Equine semen cooled with chemically defined extender containing soy lecithin / Sêmen equino refrigerado com diluidor quimicamente definido contendo lecitina de soja

Equine semen has historically been chilled using milk-based media. However, the use of animal-based components presents several potential concerns, such as variability in formulations, microbial contamination and regulatory issues. We aimed to evaluate the potential of including different concentrations of soy lecithin (LS) in chemically defined Biggers, Whitten and Whittingham (BWW) medium for cooling equine semen to 15°C. Ejaculates were diluted as six different experimental groups: 1) BotuSêmen® (control); 2) BWW; 3) BWW + 1% LS; 4) BWW + 2% LS; 5) BWW + 4% LS and 6) BWW + 6% LS. BWW medium, did not preserve motility, velocity, straightness (STR), linearity (LIN), amplitude of lateral sperm head displacement (ALH), cross flagellar beat frequency (BCF), functional and structural integrity of equine spermatozoa during 24 h of refrigeration when compared to BotuSêmen® (P <0.05). The use of BWW for cooling equine semen was only possible with the addition of LS, being the concentrations equal or higher than 2% better, because they preserved total motility, curvilinear velocity (VCL) and LIN with the same potential of BotuSêmen® (P >0.05). Nevertheless, BotuSêmen® showed superiority in preserving the percentage of sperm progressive motility, average path velocity (VAP), linear progressive velocity (VSL) and BCF during cooling compared to the other extenders (P <0.05). The inclusion of soy lecithin, from 2 to 6% in the BWW medium, allowed maintaining the viability of equine semen cooled at 15ºC for up to 24 hours.

O sêmen equino tem sido historicamente refrigerado usando meios à base de leite. No entanto, o uso de componentes de origem animal causa várias preocupações potenciais, como variabilidade nas formulações, contaminação microbiana e questões regulatórias. Objetivou-se avaliar o potencial de inclusão de diferentes concentrações de lecitina de soja (LS) no meio quimicamente definido BWW - Biggers, Whitten e Whittingham para refrigeração de sêmen equino e armazenamento na temperatura de 15°C. Os ejaculados foram diluídos em seis diferentes grupos experimentais: 1) BotuSêmen® (controle); 2) BWW; 3) BWW + 1% lecitina de soja (LS); 4) BWW + 2% LS; 5) BWW + 4% LS e 6) BWW + 6% LS. O meio BWW, não preservou a motilidade, a velocidade, a retilinearidade (STR), a linearidade (LIN), a amplitude do deslocamento lateral da cabeça (ALH), a frequência de batimento flagelar cruzado (BCF), a integridade funcional e estrutural dos espermatozoides equino durante 24 h de refrigeração quando comparado ao BotuSêmen® (P <0,05). O uso de BWW para refrigeração de sêmen equino só foi possível com adição de lecitina de soja, sendo as concentrações igual ou superior a 2% melhores, pois preservaram a motilidade total, a velocidade curvilinear (VCL) e LIN com mesmo potencial do BotuSêmen® (P >0,05). Ainda assim, o diluidor comercial BotuSêmen® apresentou superioridade em preservar o percentual de espermatozoides progressivamente móveis, a velocidade média da trajetória (VAP), a velocidade linear progressiva (VSL) e a frequência do batimento flagelar cruzado (BCF) durante a refrigeração comparado aos demais diluidores (P <0,05). A inclusão de lecitina de soja, de 2 a 6% no meio BWW, permitiu a manutenção da viabilidade do sêmen equino refrigerado a 15ºC por até 24 horas.

Use of alternative extenders and temperatures in long term storage of boar semen / Uso de diluentes e temperaturas alternativas na conservação prolongada do sêmen do varrão

The use of appropriate extenders is important for the success of an artificial insemination program. The objective of this study was to evaluate the efficiency of alternative extenders for swine semen at different temperatures (17 to 10 C). The following extenders were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), powdered coconut water (ACP-103®), and skimmed milk powder (LPD). The 50 ejaculates were analyzed daily, in natura and after dilution, during the 5-day period of semen preservation  (D0 to D4), regarding spermatic vigor and motility. Acrosome integrity and sperm viability were evaluated on D0 and D4. Data were analyzed using Mann-Whitney, Students, Tukey and chi-square tests (p 0.05). The LPD extender at 10 C presented higher motility and sperm vigor compared to BTS and ACP until D2, and to treatments stored at 17 C. Acrosome vitality and integrity remained higher (p 0.001) with LPD at 10 C on D0 and D4. LPD showed to be a good extender for the swine semen at lower temperature (10 C). Furthermore, it provided better protection to sperm cells, by allowing greater integrity and vitality of the acrosome(AU)

O uso de diluentes adequados é importante para o sucesso de um programa de inseminação artificial. O objetivo deste experimento foi avaliar a eficiência de diluentes alternativos para o sêmen suíno, em diferentes temperaturas (17 e 10 C). Foram utilizados os diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS); água de coco em pó (ACP®-103) e leite em pó desnatado (LPD). Os 50 ejaculados, foram analisados in natura e após diluição, diariamente, durante os 5 dias de conservação do sêmen (D0 a D4), quanto ao vigor e motilidade espermática. Avaliou-se a integridade do acrossoma e a viabilidade espermática no D0 e D4. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, Students, Tukey e o qui-quadrado, com intervalo de confiança de 5%. O diluente LPD a 10 C apresentou motilidade e vigor espermático melhores em relação ao BTS e ACP (10 C) até D2 e aos tratamentos conservados a 17 C. A vitalidade e integridade acrossomal, no D0 e D4, foram melhores com LPD a 10 C, que mostrou ser um bom meio diluente para o sêmen suíno em temperatura mais baixa  (10C), conferindo uma maior proteção à célula espermática, através de maiores taxas de viabilidade  e integridade de acrossoma(AU)

USO DE DILUENTES E TEMPERATURAS ALTERNATIVAS NA CONSERVAÇÃO PROLONGADA DO SÊMEN DO VARRÃO

Abstract The use of appropriate extenders is important for the success of an artificial insemination program. The objective of this study was to evaluate the efficiency of alternative extenders for swine semen at different temperatures (17 to 10 °C). The following extenders were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), powdered coconut water (ACP-103®), and skimmed milk powder (LPD). The 50 ejaculates were analyzed daily, in natura and after dilution, during the 5-day period of semen preservation (D0 to D4), regarding spermatic vigor and motility. Acrosome integrity and sperm viability were evaluated on D0 and D4. Data were analyzed using Mann-Whitney, Students, Tukey and chi-square tests (p 0.05). The LPD extender at 10 °C presented higher motility and sperm vigor compared to BTS and ACP until D2, and to treatments stored at 17 °C. Acrosome vitality and integrity remained higher (p 0.001) with LPD at 10 °C on D0 and D4. LPD showed to be a good extender for the swine semen at lower temperature (10 °C). Furthermore, it provided better protection to sperm cells, by allowing greater integrity and vitality of the acrosome.

Resumo O uso de diluentes adequados é importante para o sucesso de um programa de inseminação artificial. O objetivo deste experimento foi avaliar a eficiência de diluentes alternativos para o sêmen suíno, em diferentes temperaturas (17 e 10 °C). Foram utilizados os diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS); água de coco em pó (ACP®-103) e leite em pó desnatado (LPD). Os 50 ejaculados, foram analisados in natura e após diluição, diariamente, durante os 5 dias de conservação do sêmen (D0 a D4), quanto ao vigor e motilidade espermática. Avaliou-se a integridade do acrossoma e a viabilidade espermática no D0 e D4. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, Students, Tukey e o qui-quadrado, com intervalo de confiança de 5%. O diluente LPD a 10 °C apresentou motilidade e vigor espermático melhores em relação ao BTS e ACP (10 °C) até D2 e aos tratamentos conservados a 17 °C. A vitalidade e integridade acrossomal, no D0 e D4, foram melhores com LPD a 10 °C, que mostrou ser um bom meio diluente para o sêmen suíno em temperatura mais baixa (10 °C), conferindo uma maior proteção à célula espermática, através de maiores taxas de viabilidade e integridade de acrossoma.

Use of alternative extenders and temperatures in long term storage of boar semen / Uso de diluentes e temperaturas alternativas na conservação prolongada do sêmen do varrão

The use of appropriate extenders is important for the success of an artificial insemination program. The objective of this study was to evaluate the efficiency of alternative extenders for swine semen at different temperatures (17 to 10 C). The following extenders were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), powdered coconut water (ACP-103®), and skimmed milk powder (LPD). The 50 ejaculates were analyzed daily, in natura and after dilution, during the 5-day period of semen preservation  (D0 to D4), regarding spermatic vigor and motility. Acrosome integrity and sperm viability were evaluated on D0 and D4. Data were analyzed using Mann-Whitney, Students, Tukey and chi-square tests (p 0.05). The LPD extender at 10 C presented higher motility and sperm vigor compared to BTS and ACP until D2, and to treatments stored at 17 C. Acrosome vitality and integrity remained higher (p 0.001) with LPD at 10 C on D0 and D4. LPD showed to be a good extender for the swine semen at lower temperature (10 C). Furthermore, it provided better protection to sperm cells, by allowing greater integrity and vitality of the acrosome

O uso de diluentes adequados é importante para o sucesso de um programa de inseminação artificial. O objetivo deste experimento foi avaliar a eficiência de diluentes alternativos para o sêmen suíno, em diferentes temperaturas (17 e 10 C). Foram utilizados os diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS); água de coco em pó (ACP®-103) e leite em pó desnatado (LPD). Os 50 ejaculados, foram analisados in natura e após diluição, diariamente, durante os 5 dias de conservação do sêmen (D0 a D4), quanto ao vigor e motilidade espermática. Avaliou-se a integridade do acrossoma e a viabilidade espermática no D0 e D4. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, Students, Tukey e o qui-quadrado, com intervalo de confiança de 5%. O diluente LPD a 10 C apresentou motilidade e vigor espermático melhores em relação ao BTS e ACP (10 C) até D2 e aos tratamentos conservados a 17 C. A vitalidade e integridade acrossomal, no D0 e D4, foram melhores com LPD a 10 C, que mostrou ser um bom meio diluente para o sêmen suíno em temperatura mais baixa  (10C), conferindo uma maior proteção à célula espermática, através de maiores taxas de viabilidade  e integridade de acrossoma

Produção e purificação de nisina produzida por Lactococcus lactis em leite desnatado e soro de leite / Nisin production and purification utilizing Lactococcus lactis is skimmed milk and milk whey

O peptideo antimicrobiano retratado neste trabalho é a nisina, produzido pela bacteria Lactococcus lactis subsp. lactis, urn peptideo estruturalmente composto por 34 aminoácidos, mostra urn vasto espectro de atividade inibitória em microrganismos Gram-positivos, Gram-negatios e esporo formadores. O objetivo deste trabalho foi produzir a nisina a partir de células de Lactococcus lactis utilizando soro de leite e leite desnatado como meio de cultivo. Para tanto as células de L. lactis foram desenvolvidas em agitador rotacional (30°C/36 h/100 rpm) e a atividade de nisina, os parâmetros de crescimento e os componentes do meio de cultivo foram analisados. Em leite desnatado, contendo 2,27 g de sólidos totais, a atividade de nisina foi 20077,05 AU.mLˉ¹ sendo 3 vezes maior em relação ao leite desnatado corn 4,54 g sólidos totais, 8739,77 AU.nnLˉ¹ ; e foi 73 vezes major em relacão ao leite desnatado corn 1,14 g sólidos totais, 273,21 AU.mLˉ¹ . 0 soro de leite utilizado foi doado por uma inc:Istria de lacticínios, em laboratório parte do soro foi tratada de duas formas: (i) filtrado e (ii) esterilizado, e ambos foram utilizados para cultivo das células produtoras de nisina em agitador rotacional 30°C/36 h/100 rpm. Os resultados mostraram que o meio de cultivo composto por soro de leite não filtrado forneceu uma adaptação ao L. lactis, sendo a concentração de nisina obtida 1628 vezes maior que do soro de leite filtrado, 11120,13 e 6,83 mg.Lˉ¹ respectivamente. Em relação atividade de nisina contra Gram-negativos, aumentou-se o efeito bactericida quando adicionada ao EDTA. O comportamento da nisina no sistema micelar de duas fases aquosas foi investigado experimentalmente, demonstrando que a biomolécula alvo pode ser extraída tanto do meio fermentado complexo quanto das impurezas presentes na nisina comercial. Nos testes corn o sistema micelar de duas fases aquosas, a nisina particionou, preferencialmente, para a fase rica em micelas...

Nisin is a natural antimicrobial peptide used as food preservative produced by Lactococcus lactis, that inhibits the outgrowth of spores, the growth of a variety of Gram-positive and Gram-negative bacteria. Applications of this bacteriocin include dental care products pharmaceutical products such as stomach ulcers and colon infection treatment and potencial birth control. This study aims to evaluate growth conditions for L. lactis as well as the effect in nisin production when utilizing milk whey and skimmed milk. Lactococcus lactis ATCC 11454 was developed in a rotatory shaker (30°C/36 h/100 rpm) in diluted skimmed milk and nisin expression, growth parameters and media components were also studied. Nisin expression in skimmed milk 2.27 g total solids (20077.05 AU.mLˉ¹ ) was up to 3-fold higher than transfers in skimmed milk 4.54 g total solids (8739.77 AU.mLˉ¹ ) and was up to 85-fold higher than transfers in skimmed milk 1.14 g total solids (273.21 AU.mLˉ¹ ). Milk whey, a byproduct from dairy industries, was utilized in two different ways (i) without filtration, autoclaved at 121°C for 30 min and (ii) filtrated (1.20 pm and 0.22 vim membrane filter), L. lactis was developed in a rotary shaker (30°C/36 h/100 rpm) and these cultures were transferred five times using 5 mL aliquots of broth culture for each new volume of the respective media. The results showed that culture media composed by milk whey without filtration was better for L. lactis in its adaptation than milk whey without filtration. Nisin titers, in milk whey without filtration, was 11120.13 mg.Lˉ¹ in 2nd transfer, and up to 1628-fold higher than the filtrated milk whey, 6.83 mg.Lˉ¹ in 1 St transfer. Nisin activity was assayed by the agar diffusion method using Lactobacillus sakei ATCC 15521 and a recombinant Escherichia coli DH5a expressing the recombinant green fluorescent protein (GFPuv) as the nisin-susceptible test organisms. Combining EDTA with nisin increased the bactericidal effect of...

Progesterone concentrations measured by radioimmunoassay in blood plasma and in fat-free milk of Gir breed cows iBos indicus). Determinations during oestrus cycle. Early pregnancy diagnosis. / Níveis de progesterona determinados por radioimunoensaio em plasma sangüíneo e leite desnatado de vacas da raça Gir (Bos indicus). Avaliações durante o ciclo estral. Diagnóstico precoce de gestação.

Progesterone concentrations were measured by radioimmunoassay in 137 fat-free milk and in 138 blood plasma samples obtained three times weekly during 17 estrous cycles from 12 zebu Gir cows, raised in range conditions at the "Centro Intraunidade de Zootecnia e Indústrias Pecuárias Fernando Costa", Pirassununga, State of São Paulo, Brazil. Profiles of progesterone concentrations for early pregnancy diagnosis were also examined on samples taken 23 days after natural service. Correlations were found between frozen and cooled milk samples (r = 0.92), as well asbetween milk and blood plasma progesterone levels (r = 0.63). Variations during estrous cycle were detected, with lower values in folicular phase (less than 1.49 nmol/l in plasma and 2.61 nmol/l in milk) and peak values in luteal phase (from 15.60 to 21.30 nmol/l in plasma and 5.91 to 11.37 nmol/l in milk). All pregnancy and non pregnancy diagnosis were confirmed by rectal palpation, when 9.54 nmol/l in plasma and 3.18 nmol/l in milk discriminations values were utilized. From the combined data of 24 oestrus observations and progesterone profiles (29 oestrus) it was found that 17.2% of failure occured in oestrus detection.

Foram estudados 17 ciclos estrais de 12 vacas da raça Gir, mantidas em regime extensivo de pastagens no Centro Intraunidade de Zootecnia e Indústrias Pecuárias "Fernando Costa", em Pirassununga, Estado de São Paulo. Para o estudo dos níveis de progesterona através de RIE, foram colhidas, 3 vezes por semana e aos 23 dias após a cobertura, amostras de leite e de plasma sangüíneo, totalizando, respectivamente, 137 e 138 amostras. Os resultados obtidos indicaram correlação entre amostras refrigeradas e congeladas de leite desnatado (r = 0,92), assim como entre leite desnatado e plasma sangüíneo (r = 0,63). Verificaramse, ainda, variações dos níveis de progesterona durante o ciclo estral, com baixos valores na fase folicular (inferiores a 1,49 nmol/l de leite desnatado) e picos de 15,60 a 21,30 nmol/l no plasma e 5,91 a 11,37 nmol/l, no leite desnatado durante a fase luteínica. Todos os resultados de prenhez e não prenhez, baseados na análise de progesterona, utilizando níveis discriminatórios de 9,54 nmol/l no plasma e 3,18 nmol/l no leite, foram confirmados por palpação retal. As falhas de detecção de cio foram da ordem de 17,2% (24 cios observados em 29 ocorridos)