Molecular identification of new Trypanosoma evansi type non-A/B isolates from buffaloes and cattle in Indonesia / Identificação molecular de novos isolados de Trypanosoma evansi tipo não A/B em búfalos e gado na Indonésia

Abstract Trypanosoma evansi is reportedly divided into two genotypes: types A and B. The type B is uncommon and reportedly limited to Africa: Kenya Sudan, and Ethiopia. In contrast, type A has been widely reported in Africa, South America, and Asia. However, Trypanosoma evansi type non-A/B has never been reported. Therefore, this study aims to determine the species and genotype of the Trypanozoon subgenus using a robust identification algorithm. Forty-three trypanosoma isolates from Indonesia were identified as Trypanosoma evansi using a molecular identification algorithm. Further identification showed that 39 isolates were type A and 4 isolates were possibly non-A/B types. The PML, AMN-SB1, and STENT3 isolates were likely non-A/B type Trypanosoma evansi isolated from buffalo, while the PDE isolates were isolated from cattle. Cladistic analysis revealed that Indonesian Trypanosoma evansi was divided into seven clusters based on the gRNA-kDNA minicircle gene. Clusters 6 and 7 are each divided into two sub-clusters. The areas with the highest genetic diversity are the provinces of Banten, Central Java (included Yogyakarta), and East Nusa Tenggara. The Central Java (including Yogyakarta) and East Nusa Tenggara provinces, each have four sub-clusters, while Banten has three.

Resumo Trypanosoma evansi é reportado como dividido em dois genótipos: tipos A e B. O tipo B é incomum e reportado como limitado à África: Quênia, Sudão e Etiópia. Em contraste, o tipo A tem sido amplamente relatado na África, América do Sul e Ásia. No entanto, Trypanosoma evansi tipo não-A/B nunca foi relatado. Portanto, este estudo tem como objetivo determinar a espécie e o genótipo do subgênero Trypanozoon, utilizando-se um algoritmo robusto de identificação. Quarenta e três isolados de tripanosoma da Indonésia foram identificados como Trypanosoma evansi, usando-se um algoritmo de identificação molecular. A identificação adicional mostrou que 39 isolados eram do tipo A e 4 isolados eram, possivelmente, do tipo não A/B. Os isolados PML, AMN-SB1 e STENT3 foram, provavelmente, Trypanosoma evansi do tipo não A/B isolado de búfalos, enquanto os isolados de PDE foram isolados de bovinos. A análise cladística revelou que o Trypanosoma evansi indonésio foi dividido em sete grupos baseados no gene do minicírculo gRNA-kDNA. Os clusters 6 e 7 foram divididos cada um em dois subclusters. As áreas com maior diversidade genética são as províncias de Banten, Java Central (incluindo Yogyakarta) e East Nusa Tenggara. As de Java Central (incluindo Yogyakarta) e East Nusa Tenggara têm, cada uma, quatro subgrupos, enquanto Banten tem três.

Updated list of non-volant small mammals from the Serra da Bocaina National Park, southeastern Brazil / Lista atualizada dos pequenos mamíferos não-voadores do Parque Nacional da Serra da Bocaina, sudeste do Brasil

Abstract In the core of the Atlantic Forest biome, the Serra da Bocaina National Park (SBNP) is located in the Atlantic Forest Southeast area of endemism for vertebrates. Filling gaps in knowledge about the spatial distribution and occurrence of species in national parks is of fundamental importance to know how many species are protected and to guide conservation initiatives. Here we updated the non-volant small mammal species list of the SBNP, providing new data on species list and abundance, with species identified mainly by karyotype and/or molecular analysis. Twelve sampling sessions with a capture-mark-recapture approach were carried out in four sites in the SBNP from 2013 to 2016, during the paving works of the state highway RJ-165 (Estrada Parque Paraty-Cunha), municipality of Paraty, state of Rio de Janeiro, Brazil. Non-volant small mammals (Rodentia and Didelphimorphia) were sampled using Sherman® and Tomahawk® live traps (18,987 trap-nights) and pitfall traps (4,591 trap-nights). Thirty-two species (11 marsupials and 21 rodents) were recorded from 1,185 captured specimens. Species richness ranged from 18 to 28 between sites. Ten and 11 species were exclusively captured in live traps and pitfall traps, respectively. The observed richness (32 species) represented 91.4% of the estimated species richness for the study area. Sites 2 and 4 were the most similar to each other regarding species composition, and site 3 was the most dissimilar. The species with highest relative abundance were Euryoryzomys russatus (14%) and Delomys dorsalis (14%), while six species had relative abundances lower than 1%. Fourteen and 17 species were identified by karyotype and molecular analysis, respectively. The present study added 22 species to the park's non-volant small mammals list, which now has 37 species with confirmed occurrence. This species richness found in the SBNP is one of the highest ever recorded for the group of non-volant small mammals in protected areas of the Atlantic Forest in Brazil, corroborating the Serra da Bocaina region as a biodiversity hotspot.

Resumen No cerne do bioma Mata Atlântica, o Parque Nacional da Serra da Bocaina (PNSB) está localizado na área Sudeste de endemismo para vertebrados na Mata Atlântica. Preencher lacunas de conhecimento sobre a distribuição espacial e ocorrência das espécies em parques nacionais é de fundamental importância para saber quantas espécies estão protegidas e orientar iniciativas de conservação. Aqui atualizamos a lista de espécies de pequenos mamíferos não-voadores do PNSB, fornecendo novos dados sobre a lista de espécies e abundância, com espécies identificadas principalmente por análises cariotípicas e/ou molecular. Doze sessões de amostragem com uma abordagem de captura-marcação-recaptura foram realizadas em quatro áreas no PNSB de 2013 a 2016, durante as obras de pavimentação da rodovia estadual RJ-165 (Estrada Parque Paraty-Cunha), município de Paraty, estado do Rio de Janeiro, Brasil. Os pequenos mamíferos não-voadores (Rodentia e Didelphimorphia) foram amostrados usando armadilhas de captura viva Sherman® e Tomahawk® (18.987 armadilhas-noite) e armadilhas de queda (4.591 armadilhas-noite). Trinta e duas espécies (11 marsupiais e 21 roedores) foram registradas em 1.185 espécimes capturados. A riqueza de espécies variou de 18 a 28 entre as áreas de amostragem. Dez e 11 espécies foram capturadas exclusivamente em armadilhas de captura viva e armadilhas de queda, respectivamente. A riqueza observada (32 espécies) representou 91,4% da riqueza de espécies estimada para a área de estudo. As áreas 2 e 4 foram as mais semelhantes entre si quanto à composição de espécies, e a área 3 foi a mais dissimilar. As espécies com maior abundância relativa foram Euryoryzomys russatus (14%) e Delomys dorsalis (14%), enquanto seis espécies tiveram abundâncias relativas inferiores a 1%. Quatorze e 17 espécies foram identificadas pelo cariótipo e por análise molecular, respectivamente. O presente estudo acrescentou 22 espécies à lista de pequenos mamíferos não-voadores do parque, que passou a contar com 37 espécies com ocorrência confirmada. Essa riqueza de espécies encontrada no PNSB é uma das maiores já registradas para o grupo dos pequenos mamíferos não-voadores em áreas protegidas da Mata Atlântica no Brasil, corroborando a região da Serra da Bocaina como um hotspot de biodiversidade.

Sporothrix brasiliensis infecting cats in northeastern Brazil: New emerging areas in Paraíba state / Sporothrix brasiliensis infectando felinos no nordeste do Brasil: novas áreas emergentes no estado da Paraíba

ABSTRACT: Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by fungus of the Sporothrix complex, and in Brazil the main species reported is Sporothrix brasiliensis, of which the diseased cat is the transmitter. Although, its occurrence has increased in the state of Paraíba, Brazil, since 2016, data on the disease in this state are limited. Therefore, this research aimed to identify molecularly isolates of Sporothrix spp. from domestic cats from cities in Paraíba, and in this way to expand the understanding of the disease in the state. Thirty-nine samples were analyzed, obtained from skin lesions of domestic felines, from the following cities in Paraíba: João Pessoa, Pilões, Patos, Areia, Bananeiras and Guarabira. Cytological analysis was performed to screen the samples, followed by fungal culture, and the molecular characterization of the isolates was performed, using the species-specific Polymerase Chain Reaction (PCR) or partial sequencing of the calmodulin gene. All isolates were identified as S. brasiliensis. The sequencing showed 100% similarity to the S. brasiliensis CBS 120339 strain. In view of this, it is concluded that in the study areas the species involved in cases of feline sporotrichosis is S. brasiliensis, its presence in Paraíba demonstrated the spread of the agent in regions distant from the epicenters in Brazil, alerting to the possible occurrence of zoonotic outbreaks similar to those found in the South and Southeast regions of the country. In addition, it highlights the emerging role of felines in the transmission of sporotrichosis in new endemic areas of Brazil.

RESUMO: A esporotricose é uma micose subcutânea causada por fungos do complexo Sporothrix, e no Brasil a principal espécie relatada é Sporothrix brasiliensis da qual o transmissor é o gato doente. Embora sua ocorrência tenha aumentado no estado da Paraíba, Brasil, desde 2016, os dados sobre a doença neste estado são limitados. Diante disso, esta pesquisa teve por objetivo identificar, molecularmente, isolados de Sporothrix spp. procedentes de felinos domésticos de cidades da Paraíba, e dessa maneira expandir a compreensão da enfermidade no estado. Foram analisadas 39 amostras, obtidas de lesões cutâneas de felinos domésticos, oriundos das seguintes cidades paraibanas: João Pessoa, Pilões, Patos, Areia, Bananeiras e Guarabira. Realizou-se análise citológica, para triagem das amostras, a seguir cultura fúngica, e posteriormente a caracterização molecular dos isolados, utilizando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), espécie-específica ou sequenciamento parcial do gene calmodulina. Todos os isolados foram identificados molecularmente como S. brasiliensis. O sequenciamento demonstrou 100% de similaridade com a cepa S. brasiliensis CBS 120339. Contudo, conclui-se que nas áreas do estudo a espécie envolvida em casos de esporotricose felina é S. brasiliensis, sua presença na Paraíba demonstra a disseminação do agente em regiões distantes dos epicentros no Brasil, alertando para a possível ocorrência de surtos zoonóticos, semelhantes aos encontrados nas regiões Sul e Sudeste do país. Além disso, destaca o papel emergente dos felinos na transmissão da esporotricose em novas áreas endêmicas do Brasil.

Sporothrix brasiliensis infecting cats in northeastern Brazil: New emerging areas in Paraíba state / Sporothrix brasiliensis infectando felinos no nordeste do Brasil: novas áreas emergentes no estado da Paraíba

Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by fungus of the Sporothrix complex, and in Brazil the main species reported is Sporothrix brasiliensis, of which the diseased cat is the transmitter. Although, its occurrence has increased in the state of Paraíba, Brazil, since 2016, data on the disease in this state are limited. Therefore, this research aimed to identify molecularly isolates of Sporothrix spp. from domestic cats from cities in Paraíba, and in this way to expand the understanding of the disease in the state. Thirty-nine samples were analyzed, obtained from skin lesions of domestic felines, from the following cities in Paraíba: João Pessoa, Pilões, Patos, Areia, Bananeiras and Guarabira. Cytological analysis was performed to screen the samples, followed by fungal culture, and the molecular characterization of the isolates was performed, using the species-specific Polymerase Chain Reaction (PCR) or partial sequencing of the calmodulin gene. All isolates were identified as S. brasiliensis. The sequencing showed 100% similarity to the S. brasiliensis CBS 120339 strain. In view of this, it is concluded that in the study areas the species involved in cases of feline sporotrichosis is S. brasiliensis, its presence in Paraíba demonstrated the spread of the agent in regions distant from the epicenters in Brazil, alerting to the possible occurrence of zoonotic outbreaks similar to those found in the South and Southeast regions of the country. In addition, it highlights the emerging role of felines in the transmission of sporotrichosis in new endemic areas of Brazil.

A esporotricose é uma micose subcutânea causada por fungos do complexo Sporothrix, e no Brasil a principal espécie relatada é Sporothrix brasiliensis da qual o transmissor é o gato doente. Embora sua ocorrência tenha aumentado no estado da Paraíba, Brasil, desde 2016, os dados sobre a doença neste estado são limitados. Diante disso, esta pesquisa teve por objetivo identificar, molecularmente, isolados de Sporothrix spp. procedentes de felinos domésticos de cidades da Paraíba, e dessa maneira expandir a compreensão da enfermidade no estado. Foram analisadas 39 amostras, obtidas de lesões cutâneas de felinos domésticos, oriundos das seguintes cidades paraibanas: João Pessoa, Pilões, Patos, Areia, Bananeiras e Guarabira. Realizou-se análise citológica, para triagem das amostras, a seguir cultura fúngica, e posteriormente a caracterização molecular dos isolados, utilizando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), espécie-específica ou sequenciamento parcial do gene calmodulina. Todos os isolados foram identificados molecularmente como S. brasiliensis. O sequenciamento demonstrou 100% de similaridade com a cepa S. brasiliensis CBS 120339. Contudo, conclui-se que nas áreas do estudo a espécie envolvida em casos de esporotricose felina é S. brasiliensis, sua presença na Paraíba demonstra a disseminação do agente em regiões distantes dos epicentros no Brasil, alertando para a possível ocorrência de surtos zoonóticos, semelhantes aos encontrados nas regiões Sul e Sudeste do país. Além disso, destaca o papel emergente dos felinos na transmissão da esporotricose em novas áreas endêmicas do Brasil.

Morphological characterization and molecular identification of Colletotrichum species associated to sweet persimmon anthracnose in Southern Brazil / Caracterização morfológica e identificação molecular de espécies de Colletotrichum associadas à antracnose de caqui doce no Sul do Brasil

ABSTRACT: The highlands of Southern Brazil contribute with 40% of Brazilian persimmon production. Although expanding, persimmon production faces major problems caused by anthracnose disease (black spot), including fruit rot and necrosis of leaves. Several Colletotrichum species (C. horii, C. gloeosporioides, among others) are implicated in persimmon anthracnose around the world. To identify Colletotrichum species associated with persimmon anthracnose in the highlands of Southern Brazil, 34 isolates were analyzed by ITS-rDNA partial region, GAPDH, and TUB2 partial gene sequences, morphological characteristics, and virulence on persimmon fruits and leaves. Data showed a high prevalence of C. horii (85.3%), that associated with its high virulence on fruits and leaves, confirm a considerable degree of host preference. Moreover, other species C. aenigma, C. asianum, C. fructicola, and C. nymphaeae, were identified, but the last three ones exhibited low virulence on fruits and were not able to produce symptoms on leaves. As far as we know this is the first reference on C. asianum in persimmon. The present data may contribute to a better understanding of the etiology of anthracnose in sweet persimmon in Southern Brazil, and it will be useful for epidemiological studies and the development of disease management measures.

RESUMO: As terras altas do sul do Brasil contribuem com 40% da produção brasileira de caqui. Embora em expansão, a produção de caqui enfrenta grandes problemas causados ​​pela antracnose (mancha preta), incluindo o apodrecimento dos frutos e necrose das folhas. Várias espécies de Colletotrichum (C. horii, C. gloeosporioides, entre outras) estão envolvidas com a antracnose do caqui em todo mundo. Para identificar espécies de Colletotrichum associadas à antracnose de caqui nas terras altas do sul do Brasil, 34 isolados foram analisados ​​através da região parcial de ITS-rDNA e sequências parciais dos genes GAPDH e TUB2, características morfológicas e virulência em frutos e folhas de caqui. Os dados mostraram uma alta prevalência de C. horii (85,3%), que associada à sua alta virulência em frutos e folhas, confirma um grau considerável de preferência pelo hospedeiro. Além disso, foram identificadas outras espécies C. aenigma, C. asianum, C. fructicola, e C. nymphaeae, mas as três últimas exibiram baixa virulência nos frutos e não foram capazes de produzir sintomas nas folhas. Até onde sabemos, esta é a primeira referência sobre C. asianum em caqui. Os presentes dados podem contribuir para uma melhor compreensão da etiologia da antracnose em caqui doce no sul do Brasil e isso pode ser útil para estudos epidemiológicos e para o desenvolvimento de medidas de controle da doença.

Morphological characterization and molecular identification of Colletotrichum species associated to sweet persimmon anthracnose in Southern Brazil / Caracterização morfológica e identificação molecular de espécies de Colletotrichum associadas à antracnose de caqui doce no Sul do Brasil

The highlands of Southern Brazil contribute with 40% of Brazilian persimmon production. Although expanding, persimmon production faces major problems caused by anthracnose disease (black spot), including fruit rot and necrosis of leaves. Several Colletotrichum species (C. horii, C. gloeosporioides, among others) are implicated in persimmon anthracnose around the world. To identify Colletotrichum species associated with persimmon anthracnose in the highlands of Southern Brazil, 34 isolates were analyzed by ITS-rDNA partial region, GAPDH, and TUB2 partial gene sequences, morphological characteristics, and virulence on persimmon fruits and leaves. Data showed a high prevalence of C. horii (85.3%), that associated with its high virulence on fruits and leaves, confirm a considerable degree of host preference. Moreover, other species C. aenigma, C. asianum, C. fructicola, and C. nymphaeae, were identified, but the last three ones exhibited low virulence on fruits and were not able to produce symptoms on leaves. As far as we know this is the first reference on C. asianum in persimmon. The present data may contribute to a better understanding of the etiology of anthracnose in sweet persimmon in Southern Brazil, and it will be useful for epidemiological studies and the development of disease management measures.

As terras altas do sul do Brasil contribuem com 40% da produção brasileira de caqui. Embora em expansão, a produção de caqui enfrenta grandes problemas causados ​​pela antracnose (mancha preta), incluindo o apodrecimento dos frutos e necrose das folhas. Várias espécies de Colletotrichum (C. horii, C. gloeosporioides, entre outras) estão envolvidas com a antracnose do caqui em todo mundo. Para identificar espécies de Colletotrichum associadas à antracnose de caqui nas terras altas do sul do Brasil, 34 isolados foram analisados ​​através da região parcial de ITS-rDNA e sequências parciais dos genes GAPDH e TUB2, características morfológicas e virulência em frutos e folhas de caqui. Os dados mostraram uma alta prevalência de C. horii (85,3%), que associada à sua alta virulência em frutos e folhas, confirma um grau considerável de preferência pelo hospedeiro. Além disso, foram identificadas outras espécies C. aenigma, C. asianum, C. fructicola, e C. nymphaeae, mas as três últimas exibiram baixa virulência nos frutos e não foram capazes de produzir sintomas nas folhas. Até onde sabemos, esta é a primeira referência sobre C. asianum em caqui. Os presentes dados podem contribuir para uma melhor compreensão da etiologia da antracnose em caqui doce no sul do Brasil e isso pode ser útil para estudos epidemiológicos e para o desenvolvimento de medidas de controle da doença.

Morphological characterization and molecular identification of Colletotrichum species associated to sweet persimmon anthracnose in Southern Brazil / Caracterização morfológica e identificação molecular de espécies de Colletotrichum associadas à antracnose de caqui doce no Sul do Brasil

The highlands of Southern Brazil contribute with 40% of Brazilian persimmon production. Although expanding, persimmon production faces major problems caused by anthracnose disease (black spot), including fruit rot and necrosis of leaves. Several Colletotrichum species (C. horii, C. gloeosporioides, among others) are implicated in persimmon anthracnose around the world. To identify Colletotrichum species associated with persimmon anthracnose in the highlands of Southern Brazil, 34 isolates were analyzed by ITS-rDNA partial region, GAPDH, and TUB2 partial gene sequences, morphological characteristics, and virulence on persimmon fruits and leaves. Data showed a high prevalence of C. horii (85.3%), that associated with its high virulence on fruits and leaves, confirm a considerable degree of host preference. Moreover, other species C. aenigma, C. asianum, C. fructicola, and C. nymphaeae, were identified, but the last three ones exhibited low virulence on fruits and were not able to produce symptoms on leaves. As far as we know this is the first reference on C. asianum in persimmon. The present data may contribute to a better understanding of the etiology of anthracnose in sweet persimmon in Southern Brazil, and it will be useful for epidemiological studies and the development of disease management measures.(AU)

As terras altas do sul do Brasil contribuem com 40% da produção brasileira de caqui. Embora em expansão, a produção de caqui enfrenta grandes problemas causados ​​pela antracnose (mancha preta), incluindo o apodrecimento dos frutos e necrose das folhas. Várias espécies de Colletotrichum (C. horii, C. gloeosporioides, entre outras) estão envolvidas com a antracnose do caqui em todo mundo. Para identificar espécies de Colletotrichum associadas à antracnose de caqui nas terras altas do sul do Brasil, 34 isolados foram analisados ​​através da região parcial de ITS-rDNA e sequências parciais dos genes GAPDH e TUB2, características morfológicas e virulência em frutos e folhas de caqui. Os dados mostraram uma alta prevalência de C. horii (85,3%), que associada à sua alta virulência em frutos e folhas, confirma um grau considerável de preferência pelo hospedeiro. Além disso, foram identificadas outras espécies C. aenigma, C. asianum, C. fructicola, e C. nymphaeae, mas as três últimas exibiram baixa virulência nos frutos e não foram capazes de produzir sintomas nas folhas. Até onde sabemos, esta é a primeira referência sobre C. asianum em caqui. Os presentes dados podem contribuir para uma melhor compreensão da etiologia da antracnose em caqui doce no sul do Brasil e isso pode ser útil para estudos epidemiológicos e para o desenvolvimento de medidas de controle da doença.(AU)

Molecular prevalence and factors associated with Babesia vogeli infection in dogs in the Cerrado Mato-Grossense region of Brazil / Prevalência molecular e fatores associados à infecção por Babesia vogeli em cães do cerrado Mato-Grossense

Canine babesiosis is a common haemoparasitosis in Brazil. Caused by parasites of the genus Babesia, it is transmitted by ixodid ticks and affects domestic and wild canids. The objective of this study was to verify the prevalence of Babesia species (spp.) using molecular methods in dogs living in urban and rural areas of Cuiabá, Mato Grosso State, Brazil, and to identify the main factors associated with infection. A total of 407 samples from 407 dogs were evaluated using a polymerase chain reaction (PCR) technique, among which Babesia species (spp.) was amplified in 10 (2.5%). Although, no statistical association was found among the variables studied (p>0.05), greater positivity was observed in dogs<1 year of age, male sex, those with free access to the street, and the presence of ticks. PCR samples positive for Babesia spp. were submitted to sequencing and compared in GenBank and exhibited a high degree of similarity with Babesia vogeli sequences.(AU)

Babesiose canina é uma hemoparasitose comum no Brasil. Causada por parasitos do gênero Babesia, é transmitida por carrapatos ixodídeos e acomete canídeos domésticos e silvestres. O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalência molecular da infecção por Babesia spp. em cães residentes em áreas urbanas e rurais do município de Cuiabá, estado de Mato Grosso, Brasil, e relacionar os principais fatores associados à infecção. Para a pesquisa foram avaliados 407 cães usando a PCR. Das 407 amostras analisadas, 10 (2,5%) amplificaram DNA de Babesia spp. Não foi observada associação estatística entre as variáveis pesquisadas (p>0,05), porém observou-se maior positividade em cães com idade inferior a um ano, machos, com livre acesso à rua e com a presença de carrapatos. Amostras positivas nas PCRs para Babesia spp. foram submetidas a sequenciamento e comparadas no GenBank, mostrando alto grau de similaridade com as sequências de B. vogeli.(AU)

Molecular prevalence and factors associated with Babesia vogeli infection in dogs in the Cerrado Mato-Grossense region of Brazil / Prevalência molecular e fatores associados à infecção por Babesia vogeli em cães do cerrado Mato-Grossense

ABSTRACT: Canine babesiosis is a common haemoparasitosis in Brazil. Caused by parasites of the genus Babesia, it is transmitted by ixodid ticks and affects domestic and wild canids. The objective of this study was to verify the prevalence of Babesia species (spp.) using molecular methods in dogs living in urban and rural areas of Cuiabá, Mato Grosso State, Brazil, and to identify the main factors associated with infection. A total of 407 samples from 407 dogs were evaluated using a polymerase chain reaction (PCR) technique, among which Babesia species (spp.) was amplified in 10 (2.5%). Although, no statistical association was found among the variables studied (p>0.05), greater positivity was observed in dogs<1 year of age, male sex, those with free access to the street, and the presence of ticks. PCR samples positive for Babesia spp. were submitted to sequencing and compared in GenBank and exhibited a high degree of similarity with Babesia vogeli sequences.

RESUMO: Babesiose canina é uma hemoparasitose comum no Brasil. Causada por parasitos do gênero Babesia, é transmitida por carrapatos ixodídeos e acomete canídeos domésticos e silvestres. O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalência molecular da infecção por Babesia spp. em cães residentes em áreas urbanas e rurais do município de Cuiabá, estado de Mato Grosso, Brasil, e relacionar os principais fatores associados à infecção. Para a pesquisa foram avaliados 407 cães usando a PCR. Das 407 amostras analisadas, 10 (2,5%) amplificaram DNA de Babesia spp. Não foi observada associação estatística entre as variáveis pesquisadas (p>0,05), porém observou-se maior positividade em cães com idade inferior a um ano, machos, com livre acesso à rua e com a presença de carrapatos. Amostras positivas nas PCRs para Babesia spp. foram submetidas a sequenciamento e comparadas no GenBank, mostrando alto grau de similaridade com as sequências de B. vogeli.

Diversity of yeasts during fermentation of cocoa from two sites in the Brazilian Amazon

The purpose of this study was to identify the yeasts involved in spontaneous fermentation of cocoa from the Brazilian Amazon region. The fermentation process was carried out experimentally with cocoa seeds from two sites (Medicilândia and Tucumã), State of Pará, northern Brazil, during a six-day period. Totals of 44 yeasts were isolated from Medicilândia and 29 from Tucumã. Molecular identification was carried out by sequencing the D1/D2 region fragment of the rRNA 26S gene, expanded with universal primers for the NL1GC and LS2 eukaryotes. Pichia manshurica and Saccharomyces cerevisiae were identified in Medicilândia and five yeast species (Pichia fermentans, P. kudriavzevii, P. manshurica, S. cerevisiae and Zygosaccharomyces bailii) were identified in Tucumã. The results showed that P. manshurica and S. cerevisiae may have potential for use as starter cultures in future studies to improve the quality of cocoa seeds fermented in the Brazilian Amazon region. (AU)

A proposta deste estudo foi identificar as leveduras envolvidas na fermentação espontânea de cacau da Amazônia brasileira. A fermentação foi realizada em Medicilândia e Tucumã, Pará, Brasil, durante 6 dias. Em total foram obtidos 44 isolados de leveduras de Medicilândia e 29 de Tucumã. A identificação molecular foi realizada por sequenciamento do fragmento da região D1/D2 do gene rRNA 26S, amplificado com primers universais para eucariotos NL1GC e LS2. Em Medicilândia, foram identificadas Pichia manshurica e Saccharomyces cerevisiae. Em Tucumã foram identificadas cinco espécies (Pichia fermentans, P. kudriavzevii, P. manshurica, S. cerevisiae e Zygosaccharomyces bailii). Os resultados sugerem que P. manshurica e S. cerevisiae podem ter potencial para uso como culturas starter em estudos futuros, para melhorar a qualidade das sementes de cacau fermentadas na Amazônia brasileira.(AU)

Diversity of yeasts during fermentation of cocoa from two sites in the Brazilian Amazon / Diversidade de leveduras presentes na fermentação de cacau de duas localidades na Amazônia brasileira

The purpose of this study was to identify the yeasts involved in spontaneous fermentation of cocoa from the Brazilian Amazon region. The fermentation process was carried out experimentally with cocoa seeds from two sites (Medicilândia and Tucumã), State of Pará, northern Brazil, during a six-day period. Totals of 44 yeasts were isolated from Medicilândia and 29 from Tucumã. Molecular identification was carried out by sequencing the D1/D2 region fragment of the rRNA 26S gene, expanded with universal primers for the NL1GC and LS2 eukaryotes. Pichia manshurica and Saccharomyces cerevisiae were identified in Medicilândia and five yeast species (Pichia fermentans, P. kudriavzevii, P. manshurica, S. cerevisiae and Zygosaccharomyces bailii) were identified in Tucumã. The results showed that P. manshurica and S. cerevisiae may have potential for use as starter cultures in future studies to improve the quality of cocoa seeds fermented in the Brazilian Amazon region.(AU)

A proposta deste estudo foi identificar as leveduras envolvidas na fermentação espontânea de cacau da Amazônia brasileira. A fermentação foi realizada em Medicilândia e Tucumã, Pará, Brasil, durante 6 dias. Em total foram obtidos 44 isolados de leveduras de Medicilândia e 29 de Tucumã. A identificação molecular foi realizada por sequenciamento do fragmento da região D1/D2 do gene rRNA 26S, amplificado com primers universais para eucariotos NL1GC e LS2. Em Medicilândia, foram identificadas Pichia manshurica e Saccharomyces cerevisiae. Em Tucumã foram identificadas cinco espécies (Pichia fermentans, P. kudriavzevii, P. manshurica, S. cerevisiae e Zygosaccharomyces bailii). Os resultados sugerem que P. manshurica e S. cerevisiae podem ter potencial para uso como culturas starter em estudos futuros, para melhorar a qualidade das sementes de cacau fermentadas na Amazônia brasileira.(AU)

Molecular assessment of Gymnotus spp. (Gymnotiformes: Gymnotidae) fishing used as live baitfish in the Tietê River, Brazil

The capture of live bait for sport fishing is an important activity for fishing communities. The main species used for this purpose are members of the genus Gymnotus, which comprises numerous species of cryptic nature that are difficult to identify based on external morphology. The aims of this work were to identify through partial sequences of the COI gene Gymnotus species fished in the Jacaré-Guaçu River, SP, and to develop a molecular diagnostic approach using PCR-RFLP to identify these species. Partial COI sequences were compared to those of other species deposited in GenBank. The sequences were assessed in the NEBCutter program to determine restriction sites in the sequence and the enzymes to be tested. Phenetic analysis performed by Neighbor-Joining method showed that the specimens sampled belong to two species preliminary identified here as G. cf. sylvius and G. cf. cuia, with G. cf. sylvius accounting for 95.2% of the individuals sampled. The enzymes NlaIII and SacI generated fragments that allowed distinguishing the Gymnotus species using PCR-RFLP. This analysis can be used to accurately identify these species, which is fundamental for monitoring Gymnotus fishing and assessing the conservation of this genetic resource.(AU)

A captura de iscas-vivas para a pesca esportiva constitui uma atividade importante em comunidades de pescadores. As principais espécies utilizadas para este propósito pertencem ao gênero Gymnotus, o qual compreende inúmeras espécies de natureza críptica que dificulta a identificação baseada na morfologia externa. Os objetivos deste trabalho foram identificar através de sequências parciais do gene COI, espécies de Gymnotus capturadas no Rio Jacaré-Guaçu, Ibitinga, SP, e desenvolver um diagnóstico molecular por meio de PCR-RFLP. Sequências parciais de COI foram comparadas com outras espécies depositadas no GenBank. As sequências foram analisadas no Programa NebCutter para determinar os sítios de restrição e definir as enzimas a serem testadas. A análise fenética pelo método de Neighbor-Joining mostrou que os espécimes pertencem a duas espécies identificadas preliminarmente aqui como G. cf. sylvius e G. cf. cuia, sendo que G. cf. sylvius representou 95,2% dos indivíduos amostrados. As enzimas NlaIII e SacI geraram fragmentos que permitiram discriminar as espécies por meio de PCR-RFLP. Esta análise pode ser usada na identificação precisa destas espécies, fundamental na proposição de monitoramento da pesca de Gymnotus na região e para medidas adequadas de conservação.(AU)

Molecular assessment of Gymnotus spp. (Gymnotiformes: Gymnotidae) fishing used as live baitfish in the Tietê River, Brazil

The capture of live bait for sport fishing is an important activity for fishing communities. The main species used for this purpose are members of the genus Gymnotus, which comprises numerous species of cryptic nature that are difficult to identify based on external morphology. The aims of this work were to identify through partial sequences of the COI gene Gymnotus species fished in the Jacaré-Guaçu River, SP, and to develop a molecular diagnostic approach using PCR-RFLP to identify these species. Partial COI sequences were compared to those of other species deposited in GenBank. The sequences were assessed in the NEBCutter program to determine restriction sites in the sequence and the enzymes to be tested. Phenetic analysis performed by Neighbor-Joining method showed that the specimens sampled belong to two species preliminary identified here as G. cf. sylvius and G. cf. cuia, with G. cf. sylvius accounting for 95.2% of the individuals sampled. The enzymes NlaIII and SacI generated fragments that allowed distinguishing the Gymnotus species using PCR-RFLP. This analysis can be used to accurately identify these species, which is fundamental for monitoring Gymnotus fishing and assessing the conservation of this genetic resource.(AU)

A captura de iscas-vivas para a pesca esportiva constitui uma atividade importante em comunidades de pescadores. As principais espécies utilizadas para este propósito pertencem ao gênero Gymnotus, o qual compreende inúmeras espécies de natureza críptica que dificulta a identificação baseada na morfologia externa. Os objetivos deste trabalho foram identificar através de sequências parciais do gene COI, espécies de Gymnotus capturadas no Rio Jacaré-Guaçu, Ibitinga, SP, e desenvolver um diagnóstico molecular por meio de PCR-RFLP. Sequências parciais de COI foram comparadas com outras espécies depositadas no GenBank. As sequências foram analisadas no Programa NebCutter para determinar os sítios de restrição e definir as enzimas a serem testadas. A análise fenética pelo método de Neighbor-Joining mostrou que os espécimes pertencem a duas espécies identificadas preliminarmente aqui como G. cf. sylvius e G. cf. cuia, sendo que G. cf. sylvius representou 95,2% dos indivíduos amostrados. As enzimas NlaIII e SacI geraram fragmentos que permitiram discriminar as espécies por meio de PCR-RFLP. Esta análise pode ser usada na identificação precisa destas espécies, fundamental na proposição de monitoramento da pesca de Gymnotus na região e para medidas adequadas de conservação.(AU)

Microscopic and molecular identification of foreign matter in food: detection of fraudulent practices Identification of foreign matter: food fraud / Identificação microscópica e molecular de matérias estranhas em alimentos: detecção de práticas fraudulentas

Introduction: The most frequent demands on microscopic food analysis are allegations of consumers finding macroscopic foreign matter or suspecting the presence of undeclared ingredients on products labels. The byproducts and foreign matters detection are fundamental practice for indirectly verifying the conditions of food production. Objective: This study reports the processes of microscopic and molecular identification (PCR) of a foreign matter found in a meat pie after a consumer complaint, occurred in the city of Itapira, state of São Paulo, Brazil. Method: Two distinct procedures were used to identify foreign matter: macroscopic examination, following FDA standards, and polymerase chain reaction (PCR) technique to identify DNA extracted from foreign materials. Results: The macroscopic analysis identified animal taste buds composing the pie fillings, and the PCR test confirmed that they were of bovine origin. Conclusions: Macroscopic analysis and the PCR test allowed the identification of the type of foreign matters and confirmed its bovine origin, what was enough to characterize it as a fraud by the improper use of inferior tissues in the preparation of ready-to-eat pastry.

Introdução: Uma das mais frequentes demandas de análise microscópica de alimentos são denúncias de consumidores que encontram matéria estranha macroscópica ou suspeitam da presença de ingredientes não declarados no rótulo do produto. A detecção de subprodutos e matérias estranhas é uma prática fundamental para verificar indiretamente a condição de produção de alimentos. Objetivo: Este estudo relata o processo de identificação microscópica e molecular (PCR) de uma matéria estranha encontrada em um pastel de carne após queixa de um consumidor no município de Itapira, estado de SP, Brasil. Método: Dois procedimentos distintos foram empregados para a identificação da matéria estranha: exame macroscópico seguindo padrões estabelecidos pelo FDA e técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) para identificação do DNA extraído da matéria estranha. Resultados: A análise macroscópica identificou a matéria estranha como sendo papilas gustativas de origem animal, e o teste da PCR confirmou que as mesmas eram de origem bovina. Conclusões: A análise macroscópica e o teste da PCR permitiram a identificação do tipo de matéria estranha e confirmação de sua origem bovina, caracterizando a fraude pelo uso indevido de tecidos inferiores na preparação de pastéis prontos para consumo.

Fibrinous pleuropneumonia caused by Pasteurella multocida associated with bovine lymphoma / Pleuropneumonia fibrinosa causada por Pasteurella multocida associada a linfoma bovino

In this work, we describe an unusual case of fibrinous pleuropneumonia caused by Pasteurella multocida associated with generalized lymphadenomegaly in a bovine. The animal had a one-month history of generalized superficial lymphadenomegaly that progressed to anorexia and submandibular oedema, resulting in spontaneous death. At necropsy, the parenchyma of the lymph nodes and multiple organs was obliterated by a dense proliferation of round neoplastic cells (lymphoma). Additionally, the neoplasm presented multifocal areas of haemorrhage and necrosis, characteristic of lymphoma. The parietal and visceral pleura and parietal pericardium were enlarged and covered diffusely with large amounts of a yellowish fibrillary material. The lungs were mildly enlarged, non-collapsed, and firm and exhibited interlobular septae that were thickened with a gelatinous material. Histopathological examination showed that the parietal and visceral pleura were enlarged due to a diffuse and severe inflammatory infiltrate composed of degenerate neutrophils associated with severe fibrin deposition, characteristic of fibrinous pleuropneumonia. Pleura and parietal pericardium fragments were cultivated in aerobic and microaerobic microbiological conditions. Round greyish colonies of gram-negative coccobacilli that were shiny and non-haemolytic were observed in sheep blood agar. The biochemical profile was indicative of Pasteurella spp. Molecular identification was performed by partial 16S rRNA amplification following sequencing. Pasteurella multocida was confirmed as the primary bacterium associated with the bovine fibrinous pleuropneumonia. We are able to infer that the lymphoma caused immunodepression, which increased the animals susceptibility to atypical infectious microorganisms such as pathogenic P. multocida.(AU)

Nesse trabalho, relatamos um caso de pleuropneumonia fibrinossupurativa causada por Pasteurella multocida associada à linfoadenomegalia em um bovino. O animal apresentava aumento generalizado de linfonodos há um mês progredindo para anorexia e edema submandibular por três dias culminando com óbito. Durante a necropsia, tanto dos linfonodos quanto de diversos órgãos evidenciaram proliferação neoplásica de células arredondadas e arranjadas em mantos (linfoma). Adicionalmente, áreas multifocais de hemorragia e necrose, características de linfoma, foram observadas. As pleuras parietal e visceral e pericárdio parietal apresentavam-se espessas e recobertas por acentuada quantidade de fibrina. Os pulmões estavam aumentados, não colabados, firmes e exibiam espessamento com edema moderado de septos interlobulares. À microscopia, cortes da pleura visceral exibiram acentuado infiltrado inflamatório de neutrófilos degenerados com intensa deposição de fibrina, características da pleuropneumonia fibrinossupurativa, além de neovascularização e proliferação de fibroblastos. Amostras de pulmão e da pleura foram cultivadas em aerobiose e microaerobiose. Evidenciou-se o crescimento puro no ágar sangue ovino de colônias redondas, acinzentadas, brilhantes e não-hemolíticas, sendo caracterizadas como cocobacilos gram-negativos. As características bioquímicas do isolado foram condizentes com Pasteurella spp. Procedeu-se a identificação molecular do isolado através da amplificação parcial do gene rRNA 16S com posterior sequenciamento do produto amplificado. Deste modo foi possível a confirmação do isolado como Pasteurella multocida, sendo o agente primário da pleuropneumonia fibrinosa. Com estes dados, podemos afirmar que o linfoma causou um quadro de imunodepressão, a qual aumenta a susceptibilidade dos animais a agentes infecciosos atípicos, como a P. multocida patogênica.(AU)

Isolation and identification of Mycobacterium bovis in bovines with positive reaction to the tuberculin test in the state of Paraíba, northeast Brazil / Isolamento e identificação de Mycobacterium bovis em bovinos positivos no teste de tuberculinização no estado da Paraíba, nordeste do Brasil

In areas where human tuberculosis and bovine tuberculosis coexist, differentiation between M. bovis and M. tuberculosis is important for monitoring the spread of M. bovis among cattle and from cattle to humans. The objective of this study was to isolate and identify M. bovis in bovines with positive diagnosis identified on tuberculin test in the State of Paraíba, Northeastern Brazil. Thirty-two bovines that tested positive in the comparative tuberculin test were used, from which samples of any organ with lesions suggestive of tuberculosis were collected, as well as lymph nodes, when no gross lesions were observed. Samples were submitted to histopathological exam, mycobacterial culture, Ziehl-Neelsen staining and molecular diagnosis. Twenty-one (65.6%) animals presented lesions suggestive of tuberculosis. As to body region 77.7% of lesions were found in the thoracic cavity, 12.4% in the head and 9.9% in the abdominal cavity. Among 55 samples submitted to mycobacterial culture, mycobacteria were isolated in 31 (56.4%), being 13 (41.9%) identified as M. bovis and 18 (58.1%) as Mycobacterium spp. Conclusion is that isolation and identification of M. bovis and Mycobacterium spp. in cattle suggests that humans are exposed to the risk of infection. This reinforces the need for intensification and optimization of prevention and control measures foreseen in the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Bovine Brucellosis and Tuberculosis. Mycobacteria isolation and identification surveys are, therefore, encouraged in other Northeastern states.(AU)

Em áreas onde a tuberculose humana e a tuberculose bovina coexistem, a diferenciação entre M. bovis e M. tuberculosis é importante para monitorar a disseminação de M. bovis entre bovinos e destes para os seres humanos. Objetivou-se neste estudo isolar e identificar M. bovis em bovinos com diagnóstico positivo pelo teste de tuberculinização no estado da Paraíba, nordeste do Brasil. Foram submetidos 32 bovinos positivos ao teste de tuberculinização comparativa, dos quais foram colhidas amostras de qualquer órgão com lesões sugestivas de tuberculose, e, nos casos em que não foram observadas lesões sugestivas, foram colhidas amostras de linfonodos. As amostras foram submetidas a exame histopatológico, cultivo micobacteriológico, coloração de Ziehl-Neelsen e diagnóstico molecular. Apresentaram lesões sugestivas de tuberculose 21 animais (65,6%). Com relação à distribuição das lesões de acordo com a região corporal, 77,7% localizavam-se na cavidade torácica, 12,4% na cabeça e 9,9% na cavidade abdominal. De 55 amostras submetidas ao cultivo de micobactérias, em 31 (56,4%) foram isoladas micobactérias, sendo que em 13 (41,9%) foi identificado M. bovis, e nas 18 restantes (58,1%) foi identificado Mycobacterium spp. Conclui-se que o isolamento e a identificação de M. bovis e Mycobacterium spp. em bovinos indicam que os seres humanos estão expostos ao risco de infecção. Isso reforça a necessidade de intensificação e otimização de medidas de prevenção e controle previstas no Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Bovina. Sugere-se a realização de estudos de isolamento e identificação de micobactérias em outros estados do Nordeste.(AU)

Fibrinous pleuropneumonia caused by Pasteurella multocida associated with bovine lymphoma / Pleuropneumonia fibrinosa causada por Pasteurella multocida associada a linfoma bovino

ABSTRACT: In this work, we describe an unusual case of fibrinous pleuropneumonia caused by Pasteurella multocida associated with generalized lymphadenomegaly in a bovine. The animal had a one-month history of generalized superficial lymphadenomegaly that progressed to anorexia and submandibular oedema, resulting in spontaneous death. At necropsy, the parenchyma of the lymph nodes and multiple organs was obliterated by a dense proliferation of round neoplastic cells (lymphoma). Additionally, the neoplasm presented multifocal areas of haemorrhage and necrosis, characteristic of lymphoma. The parietal and visceral pleura and parietal pericardium were enlarged and covered diffusely with large amounts of a yellowish fibrillary material. The lungs were mildly enlarged, non-collapsed, and firm and exhibited interlobular septae that were thickened with a gelatinous material. Histopathological examination showed that the parietal and visceral pleura were enlarged due to a diffuse and severe inflammatory infiltrate composed of degenerate neutrophils associated with severe fibrin deposition, characteristic of fibrinous pleuropneumonia. Pleura and parietal pericardium fragments were cultivated in aerobic and microaerobic microbiological conditions. Round greyish colonies of gram-negative coccobacilli that were shiny and non-haemolytic were observed in sheep blood agar. The biochemical profile was indicative of Pasteurella spp. Molecular identification was performed by partial 16S rRNA amplification following sequencing. Pasteurella multocida was confirmed as the primary bacterium associated with the bovine fibrinous pleuropneumonia. We are able to infer that the lymphoma caused immunodepression, which increased the animal's susceptibility to atypical infectious microorganisms such as pathogenic P. multocida.

RESUMO: Nesse trabalho, relatamos um caso de pleuropneumonia fibrinossupurativa causada por Pasteurella multocida associada à linfoadenomegalia em um bovino. O animal apresentava aumento generalizado de linfonodos há um mês progredindo para anorexia e edema submandibular por três dias culminando com óbito. Durante a necropsia, tanto dos linfonodos quanto de diversos órgãos evidenciaram proliferação neoplásica de células arredondadas e arranjadas em mantos (linfoma). Adicionalmente, áreas multifocais de hemorragia e necrose, características de linfoma, foram observadas. As pleuras parietal e visceral e pericárdio parietal apresentavam-se espessas e recobertas por acentuada quantidade de fibrina. Os pulmões estavam aumentados, não colabados, firmes e exibiam espessamento com edema moderado de septos interlobulares. À microscopia, cortes da pleura visceral exibiram acentuado infiltrado inflamatório de neutrófilos degenerados com intensa deposição de fibrina, características da pleuropneumonia fibrinossupurativa, além de neovascularização e proliferação de fibroblastos. Amostras de pulmão e da pleura foram cultivadas em aerobiose e microaerobiose. Evidenciou-se o crescimento puro no ágar sangue ovino de colônias redondas, acinzentadas, brilhantes e não-hemolíticas, sendo caracterizadas como cocobacilos gram-negativos. As características bioquímicas do isolado foram condizentes com Pasteurella spp. Procedeu-se a identificação molecular do isolado através da amplificação parcial do gene rRNA 16S com posterior sequenciamento do produto amplificado. Deste modo foi possível a confirmação do isolado como Pasteurella multocida, sendo o agente primário da pleuropneumonia fibrinosa. Com estes dados, podemos afirmar que o linfoma causou um quadro de imunodepressão, a qual aumenta a susceptibilidade dos animais a agentes infecciosos atípicos, como a P. multocida patogênica.

Fibrinous pleuropneumonia caused by Pasteurella multocida associated with bovine lymphoma / Pleuropneumonia fibrinosa causada por Pasteurella multocida associada a linfoma bovino

In this work, we describe an unusual case of fibrinous pleuropneumonia caused by Pasteurella multocida associated with generalized lymphadenomegaly in a bovine. The animal had a one-month history of generalized superficial lymphadenomegaly that progressed to anorexia and submandibular oedema, resulting in spontaneous death. At necropsy, the parenchyma of the lymph nodes and multiple organs was obliterated by a dense proliferation of round neoplastic cells (lymphoma). Additionally, the neoplasm presented multifocal areas of haemorrhage and necrosis, characteristic of lymphoma. The parietal and visceral pleura and parietal pericardium were enlarged and covered diffusely with large amounts of a yellowish fibrillary material. The lungs were mildly enlarged, non-collapsed, and firm and exhibited interlobular septae that were thickened with a gelatinous material. Histopathological examination showed that the parietal and visceral pleura were enlarged due to a diffuse and severe inflammatory infiltrate composed of degenerate neutrophils associated with severe fibrin deposition, characteristic of fibrinous pleuropneumonia. Pleura and parietal pericardium fragments were cultivated in aerobic and microaerobic microbiological conditions. Round greyish colonies of gram-negative coccobacilli that were shiny and non-haemolytic were observed in sheep blood agar. The biochemical profile was indicative of Pasteurella spp. Molecular identification was performed by partial 16S rRNA amplification following sequencing. Pasteurella multocida was confirmed as the primary bacterium associated with the bovine fibrinous pleuropneumonia. We are able to infer that the lymphoma caused immunodepression, which increased the animals susceptibility to atypical infectious microorganisms such as pathogenic P. multocida.

Nesse trabalho, relatamos um caso de pleuropneumonia fibrinossupurativa causada por Pasteurella multocida associada à linfoadenomegalia em um bovino. O animal apresentava aumento generalizado de linfonodos há um mês progredindo para anorexia e edema submandibular por três dias culminando com óbito. Durante a necropsia, tanto dos linfonodos quanto de diversos órgãos evidenciaram proliferação neoplásica de células arredondadas e arranjadas em mantos (linfoma). Adicionalmente, áreas multifocais de hemorragia e necrose, características de linfoma, foram observadas. As pleuras parietal e visceral e pericárdio parietal apresentavam-se espessas e recobertas por acentuada quantidade de fibrina. Os pulmões estavam aumentados, não colabados, firmes e exibiam espessamento com edema moderado de septos interlobulares. À microscopia, cortes da pleura visceral exibiram acentuado infiltrado inflamatório de neutrófilos degenerados com intensa deposição de fibrina, características da pleuropneumonia fibrinossupurativa, além de neovascularização e proliferação de fibroblastos. Amostras de pulmão e da pleura foram cultivadas em aerobiose e microaerobiose. Evidenciou-se o crescimento puro no ágar sangue ovino de colônias redondas, acinzentadas, brilhantes e não-hemolíticas, sendo caracterizadas como cocobacilos gram-negativos. As características bioquímicas do isolado foram condizentes com Pasteurella spp. Procedeu-se a identificação molecular do isolado através da amplificação parcial do gene rRNA 16S com posterior sequenciamento do produto amplificado. Deste modo foi possível a confirmação do isolado como Pasteurella multocida, sendo o agente primário da pleuropneumonia fibrinosa. Com estes dados, podemos afirmar que o linfoma causou um quadro de imunodepressão, a qual aumenta a susceptibilidade dos animais a agentes infecciosos atípicos, como a P. multocida patogênica.

Isolation and identification of Mycobacterium bovis in bovines with positive reaction to the tuberculin test in the state of Paraíba, northeast Brazil / Isolamento e identificação de Mycobacterium bovis em bovinos positivos no teste de tuberculinização no estado da Paraíba, nordeste do Brasil

In areas where human tuberculosis and bovine tuberculosis coexist, differentiation between M. bovis and M. tuberculosis is important for monitoring the spread of M. bovis among cattle and from cattle to humans. The objective of this study was to isolate and identify M. bovis in bovines with positive diagnosis identified on tuberculin test in the State of Paraíba, Northeastern Brazil. Thirty-two bovines that tested positive in the comparative tuberculin test were used, from which samples of any organ with lesions suggestive of tuberculosis were collected, as well as lymph nodes, when no gross lesions were observed. Samples were submitted to histopathological exam, mycobacterial culture, Ziehl-Neelsen staining and molecular diagnosis. Twenty-one (65.6%) animals presented lesions suggestive of tuberculosis. As to body region 77.7% of lesions were found in the thoracic cavity, 12.4% in the head and 9.9% in the abdominal cavity. Among 55 samples submitted to mycobacterial culture, mycobacteria were isolated in 31 (56.4%), being 13 (41.9%) identified as M. bovis and 18 (58.1%) as Mycobacterium spp. Conclusion is that isolation and identification of M. bovis and Mycobacterium spp. in cattle suggests that humans are exposed to the risk of infection. This reinforces the need for intensification and optimization of prevention and control measures foreseen in the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Bovine Brucellosis and Tuberculosis. Mycobacteria isolation and identification surveys are, therefore, encouraged in other Northeastern states.(AU)

Em áreas onde a tuberculose humana e a tuberculose bovina coexistem, a diferenciação entre M. bovis e M. tuberculosis é importante para monitorar a disseminação de M. bovis entre bovinos e destes para os seres humanos. Objetivou-se neste estudo isolar e identificar M. bovis em bovinos com diagnóstico positivo pelo teste de tuberculinização no estado da Paraíba, nordeste do Brasil. Foram submetidos 32 bovinos positivos ao teste de tuberculinização comparativa, dos quais foram colhidas amostras de qualquer órgão com lesões sugestivas de tuberculose, e, nos casos em que não foram observadas lesões sugestivas, foram colhidas amostras de linfonodos. As amostras foram submetidas a exame histopatológico, cultivo micobacteriológico, coloração de Ziehl-Neelsen e diagnóstico molecular. Apresentaram lesões sugestivas de tuberculose 21 animais (65,6%). Com relação à distribuição das lesões de acordo com a região corporal, 77,7% localizavam-se na cavidade torácica, 12,4% na cabeça e 9,9% na cavidade abdominal. De 55 amostras submetidas ao cultivo de micobactérias, em 31 (56,4%) foram isoladas micobactérias, sendo que em 13 (41,9%) foi identificado M. bovis, e nas 18 restantes (58,1%) foi identificado Mycobacterium spp. Conclui-se que o isolamento e a identificação de M. bovis e Mycobacterium spp. em bovinos indicam que os seres humanos estão expostos ao risco de infecção. Isso reforça a necessidade de intensificação e otimização de medidas de prevenção e controle previstas no Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Bovina. Sugere-se a realização de estudos de isolamento e identificação de micobactérias em outros estados do Nordeste.(AU)

First record of the Saccostrea oyster in Bertioga, São Paulo, Brazil / Primeiro registro da ostra Saccostrea em Bertioga, São Paulo, Brasil

This study presents the first record of an alien species of oyster in Bertioga, São Paulo State (Southeast Brazilian coast). Alien oysters were found attached to mangrove roots, rock shores, stones and gravel in the riverbed, forming clusters of 10–20 individuals and cohabiting with native oyster species (Crassostrea mangle, C. brasiliana and Ostrea sp.). Results are presented based on molecular analysis of specimens collected in the Itaguaré River in June 2014. We used partial sequences of 16S and COI genes to assess the taxonomic identity. The Neighbor-joining method was used to analyze phenetic relationships among samples and the genetic diversity was calculated from the Kimura two-parameter (K2P) distances. The sequences in this work clustered with a sequence of “Saccostrea cucullata” from Madagascar for both genes (COI and 16S) and presented a genetic distance of 1.7 2.2% and 3.5 5.3% from other sequences of “S. cucullata group” for 16S and COI fragments, respectively. The genetic distances from others Saccostrea species (S. palmula, S. glomerata and S. mordax) ranged from 4.7 to 9.1% for 16S and from 13.8 to 19.0% for COI. The genetic distances from other oysters species sequences (genera Ostrea and Crassostrea) are over than 14.0% and 25.0% for 16S and COI, respectively. The record is discussed in the context of possible consequences on the environment and probable pathways of introduction. This is the first published record of a Saccostrea species in the southwestern Atlantic Ocean. (AU)

Este trabalho apresenta o primeiro registro de uma espécie exótica de ostra em Bertioga, Estado de São Paulo (sudeste da costa brasileira). As ostras exóticas foram encontradas fixadas em raízes de mangue, costões rochosos, pedras e cascalhos no leito do rio, formando agrupamentos de 10 20 indivíduos e coabitando com as espécies de ostras nativas (Crassostrea mangle, C. brasiliana e Ostrea spp.). Os resultados baseiam-se em análises moleculares de espécimes coletados no rio Itaguaré em junho de 2014. Foram utilizadas sequências parciais dos genes 16S e COI para avaliar a identidade taxonômica. As análises fenéticas foram realizadas pelo método de Neighbour-joining. A divergência genética foi calculada através das distâncias do parâmetro-2 de Kimura (K2P). As sequências agruparam-se com uma sequência de Saccostrea cucullata de Madagascar para ambos os genes (COI e 16S) e apresentaram uma distância genética de 1,7 2,2% e 3,5 5,3% de outras sequências do “grupo S. cucullata” para fragmentos de 16S e COI, respectivamente. As distâncias genéticas de outras espécies de Saccostrea (S. palmula, S. glomerata e S. mordax) variaram de 4,7 a 9,1% para 16S e de 13,8 a 19,0% para COI. As distâncias genéticas de outras espécies de ostras (gêneros Ostrea e Crassostrea) foram superiores a 14,0% e 25,0% para 16S e COI, respectivamente. O registro é discutido no contexto de possíveis consequências para o ambiente e prováveis vias de introdução. Este é o primeiro registro publicado de uma espécie de Saccostrea no sudoeste do Oceano Atlântico.(AU)