Transforming growth factor-β (TGF-β) maintains follicular ultrastructure and stimulates preantral follicle growth in caprine ovarian tissue cultured in vitro / Fator de crescimento transformante-β (TGF-β) mantém a ultraestrutura folicular e estimula o crescimento de folículos pré-antrais caprinos inclusos em tecido ovariano cultivado in vitro

The objectives of this study were to investigate whether TGF-β affect the survival, activation and further growth of goat primordial follicles enclosed in ovarian cortex after in vitro culture. Goat ovaries were collected from an abattoir and pieces of ovarian tissues were cultured for one or seven days in a supplemented alpha Minimum Essential Medium, alone or containing TGF-β (1, 5, 10 or 50ng/mL). Ovarian tissues from the fresh control as well as those cultured were processed for histological and ultrastructural studies. The results showed that when compared with fresh control, there was decrease in the percentages of histologically normal follicles in all treatments only after seven days culture. TGF-β did not affect the activation of preantral follicles regardless of its concentration, however, larger follicles diameter (P<0.05) was observed using 10ng/mL TGF-β than in the fresh control and other treatments. Moreover, this concentration maintained the normal ultrastructure after seven days of culture. In conclusion, TGF-β showed additional effect on the follicle growth and the maintenance of ultrastructural integrity of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue when used at 10ng/mL during seven days of culture...

O objetivo desse estudo foi investigar se o TGF-β afeta a sobrevivência, ativação e crescimento de folículos primordiais caprinos inclusos no córtex ovariano após o cultivo in vitro. Ovários de cabras foram coletados em abatedouro e fragmentos de tecido ovariano foram cultivados por um e sete dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM+) sozinho ou suplementado com TGF-β (1, 5, 10 ou 50ng/mL). Fragmentos ovarianos não cultivados e cultivados foram processados para análise histológica e ultraestrutural. Os resultados mostraram que, comparado ao controle fresco, houve diminuição no percentual de folículos morfologicamente normais em todos os tratamentos somente após sete dias de cultivo. O TGF-β não afetou a ativação folicular independente da concentração testada, contudo, o diâmetro folicular foi superior (P<0.05) no tratamento com 10ng/mL de TGF-β quando comparado ao controle fresco e aos demais tratamentos. Além disso, essa mesma concentração manteve a ultraestrutura normal dos folículos após sete dias de cultivo. Em conclusão, o TGF-β apresentou efeito adicional no crescimento folicular e na manutenção da integridade ultraestrutural de folículos pré-antrais caprinos inclusos no tecido ovariano quando utilizado na concentração de 10ng/mL durante sete dias de cultivo...

Progesterone and Follicle Stimulating Hormone interact and promote goat preantral follicles survival and development in vitro / Progesterona e Hormônio Folículo-Estimulante interagem e promovem a sobrevivência e o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos

We investigated the effects of progesterone and follicle stimulating hormone (FSH) on survival and growth of caprine preantral follicles. Pieces of ovarian tissue were cultured for 1 or 7 days in minimum essential medium (MEM) alone or containing progesterone (1, 2.5, 5, 10 or 20ng/mL), FSH (50ng/mL) or the interaction between progesterone and FSH. Fresh (non-cultured control) and cultured ovarian tissues were processed for histological and ultrastructural studies. After 7 days the addition of FSH to all progesterone concentrations maintained the percentage of normal follicles similar to fresh control. At day 7 of culture, a higher percentage of developing follicles was observed only in 2.5ng/ml of progesterone associated with FSH or 10ng/ml of progesterone alone when compared with control. From day 1 to day 7 of culture, a significant increase in the percentage of developing follicles was observed in MEM and 2.5ng/ml of progesterone + FSH. In addition, after 7 days, in all treatments, there was a significant increase in follicular diameter when compared with control, except for MEM alone and in 5ng/ml of progesterone + FSH or 10ng/ml of progesterone alone. Ultrastructural studies confirmed follicular integrity after 7 days of culture in 2.5ng/ml of progesterone with FSH. In conclusion, this study demonstrated that the interaction between progesterone and FSH maintains ultrastructural integrity, stimulates primordial follicles activation and further growth of cultured caprine preantral follicles.

Este trabalho verificou os efeitos da progesterona e do hormônio folículo-estimulante (FSH) na sobrevivência e no crescimento de folículos pré-antrais caprinos. Fragmentos de tecido ovariano foram cultivados por 1 ou 7 dias em Meio Essencial Mínimo (MEM) sozinho ou contendo progesterona (1, 2.5, 5, 10 ou 20ng/mL), FSH (50ng/mL) ou a combinação entre esses dois hormônios. O tecido fresco (controle não-cultivado) e o cultivado foram processados para análise histológica e ultra-estrutural. Após 7 dias a adição de FSH a todas as concentrações de progesterone manteve o percentual de folículos normais similar ao controle fresco. No dia 7 de cultivo, um alto percentual de folículos em desenvolvimento foi observado somente no tratamento com 2,5ng/ml de progesterona associada ao FSH ou com 10ng/ml de progesterona sozinha, em relação ao controle fresco. Do dia 1 para o dia 7 de cultivo, um aumento significativo no percentual de folículos em desenvolvimento foi observado no MEM sozinho e adicionado de 2,5ng/ml de progesterona + FSH. Além disso, após 7 dias, em todos os tratamentos, houve um aumento significativo no diâmetro folicular em relação ao controle, exceto nos tratamentos com MEM sozinho, 5ng/ml de progesterona + FSH ou 10ng/ml de progesterona sozinha. A análise ultra-estrutural confirmou a integridade follicular após 7 dias de cultivo no tratamento com 2,5ng/ml de progesterona + FSH. Em conclusão, este estudo demonstrou que a interação entre progesterona e FSH mantém a integridade ultra-estrutural, estimula a ativação de folículos primordiais e o posterior crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro.

Effects of alpha-tocopherol and ternatin antioxidants on morphology and activation of goat preantral follicles in vitro cultured / Efeitos dos antioxidantes alpha-tocoferol e ternatina na morfologia e na ativação de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro

The effects of α-tocopherol and ternatin on the morphology, activation, and growth of goat preantral follicles in vitro cultured, for one or five days, were evaluated. Ovarian fragments were immediately fixed (non-cultured control) or in vitro cultured for one or five days in Minimum Essential Medium (MEM) with or without α-tocopherol or ternatin supplementation, both at concentrations of 5, 10, or 15µM, corresponding to the following treatments: MEM, TOC5, TOC10, TOC 15, TER5, TER10, and TER15. The percentages of morphologically normal preantral follicles in non-cultured ovarian tissue (control) was 73.2 percent and after five days of culture, there was a decrease on these percentages in all treatments (P<0.05) when compared with non-cultured control. Culture of ovarian cortex for five days increased the percentages of follicular activation in all treatments (P<0.05). Ultrastructural analysis did not confirm the integrity of caprine preantral follicles cultured for five days in medium containing antioxidants. This study demonstrated that α-tocopherol and ternatin can promote follicular activation; however, addition of these antioxidants in the tested concentrations reduced the follicular viability after in vitro culture.

Os efeitos do α-tocoferol e da ternatina sobre morfologia, ativação e crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro, por um ou cinco dias, foram avaliados. Os fragmentos ovarianos foram imediatamente fixados (controle não-cultivado) ou cultivados in vitro, por um ou cinco dias, em Meio Essencial Mínimo (MEM) com ou sem suplementação com α-tocoferol ou ternatina nas concentrações de 5, 10 ou 15µM, formando os tratamentos MEM, TOC5, TOC10, TOC 15, TER5, TER10, TER15. O percentual de folículos pré-antrais normais no controle não-cultivado foi de 73,2 por cento, depois de cinco dias de cultivo, houve redução desse percentual em todos os tratamentos, quando comparados com o controle não-cultivado (P<0,05). O cultivo por cinco dias aumentou a ativação folicular em todos os tratamentos (P<0,05). A análise ultra-estrutural não mostrou folículos pré-antrais íntegros após cinco dias de cultivo em meio contendo antioxidantes. Concluiu-se que o α-tocoferol e a ternatina podem promover a ativação folicular, no entanto a adição desses antioxidantes nas concentrações testadas reduziu a viabilidade folicular após o cultivo in vitro.

Característica histológica, ultra-estrutural e produção de nitrito de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro na ausência ou presença de soro / Histological and ultrastructural feature and nitrite production of caprine preantral follicles in vitro cultured in the presence or absence of serum

Avaliou-se o efeito da adição de diferentes tipos e concentrações de soro sobre o desenvolvimento e a sobrevivência de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) caprinos in vitro. Além disso, verificou-se a relação entre as concentrações de nitrito presentes no meio de cultivo e a viabilidade folicular. Cada par ovariano foi dividido em 29 fragmentos, sendo um destinado ao controle. Os fragmentos foram cultivados por um ou sete dias em meio essencial mínimo suplementado (MEM+) ou MEM+ com diferentes concentrações (10 ou 20 por cento) de soro fetal bovino (SFB), soro de cabra em estro (SCE) ou soro de cabra em diestro (SCD). Na análise morfológica após sete dias, apenas o tratamento com 10 por cento de SFB apresentou percentual de FOPA normais similar ao MEM+ (P>0,05). A análise ultra-estrutural dos folículos cultivados por sete dias com MEM+ ou MEM+ com 10 por cento de SFB mostrou danos oocitários, porém células da granulosa normais. A análise do meio de cultivo revelou correlação positiva entre a viabilidade folicular e a produção de nitrito. A suplementação com soro não melhorou a viabilidade de FOPA e a concentração de nitrito no meio de cultivo funcionou como um indicador da viabilidade das células da granulosa de FOPA caprinos cultivados in vitro.

The effect of the addition of different types and concentrations of sera on the viability and development of caprine preantal follicles (PAF) in vitro cultured was analyzed. In addition, it was evaluated the correlation between nitrite concentrations in culture medium and folicular viability. Each ovarian pair was divided in 29 fragments and one was used as control. The fragments were cultured for one or seven days in minimal essential medium (MEM+) or MEM+ with different concentrations of (10 or 20 percent) bovine fetal serum (BFS), estrous goat serum (EGS), or diestrous goat serum (DGS). After seven days, the morphological analysis showed that only the treatment with 10 percent BFS maintained the percentage of normal PAF similar to MEM+ (P>0.05). The ultrastructural analysis of follicles cultured for seven days in MEM+ or MEM+ with 10 percent BFS showed some oocyte damage, although the granulosa cells were normal. Analysis of culture medium revealed a positive correlation between follicular viability and nitrite production. Supplementation with serum did not improve the viability of PAF and nitrite levels in culture medium served as an indicator of viability of granulose cells from caprine PAF in vitro cultured.

Conservação de folículos pré-antrais bovinos em solução salina 0,9 por cento ou TCM 199 / Preservation of bovine preantral follicles in 0.9 percent saline solution or TCM 199

Investigou-se a eficiência da solução salina 0,9 por cento (SS) e TCM 199 na conservação de folículos pré-antrais (FOPA) bovinos in situ em diferentes temperaturas e tempos de incubação. Cada par ovariano foi dividido em 25 fragmentos. Um fragmento foi escolhido aleatoriamente e fixado imediatamente após a coleta (controle). Os demais foram distribuídos em tubos contendo SS ou TCM 199 a 4, 20 ou 39ºC por 2, 4, 12 ou 24h. A análise histológica mostrou que a conservação a 4ºC em ambas as soluções manteve a porcentagem de FOPA normais similar ao controle. A conservação em SS a 20ºC por 12 ou 24h, TCM 199 a 20ºC por 24h e em ambas as soluções a 39ºC a partir de 2h aumentou (P<0,05) a porcentagem de FOPA degenerados comparada à porcentagem de folículos-controle. Em ambas as soluções, independente do tempo de incubação, a porcentagem de folículos normais, após conservação a 39ºC, foi (P<0,05) menor que a obtida com 4 e 20ºC. FOPA bovinos podem ser conservados eficientemente a 4ºC por até 24h em ambas as soluções, e a 20ºC por 4 e 12h em SS e TCM 199, respectivamente.

The efficiency of 0.9 percent saline solution (SS) and TCM 199 on the preservation of bovine preantral follicles (PF) in situ at different temperatures and incubation times was investigated. Each ovarian pair was divided into 25 fragments. One fragment was taken randomly and immediately fixed (control). The other fragments were distributed in tubes containing SS or TCM 199 at 4, 20 or 39ºC for 2, 4, 12 or 24h. The histological analysis showed that the storage at 4ºC in both solutions kept the percentage of normal follicles similar to control values. Preservation in SS at 20ºC for 12 or 24h, TCM 199 at 20ºC for 24h and in both solutions at 39ºC from 2 h onward (P<0.05) increased the percentage of degenerated follicles when compared with control. In both solutions, independent of incubation time, the percentage of normal follicles observed at 39ºC was (P<0.05) lower them those observed at 4 and 20ºC. Bovine PF can be preserved efficiently at 4ºC for up to 24h in both solutions, at 20ºC for 4 and 12h in SS and TCM 199, respectively.