produção de ésteres a partir do óleo essencial de citronela com ácido cinâmico via esterificação enzimática. Além disso, foi investigada a toxicidade do óleo essencial antes e após a esterificação contra Artemia salina e a ação larvicida sobre Aedes aegypti. Os ésteres foram produzidos utilizando ácido cinâmico como agente acilante e óleo essencial de citronela (3: 1) em heptano e 15% em peso da enzima NS 88011 como biocatalisadores, a 70 ° C e 150 rpm. As taxas de conversão de cinamatos de citronelil e geranil foram 58,7 e 69,0% para NS 88011, respectivamente. Para a toxicidade sobre Artemia salina foram obtidos CL50 de 5,29 μg mL-1 para o óleo essencial e 4,36 μg mL-1 para os óleos esterificados com NS 88011. Na atividade inseticida contra larvas de Aedes aegypti, obteve-se CL50 de 111,84 μg mL-1 para o óleo essencial de citronela e 86,30 μg mL-1 para os óleos esterificados com a enzima NS 88011, indicando alta toxicidade dos ésteres. Os resultados demonstraram que as amostras avaliadas apresentam potencial de aplicação como bioinseticida.

Chromium supplemented carbohydrate diets for Cirrhinus mrigala: effects on body composition, gut enzyme activity and hematological parameters / Dietas com carboidratos suplementados com cromo para Cirrhinus mrigala: efeitos sobre a composição corporal, atividade enzimática intestinal e parâmetros hematológicos

A ninety days nutritional trial was directed to explore the effects of dietary chromium on body composition, gut enzyme activity and physiological status of Cirrhinus mrigala by using G & NG corn. Six experimental diets were prepared by using different levels of chromium chloride hexahydrate (0, 0.2, 0.4 mg/kg, each with G & NG corn). For this experimental trial, 480 fingerlings, irrespective of sex were distributed in six aquariums each with replicate. Results revealed that gelatinized corn along with increasing level of Cr2Cl3.6H2O have a positive impact upon body composition of fish. Hematology was positively correlated with chromium chloride hexahydrate supplementation in gelatinized corn. Amylase gut enzyme also showed significant (P<0.05) increase in group fed with chromium chloride hexahydrate supplemented diet (G corn). However, corn with chromium chloride hexahydrate supplementation did not revealed any significant impact on gut protease enzyme activity. From these results it can be concluded that both chromium chloride hexahydrate and gelatinized corn in fish feed are very beneficial to improve body composition, enzymes activity and physiological health status of fish.

Um ensaio nutricional de 90 dias foi dirigido para explorar os efeitos do cromo dietético na composição corporal, atividade enzimática intestinal e estado fisiológico de Cirrhinus mrigala usando milho G & NG. Seis dietas experimentais foram preparadas usando diferentes níveis de cloreto de cromo hexa-hidratado (0, 0,2, 0,4 mg/kg, cada um com milho G e NG). Para este ensaio experimental, 480 alevinos, independentemente do sexo, foram distribuídos em seis aquários, cada um com réplicas. Os resultados revelaram que o milho gelatinizado, juntamente com o aumento do nível de Cr2Cl3.6H2O, tem um impacto positivo na composição corporal dos peixes. A hematologia foi positivamente correlacionada com a suplementação de cloreto de cromo hexa-hidratado em milho gelatinizado. A enzima amilase intestinal também apresentou aumento significativo (P <0,05) no grupo alimentado com dieta suplementada com cloreto de cromo hexa-hidratado (milho G). No entanto, o milho com suplementação de hexahidrato de cloreto de cromo não revelou nenhum impacto significativo na atividade da enzima protease intestinal. Desses resultados, pode-se concluir que tanto o cloreto de cromo hexa-hidratado quanto o milho gelatinizado na alimentação de peixes são muito benéficos para melhorar a composição corporal, a atividade de enzimas e o estado fisiológico de saúde dos peixes.