Protocolo clínico para seleção de candidatos ao transplante de ilhotas / Clinical protocol for selection of the candidates for islet transplantation

OBJETIVO: Descrever o perfil clínico dos candidatos ao programa de transplante de ilhotas da Pontifícia Universidade Católica do Paraná (PUC-PR), em Curitiba. MÉTODOS: O processo de avaliação clínica foi estruturado em etapas: triagem, pré-avaliação, avaliação e lista de espera. Os critérios de inclusão utilizados foram: ocorrência de hipoglicemia assintomática, complicações crônicas progressivas da doença, idade entre 18 e 65 anos e pelo menos cinco anos de doença. RESULTADOS: De setembro de 2003 a setembro de 2006 foram avaliados 92 candidatos, dos quais 25 preencheram os critérios de triagem, sendo selecionados para pré-avaliação. O principal motivo de não qualificação foi o uso de insulina em dose > 0,7 UI/kg/d. Dos 25 candidatos incluídos na pré-avaliação, sete não concordaram em assinar o termo de consentimento. Quatro candidatos completaram todas as etapas de seleção, porém apenas dois permanecem em lista de espera. CONCLUSÕES: Os candidatos ao transplante de ilhotas devem ser rigorosamente selecionados. Dois pacientes preencheram todos os critérios e encontram-se em lista de espera.

BACKGROUND: Our intention is to describe the clinical profile of the candidates for islet transplantation in Curitiba, Brazil. METHODS: The clinical evaluation was organized in stages: Screening, Initial Evaluation, Evaluation and Waiting List. Candidates’ inclusion criteria were hypoglycemia unawareness, glycemic imbalance, chronic progressive diabetic complications, 18-65 years of age and at least 5 years of type 1 diabetes evolution. RESULTS: From September 2003 through September 2006, 92 candidates were clinically evaluated, and 25 fulfilled the Screening criteria, being selected at this stage. The main reason for exclusion was insulin requirement of more than 0.7 IU/kg/day. At the Initial Evaluation, seven of the 25 patients were excluded as have not agreed to sign the informed consent. Until now, 4 candidates completed the Evaluation stage and two of them are currently enlisted. CONCLUSIONS: Candidates for islet transplantation must be rigorously evaluated. Two patients fulfilled all the selection criteria and are currently enlisted.

Pancreatic islet isolation by mechanical-enzymatic separation, stationary collagenase digestion and dextran discontinuous density gradient purification: experimental study in dogs

The prospects for allotransplantation of pancreatic islets in man depend on the development of methods that provide sufficient quantities of pancreatic islets from a single donor, which are capable, when transplanted, of achieve the normalization of carbohydrate metabolism. Objective: Evaluate the efficacy of the isolation of Langerhans islets from dogs, by means of mechanical-enzymatic separation technique with stationary digestion using collagenase, and purification with a discontinuous dextran density gradient. Methods: The counting of islet numbers and evaluation of their sizes was accomplished by staining with diphenylthiocarbazone and using stereoscopic microscopes equipped with eyepiece reticule for the measurement of average diameters of stained islets. Results: The results disclosed that the average number of islets isolated was 81032.20 ± 24736.79 and the average number of islets isolated per kg of body weight was 6938.70 ± 1392.43. The average number of islets isolated per kg of body weight showed significant correlation with body weight and weight of the pancreas resected. Conclusion: The number of islets isolated, of a single donor, by mechanical-enzymatic separation, stationary collagenase digestion and discontinuous dextran density gradient purification can be sufficient to success of pancreatic islets transplant in dogs.

A perspectiva do alotransplante de ilhotas pancreáticas no homem está na dependência do desenvolvimento de métodos que propiciem quantidades suficientes de ilhotas pancreáticas, originadas de doador único, capazes de, quando transplantadas, levarem à normalização do metabolismo dos hidratos de carbono. Objetivo: Avaliar, em cães, a eficácia do isolamento das ilhotas de Langerhans por meio da técnica de separação mecânica-enzimática, digestão estacionária com colagenase e purificação pelo gradiente de densidade descontínua de dextran. Métodos: A contagem do número e avaliação do tamanho das ilhotas foi realizada pela coloração com difeniltiocarbazona e exame em microscópio estereoscópico munido de retícula ocular para medição do diâmetro médio das ilhotas coradas. Resultados: O número médio de ilhotas isoladas foi de 81032,20 ± 24736.79 e o número médio de ilhotas/kg de peso corpóreo foi de 6938,70± 1392,43. O número médio de ilhotas/kg de peso corpóreo obtido mostrou correlação significativa com peso corpóreo e peso do pâncreas extirpado. Conclusão: Estes resultados sugerem que o número de ilhotas isoladas, de um único doador, por meio da separação mecânica-enzimática, digestão estacionária com colagenase e purificação pelo gradiente de densidade descontínua de dextran pode ser suficiente para o sucesso do transplante de ilhotas pancreáticas em cães.

Análise quantitativa das células das ilhotas pancreáticas de ratos pinealectomizados / Quantitative analysis of pancreatic islet cells of pinealectomised rats

Foi verificada a influência da glândula pineal em relação à análise quantitativa das células α, β e δ através de estudo imuno-histoquímico. Vinte ratos Wistar foram distribuídos em 2 grupos (grupo controle - grupo pinealectomizados). Os animais foram sacrificados 70 dias após a cirurgia. Amostras de pâncreas foram coradas com anticorpos monoclonais antiinsulina, antiglucagon e antisomatostatina. Foram contadas as células de cinco ilhotas de cada segmento. O número de células positivas para insulina nos ratos normais variou de 91 a 777 (312,5 ± 203,8) e nos pinealectomizados de 81 a 903 (524,4 ± 300,3); em relação ao glucagon variou nos normais de 83 a 326 (164,6 ± 95,4) e nos pinealectomizados de 95 a 287 (188,8 ± 78,4); em relação à somatostatina variou nos normais de 13 a 65 (35,4 ± 20,9) e nos pinealectomizados de 11 a 65 (29,7 ± 18,4). O número médio de células positivas para insulina nos animais pinealectomizados apresentou-se superior ao dos normais, mas essa superioridade não foi estatisticamente significante (p = 0,08). Estes resultados demonstram que a pineal parece exercer influência no pâncreas endócrino e corroboram estudos prévios.

The influence of the pineal gland on pancreatic islet with respect to a quantitative analysis of α, β and δ cells by immunohistochemistry was verified. Twenty Wistar rats was divided in two groups (control group - pinealectomysed group). The animals were sacrificed 70 days after surgery. Fragments of pancreas segments were stained with anti-insulin, anti-glucagon and antisomatostatin monoclonal antibodies. The cells of five islets were counted in each segments. The number of insulin-positive cells ranged from 91 to 777 (312,5 ± 203,8) in normal rats and from 81to 903 (524,4 ± 300,3) in pinealectomysed rats; glucagon-positive cells ranged from 83 to 326 - 164,6 ± 95,4 - (normals) and from 95 to 287 - 188,8 ± 78,4 - (pinealectomysed); somatostatin-positive cells ranged from 13 to 65 - 35,4 ± 20,9 - (normals) and from 11 to 65 - 29,7 ± 18,4 - (pinealectomysed). The mean number of insulin-positive cells was higher in pinealectomysed animals than in normal animals but not significantly (p = 0.08). These results indicate that the pineal gland seems to have an influence on endocrine pancreas and support previous studies.

Distribuição anatômica da árvore ductal pancreática do cão: implicações para o isolamento das ilhotas de Langerhans

The knowledge of normal pancreatic ductal tree anatomy in dogs is important for the preparation and isolation of islets of Langerhans. The aim of this study is to demonstrate the anatomical configuration of the pancreatic ductal tree, especially concerning its implications in the preparation of pancreatic tissue for Langerhans islets transplantation techniques. The main pancreatic duct ( Santorini ) was dissected, and the upper and the lower branches were catheterized. Total pancreatectomy was performed without duodenectomy. Through the catheters an acetone solution was administered to the ducts, a blue ink solution was administered to the upper branch, and a red ink solution was administered to the lower branch. The ductal tree was then carefully dissected. A global distension of the pancreatric parenquima was observed due to the complete envelopment of the gland by the tributary branches of the main pancreatic duct. The lower branch only distended the uncinated process region, and the upper branch only distended the body and tail regions of the pancreatic tissue. This study suggests that the use of these sites of infusion are adequate in the procedures for isolating islets of Langerhans in dogs.

O conhecimento da anatomia normal da árvore ductal pancreática no cão e de sua variações reveste-se de importância para a execução dos protocolos de preparação e isolamento das ilhotas de Langerhans. A proposta deste estudo é demonstrar a configuração anatômica da dutal pancreática com especial atenção para as implicações sobre as técnicas de preparação do tecido pancreático para o transplante de ilhotas de Langerhans no cão. Os autores realizaram a dissecção do duto pancreático principal (Santorini) e a cateterização dos seus ramos ascendente e descendente. Em seguida procederam à pancreatectomia total sem duodenectomia. Através destes cateteres, infundiu-se solução de acetona no interior dos ductos e solução de tinta nanquim de cor azul no ramo ascendente e de cor vermelha no ramo descendente. Posteriormente, os autores dissecaram a árvore ductal pancreática com pinças delicadas e digitoclasia. Através desta técnica, os autores verificaram a distensão universal do parênquima pancreático devido ao envolvimento de toda a glândula pelos ramos tributários do ducto pancreático principal. O ramos descendente distendeu exclusivamente a região do processo uncinado, ao passo que o ramo ascendente distendeu exclusivamente as regiões do corpo e cauda do pâncreas canino. Esta constatação enfatiza a utilização destas vias para a infusão das soluções apropriadas nos procedimentos de isolamento das ilhotas de Langerhans no modelo canino.