Morfologia de órgãos genitais femininos de quelônio semi-aquático Mesoclemmys vanderhaegei / Morphology of the female genital organs of freshwater turtle Mesoclemmys vanderhaegei

O Mesoclemmys vanderhaegei (Testudines: Chelidae) é um quelônio de água doce cuja ocorrência é descrita nas bacias dos rios Amazonas, Tocantins, Paraguai, Paraná e Uruguai. Consta na lista vermelha de espécies ameaçadas da International Union for Conservation of Nature, como espécie de baixo risco, mas que poderá se tornar ameaçada, sendo necessário a atualização de seus dados ecológicos e biológicos. Considerando que planos de manejo e conservação de espécies dependem também de vasto conhecimento sobre a biologia reprodutiva, apresentamos a primeira descrição macroscópica dos órgãos genitais de fêmeas jovens e adultas de M. vanderhaegei correlacionando esses achados ao tamanho do espécime e ao período do ano. Exemplares de M. vanderhaegei foram coletados no município de Chapada dos Guimarães, área de ampla ocorrência natural da espécie. A descrição dos órgãos genitais foi realizada a partir de 17 fêmeas fixadas em formol a 10% e dissecadas para evidenciação de particularidades relacionadas à anatomia externa e interna. Os órgãos genitais M. vanderhaegei jovens e adultas são constituídos por pares de ovários e ovidutos que desembocam dorsolateralmente na cloaca, formando junto com o ureter a papila urogenital. Os ovários são órgãos alongados, com a extremidade cranial mais larga e caudal afunilada, já os ovidutos são longos e localizados lateralmente aos ovários, sendo em adultas, muito diferenciado na sua forma e tamanho em relação ao das jovens. Em ambas faixas etárias, os órgãos genitais são sustentados por pregas de membrana celomática que emergem do teto da cavidade, constituindo os mesovário e mesoviduto. De acordo com a forma e o padrão de mucosa do oviduto em fêmeas adultas, o segmento cranial corresponde as regiões do infundíbulo e magnum, o segmento médio, ao istmo e no caudal identificam-se as regiões útero e vagina. No assoalho do urodeum aloja-se o clitóris. O comprimento retilíneo de carapaça e massa corpórea entre fêmeas imaturas e adultas variam, respectivamente, entre 134-155,6mm e 134,43-365g. A maioria das fêmeas jovens foram capturadas no período chuvoso e as adultas sem e com ovos no período seco. As características macroscópicas dos órgãos genitais observadas em M. vanderhaegei são compartilhadas com outros Testudines, exceto pela papila urogenital e presença do clitóris.(AU)

Mesoclemmys vanderhaegei (Testudines: Chelidae) is a freshwater turtle with occurrence in Amazon, Tocantins, Paraguai, Paraná and Uruguai rivers basins. Although according to International Union for Conservation of Nature, it has low risk of extinction, there is an uptade necessity of ecological and biological data. Considering that the management and conservation plans are related to a wide knowledge of reproductive biology, a first macroscopic description about the young and adults females of M. vanderhaegei is important. These points were correlated to the specimens size and period of the year. The samples of M. vanderhaegei were collected in Chapada dos Guimarães county, Mato Grosso, Brazil, an area of large natural occurrence of the specimens. Genital organs of seventeen females were fixed in 10% formalin and then dissected to demonstrate the particularities related to external and internal anatomy. The young and adult M. vanderhaegei genitals organs are composed of ovaries and oviducts pairs that dorsolaterally discharge into the cloaca, forming with the ureter, the urogenital papilla. The ovaries are elongated organs with larger cranial and elongated caudal portions. The oviducts, which are in adults very differentiated in its shape and size compared to the young, are long and located laterally to the ovaries. In both age groups, the genital organs are supported by celomatic membrane folds that emerge from the ceiling of the cavity, constituting the mesovary and mesoviduct. In adult females, according to the shape and pattern of the oviduct mucosa, the cranial segment corresponds to the regions of the infundibulum and magnum; the middle segment, the isthmus and the caudal segment identify the uterus and vagina regions. The clitoris is sited on the floor of the urodeum. The carapace linear length and body mass between immature and adult females vary to 134-155.6mm e 134.43-365g respectively. The main part of young females was captured in rainy period and the adults, with and without eggs, at dry period. The macroscopic characteristics of the M. vanderhaegei genital organs are also observed in others Testudines, with the exception of urogenital papilla and by the clitoris presence.(AU)

Adição da proteína específica do oviduto de porcas (pOSP) e da melatonina em meios de maturação e o efeito na clivagem in vitro de embriões suínos / Addition of the oviduct specific protein of porcine (pOSP) and melatonin in maturation media and their effect on the in vitro production of pig embryos

No presente estudo, utilizou-se a melatonina e a proteína específica do oviduto (pOSP) nos meios de maturação in vitro. Foram avaliadas a expansão do complexo cumulus-ovócito (CCOs), as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o desenvolvimento embrionário nos diferentes grupos (C = controle; T1 = somente com melatonina; T2 = com melatonina e pOSP e T3 somente com pOSP). No tocante à expansão do CCOs, houve diferença (P<0,05) dos valores obtidos no grupo C em relação aos valores médios dos grupos T1, T2 e T3, porém não houve diferença entre os valores obtidos nos tratamentos (P>0,05). Na dosagem de ROS, não houve diferença entre os valores médios obtidos no grupo C (26,4±10,9) e o valor verificado no grupo T1 (23,4±7,8), porém no grupo T2 (21,3±9,7) o valor médio mostrou-se satisfatório em relação ao valor do grupo C. No entanto, o valor médio do grupo T3 (16,6±10,5) foi o que demonstrou resultado mais satisfatório quando comparado aos demais grupos (P<0,05). A produção de embriões foi avaliada por meio da taxa de clivagem. Não houve diferença (P >0,05) entre os valores obtidos entre o grupo C (48,9 %) e os valores verificados nos grupos T1 (51,5 %), T2 (50 %), T3 (57,7 %), nem destes entre si. Este estudo permitiu concluir que a proteína específica do oviduto recombinante e a melatonina foram eficientes em melhorar a expansão dos CCOs. Além disso, as células tratadas com pOSP mostraram-se com menor quantidade de ROS, podendo a pOSP ser considerada um antioxidante proteico.(AU)

The present study used melatonin and recombinant oviduct specific protein (pOSP) in in vitro maturation medium (IVM). The expansion of the cumulus-oocyte complexes (COCs), the intracellular concentrations of reactive oxygen species (ROS) and embryo development of the different groups were evaluated (C = control; T1 = melatonin; T2 = melatonin and pOSP and T3 = pOSP). Regarding the COCs expansion, the groups T1, T2 and T3 showed satisfactory results compared with group C (P<0.05), but there was no difference between treatments (P>0.05). In the ROS dosage, there was no difference between the mean values obtained in group C (26.4 ± 10.9) and group 1 (23.4 ± 7.8). However, in group 2 (21.3 ± 9.7), the average value was found to be satisfactory in relation group C. Despite that, the average value of treatment 3 (16.6 ± 10.5) was the most satisfactory result found compared to the other groups (P<0.05). The production of embryos was evaluated by cleavage rate, there was no difference between the values obtained in group C and the values recorded in groups T1 (51.5 %), T2 (50 %), T3 (57.7 %), and among them. This study showed that the pOSP and the melatonin were effective in the improvement of the expansion of COCs cells. In addition, the cells that were treated with pOSP presented a lower amount of ROS, allowing the pOSP to be considered a proteic antioxidant.(AU)

Desenvolvimento folicular e desempenho produtivo no início do ciclo de postura em duas raças de poedeiras / Follicular development and productive performance at the onset of production in two egg-laying breeds

Avaliaram-se as características reprodutivas de duas raças puras de poedeiras semipesadas. Foram utilizadas 800 fêmeas, 400 da raça Plymouth Rock White (PRW) e 400 da raça Plymouth Rock Barred (PRB) no período compreendido entre a 16ª e a 24ª semanas de idade, quando todas as aves tiveram o mesmo manejo e receberam água e ração ad libitum. Semanalmente, foram mensurados os parâmetros peso corporal, consumo alimentar, taxa de postura, conversão alimentar, peso dos ovos, peso de oviduto e número de folículos ovarianos. Foi utilizado um delineamento inteiramente casualizado (DIC) com dois tratamentos (PRW e PRB) e cinco repetições de oitenta aves cada, sendo que os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste "T" de Student a 5% de significância. Observou-se que na 24ª semana de idade as aves da raça PRW apresentaram uma maior taxa de postura (P=0,006) e melhor conversão alimentar (P=0,020), comparado às aves da raça PRB. As aves PRB apresentaram maior peso corporal, comparado ao peso das PRW, entretanto, o peso do oviduto em relação ao peso corporal na 24ª semana e o número de folículos grandes amarelos na 20ª semana de idade foram maiores nas aves da raça PRW, comparado com as aves da raça PRB (P=0,029). Aves poedeiras da raça PRW são mais eficientes nos parâmetros produtivos e apresentam o desenvolvimento do aparelho reprodutivo mais precoce em relação às aves da PRB.

It was evaluated the reproductive traits of two pure breed laying hens. There were used 800 females, 400 White Plymouth Rock (PRW) and 400 Barred Plymouth Rock pullets, from 16 to 24 week of age. Pullets were managed in the same manner and received water and feed ad libitum. Body weight, feed intake, hen-day egg production, feed conversion, egg weight, oviduct weight and number of ovarian follicles were weekly measured. It was used a completely randomized design with two breeds (PRW and PRB) and five replicates of 80 pullets. The data were submitted to ANOVA and means compared by Student's T test 5% of significance. At 24 weeks of age the PRW pullets had a higher egg production (P=0.006) and better feed conversion (P=0.020) than the PRBs. The PRBs presented higher body weight than the PRWs, however, the number of large yellow follicles at 20 weeks, and the relative oviduct weight at 24 weeks of age were greater in the PRW pullets (P=0.029). The PRW pullets were more efficient in the production parameters and were more precocious in the development of the reproductive tract than PRB pullets.

In vitro development of bovine embryos cultured under different fetal calf serum concentrations and cell types / Desenvolvimento in vitro de embriões bovinos cultivados sob diferentes concentrações de soro fetal bovino e tipos celulares

The present work was carried out to evaluate the in vitro development of bovine embryo co-cultured in granulosa, oviduct, BRL or VERO cells co-cultures, supplemented with 5% or 10% of Fetal Calf Serum (FCS). Cummulus oocyte complexes were aspirated, matured and fertilized in vitro. Embryonic structures were divided into eight treatments. They were placed in culture media TCM 199 containing granulosa, oviduct, BRL or VERO cells, each of them added with 5% or 10% FCS. The conditions for the co-culture were 38.5 ºC, 5% CO2 in air and high humidity for ten consecutive days. Cleavage, blastocyst and hatching rates did not differ (p > 0.05) in co-culture with primary cells (granulosa and oviduct) when FCS concentration increased from 5 to 10%. However, in continuous cells co-culture (BRL and VERO), when FCS concentration increased from 5% to 10%, the blastocyst development rate decreased significantly (p < 0.05) from 33.6 to 16.3% and from 40 to 16.5% in embryo co-culture with BRL and VERO cells, respectively.

O presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o desenvolvimento in vitro de embriões bovinos co-cultivados em células da granulosa, do oviduto, BRL e VERO, suplementados com 5% ou 10% de Soro Fetal Bovino (SFB). Os complexos cummulus oócitos foram aspirados, maturados e fecundados in vitro. As estruturas embrionárias foram divididas em oito tratamentos: co-cultivo em TCM 199 contendo células da granulosa, do oviduto, BRL ou VERO adicionadas com 5% ou 10% de SFB. As condições de cultivo foram 38.5 ºC, 5% CO2 em ar e alta humidade por dez dias consecutivos. Os índices de clivagem, blastocisto e eclosão não diferiram (p > 0,05) no co-cultivo com células primárias (granulosa e oviduto) quando a concentração de SFB aumentou de 5 para 10%. Entretanto, no co-cultivo com células de linhagens contínuas (BRL e VERO), quando a concentração de SFB aumentou de 5% para 10%, os índices de blastocistos diminuíram significativamente (p < 0,05) de 33,6 para 16,3 % e de 40 para 16,5% nos embriões bovinos co-cultivados com células VERO e BRL, respectivamente.

Histologia e morfometria das glândulas das junções infundíbulo-magno e útero-vagina de codorna doméstica / Histology and morphometry of the infundibulum-magnum and uterus-vaginal junctions of spotted quails

A análise comparativa das glândulas armazenadoras de espermatozóides das junções infundíbulo-magno e útero-vagina do oviduto da codorna Nothura maculosa foi realizada durante a fase reprodutiva. As aves foram eutanasiadas por inalação com éter etílico, após a pesagem. Após a laparotomia e o deslocamento cranial do esterno, foram coletadas amostras de dois centímetros da junção infundíbulo-magno e útero-vagina. Os fragmentos foram fixados em solução de Bouin por 24 horas e, posteriormente, banhos sucessivos de álcool 70 por cento foram aplicados sobre as amostras. Em seguida, as amostras foram desidratadas em uma série de concentração crescente de alcoóis (80, 90, 95 e 3x100 por cento), diafanizadas em xilol e incluídas em parafina. Cortes histológicos de sete micrômetros de espessura foram obtidos e corados pela técnica da Hematoxilina-eosina (HE), que foram analisados e fotomicrografados em um fotomicroscópio Olympus BX-50. Para a análise morfométrica, foram capturadas imagens das glândulas armazenadoras de espermatozóides da junção infundíbulo-magno e útero-vagina mediante o programa computacional "Image Pro Plus 4.1" da Cibernetics do Brasil, tornando-se possível a quantificação das mesmas. A mucosa da junção infundíbulo-magno apresentou pregas estreitas no infundíbulo e largas no magno, enquanto na junção útero-vagina mostrou-se amplamente pregueada na vagina e mais lisa na porção uterina. O número médio de glândulas armazenadoras de espermatozóides na junção infundíbulo-magno foi maior (11,7 glândulas) (P<0,01) que na junção útero-vagina (7,5 glândulas). Supõe-se que a abundância de glândulas armazenadoras de espermatozóides na junção infundíbulo-magno permite acesso mais rápido do ovócito, após a oocitação, ao espermatozóide armazenado, garantindo a fertilização.

The comparative analysis of sperm-host glands of infundibulum-magnum and uterus-vagina junctions of Nothura maculosa quail oviduct was done during the reproductive phase. The birds were euthanized with ethyl ether after weight data were taken. After abdominal laparotomy and cranial displacement of the breastbone, two centimeters samples of infundibulum-magnum and uterus-vagina junctions were collected. The samples were fixed in Bouin's solution for twenty four hours and later, successive baths of alcohol 70 percent were applied on samples and soon afterwards dehydrated in a series of grow concentration alcohols (80, 90, 95 and 3x100 percent), diaphanized in xylol and included on paraffin. Histological sections with seven micrometers thickness were obtained and stained on Haematoxylin-Eosin (HE) technique, then they were analyzed and photomicrographed in a photomicroscope Olympus BX-50. For the morphometry analysis, infundibulum-magnum junctions and uterus-vagina sperm host gland images were captured through a computacional program Image Pro Plus 4.1", Cibernetics Brazil, making it possible to quantify them. The mucosa of the infundibulum-magnum junction presented very narrow folds in the infundibulum and too large in the magnum, while in the uterus-vagina junction was observed widely folds mucous in the vagina and smoother in the uterine portion. The average of sperm host gland in the infundibulum-magnum junction was higher (11.7 glands) (P<0.01) compared to the uterus-vagina junction (7.5 glands). It is supposed that the abundance number of sperm host glands in infundibulum-magnum junction allows faster access of the oocyte, after the ovulation of the host spermatozoid ensuring the fertilization.

Cocultura de embriões Mus musculus com monocamadas de células de linhagens primária e contínua em um sistema sem fluxo externo de CO2 / Coculture of Mus musculus embryos with monolayers of primary and continuous lineages in a system without external CO2 flow

A eficiência de três monocamadas celulares (linhagem contínua - células Madin and Darby Bovine Kidney/ MDBK;linhagem primária - células de útero e de oviduto bovino) foi testada para verificar a existência de especificidade celular através do desenvolvimento de embriões, desde o estádio de duas células até o de mórula compacta, em um sistema de cocultura sem fluxo externo de CO2. Depois da seleçâo, os embriões (n = 343) foram aleatoriamente distribuídos em diferentes tubos de ensaio, os quais foram colocados a 37°C durante 72 horas. Após o período de cocultura, as porcentagens de mórulas compactas obtidas foram de 87,7 por cento em células de oviduto, 86,2 por cento na monocamada de células uterinas e 88,3 por cento na de células MDBK. Não foi observada diferen- ça significativa entre esses valores e, por isso mesmo, conclui-se que a especificidade celular não é importante para o desenvolvimento in vitro de embriões Mus musculus.

The efficiency of three monolayers (continuous lineage - Madin and Darby Bovine Kidney/ MDBK; primary lineage - bovine celisfrom uterus and oviduct) hás been tested to verify the celular specificity through development of two cells embryos until compact morulaes stage in a coculture system without continuous CO2 flow. The selected mouse embryos (n=343) were randomiy divided into three experimental groups andplaced in closed culture tubes mantained aí 37°C during 72 hours. After the co-culture period, the porcentages of compact morulaes were 87.7 percent in oviduct cells, 86.2 percent in uterus monolayer and 88.3 percent in MDBK cells. It was not observed significative difference between these results and it is possible to condude that celular specificity is not importam to enhance the In vitro development of Mus musculus embryos.