Detección molecular de patotipos de Escherichia coli productores de enfermedad diarreica aguda en niños en un hospital de Rosario, Argentina: patotipos de Escherichia coli en niños / Molecular detection of Escherichia coli pathotypes associated to acute diarrheal disease in children in a hospital in Rosario, Argentina: Escherichia coli pathotypes in children

Objetivo: Detectar los patotipos de Escherichia coli en una población pediátrica con enfermedad diarreica aguda en la ciudad de Rosario para adoptar medidas de intervención oportunas y eficaces en Salud Pública. Materiales y métodos: Se estudiaron 360 muestras de heces de niños menores de 15 años que presentaron cuadro diarreico agudo y que concurrieron a un hospital pediátrico de la ciudad de Rosario, Argentina. La investigación se realizó desde enero de 2021 a abril del 2022. La detección de patotipos se realizó mediante reacción en cadena de la polimerasa. Resultados: Se identificaron el 21.11% de Escherichia coli diarrogénicas (DEC). Se detectaron los genes de virulencia correspondientes a: E. coli enteroagregativa (EAEC) (42,10%), E. coli enteroinvasiva (EIEC) (23.68%), E. coli enterotoxigénica ETEC) (14.47%), E. coli enteropatógena (EPEC) (15.79%) y E. coli enterohemorrágica (EHEC) (1.32%). Se detectaron infecciones mixtas por EAEC/EPEC (1.32%) y ETEC/EAEC (1.32%). Conclusiones: Los métodos de diagnóstico moleculares son una herramienta fundamental en el estudio de la epidemiologia de las enfermedades diarreicas aguda. Más aún, su implementación resulta primordial para identificar del agente etiológico de DEC, disminuir la diseminación de estos patógenos y reducir así la morbi-mortalidad asociada a las diarreas en la población pediátrica.

Objective: Detect Escherichia coli pathotypes in a pediatric population with acute diarrheal disease in the city of Rosario to adopt timely and effective intervention measures in Public Health. Material and methods: A total of 360 fecal samples from pediatric patient with ADD and who attended in a pediatric hospital in Rosario, Argentina, were studied. The research was carried out from January 2021 to April 2022. The identification of pathotypes was carried out by polymerase chain reaction. Results: 21.11% diarrheagenic Escherichia coli (DEC) strains were identified. The virulence genes corresponding to all the pathotypes studied were detected: enteroaggregative E. coli (EAEC) (42.10%), enteroinvasive E. coli (EIEC) (23.68%), enterotoxigenic E. coli (ETEC) (14.47%), enteropathogenic E. coli (EPEC) (15.79%) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC) (1.32%). Mixed EAEC/EPEC (1.32%) and ETEC/EAEC (1.32%) infections were detected. Conclusions: Molecular diagnostic methods are a fundamental tool in the study of the epidemiology of acute diarrheal disease. The application of these techniques is essential to identify the etiological agent of DEC, reduce the spread of these pathogens and thus reduce morbidity and mortality associated with diarrhea in the pediatric population.

Investigação das características moleculares e filogenéticas dos isolamentos de Pythium insidiosum em casos de ceratite / Investigation of the molecular and phylogenetic characteristics of Pythium insidiosum isolates in cases of keratitis

Introdução: Pythium insidiosum é um microrganismo fenotipicamente semelhante aos fungos com hifas, mas este oomyceto pertencente ao filo Straminofila, filogeneticamente separado dos fungos verdadeiros. Usando metodologias moleculares, isolados de P. insidiosum foram colocados em três grupos filogenéticos de acordo com sua distribuição geográfica. Mais recentemente, quatro grupos filogenéticos foram relatados. Pythium insidiosum é capaz de causar infecções graves em humanos. Pode acometer os olhos na forma de ceratites e infecções dos tecidos adjacentes que ameaçam não apenas a visão, mas também a vida do paciente. Devido ao desenvolvimento de hifas, frequentemente a infecção por esse patógeno é confundida e diagnosticada erroneamente como infecção fúngica. Objetivo: Investigar as características moleculares e filogenéticas dos isolamentos de P. insidiosum recuperados de quatorze amostras coletadas na Índia em casos de ceratite. Materiais e Métodos: Foram avaliados quatorze isolamentos de P. insidiosum dos quais foram extraídos o DNA e, então, realizados PCR com primers universais. Prosseguiu-se com amplificação das sequências utilizando Internal Transcriber Spacers (ITS) e Citocromo C Oxidase subunidade II (COXII). As análises filogenéticas subsequentes, utilizando as sequências de ITS e COXII, foram analisadas pelo método estatístico Neighbor Joining (MEGAX). Resultados: As árvores filogenéticas usando as sequências de DNA amplificadas (ITS e COXII) mostraram resultados análogos. As sequências provenientes dos quatorze isolamentos analisados foram especificamente colocadas, com alto suporte de bootstrap, no grupo II (Ásia, Austrália e África) e no grupo IV (Tailândia, Israel), de acordo com a divisão atual de P. insidiosum. Do total dos quatorze isolamentos, dez foram colocados no grupo II e quatro no grupo IV. Interessantemente, nenhum dos isolamentos foi colocado nos grupos I e III (Américas). Foi possível comprovar que os dez isolados neste estudo foram identificados como P. insidiosum comprovando a hipótese inicial. No entanto, como foi postulado anteriormente, ao avaliar as quatro sequências localizadas no grupo IV a existência de uma espécie inteiramente nova é fortemente suportada. Para confirmar essa hipótese, são necessários novos estudos baseados em análises estatísticas. Conclusão: Pacientes com ceratite resistente ao tratamento convencional, de rápida evolução, com cultura de padrão de crescimento com presença de micélios submersos aderidos ao ágar devem alertar sobre a possibilidade de infecção por P. insidiosum. Para a confirmação de possíveis isolados de P. insidiosum, técnicas moleculares devem ser realizadas. Esses foram os passos seguidos no presente estudo tornando possível a identificação do agente etiológico das ceratites da Índia como P. insidiosum. Além disso, as técnicas filogenéticas usadas neste e em outros estudos, sugeriram a possibilidade de uma nova espécie dentro do complexo P. insidiosum, o que provavelmente é uma das contribuições mais importantes deste estudo.

Introduction: Pythium insidiosum is a microorganism phenotypically like fungi with hyphae, but this oomycete belongs to the phylum Straminopila phylogenetically away from true fungi. Using molecular methodologies, isolates of P. insidiosum were placed in three phylogenetic groups according to their geographic distribution. More recently, four phylogenetic groups were reported. Pythium insidiosum can cause serious infections in humans. It can affect the eyes in the form of keratitis and infections of adjacent tissues that threaten not only the eyesight, but also the patient's life. Due to the development of hyphae, infection with this pathogen is often mistaken and misdiagnosed as a fungal infection. Objective: To investigate the molecular and phylogenetic characteristics of the isolates of P. insidiosum recovered from fourteen samples collected in Indian cases of keratitis. Materials and Methods: Fourteen P. insidiosum isolates were evaluated, from which DNA was extracted and then PCR with universal primers was performed. PCR amplification was performed using Internal Transcriber Spacers (ITS) and Cytochrome C Oxidase S subunit II (COXII) primers and subsequently sequenced. Phylogenetic analyzes, using the aligned ITS and COXII sequences, were analyzed by the Neighbor Joining method (MEGAX). Results: Phylogenetic trees using the amplified DNA sequences (ITS and COXII) showed similar results. The DNA sequences from the fourteen analyzed isolates were specifically placed, with high bootstrap support, in group II (Asia, Australia and Africa) and in group IV (Thailand, Israel), according to the current phylogenetic cluster classification of P. insidiosum. Of the fourteen isolates, ten were placed in cluster II, and four of them in cluster IV. Interestingly, none of the isolations were placed in clusters I and III (The Americas). The ten isolates in this study were identified as P. insidiosum, which support the initial hypothesis. As was previously postulated, this study found that the four Indian DNA sequences located in cluster IV represent an entirely new specie. To confirm this finding, further studies based on statistical analysis are needed. Conclusion: Patients with keratitis of rapid clinical progression, resistant to conventional treatment, with the presence of submerged mycelia adhered to the agar should alert clinicians about the possibility of infection caused by P. insidiosum. To identify possible P. insidiosum isolates, molecular techniques must be performed. Molecular and phylogenetic analyses were used in the present study making it possible to identify the etiological agent of keratitis in India as P. insidiosum. In addition, phylogenetic analyses in this and other studies, suggested the possibility of a new species within P. insidiosum complex, which is probably one of the most important contributions of this study.

Prevalencia de la infección por Mycoplasma genitalium en mujeres embarazadas / Prevalence of Mycoplasma genitalium infection in pregnant women / Prevalência da infecção por Mycoplasma genitalium em gestantes

Resumen Durante los últimos 5-10 años se ha considerado a Mycoplasma genitalium como un agente emergente de infecciones de transmisión sexual. Su papel en el embarazo ha sido poco estudiado. La prevalencia en la Argentina es desconocida. El objetivo del trabajo fue determinar la prevalencia de M. genitalium en muestras endocervicales de mujeres embarazadas que concurrieron a un control ginecológico. La metodología utilizada para la detección fue una PCR de punto final que amplifica una secuencia específica del gen mgpB. Se estudiaron 270 mujeres embarazadas entre 15 y 42 años. La prevalencia global de M. genitalium fue de 5,2% (14/270). De las sintomáticas el 10% eran positivas (9/90) y de las pacientes asintomáticas 2,8% eran positivas (5/180). El 1,5% (4/270) presentó coinfección con Chlamydia trachomatis. Todas cursaban un embarazo de más de 12 semanas. Este es el primer trabajo de prevalencia de M. genitalium realizado en mujeres embarazadas en la Argentina. Se necesitan más estudios de asociación entre este microorganismo y las complicaciones en el embarazo para avanzar hacia la prevención y el control de esta infección.

Abstract Mycoplasma genitalium has been considered an emerging agent of sexually transmitted infections for the past 5-10 years. Its association with agent of non-gonococcal urethritis in men is well recognized. In women it has been linked to cervicitis, endometritis and pelvic inflammatory disease. Its role in pregnancy has been poorly studied. In Argentina, the prevalence is unknown. The objective of this work was to determine the prevalence of M. genitalium in endocervical samples of pregnant women who attended a gynecological control. An end-point PCR was used to amplify a specific sequence of the mgpB gene. A group of 270 pregnant women between 15 and 42 years were studied. The overall prevalence of M. genitalium was 5.2% (14/270). Among the symptomatic patients, 10% were positive (9/90), whereas among the asymptomatic patients, 2.8% were positive (5/180). Only 1.5% (4/270) presented co-infection with Chlamydia trachomatis. This is the first prevalence study on M. genitalium performed on pregnant women in Argentina. More studies are needed to understand the relationship between this microorganism and complications during pregnancy, in order to prevent and control this infection in women.

Resumo O Mycoplasma genitalium tem sido considerado um agente de infecções sexualmente transmissível emergente nos últimos 5 a 10 anos. Seu papel na gravidez tem sido pouco estudado. Na Argentina, a prevalência é desconhecida. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de M. genitalium em amostras endocervicais de gestantes que realizaram controle ginecológico. Uma PCR de ponto final foi utilizada como metodologia para a detecção, que amplifica uma sequência específica do gene mgpB. Um grupo de 270 gestantes entre 15 e 42 anos foi estudado. A prevalência geral de M. genitalium foi de 5,2% (14/270). Entre as pacientes sintomáticas, 10% foram positivas (9/90), ao passo que entre as assintomáticas, 2,8% foram positivas (5/180). Apenas 1,5% (4/270) apresentou coinfecção por Chlamydia trachomatis. Todas as mulheres estudadas estavam grávidas fazia mais de 12 semanas. Este é o primeiro estudo de prevalência sobre M. genitalium realizado em mulheres grávidas na Argentina. Mais estudos de associação entre esse microorganismo e as complicações na gravidez são necessários, a fim de avançar na prevenção e no controle desta infecção.

Surveillance of phlebotomine fauna and Didelphis marsupialis (Didelphimorphia: Didelphidae) infection in an area highly endemic for visceral leishmaniasis in Colombia / Vigilancia de la fauna flebotomínea e infección de Didelphis marsupialis (Didelphimorphia: Didelphidae) en un área de alta endemia de leishmaniasis visceral en Colombia

Abstract Introduction: The study of the interaction between the parasite, the vector and the mammalian hosts, including man, allows to understand the behavior of the leishmaniases. Objective: To determine the presence of Lutzomyia species and to detect the Leishmania infection in Didelphis marsupialis in an endemic area for visceral leishmaniasis. Materials and methods: Phlebotomine fauna and individuals of D. marsupialis were collected with CDC and Tomahawk™ traps, respectively. The species of Lutzomyia were identified using the Young and Duncan key (1994). Ear and tail biopsies and blood samples from D. marsupialis were taken to identify the Leishmania species by amplifying a fragment of the gene associated with the 70 kD heat shock protein. Results: Seven Lutzomyia species were identified: Lu. evansi, Lu. gomezi, Lu. panamensis, Lu. dubitans, Lu. cayennensis cayennensis, Lu. rangeliana and Lu. trinidadensis. The first three species have epidemiological importance in Colombia because of their implications in the transmission of the Leishmania parasite. Sixty-five tissue samples from 19 D. marsupialis individuals were negative for Leishmania spp. Conclusions: The presence of the Lutzomyia species that have been identified as vectors for Leishmania inside and around houses in the village of El Bledo, in El Carmen de Bolívar represents a risk of infection. Furthermore, the presence of Lu. panamensis is reported for first time in El Carmen de Bolívar in Colombia. Although the lack of detection of Leishmania spp. in D. marsupialis samples may suggest that D. marsupialis does not play an important role in the transmission cycle of Leishmania in this region, it is necessary to carry out further longitudinal studies to confirm this hypothesis.

Resumen Introducción. El estudio de la interacción entre el parásito, el vector y los huéspedes mamíferos, incluido el hombre, permite entender el comportamiento de la leishmaniasis. Objetivo. Determinar la presencia de especies del género Lutzomyia y detectar la infección por Leishmania spp. en Didelphis marsupialis en un área endémica de leishmaniasis visceral. Materiales y métodos. Se recolectaron flebotomíneos y D. marsupialis con trampas CDC y Tomahawk™, respectivamente. Las especies de Lutzomyia se identificaron usando la clave de Young y Duncan, 1994. Se tomaron biopsias de oreja, cola y muestras de sangre de D. marsupialis para diagnosticar Leishmania spp. mediante la amplificación de un fragmento del gen de la proteína de choque térmico de 70 kD. Resultados. Se identificaron siete especies de Lutzomyia: Lu. evansi, Lu. gomezi, Lu. panamensis, Lu. dubitans, Lu. cayennensis cayennensis, Lu. rangeliana y Lu. trinidadensis. Las tres primeras especies son reconocidas como vectores en el país por estar implicadas en la transmisión de Leishmania spp. En total, 65 muestras de tejidos de oreja, cola y de sangre provenientes de 19 D. marsupialis fueron negativas para Leishmania spp. en la PCR-HSP70. Conclusiones. La presencia de flebotomíneos con importancia epidemiológica en la zona evaluada representa un riesgo de transmisión. Asimismo, Lu. panamensis es reportada por primera vez en El Bledo (Carmen de Bolívar). La ausencia de Leishmania spp. en D. marsupialis podría sugerir que esta especie no tiene un papel importante en el ciclo de transmisión de Leishmania en la vereda El Bledo, por lo que es necesario profundizar en estudios longitudinales para corroborar esta hipótesis.

Evaluation of Serological and Molecular Tests Used for the Identification of Toxoplasma gondii Infection in Patients Treated in an Ophthalmology Clinic of a Public Health Service in São Paulo State, Brazil.

Ocular toxoplasmosis is one of the most common complications caused by the infection with the parasite Toxoplasma gondii. The risk of developing eye lesions and impaired vision is considered higher in Brazil than other countries. The clinical diagnosis is difficult and the use of sensitive and specific laboratorial methods can aid to the correct diagnosis of this infection. We compared serological methods ELISA and ELFA, and molecular cPCR, Nested PCR and qPCR for the diagnosis of T. gondii infection in groups of patients clinically evaluated with ocular diseases non-toxoplasma related (G1 = 185) and with lesions caused by toxoplasmosis (G2 = 164) in an Ophthalmology clinic in Brazil. Results were compared by the Kappa index, and sensitivity (S), specificity (E), positive predictive value (PPV), and negative (NPV) were calculated. Serologic methods were in agreement with ELISA more sensitive and ELFA more specific to characterize the acute and chronic infections while molecular methods were discrepant where qPCR presented higher sensitivity, however, lower specificity when compared to cPCR and Nested PCR.

Molecular detection of candida species from hospitalized patient's specimens. / Detección molecular de especies de Candida en especímenes de pacientes hospitalizados.

Objective: To identify the most frequent Candida species in specimens from patients hospitalized in different medical centers of Mexico City, with suspected fungal infection. Methods: Specimens were grown on Sabouraud dextrose agar at 28°C for 72 h. In addition, DNA was extracted. Isolates were grown on CHROMagar Candida™, at 37°C for 48 h. The molecular identification was performed by polymerase chain reaction (PCR) using primers specific for four species. Results: Eighty one specimens were processed and included: bronchial lavage, pleural, cerebrospinal, peritoneal, ascites and bile fluids; blood, sputum, bone marrow, oro-tracheal cannula and ganglion. By culture, 30 samples (37%) were positive, and by PCR, 41 (50.6%). By PCR, the frequency of species was: Candida albicans 82.9%, Candida tropicalis 31.7%, Candida glabrata 24.4%, and Candida parapsilosis 4.9%. In 34.1% of specimens a species mixture was detected suggesting a co-infection: Two species in five specimens (C. albicans-C tropicalis and C. albicans-C glabrata), and three species in three specimens (C. albicans-C. glabrata-C. tropicalis). Conclusions: The PCR is an useful tool for detection the most common Candida species causing infection in hospitalized patients, it avoids the requirement of culture weather we start from clinical specimen and it favors the early diagnosis of invasive candidiasis.

Determinación de Leucosis Enzoótica Bovina Mediante las Claves Hematológicas de Göttingen y Elisa en Boyacá, Colombia / Enzootic Bovine Leukosis Assessment by Hematology Gottingen Keys and ELISA in Boyacá, Colombia

La Leucosis Enzootica Bovina (LEB) es una enfermedad de distribución mundial que genera grandes pérdidas económicas. Esta enfermedad, afecta principalmente la ganadería de las zonas lecheras y en Colombia no se tienen datos exactos del estado sanitario, ni se han estimado las pérdidas generadas a causa de esta patología. El objetivo fue determinar la presencia de LEB utilizando las claves hematológicas de Göttingen en Toca, Boyacá (Colombia). Se tomaron 243 muestras serológicas a 81 hembras de razas lecheras, seleccionadas al azar en intervalos de dos meses. Posteriormente, las muestras positivas y sospechosas a las claves, fueron procesadas mediante la técnica de ELISA, con el fin de corroborar su seropositividad. Las claves de Göttingen permitieron clasificar, de los 81 ejemplares, cinco muestras positivas y 18 sospechosas, de las cuales las cinco positivas resultaron también positivas a la técnica de ELISA. De los 18 ejemplares sospechosos, cinco resultaron seropositivos. La prevalencia total fue del 13.5 %; para los ejemplares entre 3 y 6 años de edad fue de 25% y para mayores de seis años fue del 6%. Se pudo concluir que el recuento de leucocitos fue de relevancia para el diagnóstico de la LEB. Sin embargo, las técnicas de Göttingen resultan no ser tan específicas para la detección de la enfermedad, por lo cual se recomienda la aplicación de técnicas con una especificidad y una sensibilidad mayor como ELISA y PCR.

Bovine Leukemia Virus (BLV) is an internationally prevalent disease that causes great economic losses. It mainly affects livestock in dairy production areas. Colombia lacks accurate data on the prevalence of BLV and its economic effect. This study aimed to determine the presence of BLV using Göttingen Hematological Keys in Toca, Boyacá (Colombia). A total of 243 serological samples were taken from 81 females of randomly selected dairy breeds at two-month intervals. Subsequently, the positive and suspect samples to the keys were processed by the ELISA technique in order to corroborate their seropositivity. The Göttingen keys allowed researchers to classify, from the 81 specimens, five positive samples and 18 suspicious ones, of which the five positive samples were also positive for the ELISA technique. Of the 18 suspected specimens, five were also seropositive. The total prevalence was 13.5%; for individuals between 3 and 6 years of age the prevalence was 25% and for individuals over 6 years the prevalence was 6%. Researchers concluded that the leukocyte count was relevant for the diagnosis of LEB. However, the Göttingen techniques are unspecific for the detection of the disease, so techniques with greater specificity and sensitivity such as ELISA and PCR yield more accurate results.

Aporte de la biología molecular en el diagnóstico de infecciones respiratorias agudas / Contribution of multiplex respiratory molecular panel to the diagnosis of acute respiratory infections

Objective: To assess the performance of multiplex-PCR for diagnosis of respiratory viruses in parallel with direct fluorescence assay (DFA). We assessed the performance and co-infection diagnosis of molecular respiratory panel PCR (MRP-PCR) and DFA in hospitalized and outpatients. Results: 8535 samples were included, 1792 tested by MRP-PCR (46.9% positive) and 6743 by DFA (35.1% positive). MRP-PCR diagnosed co-infection in 21.3% and DFA in 1.8% of the samples. Rhinovirus was the most common virus in any age group. In 210 patients both tests were done; 100 were positive by MRP-PCR and 18 by DFA. Positive concordance value was 6.2%. 85 samples were positive only by MRP-PCR and in 42 of them only novel respiratory viruses were identified. Performance of MRP-PCR was statistically significant compared DFA for traditional respiratory viruses. Discussion: Multiplex PCR has shown better sensitivity, may expand the etiologic spectrum of respiratory infections and detect a higher number of co-infections.

Objetivo: Evaluar la contribución del panel respiratorio molecular por reacción en cadena de la polimerasa-multiplex (PRM-RPC) en paralelo a la de inmunofluorescencia directa (IFD) al diagnóstico de infecciones respiratorias. Analizamos y comparamos el rendimiento y diagnóstico de co-infección de PRM-RPC con IFD en pacientes hospitalizados y ambulatorios. Resultados: Se analizaron 8535 muestras; 1792 por PRM-RPC (46,9% positivas) y 6743 por IFD (35,1% positivas). La co-infección fue 21,3% por PRM-RCP y 1,8% por IFD. El virus más frecuente fue rinovirus a toda edad. Se analizaron 210 pacientes por ambos métodos; resultaron positivas 100 por PRM-RPC y 18 por IFD, concordancia positiva de 6,2%. 85 muestras fueron solo positivas por PRM-RPC, 42 diagnosticaron nuevos virus respiratorios. El rendimiento de PRM-RPC fue significativamente mayor que el de IFD para virus respiratorios tradicionalmente diagnosticados. Conclusiones: La RCP-multiplex tiene mejor sensibilidad, podría expandir el espectro etiológico de infecciones respiratorias y detectar un mayor número de co-infecciones comparado a IFD.

Prevalência de conjuntivite adenoviral em clínica oftalmológica no município de Viçosa (MG) / Prevalence of adenoviral conjunctivitis at the ophthalmologic clinic on municipality of Viçosa/MG

Objetivo: Avaliar a prevalência de Adenovírus como agente etiológico da conjuntivite, em clínica médica oftalmológica especializada, em Viçosa, Minas Gerais, Brasil. Métodos: Amostras da secreção conjuntival de 91 pacientes clinicamente diagnosticados com conjuntivite foram submetidos à reação em cadeia da polimerase (PCR), utilizando primers degenerados para a região codificadora do gene da proteína estrutural II. Posteriormente as amostras positivas foram submetidas a sequenciamento e genotipagem. Resultados: A análise dos resultados de PCR revelou prevalência de 36,3% de Adenovírus. Não havendo distinção entre os sexos e com maior prevalência na faixa etária de 26 a 65 anos com 60,60% dos casos positivos. O sequenciamento dos casos positivos por Adenovírus revelaram a presença dos sorotipos 3, 4, 7, 8 e 34 circulante na região. Conclusão: No município de Viçosa, dois em cada cinco casos de conjuntivite são de etiologia adenoviral.

Objective: The aim of this study was to evaluate the prevalence of Adenovirus as a etiologic agent of conjunctivitis on a ophthalmic clinic in Viçosa, Minas Gerais, Brazil. Methods: Samples of conjunctival secretion from 91 patients clinically diagnosed with conjunctivitis were subjected to polymerase chain reaction (PCR) using degenerate primers targeted to the gene encoding the structural protein II. Positive samples were subsequently subjected to sequencing and genotyping. Results: PCR results showed 36.3% prevalence of Adenovirus. No differences between the sexes and was found to be higher in the age group 26-65 years with 60.60% of the positive cases. Sequencing of positive cases showed the presence of Adenovirus serotypes 3, 4, 7, 8, and 34 circulating in the region. Conclusion: In Viçosa two in five cases of conjunctivitis has Adenovirus as etiologic agent.

Avaliação da comunidade microbiana, com ênfase para a espécie Enterococus faecalis, em dentes decíduos com necrose pulpar através de técnicas fenotípicas e moleculares / Evaluation of microbiota with emphasis on species of Enterococcus faecalis, in primary teeth root canals with pulp necrosis, using conventional and molecular microbiological techniques

Infecção endodôntica em dentes decíduos tem sido pouca avaliada, apesar da influência destes sobre a dentição permanente. No presente estudo foi avaliada a microbiota, com ênfase na espécie de Enterococcus faecalis, de canais radiculares de dentes decíduos com diagnóstico de necrose pulpar, utilizando-se técnicas microbiológicas convencionais e moleculares. Para tanto, um estudo do tipo seccional, clínico e laboratorial foi desenvolvido, sendo a coleta do material endodôntico realizada na clínica de Odontopediatria da Faculdade de Odontologia da UFRJ. Para o estudo, 244 crianças saudáveis foram examinadas no período de um ano, e destas, 43 se enquadravam nos critérios de inclusão. O material foi coletado do canal radicular utilizando-se cones estéreis de papel, dos quais dois foram inoculados em caldo seletivo-indicador Enterococcosel e os outros dois em TSB-DMSO sob congelamento a -20º C. A identificação de E. faecalis foi realizada a partir do cultivo inicial no caldo e subcultivo em agar sangue para observação de colônias bacterianas características. Testes bioquímicos e enzimáticos e a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para o gene do rRNA 16S também foram utilizados para identificação da espécie. A técnica de Eletroforese em Gel com Gradiente Desnaturante (DGGE) foi utilizada para avaliação do perfil da comunidade microbiana presentes nos espécimes clínicos. Os resultados mostraram que dos 43 espécimes clínicos obtidos, 18 foram excluídos devido à contaminação no controle. Entre os 25 casos estudados, 10 foram positivos no caldo de enterococcosel, sendo cinco (20%) positivos para a espécie E. faecalis nos testes fenotípicos e na PCR. Outros cinco espécimes foram positivos no caldo, mas as amostras bacterianas não apresentaram bioquímica compatível com a espécie E. faecalis, e foram então submetidas ao seqüenciamento de um fragmento do gene do rRNA 16S. Foram identificados Lactobacillus plantarum (4 amostras) e Lactobacillus rhamnosus (1 amostra). Não houve relação dos dados clínicos com a presença de E. faecalis (p > 0,05). A técnica de DGGE mostrou uma comunidade polimicrobiana nos 25 espécimes analisados e, considerando-se o número de bandas no gel, um número ≥ 20 foi relacionado com pacientes com idade ≤ 4 anos e  20 bandas com pacientes com mais de 4 anos de idade (p  0,05). Relação significativa também foi observada entre idade  4 anos e cárie em dente posterior, assim como entre idade  4 anos e cárie em dente anterior. Trauma como causa de infecção endodôntica foi significativa entre crianças com 4 anos de idade. Os resultados demostram a presença de E. faecalis em infecções endodônticas com necrose pulpar em dentição decídua, confirmando sua presença na cavidade oral destes pacientes. Adicionalmente, a técnica de DGGE mostrou uma comunidade polimicrobiana, indicando associação entre idade do paciente e doença cárie.

Endodontic infections in primary teeth have been poorly evaluated despite their influence on permanent dentition. In the present study we assessed the microbiota, with emphasis on species of Enterococcus faecalis, in primary teeth root canals with pulp necrosis, using conventional and molecular microbiological techniques. Thus, a cross-sectional study of clinical and laboratory data was developed. The material was collected at the endodontic clinic of Pediatric Dentistry, Faculty of Dentistry, UFRJ. For the study, 244 healthy children were examined during one year, and of these, 43 met the inclusion criteria. Material was collected from root canals using sterile paper cones. Four paper cones were used for each canal: two were inoculated in the selective broth indicator Enterococcosel and anothers two placed in TSB-DMSO and frozen at -20 ° C until required. Identification of E. faecalis was initially made using culture in broth and subculture on blood agar for observational characteristics of bacterial colonies. Biochemical and enzymatic analysis as well as Polymerase Chain Reaction (PCR) for the 16S rRNA gene were also used for species identification. The Gradient Gel Electrophoresis Agents denaturants (DGGE) technique was used to assess the profile of the microbial communities present in the clinical specimens. Eighteen (18) of the 43 clinical specimens obtained were excluded due to contamination. Among the 25 cases studied, 10 were positive for the species E. faecalis in Enterococcosel broth, five (20%) were positive in the phenotypic tests and PCR. Another five specimens were positive in the broth medium, but the bacterial samples showed no biochemical species compatible with E. faecalis, and so were subjected to sequencing of a fragment of the 16S rRNA gene. Lactobacillus plantarum were identified (4 samples) and Lactobacillus rhamnosus (1 sample). There was no statistically significant correlation of clinical data with the presence of E. faecalis (p> 0.05). The DGGE analysis showed a community polymicrobial. About 20 bands or more were associated with patients ≤ 4 years old and that lesser 20 bands were associated with patients over 4 years old (p  0,05). A significant relationship was also found between patients > 4 years old and caries in posterior teeth, as well as between patients  4 years and anterior tooth caries. Trauma as the cause of endodontic infection was significant among children  4 years old. The results show the presence of E. faecalis in endodontic infections with pulp necrosis in the primary dentition, confirming its presence in the oral cavity of patients. Additionally, DGGE showed a polymicrobial community in 25 samples obtained, suggesting an association between patient age and tooth decay.

Human papillomavirus (HPV) detection in lip squamous cell carcinoma: correlation with clinical aspects and risk factors / Detecção do papilomavírus humano (HPV) em carcinoma espinocelular de lábio: correlação com aspectos clínicos e fatores de risco

O papilomavírus humano (HPV) está associado a um largo espectro de lesões em humanos e tem sido ligado à carcinogênese oral. O objetivo deste estudo foi investigar a presença do DNA do HPV em pacientes com carcinoma espinocelular de lábio e correlacioná-la com aspectos clínicos e fatores de risco. Foram estudados 33 pacientes com carcinoma espinocelular de lábio. Destes, 30 pacientes foram positivos para o gene da beta-globina humana e então foram testados para o DNA do HPV com uso da reação em cadeia de polimerase em duas etapas (PCR e nPCR) com os oligonucleotídeos iniciadores MY11/MY09 e GP5+/ GP6+. O DNA do HPV foi detectado em 43,33 por cento dos 30 pacientes analisados. Não houve associação com os fatores de risco analisados.

Human papillomavirus (HPV) is associated with a wide spectrum of lesions in humans, and it has been linked to oral carcinogenesis. The aim of this study was to investigate the presence of HPV DNA in patients with lip squamous cell carcinoma and to correlate it with clinical characteristics and risk factors. We studied 33 patients with lip squamous cell carcinomas. Of these, 30 were positive for human beta globin gene and tested for HPV DNA, using polymerase chain reaction in two steps (PCR and nPCR) with MY11/MY09 and GP5+/GP6+ primers. HPV DNA was detected in 43.33% of patients analyzed. There was no association with the risk factors analyzed.

Avaliação de pacientes com hanseníase na faixa virchowiana diagnosticados entre 1990 e 2000 e tratados com poliquimioterapia 24 does e seus comunicantes na fase de pós-eliminação em municípios de Santa Catarina / Assessment of lepromatous leprosy patients diagnosed among 1990 and 2000 and treated with multidrug therapy 24 doses and their household contacts in the post-elimination phase in Santa Catarina municipalities

INTRODUÇÃO: A poliquimioterapia (PQT-OMS) para tratamento da hanseníase resultou em drástica redução da sua prevalência, mas em limitado impacto na detecção de casos novos (CN), que se manteve estável em Santa Catarina, estado na fase de pós-eliminação. Casos com altos índices baciloscópicos apresentam riscos de recidiva tardia e podem consistir em focos persistentes de transmissão da doença. OBJETIVOS: Avaliar a recidiva da doença em amostra de pacientes virchowianos regularmente tratados com PQT-OMS 24 doses; ensaios de resistência terapêutica em camundongos para os casos suspeitos; resposta imune específica (celular e humoral) e detecção do DNA do M. leprae nos casos-índices (CI) e seus contatos intradomiciliares (CID); e os achados frente aos indicadores epidemiológicos e operacionais de Santa Catarina....

INTRODUCTION: Multidrug therapy (MDT -WHO) resulted in market reduction of leprosy prevalence in Brazil, without impact on detection of new cases in Santa Catarina (SC) state in the post-elimination phase. Lepromatous cases with high bacilloscopic index have late relapse risk and can consist in the disease transmission focus. OBJECTIVES: The aim of this study was to evaluate the disease recurrence and microbiological resistance in lepromatous leprosy patients regularly treated with MDT - WHO 24 doses ; specific immune response (cellular and humoral ) and M. leprae DNA detection in index cases (IC) and their household contacts (HHC) ; and the findings face to the epidemiological and operational indicators of Santa Catarina state ....

Detecção de papilomavírus humano (HPV) em material biológico de pacientes com carcinoma epidermóide de orofaringe / Human papillomavirus (HPV) detection in biological tissues of patiens with oropharyngeal squamous cell carcinoma

O papilomavirus humano (HPV) tem sido relacionado com a etiologia dos carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço, em análise de tecidos cerca de 60% destes carcinomas podem ser HPV positivos. O objetivo deste trabalho foi analisar a presença do HPV em material genético obtidos de tecidos, secreção salivar e sangue de pacientes portadores de carcinoma epidermóide (CEC) de orofaringe e controles e a correlação da presença viral com as váriáveis sexo, idade, tabagismo, etilismo e perfil anatomopatologico do tumor. Foi realizada uma análise do material genético de 46 pacientes com diagnóstico de CEC de orofaringe e 40 pacientes sem carcinoma. A extração do DNA dos espécimes foi realizada utilizando o kit de extração de DNA QuiAMP. O DNA isolado foi submetido a PCR para beta-globina para confirmar a presença e integridade do DNA, em seguida, foram realizadas novas reações para detecção do DNA do HPV. Para análise estatística foram empregados o teste Qui-quadrado e teste exato de Fisher. A idade média de idade foi de 60 anos para os casos e 58,2 anos para os controles e a mediana foi de 59 e 56 anos, respectivamente. Os resultados obtidos com a metodologia descrita permitiram concluir que não houve diferenças estatisticamente significativas na análise das variáveis em relação à presença do papilomavírus humano nas amostras de tecidos biológicos dos pacientes estudados

Human papillomavirus (HPV) it has been related with head and neck SCC etiology, about 60% of these carcinomas tissues can be HPV positive. The aim of this study was to analyze the HPV presence in genetic material obtained from tissues, salivary secretion and blood of oropharyngeal SCC patients and controls and correlate the virus presence with variables: sex, age, smoking, alcoholism and pathological profile of the tumours.It was made molecular and statistical analysis of genetic material of 46 oral and oropharyngeal SCC patients and 40 controls patients without carcinoma. The DNA extraction of all specimens was accomplished using the DNA extraction kit QuiAMP. The isolated DNA was submitted PCR for beta-globin to confirm the DNA presence and integrity, after new reactions it was accomplished for HPV DNA detection. Chi-square test and Fisher exact test were used for statistical analysis. The average age was 60 years for cases and 58.2 years for controls and the median age was 59 and 56 years respectively. The results obtained with the described methodology shows there was no statistically significant differences between HPV presence in samples of biological tissues and the analyzed variables

Estudo do HPV e variáveis sócio-comportamentais em mulheres com lesão intra-epitelial de alto grau / HPV and sociodemographic characteristics in women with highgrade squamous intraepithelial lesion

A infecção pelo HPV em mulheres abaixo de 30 anos é transitória, entretanto, algumas destas mulheres progridem para Lesão Intra-Epitelial de Alto Grau (LIAG). Este estudo investigou características virais, morfológicas e variáveis sócio-comportamentais em mulheres com LIAG, entre estas a determinação dos genótipos oncogênicos do HPV, a carga viral total e específica de HPV 16, a expressão da proteína p16INK4a assim como variáveis epidemiológicas. Foram selecionadas 88 mulheres provenientes de dois serviços de oncologia ginecológica de Salvador, Bahia, a Clínica IDEM e o CICAN, entre julho de 2006 e janeiro de 2009 com diagnóstico citopatológico de LIAG. As pacientes preencheram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido e responderam um questionário contendo informações sócio-demográficas e clínicas. Em seguida, foi realizada a colheita de células esfoliadas do colo uterino para genotipagem através da técnica Linear Array e avaliação da carga viral do HPV por PCR em tempo real, e a biópsia para análise histopatológica. Destas 88 mulheres, apenas 41 (46,6%) tiveram o diagnóstico de LIAG confirmado através do exame histopatológico. Desta forma, as pacientes foram divididas em 3 grupos: sem LIAG (< NIC 2), com LIAG ( NIC 2) menores que 30 anos e com LIAG ( NIC 2) com idade igual ou superior a 35 anos. Dentre os co-fatores analisados, a escolaridade, o uso de anticoncepcional oral e paridade diferiram nos dois grupos de idade com LIAG. A expressão da proteína p16INK4a foi observada em todos os graus histopatológicos com LIAG, entretanto, sua intensidade não diferiu entre estes. Foi observada uma maior prevalência de LIAG em mulheres mais jovens. Os genótipos mais prevalentes nas mulheres com LIAG foram: HPV 16, HPV 35, HPV 56, HPV 45 e HPV 70; no grupo sem LIAG foram: HPV 16, HPV 31, HPV 56, HPV 61 e HPV CP6108. A carga viral total foi maior em mulheres com LIAG em relação a mulheres sem LIAG. Houve associação entre aumento da carga viral específica...

HPV infection in young women, below 30 years old is commonly transitory. However, some women may progress to high-grade squamous intraepithelial lesion (HSIL). This study aimed to investigate viral and host factors in young women with a diagnosis of HSIL, such as viral load both total and HPV 16- specific, genotypes, p16INK4a expression and sociodemographic characteristics. Eighty-eight women with a cytological diagnosis of HSIL were recruited from 2 specialized oncoginecologyc services from Salvador, Bahia, in between July 2006 and January 2009. After providing written informed consent, cervical scrapes were obtained for DNA extraction for further molecular testing, including HPV genotyping by Linear array and viral load determination by Real-Time PCR. Biopsies were taken for confirmatory histopathologyc analysis. Forty-one out of 88 enrolled women (46,6%) had the HSIL diagnosis confirmed. Based on that they were classified into three groups: No SIL, HSIL less than 30 years old and HSIL older than 35 years old. Among co-factors studied, education, oral contraceptive use and parity significantly differed between HSIL age groups. p16INK4a expression was observed with similar intensity among all histological grades of CIN. A higher prevalence of HSIL was detected in younger women. The most prevalent genotypes in HSIL patients were HPV 16, HPV 35, HPV 56, HPV 45 and HPV 70; whereas in the No SIL group were: HPV 16, HPV 31, HPV 56, HPV 61 and HPV CP6108. Total HPV viral load was significantly higher in women bearing CIN than in the normal group. A positive association between HPV 16 viral load and increasing histological grades was observed. Total and HPV 16 viral loads were similar among young and older women with HSIL, suggesting that this is not the main factor leading to the early development of these lesions.

Comparação de dois pares de oligonucleotídeos utilizados na reação em cadeia da polimerase para detecção de Papilomavírus Humanos em esfregaços cervicais / Comparison of two pairs of primers used in polymerase chain reaction for the detection of Hunan Papillomaviruses in cervical smears

Introdução: o câncer de colo de útero é a neoplasia mais frequente em mulheres de países em desenvolvimento. Grande parte desses casos é causada por infecção persistente com diferentes tipos de papilomavírus humano (HPV) classificados em alto e baixo risco de acordo com o potencial oncogênico. Atualmente, acredita-se que a melhor rotina de identificação e acompanhamento das lesões por HPV de forma a prevenir o câncer cervical é a combinação da técnica de Papanicolaou com a reação em cadeia por polimerase (PCR) na qual ocorre a amplificação de regiões conservadas do genoma viral, com uso de primers degenerados e em seguida identificação do tipo viral. O primer mais utilizado em todo o mundo é o MY09/11, com boa sensibilidade e especificidade. Recentemente, foi descrito na literatura um novo conjunto de primers consensuais denominado PGMY reformulando o primer MY e adicionando um novo primer HMBO visando diminuir perdas do MY (falso negativo). Objetivo: comparar os dois pares de primers, MY e PGMY, a fim de apontar aquele mais adequado para o rastreamento de infecções causadas por HPV no colo uterino pela técnica de reação em cadeia da polimerase. Métodos: avaliamos 116 amostras de esfregaços cervicais. Após a extração do DNA, a técnica de PCR foi realizada de acordo com os protocolos descritos na literatura. Resultados: através desse trabalho, observamos que o par de primers PGMY apresenta maior sensibilidadee especificidade na detecção do DNA do HPV quando comparado com o par de primers MY, além de melhores valores preditivos negativo e positivo. Conclusão: o novo par de primers PGMY, deve ser usado para substituir o par MY a fim de melhorar a detecção do DNA viral.

Introduction: cervical cancer is the most frequent neoplasia among the women of countries in development. Great part of those cases is caused by persistent infection with different types of Human Papillomavirus (HPV) classified as high and low risk, according to the risk of cervical cancer development. Nowadays, it is believed that the best identification routine and follow up of the lesions in order to prevent the malignant transformation is the combination of the technique of Papanicolaou with the polymerase chain reaction (PCR), in which the amplification of conserved areas of the viral genome occurs, with use of degenerate primers, followed by type identification. The degenerate primers MY 09/11 are used worldwide, presenting good sensibility and specificity. Recently, a new group of consensual primers denominated PGMY was described in the literature reformulating the primer MY and adding a new primer HMBO seeking to reduce losses of MY (false negative). Objective: compare two pairs of primers, MY and PGMY, to discorer the most appropriate for the diagnosis of infections caused by HPV in the uterine cervix for the technique of Polymerase chain reaction. Methods: a hundred and sixteen samples from cervical smears were evaluated. After DNA extraction, the PCR was done according to the protocols described in the literature. Results: we observed that the primers pair PGMY presents better sensibility and specificity in the detection of DNA of HPV when compared to the primers pair MY, it also presents better negative and positive predictive values. Conclusion: the new primers pair PGMY should be used to substitute the pair MY to improve the detection of the viral DNA.

Expressão do transcrito da citoqueratina 19 (CK-19) na fração mononuclear do sangue periférico em pacientes com adenocarcinoma de próstata / Cytokeratin 19 expression in the peripheral blood mononuclear fraction of prostate cancer patients

Introdução: O emprego da técnica de RT-PCR na detecção da expressão de genes epiteliais como a CK-19 no sangue periférico de pacientes com câncer de próstata é uma oportunidade para avaliar a progressão tumoral ao nível molecular na ausência de doença clinicamente mensurável. Material e métodos: Inicialmente 10 pacientes com nível sérico de PSA< 2ng/ml e toque retal sugestivo de hiperplasia prostática benigna foram incluídos como grupo controle através de coleta de sangue única para dosagem do transcrito da CK-19. Subsequentemente,foram seguidos de maneira prospectiva 44 pacientes com câncer de próstata (21 com doença localizada e 23 com doença metastática), com coleta de sangue seriada a cada 3 meses por 18 meses. Foi medida a expressão sérica do transcrito da CK-19 por RT-PCR na fração leucocitária do sangue periférico e correlacionada aos níveis séricos de PSA e outras variáveis clinicas e patológicas. Resultados: Nenhum de 10 pacientes controles apresentou expressão do transcrito da CK-19 no sangue periférico. Nos pacientes com câncer de próstata a expressão do transcrito da CK-19 na entrada do estudo não se correlacionou com o escore de Gleason, estádio clínico e os níveis séricos de DHL, Hemoglobina, PSA, Fosfatase alcalina ou Testosterona. A presença de pelo menos uma dosagem positiva de CK-19 durante o seguimento se correlacionou com o tempo para a progressão bioquímica do PSA na amostra como um todo(p=0,049) e no subgrupo com doença metastática(p=0,032). Conclusão: Não houve expressão do transcrito da CK-19 na fração mononuclear do sangue periférico em homens do grupo controle. Nos pacientes com câncer de próstata não houve correlação entre a expressão do transcrito da CK-19 na entrada do estudo e as principais variáveis clínicas e patológicas de prognóstico...

Background: The recent introduction of sensitive RT-PCR-based techniques for the detection of epithelial antigen expression, such as CK-19,in the peripheral blood of prostate cancer patients may provide an opportunity to evaluate early tumor progression at the molecular level, even in the absence of measurable disease. Methods: Ten men with PSA <2ng/ml and digital rectal examination suggestive for benign prostatic hyperplasia were included as controls by only one colleted blood sample to measure of CK-19 transcript. We also studied serially collected blood samples of 44 patients with prostate cancer (21 with localized and 23 with metastatic disease) every three months for 18 months. We measured CK-19 transcript expression in the peripheral blood mononuclear fraction (PBMN) of these samples by RT-PCR and correlated it with PSA values and other clinical and pathologic variables. Results: None of the 10 normal control men showed CK-19 transcript expression in their PBMN. In the patients with prostate cancer, CK-19 transcript positivity at entry did not correlate with Gleason score, clinical stage, DHL, hemoglobin level, PSA, alkaline phosphatase or testosterone levels. Having at least one positive CK- 19 result during follow up correlated significantly with time to PSA progression in all coorte (p = 0.049) and in the subgroup of metastatic disease (p = 0.032)...

El virus del Oeste del Nilo: una realidad en México / West Nile virus: a reality in Mexico

El virus del Oeste del Nilo (VON) es un virus ARN perteneciente a la familia Flaviviridae del género Flavivirus que causa infección en aves, equinos y humanos. La infección por VON es transmitida por el mosquito Culex sp. El ciclo de vida del virus incluye a los mosquitos como vectores y a las aves como huéspedes naturales. El virus mantiene un ciclo de transmisión mosquito–ave-mosquito. Los seres humanos son huéspedes accidentales. Se han reportado epidemias en Rumania, Nueva York e Israel. Mediante el programa de vigilancia epidemiológica en nuestro país, se han reportado 90 muestras positivas en 1,223 casos estudiados en aves hasta el 15 de Septiembre del 2005. La enfermedad por el VON se presenta con fiebre, malestar general, anorexia, nausea, vómito, cefalea, mialgia, erupción cutánea y linfadenopatía. La principal entidad clínica descrita es la encefalitis y la parálisis flácida. A mayor edad, es mayor el riesgo de enfermedad neurológica y muerte. Los métodos diagnósticos incluyen determinación de anticuerpos IgM e IgG en suero y/o liquido cerebroespinal. No existe tratamiento antiviral para la infección por VON. Algunas terapias que se han utilizado incluyen interferón α2b e inmunoglobulina específica contra VON. La prevención juega un papel crucial.

West Nile virus (WNV) is a RNA virus of the Flaviridae, genus flavivirus family. It is a neuropathogenic virus causing disease in birds, horses and humans. WNVis transmitted by the vector mosquito Culex sp. The virus life 's cycle includes mosquitoes as vectors and birds as natural hosts. Humans are accidental hosts. Since the introduction of the Epidemiological Surveillance Program at the Ministry ofHealth. we have documented 90 positive test results among birds out of 1,223 cases studied in Mexico as of September IS. 2005. The incubation period in humans after a mosquito bite ranges from 3 to 14 days. Disease is characterized by early onset fever, general malaise, decreased appetite, nausea, vomiting, headaches, myalgias, enlarged lymph nodes andrash. Neurological manifestations include encephalitis andflaccid paralysis, which are present in less than 1% of subjects infected with WNV. Older patients display more adverse outcomes including death. The diagnosis is made by the determination of specific IgM and JgG antibodies in serum and/or cerebrospinal fluid. There is no antiviral treatment to date against WNV but interferon ?2b, and WNVspec4ic-immunoglobulin have been used Prevention is therefore the key to control the infection.

Detection of Leptospira spp. from pure cultures and from experimentally contaminated bovine semen by polymerase chain reaction / Detecção de Leptospira spp. através da reação em cadeia pela polimerase (PCR) em sêmen bovino experimentalmente contaminado

Due to the high importance of the venereal transmission of bovine leptospirosis, this study aimed to test the ability of PCR to detect Leptospira interrogans serovar hardjo DNA in experimentally contaminated bovine semen. Employing primers directed to the 16S rRNA gene, 10 bacteria/ml of semen could be detected by PCR. Results achieved in this work show that PCR can have a great potential to detect Leptospira spp. in insemination centers. (AU)

Considerando a importância do sêmen na transmissão da leptospira bovina, foi realizado o presente estudo que teve como objetivo aplicar a reação em cadeia pela polimerase (PCR) para a detecção de leptospiras em sêmen bovino experimentalmente contaminado. A reação de PCR foi capaz de amplificar um fragmento de DNA específico de 330 pares de bases a partir de cultivos puros de 26 sorovares de Leptospira spp. A contaminação experimental de sêmen com Leptospira interrogans serovar hardjo revelou que a técnica de PCR conseguiu detectar 10 bactérias/ml, concentração sensivelmente mais baixa que as 1.000 bactérias/ml detectadas através do cultivo microbiológico. Os resultados observados revelam o grande potencial da reação de PCR para a detecção de Leptospira spp. em sêmen bovino, notadamente em centrais de inseminação artificial.(AU)

Isolamento e identificação pela imunofluorescência direta e reação em cadeia de polimerase do vírus da artrite-encefalite caprina

This paper describes the isolation of caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV) in Minas Gerais and Pernambuco States, Brazil, using goat synovial membrane (GSM) explants (isolates: BrMg 1-01, BrMg 2-01, BrMg 2-02, BrMg 2-03 and BrPe 1-01) or co-culture of blood mononuclear cells with GSM (BrMg 1-02). The isolates were identified by cytopathic effect (CPE), direct immunofluorescence (DIF) and an improved polimerase chain reaction (PRC) specific to CAEV (strain Cork) genome. It was found isolates of low (BrMg 1-01 and BrMg 1-02) and of high lytic (BrMg 2-01, BrMg 2-02, BrMg 2-03 and BrPe 1-01) phenotypes. The DIF revealed positive results in cells infected by all isolates tested and the reference strains of CAEV (Cork) and visna-maedi (K1514). The used PCR amplified a 286 pb fragment of DNA from cells infected with all isolates and CAEV Cork but not with visna-maedi K1514.

Amostras do vírus da artrite-encefalite caprina (CAEV) de animais dos estados de Minas Gerais e Pernambuco foram isoladas a partir de explantes de membrana sinovial (MS) (amostras BrMg 1-01, BrMg 2-01, BrMg 2-02, BrMg 2-03 e BrPe 1-01) ou de co-cultivo de leucócitos com MS (BrMg 1-02). As amostras foram identificadas pelo efeito citopático-ECP (formação de sincícios), imunofluorescência direta (IFD) e reação em cadeia de polimerase (PCR) aperfeiçoada para amplificação de parte do gene gag da amostra CAEV Cork. O estudo do ECP revelou a presença de amostras pouco (BrMg 1-01 e BrMg 1-02) ou fortemente indutoras de ECP (BrMg 2-01, BrMg 2-02, BrMg 2-03 e BrPe 1-01). A IFD mostrou resultado positivo em células de todas as monocamadas infectadas pelas amostras isoladas e em células de referência (CAEV Cork e visna/maedi K 1514). A PCR do DNA de células infectadas resultou na amplificação específica de um fragmento de DNA de 286pb da amostras testadas, exceto do visna/maedi K 1514.