Pathology, microbiology, and molecular evaluation of tissues from equids serologically positive for Burkholderia mallei in Midwestern Brazil / Avaliação patológica, microbiológica e molecular em amostras de tecidos de equídeos sorologicamente positivos para Burkholderia mallei no Centro-Oeste do Brasil

Glanders is a disease caused by the bacterium Burkholderia mallei that primarily affects horses, mules and donkeys. The disease can cause lesions in the skin, lungs and several other organs. However, it often manifests as an asymptomatic disease. In Brazil, serological tests of high sensitivity and specificity are used to assist in the detection of antibodies against B. mallei and to contribute to the control of the disease. However, due to the mandatory euthanasia of seroreactive animals, equids with positive serology for B. mallei and asymptomatic generated great conflicts between breeders, veterinarians and diagnostic laboratories. This study clarifies the limitations of complementary diagnostic tests for detecting B. mallei. It describes the clinical, morphological and laboratory findings in 24 equines from different municipalities in the Mato Grosso State, Brazil, which reacted to the complement fixation test and were positive in the western blotting test for glanders. Data and tissue samples were collected from 24 horses for histological, microbiological and molecular analysis. In 23 horses, no clinical signs, morphological alterations, microbiological isolation, or molecular detection would characterize B. mallei infection. On the other hand, samples from an asymptomatic horse without lesional alterations showed sequence amplification compatible with B. mallei in the PCR. Considering that the infection by B. mallei is subject to the application of animal sanitary defense measures and that, by international requirement and national legislation, the serological results are tools that should support the sanitation procedures for the error of the bacteria in the Mato Grosso State, Brazil.

Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderia mallei que acomete primariamente cavalos, mulas e burros. A doença pode causar lesões na pele, pulmões e em diversos outros órgãos, entretanto frequentemente manifesta-se como uma enfermidade assintomática. No Brasil são utilizados testes sorológicos de elevada sensibilidade e especificidade para auxiliar na detecção de anticorpos contra B. mallei e contribuir para controle da doença. Porém, devido à obrigatoriedade da eutanásia de animais sororeagentes, os equídeos com sorologia positiva para B. mallei e assintomáticos geraram grandes embates entre criadores, médicos-veterinários e laboratórios de diagnóstico. Este trabalho esclarece as limitações dos testes diagnósticos complementares para detecção de B. mallei e descreve os achados clínicos, morfológicos e de exames laboratoriais em 24 equídeos, procedentes de diferentes municípios do estado de Mato Grosso, Brasil, que reagiram ao teste de fixação de complemento e foram positivos no teste de "western blotting" para mormo. Foram colhidos dados e amostras de tecidos de 24 equídeos para análise histológica, microbiológica e molecular. Em 23 equídeos não existiam sinais clínicos, alterações morfológicas, isolamento microbiológico ou detecção molecular que caracterizassem infecção por B. mallei. Por outro lado, amostras de um cavalo assintomático e sem alterações lesionais apresentaram amplificação de sequência compatível com B. mallei na PCR. Considerando que a infecção por B. mallei é passível da aplicação de medidas de defesa sanitária animal e que por exigência internacional e da legislação nacional, os resultados sorológicos são ferramentas que devem amparar os procedimentos de saneamento para erradicação da bactéria no estado de Mato Grosso, Brasil.

Situational profile of equidae breeders in the municipality of Soure, Pará: an approach to glanders and adoption of relevant sanitary measures / Perfil situacional dos criadores de equídeos do município de Soure, Pará: uma abordagem quanto ao mormo e a adoção das medidas sanitárias pertinentes

A survey was conducted on the knowledge, attitudes, and behaviors of Equidae breeders in the municipality of Soure, Marajó Island, Pará, regarding animal health problems in the properties, especially glanders and adoption of sanitary measures that are pertinent to their combat, to elaborate on educational technical material with the appropriate methodology. The study included 50 interviewees from urban and rural areas of this municipality. Regarding data collection, structured interviews containing 22 multiple choice questions on the socioeconomic characteristics of breeders and/or owners of Equidae, breeding habits and models, and conceptions about sanitary control and their relationship with the animal health defense agency were conducted. From the qualitative analysis of data, 66% (33/50) interviewees were identified as literate, which facilitates the choice of the best language to use for communication. Regarding the choice of the best language for the transfer of information, 62% (31/50) interviewees said that a mobile phone is currently the best tool for transmitting information. Further, 40% (20/50) interviewees breed their Equidae extensively, raising an alert for epidemiological surveillance, and only 10% (5/50) interviewees turned to ADEPARÁ when the animals were sick. Based on the study results, Equidae breeders need guidance regarding the actions of the animal health defense services, and sanitary education is a fundamental measure for raising awareness and clarification of glanders to mitigate damage to public health and animal welfare, avoiding its spread in the State.(AU)

Foi realizado um levantamento sobre conhecimentos, atitudes e comportamentos dos criadores de equídeos do município de Soure, na Ilha do Marajó, Pará, quanto aos problemas sanitários nas propriedades, em especial, ao mormo e a adoção de medidas sanitárias pertinentes ao seu combate - elaboração de material técnico educativo com metodologia ade-quada ao público-alvo trabalhado. A pesquisa contou com 50 entrevistados pertencentes às zonas urbana e rural desse muni-cípio. Quanto a coleta de dados, foram realizadas entrevistas estruturadas contendo 22 questões de múltipla escolha referentes às características socioeconômicas dos criadores e/ou proprietários de equídeos; aos hábitos e aos modos de criação; às con-cepções sobre o controle sanitário e a relação destes com o órgão de defesa sanitária animal. Da análise qualitativa dos dados, observou-se que 66% (33/50) dos entrevistados são alfabetizados; o que facilita a escolha da melhor linguagem para o repasse de informações; 62% (31/50) elencou que o celular, atualmente, é a melhor ferramenta para a transmissão de informações; 40% (20/50) cria seus equídeos de maneira extensiva, representando um alerta à vigilância epidemiológica e apenas 10% (5/50) recorre à ADEPARÁ quando os animais adoecem. Com base no estudo, foi possível concluir que os criadores de equídeos necessitam de orientações quanto às ações do serviço de defesa sanitária animal, sendo a educação sanitária medida fundamen-tal para conscientização e esclarecimento deles sobre o mormo, de maneira a mitigar seus danos à saúde pública e ao bem-estar dos animais, evitando sua propagação no Estado.(AU)

Situação atual do mormo no estado de São Paulo e no Brasil

O Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderiamallei que acomete principalmente os equídeos e é caracterizada por provocar lesões nos sistemas respiratório cutâneo e linfático. Em virtude do grande impacto gerado na equideocultura e, principalmente, por ser uma enfermidade de caráter zoonótico, está incluída na lista de doenças de notificação imediata de qualquer caso suspeito no Brasil, e os casos confirmados são informados a Organização Mundial de Saúde Animal (OIE).(AU)

Situação atual do mormo no estado de São Paulo e no Brasil

O Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderiamallei que acomete principalmente os equídeos e é caracterizada por provocar lesões nos sistemas respiratório cutâneo e linfático. Em virtude do grande impacto gerado na equideocultura e, principalmente, por ser uma enfermidade de caráter zoonótico, está incluída na lista de doenças de notificação imediata de qualquer caso suspeito no Brasil, e os casos confirmados são informados a Organização Mundial de Saúde Animal (OIE).

Sinais clínicos em equídeos naturalmente infectados por Burkholderia mallei no estado de Alagoas: relato de caso / Clinical Signs in equids naturally infected by Burkholderia mallei in the state of Alagoas: case report / Signos Clínicos en équidos infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el estado de Alagoas: reporte de caso

Há alguns anos o mormo chegou a ser considerado erradicado no Brasil pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), porém tem ganhado importância devido ao aumento no número de casos nos últimos anos em todos os estados brasileiros. Os sinais clínicos foram reconhecidos desde que a doença foi registrada pela primeira vez por Hipócrates e Aristóteles e as formas de manifestação da doença são prepatente, hiperaguda, aguda e crônica. Objetivou-se relatar os achados clínicos de equídeos naturalmente infectados com mormo em propriedades consideradas foco pela Agência de Defesa e Inspeção Agropecuária de Alagoas - ADEAL e pelo MAPA no estado de Alagoas. Os sinais clínicos observados nos animais acometidos foram, apatia, dispneia estertorosa, nódulos linfáticos infartados (aumentados), expectoração nasal mucopurulenta bilateral em 3/16 dos animais observados, 1/16 animal apresentou a forma crônica evidenciada pelo edema de membro posterior esquerdo, com presença de lesões ulceradas, linfagite disseminada, expectoração de secreção nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptise) e dispneia severa. Por fim os sinais clínicos e achados macroscópicos observados nos animais naturalmente infectados por Burkholderia mal/ei no estado de Alagoas corroboram com o descrito na literatura veterinária e para que haja o controle e a não disseminação da doença, animais positivos devem ser eutanasiados e propriedades foco devem ser interditadas.(AU)

A few years ago the glanders came to be considered eradicated in Brazil by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), but has gained importance due to the increase in the number of cases in recent years in ali Brazilian states. The clinical signs were recognized since the disease was first recorded by Hippocrates and Aristotle and the forms of the disease manifestation are prepatente, hyperacute, acute and chronic. This study aimed to report the clinical findings of equids naturally infected with glanders properties considered focus by the Defense Agency and Agriculturallnspection of Alagoas - ADEAL and the ap in the state of Alagoas. The clinical signs observed in animais affected were, apathy, dyspnea stertorous, infarcted Iymph nodes (increased), expectoration mucopurulent bilateral nasal in 3/16 of animais observed, 1/16 animal presented the chronic form evidenced by edema in the left posterior limb, with the presence of ulcerated lesions, linfagite disseminated, the expectoration of nasal secretion serosanguinolenta bilateral (hemoptysis) and severe dyspnea. Finally, the clinical signs and macroscopic findings observed in animais naturally infected by Burkholderia mallei in Alagoas state corroborate with the previously described in the literature on veterinary and for which there is no control and the spread of the disease, positive animais should be euthanized and focus should be interditadas properties.(AU)

Hace unos anos el Muermo llegó a ser considerado erradicado en Brasil por el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación (MAPA), pero ha adquirido mayor importancia debido al aumento en el número de casos en los últimos anos en todos los estados brasilenos. Los signos clínicos fueron reconocidos desde que la enfermedad fue grabado por primera vez por Hipócrates y Aristóteles y las formas de las manifestaciones de la enfermedad son prepatente, Hiperaguda, aguda y crónica. Este estudio tiene como objetivo informar los hallazgos clínicos de équidos infectados naturalmente con el Muermo consideran propiedades focus por Ia Agencia de Defensa e Inspección Agrícola de Alagoas - ADEAL Y el MAPA en el estado de Alagoas. Los signos clínicos observados en los animales afectados fueron, apatía, disnea estertorosa, ganglios linfáticos infartados (aumento), expectoración nasal mucopurulento bilateral en 3/16 (tres/dieciséis) de animales observados, 1/16 (uno/dieciséis) animal presentado Iaforma crónica evidenciada por edema en la extremidad posterior izquierda, con la presencia de lesiones ulceradas, linfagite difundido, la expectoración de secreción nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptisis) y disnea severa. Por último, los signos clínicos y los hallazgos macroscópicos observados en los animales infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el Estado de Alagoas corroborar con las descritas previamente en la literatura sobre veterinaria y para los cuales no hay control y la propagación de la enfermedad, los animales positivos deben ser sacrificados y el enfoque debe ser interditadas propiedades.(AU)

Sinais clínicos em equídeos naturalmente infectados por Burkholderia mallei no estado de Alagoas: relato de caso / Clinical Signs in equids naturally infected by Burkholderia mallei in the state of Alagoas: case report / Signos Clínicos en équidos infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el estado de Alagoas: reporte de caso

Há alguns anos o mormo chegou a ser considerado erradicado no Brasil pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), porém tem ganhado importância devido ao aumento no número de casos nos últimos anos em todos os estados brasileiros. Os sinais clínicos foram reconhecidos desde que a doença foi registrada pela primeira vez por Hipócrates e Aristóteles e as formas de manifestação da doença são prepatente, hiperaguda, aguda e crônica. Objetivou-se relatar os achados clínicos de equídeos naturalmente infectados com mormo em propriedades consideradas foco pela Agência de Defesa e Inspeção Agropecuária de Alagoas - ADEAL e pelo MAPA no estado de Alagoas. Os sinais clínicos observados nos animais acometidos foram, apatia, dispneia estertorosa, nódulos linfáticos infartados (aumentados), expectoração nasal mucopurulenta bilateral em 3/16 dos animais observados, 1/16 animal apresentou a forma crônica evidenciada pelo edema de membro posterior esquerdo, com presença de lesões ulceradas, linfagite disseminada, expectoração de secreção nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptise) e dispneia severa. Por fim os sinais clínicos e achados macroscópicos observados nos animais naturalmente infectados por Burkholderia mal/ei no estado de Alagoas corroboram com o descrito na literatura veterinária e para que haja o controle e a não disseminação da doença, animais positivos devem ser eutanasiados e propriedades foco devem ser interditadas.

A few years ago the glanders came to be considered eradicated in Brazil by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), but has gained importance due to the increase in the number of cases in recent years in ali Brazilian states. The clinical signs were recognized since the disease was first recorded by Hippocrates and Aristotle and the forms of the disease manifestation are prepatente, hyperacute, acute and chronic. This study aimed to report the clinical findings of equids naturally infected with glanders properties considered focus by the Defense Agency and Agriculturallnspection of Alagoas - ADEAL and the ap in the state of Alagoas. The clinical signs observed in animais affected were, apathy, dyspnea stertorous, infarcted Iymph nodes (increased), expectoration mucopurulent bilateral nasal in 3/16 of animais observed, 1/16 animal presented the chronic form evidenced by edema in the left posterior limb, with the presence of ulcerated lesions, linfagite disseminated, the expectoration of nasal secretion serosanguinolenta bilateral (hemoptysis) and severe dyspnea. Finally, the clinical signs and macroscopic findings observed in animais naturally infected by Burkholderia mallei in Alagoas state corroborate with the previously described in the literature on veterinary and for which there is no control and the spread of the disease, positive animais should be euthanized and focus should be interditadas properties.

Hace unos anos el Muermo llegó a ser considerado erradicado en Brasil por el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación (MAPA), pero ha adquirido mayor importancia debido al aumento en el número de casos en los últimos anos en todos los estados brasilenos. Los signos clínicos fueron reconocidos desde que la enfermedad fue grabado por primera vez por Hipócrates y Aristóteles y las formas de las manifestaciones de la enfermedad son prepatente, Hiperaguda, aguda y crónica. Este estudio tiene como objetivo informar los hallazgos clínicos de équidos infectados naturalmente con el Muermo consideran propiedades focus por Ia Agencia de Defensa e Inspección Agrícola de Alagoas - ADEAL Y el MAPA en el estado de Alagoas. Los signos clínicos observados en los animales afectados fueron, apatía, disnea estertorosa, ganglios linfáticos infartados (aumento), expectoración nasal mucopurulento bilateral en 3/16 (tres/dieciséis) de animales observados, 1/16 (uno/dieciséis) animal presentado Iaforma crónica evidenciada por edema en la extremidad posterior izquierda, con la presencia de lesiones ulceradas, linfagite difundido, la expectoración de secreción nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptisis) y disnea severa. Por último, los signos clínicos y los hallazgos macroscópicos observados en los animales infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el Estado de Alagoas corroborar con las descritas previamente en la literatura sobre veterinaria y para los cuales no hay control y la propagación de la enfermedad, los animales positivos deben ser sacrificados y el enfoque debe ser interditadas propiedades.

Produção e purificação parcial de PPD-maleína para diagnóstico do mormo em equídeos / Partially purified malleo-proteins production for glanders diagnosis in Equidae

Objetivou-se com este estudo produzir e purificar parcialmente a PPD-maleína a partir de amostras de Burkholderia mallei isoladas de equídeos no Brasil com potencial para uso no diagnóstico do mormo. As linhagens de B. mallei fenotipicamente caracterizadas e de virulência comprovada foram inoculadas em caldo Dorset-Henley para crescer e metabolizar. Em seguida, as proteínas foram separadas por precipitação com ácido tricloroacético e precipitadas com sulfato de amônia. As PPDs-maleínas foram concentradas em 1,0mg/mL e na avaliação realizada em cobaios foi eficaz no desenvolvimento da hipersensibilidade do tipo tardia e consequentemente na identificação de animais verdadeiro positivos e exclusão dos verdadeiro negativos, sendo uma possibilidade em potencial para utilização no diagnóstico do mormo.(AU)

The objective of this study was to produce and partially purify Malleo-protein from Burkholderia mallei samples isolates from Equidae in Brazil with potential for use in the diagnosis of glanders. The strain B. mallei phenotypically characterized and proven virulent was inoculated into broth Dorset-Henley to grow and metabolize. The proteins were separated by trichloroacetic acid precipitation and amonium sulfate precipitation. The PPD mallein was concentrated 1.0mg/mL and biologically tested in guinea pigs. It was effective in the development of delayed-type hypersensitivity and consequently to identify true-positive animals and to exclude of true negatives. There is the possibility for potential use in the glanders diagnosis in Equidae.(AU)

Produção e purificação parcial de PPD-maleína para diagnóstico do mormo em equídeos / Partially purified malleo-proteins production for glanders diagnosis in Equidae

Objetivou-se com este estudo produzir e purificar parcialmente a PPD-maleína a partir de amostras de Burkholderia mallei isoladas de equídeos no Brasil com potencial para uso no diagnóstico do mormo. As linhagens de B. mallei fenotipicamente caracterizadas e de virulência comprovada foram inoculadas em caldo Dorset-Henley para crescer e metabolizar. Em seguida, as proteínas foram separadas por precipitação com ácido tricloroacético e precipitadas com sulfato de amônia. As PPDs-maleínas foram concentradas em 1,0mg/mL e na avaliação realizada em cobaios foi eficaz no desenvolvimento da hipersensibilidade do tipo tardia e consequentemente na identificação de animais verdadeiro positivos e exclusão dos verdadeiro negativos, sendo uma possibilidade em potencial para utilização no diagnóstico do mormo.

The objective of this study was to produce and partially purify Malleo-protein from Burkholderia mallei samples isolates from Equidae in Brazil with potential for use in the diagnosis of glanders. The strain B. mallei phenotypically characterized and proven virulent was inoculated into broth Dorset-Henley to grow and metabolize. The proteins were separated by trichloroacetic acid precipitation and amonium sulfate precipitation. The PPD mallein was concentrated 1.0mg/mL and biologically tested in guinea pigs. It was effective in the development of delayed-type hypersensitivity and consequently to identify true-positive animals and to exclude of true negatives. There is the possibility for potential use in the glanders diagnosis in Equidae.

Desenvolvimento e avaliação de um teste ELISA indireto para o diagnóstico sorológico do mormo em equídeos / Standardization and evaluation of an indirect ELISA for the serological diagnosis of glanders in horses

O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa de caráter agudo ou crônico que acomete principalmente os equídeos, causando enormes prejuízos na cadeia produtiva do cavalo. Para controlar a enfermidade o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) instituiu medidas sanitárias obrigatórias em todo território nacional que incluem o diagnóstico oficial pela fixação do complemento (FC), maleinização e sacrifício dos animais positivos. Os kits atuais utilizados no diagnóstico da doença são importados, dificultando e encarecendo sua aplicação na rotina. Objetivou-se com este estudo padronizar um teste de ELISA indireto utilizando o extrato protéico de Burkholderia mallei isolada a partir de equídeo portador no estado de Pernambuco. As amostras foram cultivadas em ágar sangue 10%, incubada por 48h a 37°C; posteriormente caracterizou-se fenotípica e genotipicamente uma das colônias isoladas, e em seguida a cultivou em BHI para enriquecimento; logo após, esta foi repicada para o meio Dor-set Henley o qual foi incubado a 37ºC sob 60rpm por oito semanas. Para padronização do teste utilizou-se o Conjugado Proteína G Peroxidase Sigma na diluição de 1:90.000, com soros diluídos em 1:100 e o antígeno em 1:400. Utilizou-se 60 soros como controle negativo testados frente à FC para determinação do ponto de corte o qual ficou em 0,042nm. Feitas as padronizações, foram testadas 300 amostras, onde 99% (297) foram concordantes com os resultados obtidos na FC. Ao final, o ensaio apresentou 100% de sensibilidade e 98,2% de especificidade com valores preditivo positivo e negativo de 97,7% e 100%, respectivamente. O teste de concordância kappa foi 0,98 e a repetibilidade intra e interplaca ficaram em 8,8 e 10,3%, respectivamente. Diante dos resultados obtidos durante os ensaios, conclui-se que o teste de ELISA indireto pode ser utilizado como uma ferramenta de diagnóstico eficiente. Entretanto, mais ensaios devem ser realizados visando consolidar a confiabilidade do referido teste.(AU)

Glanders is an infectious-contagious disease of acute or chronic character which principally affects horses, causing enormous losses in the productive chain of this animal. To control the disease, the Ministry of Agriculture, Husbandry and Supply instituted mandatory sanitation measures in the entire national territory which include an official diagnosis through the complement fixation (CF) test, maleinization and sacrifice of the animals that are positive. Nowadays the kits used for the diagnosis of the disease are imported, making their routine application difficult and more expensive. The objective of this study was to standardize an indirect ELISA test, using the proteic extract of Burkholderia mallei isolated from a carrier horse in the state of Pernambuco. The samples were cultivated in 10% blood agar and incubated for 48h at 37°C; later, one of the isolated colonies was characterized phenotypically and genotypically and immediately cultivated in brain heart infusion (BHI) for enrichment; then it was peaked (repicada) for the Dor-set Henley medium which was incubated at 37ºC under 60rpm for eight weeks. To standardize the test the Protein G Peroxidase Sigma Conjugate was used in the dilution of 1:90.000, with serums diluted in 1:100 and the antigen in 1:400. Sixty serums were used as negative controls, tested before the CF to determine the cutting point which was 0.042nm. After establishing the standardization, 300 samples were tested, of which 99% (297) were in agreement with the results obtained in the CF. At the end, of assay presented 100% sensibility and 98.2% specificity, with predictive (preditivo) positive and negative values of 97.7% and 100% respectively. The Kappa concordance test was 0.98 and the intra and interplac repeatability were 8.8% and 10.3% respectively. From the results obtained, it is possible to affirm that the indirect ELISA test can be used as an efficient diagnosis tool. However, more essays must be carried out to consolidate the reliability of this test.(AU)

Desenvolvimento e avaliação de um teste ELISA indireto para o diagnóstico sorológico do mormo em equídeos / Standardization and evaluation of an indirect ELISA for the serological diagnosis of glanders in horses

O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa de caráter agudo ou crônico que acomete principalmente os equídeos, causando enormes prejuízos na cadeia produtiva do cavalo. Para controlar a enfermidade o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) instituiu medidas sanitárias obrigatórias em todo território nacional que incluem o diagnóstico oficial pela fixação do complemento (FC), maleinização e sacrifício dos animais positivos. Os kits atuais utilizados no diagnóstico da doença são importados, dificultando e encarecendo sua aplicação na rotina. Objetivou-se com este estudo padronizar um teste de ELISA indireto utilizando o extrato protéico de Burkholderia mallei isolada a partir de equídeo portador no estado de Pernambuco. As amostras foram cultivadas em ágar sangue 10%, incubada por 48h a 37°C; posteriormente caracterizou-se fenotípica e genotipicamente uma das colônias isoladas, e em seguida a cultivou em BHI para enriquecimento; logo após, esta foi repicada para o meio Dor-set Henley o qual foi incubado a 37ºC sob 60rpm por oito semanas. Para padronização do teste utilizou-se o Conjugado Proteína G Peroxidase Sigma na diluição de 1:90.000, com soros diluídos em 1:100 e o antígeno em 1:400. Utilizou-se 60 soros como controle negativo testados frente à FC para determinação do ponto de corte o qual ficou em 0,042nm. Feitas as padronizações, foram testadas 300 amostras, onde 99% (297) foram concordantes com os resultados obtidos na FC. Ao final, o ensaio apresentou 100% de sensibilidade e 98,2% de especificidade com valores preditivo positivo e negativo de 97,7% e 100%, respectivamente. O teste de concordância kappa foi 0,98 e a repetibilidade intra e interplaca ficaram em 8,8 e 10,3%, respectivamente. Diante dos resultados obtidos durante os ensaios, conclui-se que o teste de ELISA indireto pode ser utilizado como uma ferramenta de diagnóstico eficiente. Entretanto, mais ensaios devem ser realizados visando consolidar a confiabilidade do referido teste.

Glanders is an infectious-contagious disease of acute or chronic character which principally affects horses, causing enormous losses in the productive chain of this animal. To control the disease, the Ministry of Agriculture, Husbandry and Supply instituted mandatory sanitation measures in the entire national territory which include an official diagnosis through the complement fixation (CF) test, maleinization and sacrifice of the animals that are positive. Nowadays the kits used for the diagnosis of the disease are imported, making their routine application difficult and more expensive. The objective of this study was to standardize an indirect ELISA test, using the proteic extract of Burkholderia mallei isolated from a carrier horse in the state of Pernambuco. The samples were cultivated in 10% blood agar and incubated for 48h at 37°C; later, one of the isolated colonies was characterized phenotypically and genotypically and immediately cultivated in brain heart infusion (BHI) for enrichment; then it was peaked (repicada) for the Dor-set Henley medium which was incubated at 37ºC under 60rpm for eight weeks. To standardize the test the Protein G Peroxidase Sigma Conjugate was used in the dilution of 1:90.000, with serums diluted in 1:100 and the antigen in 1:400. Sixty serums were used as negative controls, tested before the CF to determine the cutting point which was 0.042nm. After establishing the standardization, 300 samples were tested, of which 99% (297) were in agreement with the results obtained in the CF. At the end, of assay presented 100% sensibility and 98.2% specificity, with predictive (preditivo) positive and negative values of 97.7% and 100% respectively. The Kappa concordance test was 0.98 and the intra and interplac repeatability were 8.8% and 10.3% respectively. From the results obtained, it is possible to affirm that the indirect ELISA test can be used as an efficient diagnosis tool. However, more essays must be carried out to consolidate the reliability of this test.

Caracterização fenotípica e molecular de amostras de Burkholderia mallei isoladas na Região Nordeste do Brasil / Phenotypic and molecular characterization of Burkholderia mallei isolated in northeastern Brazil

Objetivou-se com este trabalho realizar o estudo bioquímico e molecular de amostras de Burkholderia mallei isoladas de eqüídeos com diagnóstico clínico e sorológico para o mormo e provenientes da Região Metropolitana do Recife-PE e Zona da Mata dos Estados de Alagoas e Pernambuco. Foram realizadas as técnicas microbiológicas para o isolamento e identificação fenotípica de B. mallei e as técnicas moleculares de ribotipagem-PCR e RAPD-PCR. Das oito amostras estudadas, quatro apresentaram pequenas variações fenotípicas. Nas técnicas moleculares, as amostras formaram quatro grupos de diferentes perfis ribotípicos, demonstrando também quatro perfis genotípicos. Houve associação nos resultados da Ribotipagem-PCR e RAPD-PCR. As variações nos perfis ribotípicos e genotípicos foram associadas às diferentes regiões estudadas. De acordo com os resultados obtidos, conclui-se que as pequenas variações bioquímicas não estão associadas aos diferentes perfis moleculares e que essas diferenças demonstram uma heterogeneidade que está associada à procedência das amostras, indicando que a infecção nos animais ocorre por clones diferentes das amostras analisadas.

The objective of this paper was to study the molecular performance and phenotypic characterization of Burkholderia mallei isolated from horses with clinical and serological diagnosis of glanders, originating from the Metropolitan District of Recife and Zona da Mata of Pernambuco and Alagoas. The isolation and biochemical identification of B. mallei was carried out by microbiological and molecular techniques of PCR-fingerprinting and RAPD-PCR. From the eight samples studied, four showed little phenotype variations. In the molecular tests, the samples formed 4 groups of different ribotype profiles and 4 genotype profiles. There was some association of PCR-fingerprinting with RAPD-PCR results. It was concluded that the slight biochemical variations were not associated with different molecular profiles. They also indicated that these differences show heterogeneity associated with the origin of the sample, indicating that the infection was caused by clones of different strains and that the polymorphism of DNA observed could make it difficult to choose one standard strain for an immune prophylactic treatment of glanders.

Proteinograma sérico em muares naturalmente infectados pela Burkholderia mallei / Serum proteinogram in mules naturally infected by the Burkholderia mallei

The Burkholderia mallei is the causing bacterium of glanders, illness of high morbidity and lethality for the equides, and also one zoonosis. Recently diagnostic in the Pernambuco and Alagoas States/Brazil, it comes decimating populations of equides in the Zone of Forest Region of these states, causing great damages to the sugar cane plantation activity that it uses such animals as traction. The objective this work was to investigate the proteins alterations caused by glanders. Had been studied ninety adult mules, of different races, destined to the work, proceeding from the sugar cane plantation region, Zone of Forest, in the Pernambuco State/Brazil. These were divided in three groups: G1: thirty animals with negative serology for glanders; G2: thirty animals with positive serology for glanders and without apparent symptoms and G3: thirty animals with positive serology for glanders and with apparent symptoms. The gotten results, referring the medium of the parameters studied respectively for G1, G2 and G3 had been: total serum protein 7.33; 7.73 and 7.46g/dl; albumin 2.57; 2.43 and 1.81g/dl; globulins 4.37; 4.86 and 5.64g/dl; albumin/ globulins ratio 0.55; 0.47 and 0.34g/dl; alpha-globulin 1.06; 1.33 and 1.33g/dl; beta-globulin 1.10; 1.21 and 1.80g/dl and gamma-globulin 2.21; 2.32 and 2.51g/dl. It is concluded that the variations for the studied parameters were significant; the increase of the globulins characterizes an antigenic stimulus in the sick animals, as well as an inversion in the albumin/globulins ratio for the animals with apparent clinic in relation to the excessively animal ones. These findings could be considered in the diagnosis, prognostic and in future research that they aim at to study forms of immunization against this illness.(AU)

A Burkholderia mallei é a bactéria causadora do mormo, doença de alta morbidade e letalidade para os eqüídeos, e também uma zoonose. Recentemente diagnosticada nos estados de Pernambuco e Alagoas, vem dizimando populações de eqüídeos na Região da Zona da Mata destes estados, causando grandes prejuízos à atividade canavieira que utiliza tais animais como tração. Objetivou-se com este trabalho investigar as alterações protéicas causadas pelo mormo. Foram estudados 90 muares adultos, de diferentes raças, destinados ao trabalho, provenientes da região canavieira, Zona da Mata, do Estado de Pernambuco. Estes foram divididos em três grupos: G1: composto por trinta animais sorologicamente negativos para o mormo; G2: composto por trinta animais sorologicamente positivos e sem sintomatologia clínica aparente e G3: composto por trinta animais sorologicamente positivos e com sintomatologia clínica aparente. Os resultados obtidos, referentes à média dos parâmetros estudados para G1, G2 e G3 foram respectivamente: proteína sérica total 7,33; 7,73 e 7,46g/dl; albumina 2,57; 2,43 e 1,81g/dl; globulinas 4,37; 4,86 e 5,64g/dl; relação albumina/globulinas 0,55; 0,47 e 0,34g/dl; alfaglobulina 1.06; 1.33 e 1,33g/dl; beta-globulina 1,10; 1,21 e 1,80g/dl e gama-globulina 2,21; 2,32 e 2,51g/dl. Conclui-se que as variações para os parâmetros estudados foram significativas, o aumento das globulinas caracteriza um estímulo antigênico nos animais positivos, bem como uma inversão na relação albumina/globulinas para os animais com clínica aparente em relação aos demais animais. Estes achados poderão ser considerados no diagnóstico, prognóstico e em pesquisas futuras que visem estudar formas de imunização contra esta importante enfermidade. (AU)

Haematological and biochemical aspects of mules naturally infected by Bulkholderia mal/ei / Aspectos hematológicos e bioquímicos em muares naturalmente infectados pela Bulkholderia mallei

The hematological and biochemical aspects were studied in mules naturally infected by Burkholdería mallei -Brasíl. Three experíment groups were created, being: G1 (n=30) with negative serum for glanders; G2 (n=30) with positive serum for glanders but which had not developed the symptoms and G3 (n=30) with positive serum for glanders and which suggestive symptoms. Hematological tests and biochemical measuring were done (serum bilirrubin, aspartate amino transferase, alanine amino transferase, gama glutamil transferase, creatinokinase, alkaline phosphatase, lactic dehidrogen, blood urea nitrogen and creatinin). On the hematological test there was a significant variation for: packed cell, hemoglobin, VCM, and HCM in G1, G2 and G3, showing normocytic normochromic anaemia in G3. The leukogram showed neutrophilic leukocitosis left switch monocytosis, linphopenia and eosinopenia compatible with acute or chronic bacterial infection. There was no significant difference of the serum biochemical elements among the investigated groups. The hematological and biochemical findings were not enough to diagnose glanders alone, but can be suggestive for more precise tcsts for the diagnosis of glanders. 

Estudaram-se os aspectos hematológicos e bioquímicos em muares naturalmente infectados pela Burkholderia mallei. Foram constituídos três grupos de animais: Grupo 1 (G1): composto por 30 animais sadios e sorologicamente negativos para o mormo; Grupo 2 (G2): composto por 30 animais sorologicamente positivos para o mormo e sem sintomatologia aparente da doença e Grupo 3 (G3): composto por 30 animais sorologicamente positivos e com sintomas sugestivos do mormo. Foram realizados hemogramas e dosagens bioquímicas: billirubinas séricas, aspartato amino transferase (A8T), gama glutamil transferase (GGT), creatina kinase (CK), fosfatase alcalina (FA), desidrogenase láctica (LDH), uréia e creatinína. Observou-se variação significativa para as variáveis: VG, Hb e os índices hematimétricos: VCM, HCM, indicando anemia normocitica, normocrônica no G3. O leucograma revelou leucocitose com neutrofilia e desvio à esquerda, além de monocitose, linfocitopenia e eosinopenia, compatíveis com infecções bacterianas agudas ou crônicas. Para as variáveis da bioquímica sérica não se detectou diferença significativa entre os grupos. Concluiu-se que os achados hematológicos e bioquímicos não são ferramentas suficientes para confirmar o diagnóstico da doença, mas podem auxiliar na indicação para a realização de testes mais sensíveis para o diagnóstico do mormo.

Haematological and biochemical aspects of mules naturally infected by Bulkholderia mal/ei / Aspectos hematológicos e bioquímicos em muares naturalmente infectados pela Bulkholderia mallei

The hematological and biochemical aspects were studied in mules naturally infected by Burkholdería mallei -Brasíl. Three experíment groups were created, being: G1 (n=30) with negative serum for glanders; G2 (n=30) with positive serum for glanders but which had not developed the symptoms and G3 (n=30) with positive serum for glanders and which suggestive symptoms. Hematological tests and biochemical measuring were done (serum bilirrubin, aspartate amino transferase, alanine amino transferase, gama glutamil transferase, creatinokinase, alkaline phosphatase, lactic dehidrogen, blood urea nitrogen and creatinin). On the hematological test there was a significant variation for: packed cell, hemoglobin, VCM, and HCM in G1, G2 and G3, showing normocytic normochromic anaemia in G3. The leukogram showed neutrophilic leukocitosis left switch monocytosis, linphopenia and eosinopenia compatible with acute or chronic bacterial infection. There was no significant difference of the serum biochemical elements among the investigated groups. The hematological and biochemical findings were not enough to diagnose glanders alone, but can be suggestive for more precise tcsts for the diagnosis of glanders.

Estudaram-se os aspectos hematológicos e bioquímicos em muares naturalmente infectados pela Burkholderia mallei. Foram constituídos três grupos de animais: Grupo 1 (G1): composto por 30 animais sadios e sorologicamente negativos para o mormo; Grupo 2 (G2): composto por 30 animais sorologicamente positivos para o mormo e sem sintomatologia aparente da doença e Grupo 3 (G3): composto por 30 animais sorologicamente positivos e com sintomas sugestivos do mormo. Foram realizados hemogramas e dosagens bioquímicas: billirubinas séricas, aspartato amino transferase (A8T), gama glutamil transferase (GGT), creatina kinase (CK), fosfatase alcalina (FA), desidrogenase láctica (LDH), uréia e creatinína. Observou-se variação significativa para as variáveis: VG, Hb e os índices hematimétricos: VCM, HCM, indicando anemia normocitica, normocrônica no G3. O leucograma revelou leucocitose com neutrofilia e desvio à esquerda, além de monocitose, linfocitopenia e eosinopenia, compatíveis com infecções bacterianas agudas ou crônicas. Para as variáveis da bioquímica sérica não se detectou diferença significativa entre os grupos. Concluiu-se que os achados hematológicos e bioquímicos não são ferramentas suficientes para confirmar o diagnóstico da doença, mas podem auxiliar na indicação para a realização de testes mais sensíveis para o diagnóstico do mormo.

Glanders / Mormo

Glanders was considered to be an exotic disease in Brazil until the official report of several cases in the Zona da Mata area in the Northeast. Confirmation was based on bacterial isolation and serological tests (complement fixation). Surveys in the affected region indicate that glanders has been present over the years, killing animals, although no official reports were made in 30 years (1969 to 1999). The disease remained in the region as a result of local management practices associated with the climate conditions, high humidity and temperatures. The difficulty to obtain adequate material for isolation can account for the absence of diagnosis. The authors emphasize that glanders is a zoonosis with high impact on public health, and the disease can go undiagnosed because physicians lack general knowledge about glanders, diagnosing it as some other infectious disease.

O mormo foi considerado extinto no Brasil até a notificação de diversos casos na Zona-da-Mata nordestina em 1999. A confirmação foi feita por isolamento bacteriano e provas sorológicas (fixação de complemento). Os estudos realizados naquela região demonstram que a doença sempre permaneceu no local matando animais apesar de que durante 30 anos (de 1969 até 1999), nenhum caso ter sido notificado. As características de manejo dos animais no local, associadas às condições climáticas de forte calor e umidade, foram determinantes para a permanência da patologia. A dificuldade de se obter material adequado para o isolamento, refletiu-se na ausência de diagnóstico. Os autores fazem uma revisão da literatura, descrevendo as características microbiológicas da bactéria, a sintomatologia, as lesões anatomopatológicas e os achados epidemiológicos na área geográfica afetada, lembrando que há casos notificados também em outras regiões do Brasil. Finalmente ressaltam que o mormo é uma zoonose de grande importância em saúde pública e que o desconhecimento geral pode levar os médicos a confundi-lo com outras doenças infecciosas.

Glanders / Mormo

Glanders was considered to be an exotic disease in Brazil until the official report of several cases in the Zona da Mata area in the Northeast. Confirmation was based on bacterial isolation and serological tests (complement fixation). Surveys in the affected region indicate that glanders has been present over the years, killing animals, although no official reports were made in 30 years (1969 to 1999). The disease remained in the region as a result of local management practices associated with the climate conditions, high humidity and temperatures. The difficulty to obtain adequate material for isolation can account for the absence of diagnosis. The authors emphasize that glanders is a zoonosis with high impact on public health, and the disease can go undiagnosed because physicians lack general knowledge about glanders, diagnosing it as some other infectious disease.

O mormo foi considerado extinto no Brasil até a notificação de diversos casos na Zona-da-Mata nordestina em 1999. A confirmação foi feita por isolamento bacteriano e provas sorológicas (fixação de complemento). Os estudos realizados naquela região demonstram que a doença sempre permaneceu no local matando animais apesar de que durante 30 anos (de 1969 até 1999), nenhum caso ter sido notificado. As características de manejo dos animais no local, associadas às condições climáticas de forte calor e umidade, foram determinantes para a permanência da patologia. A dificuldade de se obter material adequado para o isolamento, refletiu-se na ausência de diagnóstico. Os autores fazem uma revisão da literatura, descrevendo as características microbiológicas da bactéria, a sintomatologia, as lesões anatomopatológicas e os achados epidemiológicos na área geográfica afetada, lembrando que há casos notificados também em outras regiões do Brasil. Finalmente ressaltam que o mormo é uma zoonose de grande importância em saúde pública e que o desconhecimento geral pode levar os médicos a confundi-lo com outras doenças infecciosas.