ABSTRACT
Common bean is a crop recalcitrant to in vitro regeneration and therefore it lacks an efficient transformation protocol that can be reproduced using A. tumefaciens. The main goal of this study was to establish a protocol for A. tumefaciens mediated transformation of Phaseolus vulgaris var. Brunca by marker genes (gusA and nptII) together with the gene for trehalose-6-phosphate synthase from Saccharomyces cerevisiae (TPS1) used in other species to increase tolerance to abiotic stress. The β-glucuronidase activity was detected in 45 % of the LBA4404 ElectroMAX® pCAMBIA1301 infected explants. Transformed explants regenerated new shoots after four to five months period in a kanamycin rich media. Surviving plants were evaluated by PCR and presented an 0.5 % efficiency of transformation. The established protocol for genetic transformation of common bean has two additional advantages with respect to previous reports: (1) it allows for obtaining transformed regenerants and (2) the genetic transformation was stable for the selective gene.
El frijol común en un cultivo recalcitrante a la regeneración in vitro y se carece de un protocolo eficiente y reproducible de transformación genética usando A. tumefaciens. Desarrollamos un protocolo de transformación genética mediada por A. tumefaciens de frijol común variedad Brunca utilizando genes marcadores (gusA y nptII) junto con el gen de la trehalosa-6-fosfato sintasa de levadura (TPS1) utilizado para incrementar tolerancia a estrés abiótico. La actividad de la β-glucoronidasa fue detectada en 45 % de los explantes infectados con la cepa LBA4404 de A. tumefaciens transformada con pCAMBIA1301. Después de 4 o 5 meses se regeneraron tallos en un medio adicionado con kanamicina. Los explantes supervivientes se evaluaron mediante PCR y presentaron una eficiencia de transformación de 0.5 %. El protocolo de transformación genética de frijol común establecido tiene dos ventajas adicionales con respecto a los reportes previos: (1) permite la obtención de regenerares transformados y (2) la transformación genética fue estable para el gen selectivo.
ABSTRACT
The aim of the present work is to study the effect of dietary dietary fiber of similar solubility to that of the cooked common bean in the increase of the small intestine, liver, and pancreas of rats. Recently weaned male Wistar rats were fed ad libitum balanced diets containing cooked common bean (12.9 percent of dietary fiber plus resistant starch) or casein with 5.0 percent (control group), 10.0 percent, 12.5 percent or 15.0 percent of dietary fiber plus resistant starch added, with the same proportions of insoluble and soluble fibers and resistant starch found in bean (8:3:1) for 14 days. Weight gain and diet intake were smaller in the group fed the cooked bean diet. However, this group showed the highest increase in the studied organs. Rats that ingested the diet containing casein with 15.0 percent of dietary fiber added showed a growth of 21.4 percent in the pancreas. Rats fed other casein diets did not show significant differences (p>0.05). The diet containing the cooked common bean led to weight gain of all studied organs (50.0 percent in the pancreas, 25.0 percent in the liver and 33.4 percent in the small intestine) and an increase of 47.1 percent in the small intestine length. Therefore, dietary fiber plus resistant starch had a trophic effect on digestive organs, although they were not the only stimulation factor, because the cooked bean has other chemical components, like phytates and tannins, that probably contribute to that effect.
Ratas Wistar machos recién destetados fueron alimentados ad libitum con dietas balanceadas, conteniendo frijol común cocinado (12,9 por ciento de fibras dietéticas + almidón resistente) o caseína agregado de 5,0 por ciento (grupo control), 10,0 por ciento, 12,5 por ciento o 15,0 por ciento de fibras dietéticas + almidón resistente, con las mismas proporciones de fibras insolubles y solubles y almidón resistente, encontradas en el frijol (8:3:1) por 14 días. El aumento de peso y la ingesta de dieta fueron más pequeños en el grupo alimentado con la dieta del frijol cocinado. Sin embargo, este grupo mostró el aumento más alto en los órganos estudiados. Las ratas que ingirieron la dieta conteniendo caseína con agregado de 15,0 por ciento de fibra dietética mostraron un crecimiento de 21,4 por ciento en el páncreas. Las ratas alimentadas con las otras dietas de caseína no mostraron diferencias significativas (p>0,05). El consumo de dieta conteniendo frijol común cocinado provocó un aumento de peso en todos los órganos estudiados (50,0 por ciento en el páncreas, 25,0 por ciento en el hígado y 33,4 por ciento en el intestino delgado) y un incremento del 47,1 por ciento en el tamaño del intestino delgado. La fibra dietética más almidón resistente ejerce un efecto trófico en los órganos digestivos, aunque no fue ese el único factor estimulante. El frijol cocinado puede tener otros componentes químicos, además de los inhibidores de proteasas, lectinas, fitatos y taninos, que probablemente contribuyen a ese efecto.
