Protective effect of trans-nerolidol on vascular endothelial cell injury induced by lipopolysaccharides / Efectos protectores del trans-nerolidol en lesiones inducidas por lipopolisacáridos en células endoteliales vasculares

This article aimed to discuss the protection of trans - nerolidol on vascular endothelial cells (ECs) injured by lipopolysac charides. ECs were divided into four groups: normal, model, low and high dose trans - nerolidol treatment groups. The cell survival rate and the contents of NO in the cell culture supernatant were determined. The protein expression and transcript level of pe roxisome proliferator - activated receptor - γ (PPARγ), endothelial nitric oxide synthase (eNOS), and inducible nitric oxide synthase (iNOS) were determined by western blotting and RT - PCR respectively. Compared with the normal group, cell livability, protein e xpression and mRNA transcript level of PPARγ and eNOS decreased, NO contents, protein expression and mRNA transcript tlevel of iNOS increased in model group significantly. Compared with model group, all the changes recovered in different degree in treatmen t groups. Hence, it was concluded that trans - nerolidol can alleviate the ECs injuryby the regulation of iNOS/eNOS through activating PPARγ in a dose - dependent manner

Este artículo tiene como objetivo discutir la protección del trans - nerolidol en las células endoteliales vasculares (CE) dañadas por lipopolisacáridos. Las CE se di vidieron en cuatro grupos: normal, modelo, grupos de tratamiento con trans - nerolidol de baja y alta dosis. Se determinó la tasa de supervivencia de las células y los contenidos de óxido nítrico (NO) en el sobrenadante del cultivo celular. La expresión de p roteínas y el nivel de transcripción del receptor activado por proliferadores de peroxisomas - γ (PPARγ), el óxido nítrico sint et asa endotelial (eNOS) y el óxido nítrico sint et asa inducible (iNOS) se determinaron mediante western blot y RT - PCR, respectivamen te. En comparación con el grupo normal, la viabilidad celular, la expresión de proteínas y el nivel de transcripción de PPARγ y eNOS disminuyeron, los contenidos de NO, la expresión de proteínas y el nivel de transcripción de iNOS aumentaron significativam ente en el grupo modelo. En comparación con el grupo modelo, todos los cambios se recuperaron en diferentes grados en los grupos de tratamiento. Por lo tanto, se concluyó que el trans - nerolidol puede aliviar el daño en las CE regulando iNOS/eNOS a través d e la activación de PPARγ de manera dependiente de la dosis.

Underexpression of endothelial nitric oxide synthase leads to more severe pulmonary complex vascular lesions associated with HIV patients / La baja expresión de oxido nítrico sintetasa provoca mayor severidad en las lesiones vasculares complejas asociadas al VIH

Abstract Background: Despite increase in survival of human immunodeficiency virus (HIV) patients due to highly active antiretroviral therapy, non-infectious complications are still prevalent such as presentation of lung vasculopathy, even in asymptomatic patients. Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) is necessary to produce nitric oxide that causes pulmonary endothelial vasodilation. Participation of this protein in the pulmonary circulation in HIV patients has not been elucidated. This work studied the presence and expression of eNOS in pulmonary complex vascular lesions associated with HIV (PCVL/HIV). Methods: In lung tissues from patients who died from complications of HIV, we used immunohistochemistry and immune chemiluminescence (imageJ) to determine the different degrees of expression of eNOS in PCVL-HIV in comparison with non-PCVL/HIV. Reagents used were anti-eNOS and an automated system. All data are presented as mean and standard deviation. Differences were analyzed with Wilcoxon; p < 0.05 was accepted as statistically significant. Results: In 57 tissues, the histological evidence of pulmonary vasculopathy was showed as different types (proliferative, obliterative, and plexiform) and severe presentation of vasculopathy than non-PCVL/HIV. A statistically significant decrease of eNOS was observed in all PCVL/HIV tissue samples. Conclusion: eNOS has a relevant role in the pathogenesis of pulmonary vasculopathy in acquired immunodeficiency syndrome patients. It is necessary to determine in the future the participation of eNOS and other mechanisms involved in PCVL/HIV.

Resumen Antecedentes: A pesar del incremento en la sobrevivencia del paciente con virus de inmunodeficiencia humana (VIH) debido al uso del tratamiento antiretroviral altamente efectivo, las complicaciones no infecciosas siguen ocasionando vasculopatía pulmonar, aun en pacientes asintomáticos. La óxido nítrico sintetasa (ONSe) es necesaria para la producción de óxido nítrico la cual provoca vasodilatación pulmonar. La participación de esta proteína en la circulación pulmonar en los pacientes con VIH aún no se ha dilucidado. Este trabajo estudia la presencia y la expresión de ONSe en las lesiones vasculares pulmonares complejas asociadas al VIH (LVPC/VIH). Métodos: En tejidos pulmonares de pacientes que fallecieron por complicaciones del VIH, se utilizó inmunohistoquímica e inmunoquimioluminescencia (imageJ) para determinar los diferentes grados de expresión de la ONSe en LVPC/VIH. Los reactivos utilizados son anti-ONSe en sistema automatizado. Todos los datos son presentados en media y desviación estándar. Las diferencias son analizadas con la prueba de Wilcoxon; se aceptó como estadísticamente significativa una p < 0.05. Resultados: En 57 pacientes, la histología de la vasculopatía pulmonar mostró diferentes tipos (proliferativo, obliterativo y plexiforme) además de varias presentaciones de vasculopatía en tejidos no-LVPC/VIH. Se observó diferencia estadística en la disminución de ONSe en todos los tejidos LVPC/VIH. Conclusiones: La ONSe tiene un papel relevante en la patogénesis de la vasculopatía pulmonar en el VIH. Es necesario determinar en el futuro la participación de ONSe y otros mecanismos involucrados en LVPC/VIH.

Underexpression of endothelial nitric oxide synthase leads to more severe pulmonary complex vascular lesions associated with HIV patients.

Background: Despite increase in survival of human immunodeficiency virus (HIV) patients due to highly active antiretroviral therapy, non-infectious complications are still prevalent such as presentation of lung vasculopathy, even in asymptomatic patients. Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) is necessary to produce nitric oxide that causes pulmonary endothelial vasodilation. Participation of this protein in the pulmonary circulation in HIV patients has not been elucidated. This work studied the presence and expression of eNOS in pulmonary complex vascular lesions associated with HIV (PCVL/HIV). Methods: In lung tissues from patients who died from complications of HIV, we used immunohistochemistry and immune chemiluminescence (imageJ) to determine the different degrees of expression of eNOS in PCVL-HIV in comparison with non-PCVL/HIV. Reagents used were anti-eNOS and an automated system. All data are presented as mean and standard deviation. Differences were analyzed with Wilcoxon; p < 0.05 was accepted as statistically significant. Results: In 57 tissues, the histological evidence of pulmonary vasculopathy was showed as different types (proliferative, obliterative, and plexiform) and severe presentation of vasculopathy than non-PCVL/HIV. A statistically significant decrease of eNOS was observed in all PCVL/HIV tissue samples. Conclusion: eNOS has a relevant role in the pathogenesis of pulmonary vasculopathy in acquired immunodeficiency syndrome patients. It is necessary to determine in the future the participation of eNOS and other mechanisms involved in PCVL/HIV.

Antecedentes: A pesar del incremento en la sobrevivencia del paciente con virus de inmunodeficiencia humana (VIH) debido al uso del tratamiento antiretroviral altamente efectivo, las complicaciones no infecciosas siguen ocasionando vasculopatía pulmonar, aun en pacientes asintomáticos. La óxido nítrico sintetasa (ONSe) es necesaria para la producción de óxido nítrico la cual provoca vasodilatación pulmonar. La participación de esta proteína en la circulación pulmonar en los pacientes con VIH aún no se ha dilucidado. Este trabajo estudia la presencia y la expresión de ONSe en las lesiones vasculares pulmonares complejas asociadas al VIH (LVPC/VIH). Métodos: En tejidos pulmonares de pacientes que fallecieron por complicaciones del VIH, se utilizó inmunohistoquímica e inmunoquimioluminescencia (imageJ) para determinar los diferentes grados de expresión de la ONSe en LVPC/VIH. Los reactivos utilizados son anti-ONSe en sistema automatizado. Todos los datos son presentados en media y desviación estándar. Las diferencias son analizadas con la prueba de Wilcoxon; se aceptó como estadísticamente significativa una p < 0.05. Resultados: En 57 pacientes, la histología de la vasculopatía pulmonar mostró diferentes tipos (proliferativo, obliterativo y plexiforme) además de varias presentaciones de vasculopatía en tejidos no-LVPC/VIH. Se observó diferencia estadística en la disminución de ONSe en todos los tejidos LVPC/VIH. Conclusiones: La ONSe tiene un papel relevante en la patogénesis de la vasculopatía pulmonar en el VIH. Es necesario determinar en el futuro la participación de ONSe y otros mecanismos involucrados en LVPC/VIH.

Arginina y cáncer: implicaciones en la regulación de la respuesta antitumoral / Arginine and cancer: Implications in the regulation of antitumoral response

Los informes de la literatura apoyan el papel de la arginina como mecanismo regulador de la respuesta inmune. Se ha descrito la correlación entre disminución de la arginina y reducción de la proliferación y la activación de los linfocitos T en trasplante hepático, trauma grave, sepsis y cáncer. Entre los efectos se describen la disminución en la expresión de la cadena CD3z (traducción de la señal de activación en el linfocito T). La disminución de la arginina está relacionada con la producción de arginasa 1 (ARG1) por parte de las células mieloides supresoras. Se han propuesto dos posibles mecanismos por medio de los cuales el aumento de la actividad de ARG1 podría estar actuando en un proceso tumoral. El primero es la disminución de la proliferación de los linfocitos y el freno del ciclo celular. El segundo es promover el crecimiento tumoral al transformar la arginina en precursores de poliaminas. Se presentan en este artículo los principales conceptos del papel de la arginina en la respuesta antitumoral.

Recent findings support the potential role of arginine as a regulator of the immune response. Correlation between decreased arginine and decreased proliferation and activation of T lymphocytes has been described in liver transplantation, severe trauma, sepsis and cancer. Among the effects, decrease in the CD3z chain expression (activation signal in the T cell) has been described. Arginine is reduced in relation to the production of arginase 1 (ARG1) by myeloid suppressor cells. Two possible mechanisms have been postulated by which the increased activity of ARG1 could be acting on a tumor. The first is the reduction of lymphocyte proliferation and cell cycle arrest. The second is to promote tumor growth by transforming arginine in precursors of polyamines. We present in this article the main concepts on the role of arginine in antitumor response.

Producción de anticuerpos policlonales IgG contra una proteína con actividad de óxido nítrico sintetasa de Toxoplasma gondii recombinante (NOS-Tg-r) y marcación inmunológica en taquizoítoso / Production of Polyclonal Antibodies against Toxoplasma gondii Recombinant protein with Nitric Oxide Synthase activity and immunologic marking in Tachyzoites

La enzima óxido nítrico sintetasa ha sido estudiada en mamíferos; en los últimos años se ha descrito que existe también en protozoos, pero se desconocen aspectos importantes de su función. Se logró producir anticuerpos policlonales contra la proteína recombinante con actividad de óxido nítrico sintetasa (NOS-Tg-r) de Toxoplasma gondii y realizar marcación inmunológica en taquizoítos. Se usaron dos conejos Nueva Zelanda (Oryctolagus cuniculus)que se inmunizaron por vía intramuscular con NOS-Tg-r, y dos tipos de adyuvantes, hidróxido de aluminio y adyuvante de Freund. Se comprobó la presencia de anticuerpos policlonales con la técnica de ensayo inmunoenzimático indirecto. Los resultados obtenidos mostraron que a NOS-Tg-r con adyuvante de Freund indujo mayor respuesta inmune que la de la NOS-Tg-r con hidróxido aluminio p 0,005). Para verificar si había reacción cruzada, se realizó una prueba ELISA utilizando como antígenos: metaloproteasa de T. gondii recombinante, cisteína proteasa 5 de Entamoeba histolytica recombinante, albúmina al 2%, hidróxido de aluminio y adyuvante de Freund. Los valores obtenidos con sueros preinmunes y contra proteínas alternas no superaron el punto de corte (0,069), lo cual indica que los anticuerpos policlonales obtenidos son específicos para NOS-Tg-r. Se realizó marcación inmunológica en taquizoítos de Toxoplasma gondii con inmunofluorescencia indirecta que mostró una marcación difusa a nivel de citoplasma y confirmó la presencia de esta proteína en los taquizoítos.

The nitric oxide synthase (NOS)is an enzyme well described on mammals but little is known about the role of these enzymes on pathogenic parasites. We produced polyclonal antibodies against a recombinant NOS enzyme from Toxoplasma gondii nd e lso er formed n mmunol locali zation of the enzyme on tachyzoites. We used two New Zealand rabbits (Oryctolagus cuniculus) to perform intramuscular immunization and we used two types of adjuvant: aluminum hydroxide and Freund ’s adjuvant. We tested the generation of polyclonal antibodies by an indirect ELISA assay. The results showed that levels of antibodies were higher in rabbits immunized with Freund ’s adjuvant than with aluminum hydroxide (p =0.005). In order to test cross reactions, we used a recombinant Toxoplasma metallooprotease, a recombinant cysteine protease from Entamoeba histolytica, albumin 2%, hydroxide aluminium and Freund ’s adjuvant as antigens on indirect ELISA assays for the polyclonal serum antibodies. No serum showed absorbances higher than the cutoff level with these antigens, indicating that the polyclonal antibodies were specific for recombinant Toxoplasma NOS. Additionally, we performed immunodetection of the enzyme on Toxoplasma gondii tachyzoites and we obtained a diffuse labeling of the parasite.

Oxido nítrico: implicaciones fisiopatológicas / Nitric oxide: physiopathological implications

El oxido nítrico y el factor relajante del endotelio fueron consideradas la misma molécula moduladora del tono vascular a través de la formación estimulada de guanosina 3, 5 monofosfato. El oxido nítrico (NO) se produce durante la conversión de L-arginina a L-citrulina por las isoformas de oxido nítrico sintetasa (NOS), es un gas que modula varias funciones incluyendo la relajación del mùsculo liso, neurotransmisión, la citotoxicidad celular inmune, mecanismo de accion de agentes anestesicos y vias de nocicepcion. Esta revisión considera las acciones biológicas del oxido nítrico.

Nitric oxide and endothelium-derived relaxing factor were considered a single entity, modulating vascular tone through the stimulated formation of cyclic guanosine 3',5'-monophosphate. Nitric oxide (NO), produced during the conversion of L-arginine to L-citrulline by NO synthase (NOS) isoforms, is a gaseous that mediates various functions, including smooth muscle relaxation, neurotransmission, immune cell cytotoxicity, effects of anesthetic agents and nociceptive pathways. This review will consider the biologic actions of nitric oxide.

Respuesta hipotensora al tratamiento agudo con péptido natriurético auricular: su relación con la expresión y la actividad de la óxido nítrico sintetasa cardíaca en ratas espontáneamente hipertensas / Hypotensive Response to Acute Treatment with Atrial Natriuretic Peptide: Its Relationship with Cardiac Nitric Oxide Synthase Expression and Activity in Spontaneously Hypertensive Rats

Introducción El péptido natriurético auricular (ANP) y el óxido nítrico (NO) aumentan la diuresis y la natriuresis y disminuyen el tono vascular. Previamente demostramos que el NO está involucrado en el efecto hipotensor del ANP en ratas normotensas. Objetivo Estudiar el efecto del ANP sobre la presión arterial media (PAM) y el sistema del NO en ratas espontáneamente hipertensas (SHR) y Wistar Kyoto (WKY) y la participación de la isoforma inducible de la NO-sintasa (iNOS). Material y métodos Protocolo 1: los animales fueron infundidos con solución salina (0,05 ml/min) o con ANP (0,2 µg/kg/min) durante 1 hora. Se determinaron: PAM y nitritos y nitratos urinarios (NOx). Se extrajo el corazón y se determinaron la actividad, con L-[U14C]-arginina, y la expresión (Western blot) de iNOS y NOS endotelial (eNOS). Protocolo 2: luego del agregado de ANP (1 µM), cANP(4-23) (agonista NPR-C,1µM) o aminoguanidina (inhibidor de iNOS, 1 µM) se determinó la actividad de la NOS en la aurícula derecha y en el ventrículo izquierdo de SHR y WKY. Resultados La infusión con ANP disminuyó la PAM y aumentó los NOx en ambos grupos. La actividad NOS fue mayor en SHR y se incrementó con la infusión de ANP. Se observaron niveles proteicos mayores para eNOS e iNOS en SHR, que no se modificaron con ANP. La actividad basal de iNOS fue mayor en SHR. En la aurícula, el ANP sólo interactuaría con el NPR-C para activar la NOS y en el ventrículo también participarían los receptores NPR-A/B. El desarrollo y/o el mantenimiento de la hipertensión en este modelo experimental involucraría alteraciones en la interacción entre ambos sistemas, ANP y NO.

Background Atrial natriuretic peptide (ANP) and nitric oxide (NO) increase diuresis and natriuresis and reduce vascular tone. We have previously demonstrated that NO is involved in ANP hypotensive effect in normotensive rats. Objective To assess the effect of ANP on mean blood pressure (MBP) and on NO system in spontaneously hypertensive rats (SHR) and Wistar Kyoto (WKY), and the role of the inducible isoform of nitric oxide synthase (iNOS). Material and Methods Protocol 1: animals were instilled with saline solution (0.05 ml/min) or with ANP (0.2 µg/kg/min) for an hour. MBP and urinary nitrites and nitrates (NOx) were assessed. The heart was extracted and iNOS and endothelial iNOS (eNOS) activity (with L-[U14C]-arginine) and expression (Western blot) were determined. Protocol 2: after adding ANP (1 µM), cANP(4-23) (NPR-C agonist, 1µM) or aminoguanidine (iNOS inhibitor, 1 µM) NOS activity in the right atrium and left ventricle of SHR and WKY was determined. Results Instillation with ANP reduced MBP and increased NOx in both groups. NOS activity was greater in SHR, and increased with the instillation of ANP. In SHR, greater eNOS and iNOS protein levels were observed, which were not modified by ANP. iNOS basal activity was greater in SHR. In the atrium, ANP interacts only with NPR-C in order to activate NOS, and NPR-A/B receptors would also take part in the ventricle. In this experimental model, the development and maintenance of hypertension could involve alterations in the interaction between both systems, ANP and NO.