Estudo comparativo da expressão de ALDH1 em líquen plano oral, lesão liquenoide e leucoplasia em epitélio e no infiltrado inflamatório liquenoide / Comparative study of ALDH1 expression in oral lichen plane, lichenoid lesion and leucoplasia in epithelial and lichenoid inflammatory infiltrate

O líquen plano oral é uma doença potencialmente maligna e compartilha muitas características clínicas e histopatológicas com outras lesões semelhantes. O ALDH1 é um biomarcador específico na identificação de células-tronco, porém seu papel nas células estromais do infiltrado inflamatório imune não foi explorado. O objetivo deste estudo foi investigar a imunoexpressão de ALDH1 em células epiteliais e estromais de Líquen Plano Oral e outras lesões liquenóides. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) sob o parecer no 5.410.374, CAAE: 52763021.0.0000.5149. Foi realizada uma busca no arquivo do laboratório de Patologia Oral e Bucomaxilofacial da UFMG em um período de 10 anos (2011 ­ 2021) de casos diagnosticados como Líquen Plano oral, Lesão Liquenoide, Leucoplasia e Processo Inflamatório Inespecífico (controle). Foram selecionados 633 casos e após a utilização dos critérios de inclusão e exclusão, a expressão imuno-histoquímica do ALDH1 foi investigada em 64 casos, 16 de cada diagnóstico. O ALDH1 foi avaliado tanto no epitélio quanto nas células estromais do infiltrado inflamatório liquenóide. Um percentual de 5% de células ALDH1+ foi considerado positivo no epitélio. A avaliação das células estromais foi feita de forma semiquantitativa. Os campos foram classificados em escores, segundo os critérios: 1 (0 a 10%); 2 (11 a 50%) e 3 (mais de 51%). O valor médio da soma dos campos foi o escore final. Diferenças estatísticas entre os grupos foram investigadas e a significância foi estabelecida considerando p < 0,05. A análise estatística foi realizada utilizando o software: SPSS ­ Statistical Package for the Social Science® (versão 26.0, 2019, Chicago, IL, USA). A expressão de ALDH1 no epitélio foi baixa em todos os grupos sem diferença entre eles, embora a maioria dos casos tenha sido encontrada na amostra de inflamação crônica inespecífica. O escore de células ALDH1+ na lâmina própria foi maior para LPO (2,0), seguido por Leucoplasia (1,3), LLO (1,2) e processo inflamatório inespecífico (1,1) (p<0,05). A imunoexpressão do ALDH1 no epitélio de lesões com um infiltrado liquenóide não mostrou uma ferramenta contributiva, porém o ALDH1 em células estromais no infiltrado inflamatório do líquen plano merece atenção, pois pode estar envolvido no complexo processo de regulação imune associado à patogênese desta doença.

Oral lichen planus (OLP) is a potentially malignant lesion and shares clinical and histopathological features with similar lesions. ALDH1 is a specific biomarker in the identification of stem cells, but its role in the stromal cells of the immune inflammatory infiltrate has not been elucidated yet. The aim of this study was to investigate the ALDH1 immunoexpression in epithelial and stromal cells from OLP and other lichenoid lesions. The study was approved by the Research Ethics Committee of the Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) under protocol no 5.410.374, CAAE: 52763021.0.0000.5149. An search of the biopsy records of the Oral and Maxillofacial Pathology Laboratory at UFMG in a period of 10 years (2011 - 2021) was performed including the diagnosis of Oral Lichen Planus (OLP), Oral Lichenoid Lesion (OLL), Oral Leukoplakia (OLK) and Unspecific Inflammatory Process (UIP) ­ as control. Initially were obtained 633 cases. After inclusion and exclusion criteria a total of 64 cases were investigated for the ALDH1 immunohistochemical expression, 16 cases of each diagnose. ALDH1 was evaluated both in the epithelium and in the stromal cells. A percentage of ≤5% of ALDH1+ cells was considered positive in the epithelium. The evaluation of stromal cells was performed semi-quantitatively. The fields were classified into scores, according to the following criteria: 1 (0 to 10%); 2 (11 to 50%) and 3 (more than 51%). The mean value of the sum of the fields represented the final score. Statistical differences between groups were investigated and significance was established considering p < 0.05. Statistical analysis was performed using the software: SPSS ­ Statistical Package for the Social Science® (version 26.0, 2019, Chicago, IL, USA). The expression of ALDH1 in the epithelium was low in all groups with no difference between them, although most cases were found in the UIP samples. ALDH1+ cells in the lamina propria was higher for OLP (2.0) than others followed by OLK (1.3), OLL (1.2) and UIP (1.1) (p<0.05). The ALDH1 immunoexpression in the epithelium of lichenoid diseases did not prove to be contributory to show a malignant potential, but ALDH1 in stromal cells from OLP infiltrate might be involved in the complex immune regulation process associated with the pathogenesis of this disease.

Investigação de perda de heterozigosidade e expressão da proteína Ki-67 em lesão liquenóide oral associada ao amálgama / Investigation of loss of heterozygosity and expression the Ki-67 protein in oral Lichenoid lesion associated with the amalgam

A Lesão liquenóide oral associada ao amálgama (LLOAA) é uma lesão incomum de patogênese ainda incerta. A lesão apresenta características clínicas e histopatológicas semelhantes ao líquen plano bucal (LPB), que é considerada uma lesão com potencial de transformação maligna. Pesquisas moleculares a fim de aprimorar os conhecimentos sobre a patogênese e o comportamento clínico de LLOAA ainda são escassas. O objetivo do estudo foi investigar a perda de heterozigosidade (loss of heterozygosity ­ LOH) em amostras de LLOAA, LPB e mucosa bucal normal (MBN) em regiões cromossômicas 9p22, 11q13.4 e 17p13.1 e avaliar o índice de proliferação celular das mesmas amostras, buscando uma associação entre o índice de proliferação celular e LOH. Foram selecionadas 9 amostras de LLOAA, 10 de LPB e 8 de MBN, pareadas por sexo e idade. A LOH nas regiões cromossômicas 9p22, 11q13.4 e 17p13.1 foi avaliada por meio dos marcadores microssatélites polimórficos D9S157, D9S162, D9S171, D11S1369, TP53, AFM238WF2. O índice de proliferação celular foi avaliado pela expressão imuno-histoquímica da proteína Ki-67 (MIB-1) em 8 amostras de LLOAA, 10 de LPB e 8 de MBN. Amostras de LLOAA exibiram LOH em 3 dos 6 marcadores (AFM238WF2, D9S157 e D11S1369), de LPB exibiram LOH em 2 destes marcadores (AFM238WF2, D9S157) enquanto que amostras de MBN não apresentaram LOH. A perda alélica foi mais frequente para os marcadores AFM238WF2 (17p13.1, 21%) e D9S157 (9p22, 17,64%) e a média da frequência de perda alélica na amostras de LLOAA foi de 26,6% enquanto que nas amostras de LPB foi de 7,5%. A imuno-histoquímica apresentou positividade nuclear nas células variando entre 0,29% a 28% e não houve associação entre o índice de proliferação celular e LOH em LLOAA e LPB (p>0,05). Este estudo demonstrou que LLOAA, semelhante ao LPB, apresentou LOH nas regiões cromossômicas 9p22, 11q13.4 e 17p13.1, independentemente da taxa de proliferação celular. Apesar de não ter sido encontrada tal associação, LOH ocorre em LLOAA e pode estar envolvida na patogênese desta lesão

The Amalgam-associated oral lichenoid lesion (AAOLL) is an infrequent disease of uncertain pathogenesis. The lesion shows clinical and histopathological features similar to oral lichen planus (OLP), which is considered a lesion with malignant transformation potential. Molecular researches in order to improve knowledge of the pathogenesis and clinical behavior of AAOLL are still scarce. The purpose of the current study was to evaluate the loss of heterozygosity - LOH in AAOLL, in OLP, and in normal oral mucosa (NOM) using polymorphic microsatellite markers at chromosome regions 9p22, 11q13.4 and 17p13.1, located around important tumor suppressor genes and to evaluate the immunohistochemical expression of Ki67 protein in the same samples. The sample comprised 09 AAOLLs, 10 OLPs and 8 NOMs matched by patients' gender and age. The LOH at chromosome regions 9p22, 11q13.4 and 17p13.1 was evaluated by microsatellite polymorphic markers D9S157, D9S162, D9S171, D11S1369, TP53, AFM238WF2. Cell proliferation was assessed by immunohistochemical expression of Ki-67 (MIB-1) in eight AAOLL, ten OLP and eight NOM. AAOLL exhibited LOH at 3 of 6 LOH markers (AFM238WF2, D9S157 AND D11S1369), while OLP demonstrated LOH at two of these markers (AFM238WF2, D9S157) while NOM showed no LOH. The allelic loss were most frequently in marker AFM238WF2 (17p13.1, 21%) and D9S157 (9p22, 17,64%). The mean fractional allelic loss of AAOLL was 26,6% whereas mean fractional allelic loss of OLP was 7,5%. Immunohistochemistry revealed nuclear positivity ranging from 0,29% to 28% of the cells and there was no association between cell proliferation and LOH in LLOAA e LPB (p>0,05). Our study shows that AAOLL, similar to OLP, exhibits LOH, irrespective of cell proliferation index. Despite the lack of association between LOH and cell proliferation we can assume that LOH occurs in AAOLL and it should be considered in the pathogenesis of this lesion