ABSTRACT
Las células de Schwann (CS) son la glía de sistema nervio periférico. El diseño de prótesis nerviosas se ha centrado en la producción de CS autólogas cultivadas a partir de nervios ciáticos (NC) y de ganglios de la raíz dorsal (GRD). Muy poca literatura reporta cultivo de células perineurales (CP) y fibroblastos endoneurales (FE), y no son consideradas como elementos a incluir en una prótesis. En este trabajo, se describe la importancia de la microdisección del nervio ciático y de los GRD para obtener cultivos de CS, FE y CP con 98%±2 de purificación. Las CS crecen sobre diferentes soportes, con y sin mitógenos. Se obtuvo un porcentaje de CS elevado cuando se elimina el epineuro y perineuro de los NC 90%±3 y la cápsula de los GRD 94%±3 antes de la disociación enzimática, comparado a 70%±4,2 sin microdisección u 80%±3,5 sin epineuro. Los FE se adhieren preferencialmente en las primeras 24 h y 20% de suero favorece su crecimiento. En el primer sub-cultivo, son 99% CS o FE, siendo confluentes a los 6 y 8 días respectivamente. Las CP o de la cápsula de GRD no se disocian y no crecen en sub-cultivos, únicamente crecen a partir de explantes de perineuro; no forman monocapa sino una "lámina" de múltiples capas celulares. En conclusión, la microdisección del GRD y del NC y su disociación son indispensables para obtener en pocos días CS, FE y CP de animales adultos en cultivos altamente purificados.
The Schwann cells (SC) are glial of system peripheral nerve. The nervous prostheses are related to the production of autologous SC obtained from the peripheral nervous and from the dorsal root ganglia (DRG). There is a small amount of literature that reports perineural cells (PC) and endoneural fibroblast (EF) cultures as elements to take account of prostheses. In this work, the micro dissection importance is described in the sciatic nerve (SN) and in the DRG to achieve SC, EF and PC culture with a purity of 98%. The SC grows up on different supports with and without mitogens. An elevated percentage of SC was obtained when the epineurium and the perineurium were removed in the SN (90%±3) and in the GRD (94%±3) before the enzymatic dissociation compared to seventy percentage when the micro dissection was omitted or eighty percentage without the epineurium micro dissection. The EF was adhered in the first twenty four hours and the twenty percentage of serum improved their growth. In the first passage, there is 99 percentage SC or EF, and they get the confluence in the six and eight day, respectively. The PC or the cells of the DRG don´t have neither a good dissociation, nor a growth in subcultures, they only grow from the perineurium explants that forms a lamina of several cellular layers more than a monolayer. In conclusion, the DRG and SN micro dissection and dissociated are indispensable to acquire in few days SC, EF and PC cultures with a high purity from adult animals.