Lysozyme antimicrobial activity against Enterococcus Faecalis - a pilot study / Atividade antimicrobiana da lisozima contra Enterococcus Faecalis - um estudo piloto

O preparo químico-mecânico (PQM) do sistema de canais radiculares é essencial para eliminar tecidos infectados e garantir uma desinfecção adequada. O Hidróxido de Cálcio (HC) combinado com o propilenoglicol é frequentemente utilizado como uma pasta intracanal para desinfecção e medicação intraoperatória. No entanto, algumas bactérias, como o Enterococcus faecalis (E. faecalis), podem resistir aos efeitos do hidróxido de cálcio. O Ultracal® é uma medicação de hidróxido de cálcio de alta qualidade e radiopaco usado em procedimentos endodônticos. Já a lisozima é uma substância com propriedades antimicrobianas encontrada em várias partes do corpo humano e tem sido estudada como uma opção promissora para o tratamento de infecções endodônticas. O objetivo do presente estudo foi avaliar e comparar a atividade antimicrobiana do HC com propilenoglicol, Ultracal® e Lisozima contra E. faecalis. Foram realizadas escavações em placas de petri contaminadas com E. faecalis. Após, foi adicionado as medicações intracanais e as placas foram levadas a estufa a 37°C em aerobiose. Os halos de inibição formados foram medidos em 2, 4 e 7 dias. HC apresentou halos de inibição maiores quando comparado as outras medicações e com maior crescimento com o passar dos dias. A lisozima apresentou apenas ação nas primeiras 48 horas, perdendo seu efeito após esse período. Ambas as medicações com hidróxido de cálcio apresentaram valores crescentes. Baseado nos resultados obtidos, conclui-se que as medicações a base de hidróxido de cálcio demonstraram melhor ação contra E. faecalis em ação direta.

The chemical-mechanical preparation (CMP) of root canals system is essential to eliminate infected tissues and ensure adequate disinfection. Calcium hydroxide (CH) combined with propylene glycol is often used as an intracanal medication for intraoperative disinfection and medication. However, some bacteria, such as Enterococcus faecalis (E. faecalis), may resist the effects of calcium hydroxide. Ultracal® is a high-quality radiopaque calcium hydroxide medication used in endodontic procedures. Lysozyme, on the other hand, is a substance with antimicrobial properties found in various parts of the human body and has been studied as a promising option for the treatment of endodontic infections. The aim of this study was to evaluate and compare the antimicrobial activity of CH with propylene glycol, Ultracal®, and Lysozyme against E. faecalis. Petri plates contaminated with E. faecalis were excavated, intracanal medications were added, and the plates were incubated at 37°C in aerobic conditions. The inhibition halos formed were measured at 2, 4, and 7 days. CH showed larger inhibition halos compared to the other medications and exhibited increased growth over the days. Lysozyme showed activity only in the first 48 hours, losing its effect after this period. Both medications with calcium hydroxide showed increasing values. Based on the results obtained, it is concluded that calcium hydroxide-based medications demonstrated better action against E. faecalis in direct action.

Caracterização de cubossomos não-iônicos em presença de proteínas modelo: uma abordagem estrutural e funcional / Characterization of non-ionic cubosomes in the presence of model pro­teins: a structural and functional approach

Uma área de pesquisa que vem ganhando muita atenção nos últimos anos é a nanome­dicina, com especial atenção para os sistemas com entrega controlada de fármacos, ou drug delivery. Dentre as diversas nanopartículas utilizadas para este fim, destacam-se os sistemas formados por lipídeos e polímeros, como por exemplo os lipossomos e os cubossomos. Neste trabalho, é estudada a influência estrutural da lisozima e da curcumina, proteínas modelo. A lisozima é uma enzima antimicrobiana produzida por animais e que faz parte do sistema imunológico. Ela é uma hidrolase glicosídica que catalisa a hidrólise dos componentes da parede celular de bactérias gram-positivas. Esta hidrólise, por sua vez, compromete a integridade das paredes celulares, causando a lise (e como consequência a morte) das bactérias. Curcumina é um composto cristalino de cor amarelada brilhante, encontrada no caule da Curcuma longa (ou açafrão), que tem sido utilizada como corante ou até mesmo como aditivo alimentar. Este composto tem sido uma grande aposta no tratamento de doenças crônicas como inflamação, artrite, síndrome metabólica, doença hepática, obesidade, doenças neurodegenerativas e principalmente canceres, sendo também utilizada em estudos como potencial agente antibacteriano. O principal objetivo deste trabalho é construir sistemas nanoestruturados com potencial de atuarem como sistemas antimicrobianos, com a liberação controlada de ambos dos fármacos. Estes sistemas são compostos por cubossomos de fitantriol (PHY) em ausência e presença da lisozima, da curcumina e de suas combinações, a fim de analisar ação antimicrobiana conjunta da lisozima e da curcumina. As técnicas biofísicas utilizadas para caracterizar essas partículas são SAXS (espalhamento de raios-X em baixos ângulos), DLS (espalhamento dinâmico de luz), Cryo-TEM (criomicroscopia eletrônica de transmissão) e NTA (análise de rastreamento de nanopartículas). Foi possível verificar que as formulações lipídicas são eficazes na formação de estruturas cúbicas com estabilidade desejável. As nanopartículas cúbicas demonstraram alta capacidade de encapsulação da lisozima e da curcumina. A cinética de liberação desses medicamentos mostrou-se promissora, sugerindo que a encapsulação dos fármacos é eficaz, bem como a liberação controlada e direcionada. Duas linhagens de bactérias foram estudadas, sendo que a E. coli, não sofreu nenhum dano citotóxico, enquanto a Bacillus subtilis sim. Tal resultado indica o potencial antimicrobiano do sistema para alguns tipos de bactérias

An area of research that has gained significant attention in recent years is nanomedicine, with a particular focus on drug delivery systems. Among the various nanoparticles used for this purpose, lipid and polymer-based systems, such as liposomes and cubosomes stand out. This study investigate the structural influence of encapsulating lysozyme and curcumin, model compounds. Lysozyme is an antimicrobial enzyme produced by animals and is part of the immune system. It is a glycosidic hydrolase that catalyzes the hydrolysis of components in the cell walls of gram-positive bacteria. This hydrolysis compromises the integrity of cell walls, leading to the lysis (and consequently the death) of bacteria. Curcumin is a bright yellow crystalline compound found in the stem of Curcuma longa (or turmeric), commonly used as a dye or even as a food additive. It has been a significant focus in the treatment of chronic diseases such as inflammation, arthritis, metabolic syndrome, liver disease, obesity, neurodegenerative diseases, and especially cancers. It is also studied as a potential antibacterial agent. The main objective of this study is to construct nanostructured systems with the potential to act as antimicrobial agents, with controlled release of both drugs. These systems consist of phytantriol (PHY) cubosomes in the absence and presence of lysozyme, curcumin, and their combinations to analyze the joint antimicrobial action of lysozyme and curcumin. Biophysical techniques used for characterization include Small-Angle X-ray Scattering (SAXS), Dynamic Light Scattering (DLS), Cryo-Transmission Electron Microscopy (Cryo-TEM), and Nanoparticle Tracking Analysis (NTA). It was observed that lipid formulations are effective in forming cubic structures with desirable stability. Cubic nanoparticles have demonstrated a high encapsulation capacity for lysozyme and curcumin. The release kinetics of these drugs have shown promise, suggesting that drug encapsulation is effective, as well as their controlled and targeted release. Two bacterial strains were studied, with E. coli showing no cytotoxic damage, while Bacillus subtilis did. This result indicates the antimicrobial potential of the system against types of bacteria

Effect of Azadirachta indica (Sapindales: Meliaceae) Oil on the Immune System of Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) Immatures.

The insect immune system includes several mechanisms responsible for defending against pathogens, parasites, and parasitoids. Some botanical insecticides, such as Azadirachta indica oil, cause changes in the immune system of various insect species. Spodoptera frugiperda is an important agricultural pest; thus, knowledge about the effect of neem oil on the immune system of this species can assist in its management. This study aimed to evaluate the effect of A. indica oil on the immune system of S. frugiperda. Caterpillars (2-3 mg) were placed individually in containers (50 ml) with approximately 10 g of diet, containing 125, 250, and 500 ppm of neem oil with propanone; the control group received only the propanone diet. In four experiments, the total number of hemocytes, the phagocytic activity, the activity of lysozyme-like enzymes, and phenoloxidase activity were measured in caterpillars at the end of the sixth instar. The total number of hemocytes in insects exposed to neem oil was 21% lower than in the control group. The percentage of cells that phagocyted the latex beads was similar among the caterpillars that ingested the different concentrations. The mean diameter of cell lysis halos was reduced only at concentrations of 125 and 250 ppm. Absorbance did not differ between treatments. Knowing that this oil reduces the number of circulation cells and the activity of lysozyme-like enzymes is of great importance to design control strategies, once the neem oil could be added to other biological agents for mortality reducing the chances of this insect surviving in the environment.

Proteínas Totales, Fosfatasa Alcalina, Prostaglandinas E2 y Lisozima como Biomarcadores Salivales en Pacientes Adultos con Periodontitis Crónica / Total Protein, Alkaline Phosphatase, Prostaglandin E2 and Lysozyme as Salivary Biomarkers in Patients with Chronic Periodontitis

RESUMEN: La periodontitis crónica es una inflamación de los tejidos que rodean y dan soporte a los dientes. Diversos biomarcadores químicos y pro inflamatorios están aumentados durante el transcurso de la enfermedad. El objetivo del estudio fue determinar los distintos niveles salivales de proteínas totales, fosfatasa alcalina, prostaglandina E2 (PGE2) y lisozima en pacientes con periodontitis crónica. Se obtuvieron muestras de saliva de 31 pacientes con periodontitis crónica y se realizó un estudio de serie de casos para la determinación cuantitativa de los biomarcadores. La concentración de proteínas totales se encontró por sobre los rangos de referencia en 22 pacientes, la actividad de la fosfatasa alcalina se vio aumentada en 9 pacientes y la concentración de PGE2 se vio por sobre los rangos de referencia en 30 pacientes. Las proteínas totales y PGE2 son biomarcadores salivales en estos pacientes con periodontitis, no así la fosfatasa alcalina y la lisozima.

ABSTRACT: Chronic periodontitis is an inflammation of tissue that surrounds and supports the teeth; during the course of the disease there is an increase of different chemical and pro-inflammatory biomarkers. The objective of the study was to determine different levels in saliva of total protein, alkaline phosphatase, lysozyme and prostaglandin E2 (PGE2) in patients with chronic periodontitis. We used saliva samples from 31 patients who had chronic periodontitis and the study was a case of series. Our results showed 22 patients with increased concentrations of protein concentration, nine patients with increased alkaline phosphatase and PGE2 concentration was above the reference range in 30 patients: The total protein and PGE2 are good salivary biomarkers in patients with periodontitis, but not the alkaline phosphatase and lysozyme.

Immunocytochemical characterization of primary cell culture in canine transmissible venereal tumor / Caracterização imunocitoquímica de culturas primárias de tumor venéreo transmissível canino

Immunochemistry with anti-vimentin, anti-lysozyme, anti-alpha 1 antitrypsin, anti-CD3 and anti-CD79α antibodies has been used for characterization of primary cell culture in the transmissible venereal tumor (TVT). Samples for primary cell culture and immunohistochemistry assays were taken from eight dogs with cytological and clinical diagnosis of TVT. To validate the immunochemical results in the primary cell culture of TVT, a chromosome count was performed. For the statistical analysis, the Mann-Whitney test with p<0.05 was used. TVT tissues and culture cells showed intense anti-vimentin immunoreactivity, lightly to moderate immunoreactivity for anti-lysozyme, and mild for anti-alpha-antitrypsin. No marking was achieved for CD3 and CD79α. All culture cells showed chromosomes variable number of 56 to 68. This is the first report on the use of immunocytochemical characterization in cell culture of TVT. Significant statistic difference between immunochemistry in tissue and culture cell was not established, what suggests that the use of this technique may provide greater certainty for the confirmation of tumors in the primary culture. This fact is particularly important because in vitro culture of tumor tissues has been increasingly used to provide quick access to drug efficacy and presents relevant information to identify potential response to anticancer medicine; so it is possible to understand the behavior of the tumor.(AU)

Os anticorpos anti-vimentina, anti-lisozima, anti-alfa 1 antitripsina, anti-CD3 e anti-CD79α foram empregados para a caracterização de culturas primárias de tumor venéreo transmissível canino (TVT). Amostras para cultura primária e imuno-histoquímica foram coletadas de oito cães com diagnóstico clínico e citológico de TVT. Para validar o resultado inmunocitoquímico nas culturas de TVT foi realizada a contagem de cromossomos. Para a análise estatística o teste de Mann-Whitney foi empregado a um nível de significância de p<0.05. As culturas e os tecidos de TVT apresentaram intensa reatividade para vimentina, moderada a leve para Lisozima, moderada para alfa-antitripsina e não houve marcação para CD3 e CD79α. Finalmente, todas as culturas apresentaram números de cromossomos que variaram de 56 a 68. Este é o primeiro relato que apresenta o uso da immunocitoquímica para a caracterização de culturas de TVT. Assim, e devido ao fato de se observar semelhança entre a imunomarcação em células e tecidos, sugere-se que o uso desta técnica possa auxiliar na confirmação de culturas primárias do tumor, fato muito importante porque a utilização da cultura do tumor pode permitir o acesso a informação relevante sobre resposta potencial a um tratamento e conhecimento do comportamento biológico do tumor.(AU)

Supplementation with humic substances affects the innate immunity in layer hens in posfasting phase / El suplemento de sustancias húmicas afecta la inmunidad innata en gallinas ponedoras en fase posmuda

Objective. Asses the effect of supplementation with Humic substances (HS) over some innate immunity parameters (serum bactericidal activity, phagocytosis, bacterial agglutination, respiratory burst and lisozyme activity) in phase after fasting of layer hens. Materials and methods. 120 posfasting phase Hy Line Brown layer hens were taken which were distributed into four groups: The first and the second were supplemented with 0.1 and 0.2% of HS, respectively. The third group was supplemented with 0.25 mg/kg on levamisole hydrochloride and fourth group have no supplementation; during sixty days period. Blood samples were collected on 8th, 30th and 60th of experiment day. Results. The phagocytic index and respiratory burst increased significantly at day 30th in HS supplemented groups. Alike, serum bactericidal activity and lisozyme activity improved on 8 th day, nevertheless, changes were no evident latter. The bacterial agglutination was high in supplemented groups evaluated at everyone times. Conclusions. Results showed that HS behave as immunostimulant in the early phase after fasting layer hens.

Objetivos. Evaluar el efecto de las sustancias húmicas (SH) sobre algunos parámetros de la inmunidad innata (actividad bactericida del suero, fagocitosis, aglutinación bacteriana, explosión respiratoria y actividad de la lisozima) en la fase posmuda de gallinas ponedoras. Materiales y métodos. Se utilizaron 120 gallinas ponedoras Hy Line Brown en la fase de posmuda, las cuales fueron divididas en cuatro grupos: Los dos primeros fueron suplementados con 0.1 y 0.2% de SH respectivamente, el tercer grupo fue suplementado con 0.25 mg/kg de Clorhidrato de levamisol y el cuarto grupo control sin suplemento; durante un período de 60 días. Las muestras sanguíneas se tomaron los días 8, 30 y 60 del experimento. Resultados. El Índice fagocítico y la explosión respiratoria se incrementaron significativamente a partir del día 30 de suplementación con SH. De la misma manera, la actividad bactericida del suero y la actividad de la lisozima aumentaron al día 8; no obstante no se evidenciaron cambios posteriores. La aglutinación bacteriana fue significativamente mayor en los grupos suplementados en todos los tiempos evaluados. Conclusiones. Los resultados demuestran que las SH se comportan como agentes inmunoestimulantes en la fase temprana de la posmuda en gallinas ponedoras Hy Line Brown.

Immunocytochemical characterization of primary cell culture in canine transmissible venereal tumor / Caracterização imunocitoquímica de culturas primárias de tumor venéreo transmissível canino

Immunochemistry with anti-vimentin, anti-lysozyme, anti-alpha 1 antitrypsin, anti-CD3 and anti-CD79 antibodies has been used for characterization of primary cell culture in the transmissible venereal tumor (TVT). Samples for primary cell culture and immunohistochemistry assays were taken from eight dogs with cytological and clinical diagnosis of TVT. To validate the immunochemical results in the primary cell culture of TVT, a chromosome count was performed. For the statistical analysis, the Mann-Whitney test with p 0.05 was used. TVT tissues and culture cells showed intense anti-vimentin immunoreactivity, lightly to moderate immunoreactivity for anti-lysozyme, and mild for anti-alpha-antitrypsin. No marking was achieved for CD3 and CD79. All culture cells showed chromosomes variable number of 56 to 68. This is the first report on the use of immunocytochemical characterization in cell culture of TVT. Significant statistic difference between immunochemistry in tissue and culture cell was not established, what suggests that the use of this technique may provide greater certainty for the confirmation of tumors in the primary culture. This fact is particularly important because in vitro culture of tumor tissues has been increasingly used to provide quick access to drug efficacy and presents relevant information to identify potential response to anticancer medicine; so it is possible to understand the behavior of the tumor.(AU)

Os anticorpos anti-vimentina, anti-lisozima, anti-alfa 1 antitripsina, anti-CD3 e anti-CD79 foram empregados para a caracterização de culturas primárias de tumor venéreo transmissível canino (TVT). Amostras para cultura primária e imuno-histoquímica foram coletadas de oito cães com diagnóstico clínico e citológico de TVT. Para validar o resultado inmunocitoquímico nas culturas de TVT foi realizada a contagem de cromossomos. Para a análise estatística o teste de Mann-Whitney foi empregado a um nível de significância de p 0.05. As culturas e os tecidos de TVT apresentaram intensa reatividade para vimentina, moderada a leve para Lisozima, moderada para alfa-antitripsina e não houve marcação para CD3 e CD79. Finalmente, todas as culturas apresentaram números de cromossomos que variaram de 56 a 68. Este é o primeiro relato que apresenta o uso da immunocitoquímica para a caracterização de culturas de TVT. Assim, e devido ao fato de se observar semelhança entre a imunomarcação em células e tecidos, sugere-se que o uso desta técnica possa auxiliar na confirmação de culturas primárias do tumor, fato muito importante porque a utilização da cultura do tumor pode permitir o acesso a informação relevante sobre resposta potencial a um tratamento e conhecimento do comportamento biológico do tumor.(AU)

Oxidação de resíduos de triptofano em proteínas: formação de ligação cruzada ditriptofano e implicações patofisiológicas / Oxidation of tryptophan residues in proteins: formation of the ditryptophan cross-link and pathophysiological implications

Apesar de extensa investigação das modificações oxidativas irreversíveis sofridas pelas proteínas in vitro e in vivo, os produtos formados pela oxidação de resíduos de triptofano ainda permanecem apenas parcialmente conhecidos. Recentemente, nosso grupo caracterizou uma ligação cruzada de ditriptofano produzida pela recombinação de radicais hSOD1-triptofanila gerados pelo ataque do radical carbonato produzido durante a atividade peroxidásica da enzima superóxido dismutase humana (hSOD1). Neste trabalho, examinamos se a ligação ditriptofano pode ser formada em outras proteínas, além da hSOD1 e por outros oxidantes, além do radical carbonato. A lisozima da clara do ovo e a beta cristalino bovina foram utilizadas como alvos de oxidação. A lisozima foi utilizada por ser uma enzima pequena (129 aminoácidos) e de estrutura bem conhecida, contendo seis resíduos de Trp. Os resultados mostraram que o radical carbonato, gerado enzimatica ou fotoliticamente, promove a oxidação, dimerização e inativação da lisozima. Os principais produtos de oxidação caracterizados por análise de nano-ESI-Q-TOF-MS/MS foram hidroxi-triptofano e N-formilquinurenina juntamente com um dímero de lisozima (lisozima-Trp28-Trp28-lisozima) e um hetero dímero lisozima-hSOD1 (lisozima-Trp28-Trp32-hSOD1), ambos ligados por uma ligação ditriptofano. Também demonstramos que a irradiação da lisozima com luz UVC leva à formação do dímero lisozima-Trp28-Trp28-lisozima. Em consequência, resolvemos tratar a beta cristalino bovina com radical carbonato gerado fotoliticamente ou com luz UVC, e a proteína também sofreu oxidação, dimerização e agregação. Os principais produtos de oxidação caracterizados por nano-ESI-Q-TOF-MS/MS foram hidroxi-triptofano, N-formilquinurenina, DOPA e um dímero de beta cristalino (ßB2-Trp151-Trp151-ßB2). A irradiação com luz UVC também levou à formação de um dímero intra-cadeia, caracterizado como ßA2-Trp78-Trp81. Quando a beta cristalino foi irradiada com um simulador de luz solar (UVA e UVB) também foi possível observar um dímero, caracterizado como ßA2-Trp150-Trp150-ßA2. A presença de produtos de oxidação de resíduos de Trp, dentre eles a ligação cruzada ditritpofano, também foi avaliada in vivo, utilizando o cristalino de pacientes que foram submetidos a cirurgia para remoção de catarata. Beta, alfa e gama cristalino foram as principais proteínas identificadas nas frações solúvel e insolúvel do cristalino. A principal modificação pós-traducionais identificada foi deamidação. Um alto conteúdo de resíduos de metionina e triptofano oxidados foram identificados nas proteínas presentes na fração insolúvel. Os principais produtos de oxidação de Trp identificados por nano-ESI-Q-TOF-MS/MS foram quinurenina e N-formilquinurenina. A presença de dímeros covalentes no cristalino com catarata foi confirmada por análises de massas. A completa caracterização desses dímeros (ßB1-Trp127-Trp127-ßB1 e ßB1-Trp193-Trp193-ßB1) confirmou que as cadeias polipeptídicas foram ligadas por uma ligação ditriptofano. Em síntese, nossos dados demonstraram que o radical carbonato e a luz UV podem produzir dímeros de ditriptofano em diferentes proteínas. Também, a presença da ligação cruzada de ditriptofano in vivo (catarata humana) foi pela primeira vez detectada

Despite extensive investigation of irreversible oxidative modifications suffered by proteins in vitro and in vivo, the products formed by oxidation of tryptophan residues remain partially characterized. Our group recently described a ditryptophan cross-link produced by recombination of hSOD1-tryptophanyl radicals generated by attack of the carbonate radical produced during the peroxidase activity of the human superoxide dismutase (hSOD1) enzyme. Here, we examine whether the ditryptophan cross-link can be produced in others proteins besides the hSOD1 and by other oxidants, in addition to the carbonate radical. The egg white lysozyme and bovine beta crystalline were used as targets. Lysozyme was used because it is a small enzyme (129 amino acids) with a well-known structure, containing six Trp residues. The results showed that the carbonate radical, generated enzymatically or photolytically, promotes lysozyme oxidation, inactivation and dimerization. The major oxidation products characterized by nano-ESI-Q-TOF-MS/MS analysis were hydroxy-tryptophan and N-formylkynurenine together with a dimer of lysozyme (lysozyme-Trp28-Trp28-lysozyme) and a hetero dimer hSOD1-lysozyme (lysozyme-Trp28-Trp32-hSOD1), both bound by a ditryptophan cross-link. Also, it was demonstrated that lysozyme irradiation with UVC light leads to the formation of the dimer lysozyme-Trp28-Trp28-lysozyme. In view of these results, we decided to treat beta crystalline bovine with photolytically generated carbonate radical and UVC. Beta crystalline also suffered oxidation, dimerization and aggregation. The major oxidation products characterized were hydroxy-tryptophan, N-formylkynurenine, DOPA and a beta crystalline dimer (ßB2-Trp151-Trp151-ßB2) by nano-ESI-Q-TOF-MS/MS. Irradiation with UVC light also led to the formation of an intra-chain dimer, which was characterized as ßA2-Trp78-Trp81. When beta crystalline was irradiated with a solar simulator (UVA and UVB), it was also possible to observe a dimer which was characterized as ßA2-Trp150-Trp150-ßA2. The presence of oxidized tryptophan products, including the ditryptophan cross-link, was also evaluated in vivo in the lenses of patients submitted to cataract removal. Beta, alpha and gamma crystalline were the main proteins identified in soluble and insoluble fractions of the lenses. The main post translational modification identified was deamidation. A high content of oxidized methionine and tryptophan residues were identified in proteins present in the insoluble fraction. The main tryptophan oxidation products identified by nano-ESI-Q-TOF-MS/MS were kynurenine and N-formylkynurenine. The presence of covalent dimers in the lenses with cataract was demonstrated by mass analysis. Full MS/MS characterization of the dimers ßB1-Trp127-Trp127-ßB1 and ßB1-Trp193-Trp193-ßB1 confirmed that they were linked by a ditryptophan bond. In summary, our data demonstrate that the carbonate radical and UV light can produce ditryptophan dimers in different proteins. Also, the presence of the ditryptophan cross-link was first detected in vivo (human cataract)

Hipopotasemia recurrente y de difícil control en un paciente con leucemia linfoide aguda / Relapsing and difficult to control hypokalemia in a patient with acute lymphoid leukemia / Hipopotassemia recorrente e de difícil controle num paciente com leucemia linfoide aguda

La hipopotasemia es un alteración hidroelectrolítica que en ocasiones es difícil de controlar, y cuando es muy grave puede producir complicaciones que amenazan la vida; presentamos el caso de una paciente con leucemia linfoide aguda en recaída, que presentó parálisis flácida asociada a hipopotasemia grave; como causa se encontró una tubulopatía renal asociada a infiltración leucémica de los riñones.

Hypokalemia is an electrolytic disorder, in some occasions difficult to control. When severe, it may be life-threatening. We report the case of a patient with relapse of acute lymphoid leukemia, who presented to the hospital with flaccid paralysis associated with severe hypokalemia. The cause was a tubulopathy associated with leukemic infiltration of the kidneys.

A hipopotassemia é um alteração hidroeletrolítica que em ocasiões é difícil de controlar, e quando é muito grave pode produzir complicações que ameaçam a vida; apresentamos o caso de uma paciente com leucemia linfoide aguda em recaída, que apresentou paralisia flácida sócia a hipopotassemia grave; como causa se encontrou uma tubulopatia renal associada a infiltração leucêmica dos rins.

Moléculas biologicamente ativas da hemolinfa de pupas de Lonomia obliqua

Os insetos formam um grupo grande e diverso de animais. Eles vivem em quase todos os ecossistemas do planeta e essa ampla distribuição tem estimulado a pesquisa por moléculas bioativas entre eles. Vários estudos têm sido realizados demonstrando a presença de substâncias farmacologicamente ativas na hemolinfa dos insetos. A Lonomia obliqua é um inseto de importância médica, pois na sua fase larval possui cerdas urticantes com toxina que causa efeitos hemorrágicos. O veneno da Lonomia é bastante estudado, sendo que muitos dos seus componentes foram isolados e caracterizados. Na hemolinfa da L. obliqua já foram identificadas algumas moléculas como a lonofibrase, que tem ação fibrinogenolítica, e uma proteína de alto peso molecular que estimula a produção de proteínas recombinantes...

Actividad antiproliferativa de la lisozima en su forma nativa y modificada / Antiproliferative activity of the lisozyme native and modified form

Durante milenios el hombre ha utilizado los productos de origen natural para fines terapéuticos. Las actividades biológicas de proteínas y péptidos alimentarios es un hecho bastante do-cumentado. La lisozima de clara de huevo es una proteína utilizada para diferentes fines, entre ellos, la industria farmacéutica la emplea como antibacteriano y antiviral. Se sabe que las modificaciones estructurales de las proteínas pueden modificar sus funciones biológicas. En el presente trabajo observamos que la modificación de la lisozima por tratamiento térmico, enzimático y reductor permite mejorar su actividad antiproliferativa. El hidrolizado de lisozima nativa logró inhibir el 50% del crecimiento celular de la línea tumoral (OVCAR-3); este efecto fue dosis dependiente.

For millennia, man has used natural products for therapeutic purposes. The biological activity of protein and peptide food is a well-documented fact. Hen egg white lysozyme is a protein used for various purposes including the antibacterial and antiviral use in the pharmaceutical industry. It is known that structural changes in proteins can alter their biological functions. In the present study, we observed that modification of lysozyme by thermal enzymatic and reducing treatment improves its antiproliferative activity. Native lysozyme hydrolysate achieved 50% inhibition of cell growth of the tumor cell line (OVCAR-3); this effect was dose dependent.

Disease resistance of pacu Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887) fed with B-glucan / Resistência à doença em pacu, Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887), alimentados com B-glucana

Effects of β-glucan on innate immune responses and survival were studied in pacu experimentally infected with Aeromonas hydrophila. Fish fed diets containing 0, 0.1% and 1% β-glucan were injected with A. hydrophila. β-glucan enhanced fish survival in both treated groups (26.7% and 21.2% of the control, respectively). Leukocyte respiratory burst and alternative complement pathway activities were elevated after bacterial challenge regardless the β-glucan concentration. Lysozyme activity was higher after infection and showed a gradual increase as β-glucan concentration increased. A significant elevation in WBC count was observed either after bacterial challenge or by influence of β-glucan separately. The same response was observed in the number of thrombocytes, lymphocytes, eosinophils, LG-PAS positive cell and monocytes. It can be concluded that feeding pacu with β-glucan can increase protection against A. hydrophila, due to changes in non-specific immune responses.(AU)

Os efeitos da β-glucana sobre as respostas imunes inatas e a sobrevivência foram estudados em pacu experimentalmente infectado com Aeromonas hydrophila. Peixes alimentados com dietas contendo 0,1% e 1% de β-glucana foram injetados com 1 × 108 CFU de A. hydrophila após 7 dias de alimentação. A sobrevivência de peixes foi maior nos dois grupos tratados em comparação ao grupo controle (26,7% e 21,2%, respectivamente). A atividade respiratória de leucócitos e a atividade hemolítica do complemento via alternativa estavam elevadas após desafio bacteriano independentemente da concentração de β-glucana. A atividade de lisozima foi maior após a infecção e mostrou um aumento gradual de acordo com a concentração do imunoestimulante. Observou-se um aumento significativo na contagem de leucócitos totais após o desafio bacteriano e influência de β-glucana. A mesma resposta foi observada para trombócitos, linfócitos, eosinófilos, leucócito PAS positivo e monócitos. Com exceção de neutrófilos, que diminuíram frente ao mais alto nível do imunoestimulante e não se alteraram após a infecção, as outras células aumentaram após a exposição à A. hydrophila. A β-glucana não afetou os níveis de proteína total do soro, que aumentaram após o desafio bacteriano. Conclui-se que a administração de β-glucana em pacu pode aumentar a proteção contra A. hydrophila, por alterações nas respostas imunes de não-específicas.(AU)

Disease resistance of pacu Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887) fed with β-glucan / Resistência à doença em pacu, Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887), alimentados com β-glucana

Effects of β-glucan on innate immune responses and survival were studied in pacu experimentally infected with Aeromonas hydrophila. Fish fed diets containing 0, 0.1% and 1% β-glucan were injected with A. hydrophila. β-glucan enhanced fish survival in both treated groups (26.7% and 21.2% of the control, respectively). Leukocyte respiratory burst and alternative complement pathway activities were elevated after bacterial challenge regardless the β-glucan concentration. Lysozyme activity was higher after infection and showed a gradual increase as β-glucan concentration increased. A significant elevation in WBC count was observed either after bacterial challenge or by influence of β-glucan separately. The same response was observed in the number of thrombocytes, lymphocytes, eosinophils, LG-PAS positive cell and monocytes. It can be concluded that feeding pacu with β-glucan can increase protection against A. hydrophila, due to changes in non-specific immune responses.

Os efeitos da β-glucana sobre as respostas imunes inatas e a sobrevivência foram estudados em pacu experimentalmente infectado com Aeromonas hydrophila. Peixes alimentados com dietas contendo 0,1% e 1% de β-glucana foram injetados com 1 × 108 CFU de A. hydrophila após 7 dias de alimentação. A sobrevivência de peixes foi maior nos dois grupos tratados em comparação ao grupo controle (26,7% e 21,2%, respectivamente). A atividade respiratória de leucócitos e a atividade hemolítica do complemento – via alternativa estavam elevadas após desafio bacteriano independentemente da concentração de β-glucana. A atividade de lisozima foi maior após a infecção e mostrou um aumento gradual de acordo com a concentração do imunoestimulante. Observou-se um aumento significativo na contagem de leucócitos totais após o desafio bacteriano e influência de β-glucana. A mesma resposta foi observada para trombócitos, linfócitos, eosinófilos, leucócito PAS positivo e monócitos. Com exceção de neutrófilos, que diminuíram frente ao mais alto nível do imunoestimulante e não se alteraram após a infecção, as outras células aumentaram após a exposição à A. hydrophila. A β-glucana não afetou os níveis de proteína total do soro, que aumentaram após o desafio bacteriano. Conclui-se que a administração de β-glucana em pacu pode aumentar a proteção contra A. hydrophila, por alterações nas respostas imunes de não-específicas.

Lisozima: Actividad antibacteriana y alergenicidad / Lysozyme: Antibacterial Activity and Allergenicity

Desde que la lisozima fue descubierta por Alexander Fleming en 1922, muchos son los trabajos que se han lleva-do a cabo para describir las distintas actividades biológicas de esta proteína como son su actividad antibacteria-na, antiviral, antinflamatoria, analgésica, antitumoral y antioxidante. Su actividad antibacteriana frente a bacterias Gram-positivas es la actividad más ampliamente estudiada. Muchas investigaciones se han realizado para ampliar el espectro antibacteriano y poder atacar bacterias Gram-negativas. Se han llevado a cabo modificacio-nes térmicas, químicas, enzimáticas, mutaciones genéticas y efectos sinérgicos con otros compuestos, y se consiguió exitosamente ampliar el espectro antibacteriano, proponiendo en todos los casos que dicha actividad es independiente de su a ctividad enzimática natural. En este trabajo destacamos todas las propiedades estructura-les de la lisozima y sus principales actividades biológicas y las investigaciones que se han llevado a cabo para potenciar dichas actividades.

Since ly sozyme was discovered by Alexander Fleming in1922, many papers have been published on the different biological activities of this protein, such as its antibacterial, antiviral, anti-inflammatory, analgesic, antitumor andantioxidant properties. Its antibacterial activity againstGram-positive bacteria is the most widely studied. Much research has been done to widen the antibacterial spectrumand to attack the Gram-negative bacteria. Thermal, chemical and enzymatic modifications, as well as genetic mutations and synergistic effects, with other compounds have been made. The antibacterial spectrum was success fully widened in all cases, suggesting that this activity is independent of its natural enzymatic activity. In this paper we describe t he structural properties of lysozyme and its main biological activities, and also the research that has been carried out to maximize these activitie.

Desde que a lisozima foi descoberta por AlexandreFleming em 1922, muitos são os trabalhos que foram realizados para descrever as diferentes atividades biológicas desta proteína, como são sua atividade bacteriana, antiviral, anti-inflamatória, analgésica, antitumoral e antioxidante. Sua atividade antibacteriana frente a bactérias Gram-positivas é a atividade mais amplamente estudada. Muitas pesquisas foram realizadas para ampliar o espectroanti bacteriano e poder atacar bactérias Gram-negativas.Foram realizadas modificações térmicas, químicas,enzimáticas, mutações genéticas e efeitos sinérgicos com outros compostos, e obteve-se com sucesso ampliar o espectro antibacteriano, propondo em todos os casos que tal atividade é independente da sua atividade enzimática natural.Neste trabalho destacamos todas as propriedades estruturais da lisozima e suas principais atividades biológicas e as pesquisas que foram realizadas para potenciar tais atividades.

Película lagrimal: su interacción y su adherencia sobre los lentes de contacto de hidrogel de silicona / Tear film, interaction and adherence to silicone hydrogel

El rápido aumento en la cantidad de adaptaciones de lentes de hidrogel de silicona, sus características físico-químicas y las complicaciones que estos pueden presentar en cuanto a confort y tolerancia, requieren del conocimiento de los diferentes factores que puedan ocasionarlas. El objeto de este artículo es revisar los aspectos referidos a los depósitos en este tipo de lentes, que no solo afectan la vida útil de estos, sino su comportamiento clínico. Los diferentes materiales, esto es, los polímeros que los constituyen, contenido acuoso, hidrofobicidad/hidrofilicidad de la superficie, y tratamientos de superficie, son algunos de los factores relativos a los lentes de contacto. El peso molecular, cargas eléctricas, polaridad e hidrofobicidad/hidrofilicidad, son características específicas de cada uno de los componentes del film lagrimal. De las interacciones entre estos y los lentes de contacto depende la adherencia y características de los depósitos, con las consecuentes implicaciones clínicas.

The fast increase in the amount of silicone hydrogel contact lens adaptations, as well as their physical-chemical characteristics and possible complications in terms of comfort and tolerance, require the knowledge of the different factors that may cause them. The purpose of this articleis to review the aspects regarding the deposits in this type of lenses that affect not only their life utility but also their clinical behavior. The different materials, that is, the polymers that they are made of, as well as the water content, hydrophobicity/hydrophilicity of the surface and surface treatments are some of the factors related to contact lenses. Molecular weight, electric charges,polarity and hydrophobicity/hydrophilicity are specific characteristics of each tear film component.Their interactions with contact lenses influence the adherence and characteristics of the deposits,with the subsequent clinical implications.

An evaluation of the expression profiles of salivary proteins lactoferrin and lysozyme and their association with caries experience and activity / Avaliação do padrão de expressão das proteínas salivares lactoferrina e lisozima e sua associação com experiência e atividade de cárie

Purpose: Saliva contains both specific and non-specific protective factors of the immune system, such as antimicrobial proteins, which can inhibit the adhesion and viability of cariogenic microorganisms. The association between caries experience/activity and the electrophoretic profiles of salivary proteins lactoferrin and lysozyme was evaluated. Methods: Eighty 12-year-old students from public schools in Londrina, PR, Brazil, were selected and divided into two groups: Group A - with decayed teeth and Group B - with caries-free teeth. The parent/guardian of each child signed a consent form and filled out a questionnaire regarding the oral and systemic health of his/her child. A clinical examination to diagnose the presence or absence of dental caries, by means of the DMFT index, was conducted. A total of 1 mL of saliva was collected for protein analysis using a polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Results: A total of 58.8% of the children were caries-inactive; in contrast, 63.3% showed caries experience. There was a slight association between lysozyme concentrations and DMFT. Lactoferrin was positively correlated with both DMFT and restored teeth. Conclusion: The quantification of lactoferrin and lysozyme enabled an assessment of possible associations with caries status, thus improving the understanding of the biological and etiological aspects of caries.

Objetivo: A saliva contém fatores de defesa adquiridos e não adquiridos, como proteínas antimicrobianas capazes de inibir a aderência e a viabilidade dos microrganismos cariogênicos. Avaliou-se a associação entre a experiência/atividade de cárie e o perfil eletroforético das proteínas salivares lactoferrina e lisozima.Metodologia: Oitenta escolares aos 12 anos de idade da Rede Estadual de Ensino de Londrina, PR, Brasil, foram divididos em dois grupos: Grupo A – com cárie e Grupo B – sem cárie. Os responsáveis legais assinaram um termo de consentimento informado, e responderam um questionário sobre a saúde bucal e sistêmica das crianças. Foi realizado exame clínico, para diagnosticar a presença ou ausência de cárie através do Índice CPO-D e coletado 1 mLde saliva para análise das proteínas por meio da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE).Resultados: Observou-se que 58,8% das crianças eram cárie-inativas, apesar de 63,3% possuírem experiência de cárie. Houve uma tendência de associação entre a concentração de lisozima com o CPO-D. A proteína lactoferrina correlacionou-se positivamente com CPO-D e dentes restaurados.Conclusão: A quantificação destas proteínas permitiu observar possível associação com a cárie, favorecendo uma melhor compreensão do aspecto biológico e etiológico da doença.

Leukocytes respiratory burst and lysozyme level in pacu (Piaractus mesopotamicus Holmberg, 1887) / Atividade respiratória de leucócitos e nível de lisozima em pacu (Piaractus mesopotamicus)

Innate immune responses are useful to determine the health status of fish and to evaluate the effect of immunomodulatory substances in fish farming. Leukocytes respiratory burst was measured in pacu (Piaractus mesopotamicus) using chemiluminescence assay and nitroblue tetrazolium (NBT) reduction assay. The nitroblue tetrazolium reduction seemed more adequate than chemiluminescence assay for leukocytes oxidative burst determination, since it was difficult to isolate the blood leucocytes for chemiluminescence assay. Plasma and serum lysozyme were measured using a turbidimetric assay. The heating of serum and plasma samples (56 ºC for 30 minutes) for complement system inactivation darkened the plasma samples and interfered in the results. The lysozyme activity in serum was higher than in plasma, suggesting that serum samples are more appropriate for the analysis. This study established protocols that can be useful tools in the study of immune mechanisms of the tropical fish pacu.

Respostas imunológicas inatas são úteis para determinar o estado de saúde de peixes e avaliar o efeito de substâncias imunomoduladoras no cultivo destes animais. A atividade respiratória de leucócitos foi medida em pacu (Piaractus mesopotamicus) através de ensaio de quimioluminescência e ensaio de redução do nitroblue tetrazolium (NBT). O ensaio de redução do nitroblue tetrazolium pareceu mais adequado que o ensaio de quimioluminescência para determinação da atividade respiratória de leucócitos, uma vez que foi difícil isolar com êxito os leucócitos do sangue para o ensaio de quimioluminescência. Lisozima sérica e plasmática foram medidas por meio de ensaio turbidimétrico. Com o objetivo de inativar as proteínas do sistema complemento, as amostras de soro e plasma foram aquecidas (56 ºC por 30 minutos). Porém, este procedimento provocou a turvação das amostras de plasma e interferiu nos resultados. A atividade de lisozima no soro foi maior que no plasma, sugerindo que amostras de soro são mais apropriadas para esta análise. Este estudo estabeleceu protocolos que podem ser utilizados como ferramentas no estudo de mecanismos imunológicos do peixe tropical pacu.

Leukocytes respiratory burst and lysozyme level in pacu (Piaractus mesopotamicus Holmberg, 1887)

Innate immune responses are useful to determine the health status of fish and to evaluate the effect of immunomodulatory substances in fish farming. Leukocytes respiratory burst was measured in pacu (Piaractus mesopotamicus) using chemiluminescence assay and nitroblue tetrazolium (NBT) reduction assay. The nitroblue tetrazolium reduction seemed more adequate than chemiluminescence assay for leukocytes oxidative burst determination, since it was difficult to isolate the blood leucocytes for chemiluminescence assay. Plasma and serum lysozyme were measured using a turbidimetric assay. The heating of serum and plasma samples (56 ºC for 30 minutes) for complement system inactivation darkened the plasma samples and interfered in the results. The lysozyme activity in serum was higher than in plasma, suggesting that serum samples are more appropriate for the analysis. This study established protocols that can be useful tools in the study of immune mechanisms of the tropical fish pacu.

Respostas imunológicas inatas são úteis para determinar o estado de saúde de peixes e avaliar o efeito de substâncias imunomoduladoras no cultivo destes animais. A atividade respiratória de leucócitos foi medida em pacu (Piaractus mesopotamicus) através de ensaio de quimioluminescência e ensaio de redução do nitroblue tetrazolium (NBT). O ensaio de redução do nitroblue tetrazolium pareceu mais adequado que o ensaio de quimioluminescência para determinação da atividade respiratória de leucócitos, uma vez que foi difícil isolar com êxito os leucócitos do sangue para o ensaio de quimioluminescência. Lisozima sérica e plasmática foram medidas por meio de ensaio turbidimétrico. Com o objetivo de inativar as proteínas do sistema complemento, as amostras de soro e plasma foram aquecidas (56 ºC por 30 minutos). Porém, este procedimento provocou a turvação das amostras de plasma e interferiu nos resultados. A atividade de lisozima no soro foi maior que no plasma, sugerindo que amostras de soro são mais apropriadas para esta análise. Este estudo estabeleceu protocolos que podem ser utilizados como ferramentas no estudo de mecanismos imunológicos do peixe tropical pacu.

Dosagem de lisozima para avaliação da resposta imune em bezerros

O presente trabalho visou verificar a eficiência da dosagem de lisozima como indicador de imunidade em bovinos, valendo-sede animais naturalmente acometidos de processo diarréico. Para tanto, foram utilizados bezerros com até três meses deidade, criados em manejo semi-intensivo e divididos em três grupos experimentais (I sem diarréia, II com diarréia massem sintomas sistêmicos, III com diarréia e sintomas sistêmicos). Foram colhidas amostras sangüíneas de cada animal,que foram processadas para a realização da dosagem de gamaglobulinas por eletroforese, dosagem de IgG por imunodifusãoradial, contagem de linfócitos e dosagem de lisozima. Os resultados encontrados mostraram existir linfopenia nos animais dogrupo III, mas não foi verificada hipogamaglobulinemia na eletroforese ou na imunodifusão radial. Não foram encontradasdiferenças estatisticamente significantes no nível de lisozima entre os grupos estudados. Não foi possível demonstrar correlaçãoentre a dosagem de lisozima e os outros indicadores preconizados no presente experimento. Todavia, embora nopresente experimento não se tenha encontrado uma correlação positiva entre o teor de lisozima e parâmetros de respostaimunitária, os resultados obtidos sugerem que novos trabalhos devam ser realizados para que tal parâmetro seja validadocomo indicador biológico.

Dosagem de lisozima para avaliação da resposta imune em bezerros

O presente trabalho visou verificar a eficiência da dosagem de lisozima como indicador de imunidade em bovinos, valendo-sede animais naturalmente acometidos de processo diarréico. Para tanto, foram utilizados bezerros com até três meses deidade, criados em manejo semi-intensivo e divididos em três grupos experimentais (I sem diarréia, II com diarréia massem sintomas sistêmicos, III com diarréia e sintomas sistêmicos). Foram colhidas amostras sangüíneas de cada animal,que foram processadas para a realização da dosagem de gamaglobulinas por eletroforese, dosagem de IgG por imunodifusãoradial, contagem de linfócitos e dosagem de lisozima. Os resultados encontrados mostraram existir linfopenia nos animais dogrupo III, mas não foi verificada hipogamaglobulinemia na eletroforese ou na imunodifusão radial. Não foram encontradasdiferenças estatisticamente significantes no nível de lisozima entre os grupos estudados. Não foi possível demonstrar correlaçãoentre a dosagem de lisozima e os outros indicadores preconizados no presente experimento. Todavia, embora nopresente experimento não se tenha encontrado uma correlação positiva entre o teor de lisozima e parâmetros de respostaimunitária, os resultados obtidos sugerem que novos trabalhos devam ser realizados para que tal parâmetro seja validadocomo indicador biológico.