Cytogenetics of Chilean land plants (Embryophyta): state-of-the-art and prospects / CItogenética de plantas terrestres Chilenas (Embryophyta): estado del arte y perspectivas

ABSTRACT Chile is located in the south-western region of South America along the Pacific Ocean and contributes to the worldwide flora with ca. 6,120 species of Bryophyta, Pteridophyta, Pinophyta, Gnetophyta, and Magnoliophyta (1.9% of worldwide total species), exhibiting high endemism across all plant divisions. Little is known about the genetic diversity of Chilean land plants worldwide, including their cytogenetic and molecular characteristics. In 2012 we published the first state-of-the-art review in Cytogenetics of Chilean Angiosperms. The article gathered 78 publications from 1924 to 2010 accounting for approximately 139 species (2.8% of total Chilean species). The aim of this paper was to review the advances in cytogenetic studies of Chilean land plants, reporting additional cytogenetic data for species of four botanical divisions until 2020. Cytogenetic data were searched in the CPCD (Chilean Plants Cytogenetic Database). In total, we found 180 publications from both Chilean and foreign researchers. To date, cytogenetic data have been reported for 499 Chilean land plant species (8.2% of total) belonging to 244 genera and 117 families. In this context, the 2001-2020 period has been among the most productive regarding publications, with 74 available reports that include 163 additional species. Based on chromosome numbers, angiosperms and bryophytes registered the greatest diversity with 55 and 29 different 2n, respectively; both divisions having the greatest number of studied species. Given the importance of increasing information on Chilean land plants, it is expected that more publications will contribute to the knowledge of their cytogenetic diversity in the near future.

RESUMEN Chile está ubicado en la región suroeste de América del Sur a lo largo del Océano Pacífico y contribuye a la flora mundial con aproximadamente 6.120 especies de Bryophyta, Pteridophyta, Pinophyta, Gnetophyta y Magnoliophyta (1,9% del total de especies en todo el mundo), que presentan un alto endemismo en todas las divisiones de plantas. Poco se conoce sobre la diversidad genética de las plantas terrestres chilenas en todo el mundo, incluidas sus características citogenéticas y moleculares. En 2012 publicamos la primera revisión sobre el estado del arte en Citogenética de Angiospermas Chilenas. El artículo reunió 78 publicaciones desde 1924 hasta 2010, que representan aproximadamente 139 especies (2,8% del total de especies chilenas). El objetivo de este trabajo fue revisar los avances en estudios citogenéticos de plantas terrestres chilenas, reportando datos citogenéticos adicionales para especies de cuatro divisiones botánicas hasta el 2020. Los datos citogenéticos se buscaron en el CPCD (Base de Datos Citogenéticos de Plantas Chilenas). En total, encontramos 180 publicaciones sobre citogenética de plantas terrestres chilenas, con datos citogenéticos para 499 especies (8,2% del total) pertenecientes a 244 géneros y 117 familias. En este contexto, el período 2001-2020 ha sido uno de los más productivos en cuanto a publicaciones, con 74 artículos disponibles que incluyen 163 especies adicionales. Basado en los números cromosómicos, angiospermas y briófitos registran la mayor diversidad, con 55 y 29 2n diferentes, respectivamente; ambas divisiones tienen también el mayor número de especies estudiadas. Dada la importancia de incrementar la información sobre plantas terrestres chilenas, se espera que más publicaciones contribuyan al conocimiento de su diversidad citogenética en un futuro próximo.

Evolutionary dynamics of autopolyploids in natural populations: the case of Turnera sidoides complex / Dinámica evolutiva de autopoliploides en poblaciones naturales: el caso del complejo Turnera sidoides

ABSTRACT Turnera sidoides (x=7) is one of the few well-studied South American autopolyploid complexes. Since polyploidy has played a prominent role within this complex, ongoing studies in T. sidoides focus on understanding the mechanisms involved in the origin and the establishment of polyploids using integrative approaches. This paper synthesises the results of more than 20 years of research on this topic. Cytogenetics analysis provided evidences for the production of unreduced male and female gametes, supporting the hypothesis of bilateral sexual polyploidization as the mechanism of origin of polyploids in T. sidoides. The finding of viable triploids suggested that unilateral sexual polyploidization could also be an important mechanism for the origin of tetraploids in T. sidoides. The occurrence of plants continuously forming many unreduced gametes would play a key role in the establishment of neopolyploids in natural populations. Also, the higher number of propagules that tetraploids contribute to subsequent generations, the ability to multiply asexually by rhizomes, and the occurrence of occasional cases of self-compatibility and successful illegitimate crosses in polyploids increase the likelihood that a low frequency of neopolyploids can be maintained in natural populations of T. sidoides. In addition, integration of cytogeographic and genetic divergence data together with past niche modelling provided further insights supporting the hypothesis that historical climatic and geomorphological events provided favourable conditions for the establishment of autopolyploids, with the wider distribution of tetraploids of T. sidoides being the result of their range expansion.

RESUMEN Turnera sidoides (x=7) es uno de los pocos complejos autopoliploides sudamericanos bien estudiados. Como la poliploidía ha tenido un papel destacado en el complejo, los estudios en curso en T. sidoides se centraron en la comprensión de los mecanismos implicados en el origen y el establecimiento de los poliploides mediante diferentes enfoques. En este trabajo se sintetizan los resultados de más de 20 años de investigación sobre este tema. El análisis citogenético proporcionó evidencias de la producción de gametos masculinos y femeninos no reducidos, sustentando la hipótesis de la poliploidización sexual bilateral como mecanismo de origen de los poliploides en T. sidoides. Sin embargo, el hallazgo de triploides fértiles sugirió que la poliploidización sexual unilateral también sería un mecanismo importante de origen de tetraploides en T. sidoides. La ocurrencia de plantas que forman continuamente gametos no reducidos desempeñaría un papel clave en el establecimiento de neopoliploides. Además, el mayor número de propágulos que los tetraploides aportan a las siguientes generaciones, la capacidad de multiplicación asexual por rizomas y los casos ocasionales de autocompatibilidad y cruzamientos ilegítimos exitosos aumentarían la probabilidad de que se mantenga una baja frecuencia de neopoliploides en las poblaciones naturales de T. sidoides. Asimismo, la integración de datos citogeográficos y de divergencia genética junto con el modelado de nicho en el pasado aportó información que sustenta la hipótesis de que los eventos climáticos y geomorfológicos históricos proporcionaron las condiciones favorables para el establecimiento y expansión de los tetraploides de T. sidoides.

Inducción de poliploidía con clochicina en vitroplantas de Aloe vera (L.) / Induction of polyploidy with colchicine in vitroplants of Aloe vera (L.)

RESUMEN La inducción artificial de la poliploidía es una técnica de fitomejoramiento empleado en plantas de interés medicinal. Sin embargo, pocas especies del género Aloe han sido sometidas a este tratamiento. El objetivo de esta investigación fue estandarizar la técnica de inducción de poliploidía en vitroplantas de Aloe vera (L.). Se realizó un diseño experimental con dos grupos (control y experi mental) a los cuales se les aplicó un estudio citogenético pre y postratamiento por tres generaciones consecutivas. Se evaluaron tres concentraciones de colchicina (0,05; 0,10 y 0,15%) y dos tiempos de exposición (48 y 72 horas). Las vitroplantas controles mantenidas en agua destilada (sin colchicina) por 48 y 72 (T y T2 respectivamente) y las tratadas con solución de colchicina al 0,05% por 48 y 72 horas (T3 y T4 respectivamente), presentaron pocos cambios citogenéticos, siendo la mayoría de sus células diploides. Las plantas tratadas con solución de colchicina a 0,10% por 48 y 72 horas (T5 y T6 respectivamente), lograron la duplica ción cromosómica en más del 50% del tejido. Las tratadas con una concentración de 0,15% por 48 horas (T7) mostraron tejido quimérico con un alto predominio de células poliploides y al aumentar el tiempo de exposición a 72 horas (T8), todas las células fueron poliploides, pero el desarrollo de estas plantas in vitro, fue anormal y con tejido necrótico. Las plantas con T5, se desarrolla ron mejor que con el T6. Se recomienda el uso de la colchicina a una concentración de 0,10% por 48 horas para obtener vitro plantas poliploides en A. vera.

ABSTRACT The artificial induction of polyploidy is a plant breeding technique used in plants of medicinal interest. However, few species of the genus Aloe have been subjected to this treatment. The objective of this research is to standardize the induction technique of polyploidy in vitroplants of Aloe vera (L.). An experimental design was performed with two groups (control and experimental), to which a cytogenetic study was applied pre and post treatment for three consecutive generations. Three concentrations of colchi cine (0.05, 0.10 and 0.15%) and two exposure times (48 and 72 hours) were considered. The control vitroplants kept in distilled water (without colchicine) for 48 and 72 hours (T1 and T2 respectively) and those treated with colchicine's solution at 0.05% for 48 and 72 hours (T3 and T4 respectively), presented few cytogenetic changes, being diploid most of their cells. Plants treated with 0.10% colchicine's solution for 48 and 72 hours (T5 and T6 respectively) achieved chromosomal duplication in more than the 50% of the tissue. Those treated with a concentration of 0.15% for 48 hours (T7) showed chimeric tissue with a high predominance of polyploid cells, and by increasing the exposure time to 72 hours (T8) all cells were polyploid, but the development of these plants in vitro were abnormal and with necrotic tissue. Plants with T5, developed better than with T6. The use of colchicine at a concen tration of 0.10% for 48 hours is recommended to obtain polyploid vitroplants in A. vera.

Tetraploidia em Rhamdia quelen (Quoy e Gaimard, 1824) por choque térmico duplo (quente e frio) / Tetraploidy in Rhamdia quelen (Quoy & Gaimard 1824) by a dual thermal shock (heat and cold)

Avaliou-se a eficiência do choque térmico duplo para induzir tetraploidia em jundiá Rhamdia quelen em diferentes tempos pós-fertilização. Vinte mililitros de ovos (10, 15, 20, 25, 30 e 35 mpf – minutos pós-fertilização) foram tratados com choque térmico quente (39±0,2ºC) durante 3 min seguido de choque térmico frio (1,0±0,1ºC) durante 30 min. Um grupo controle foi utilizado. As taxas de fertilização e de eclosão foram medidas 12 hpf (horas pós-fertilização) e 30 hpf, respectivamente. Decorridas 60 hpf, 25 larvas de cada unidade experimental foram fixadas para verificação da ploidia, por citometria de fluxo. A taxas de fertilização foram de 87,83% para o controle e de 23,4%; 28,5%; 30,4%; 20,0%; 30,3% e 36,7%, para os grupos tratados com choque térmico aos 10, 15, 20, 25, 30, 35 mpf, respectivamente. Encontraram-se tetraploides apenas nos grupos de ovos tratados aos 15 mpf e 20 mpf. Este é o primeiro trabalho de indução de tetraploidia em jundiá por choques térmicos quente e frio, o qual possibilitou o aperfeiçoamento dessa técnica.

The efficiency of double thermal shock to induce tetraploidy in Rhamdia quelen (jundiá) at different post-fertilization periods was assessed. Each test was performed with 20 mL of eggs (10, 15, 20, 25, 30 and 35 mpf – minutes post-fertilization) exposed to hot thermal shock (39±0.2ºC) for 3 min, followed by cold thermal shock (1.0±0.1ºC) for 30 min. A control group was also employed. Fertilization and hatching rates were evaluated 12 and 30 hours post-fertilization (hpf), respectively. After 60 hpf, twenty-five larvae from each experimental unit were fixed to verify the ploidy by flow cytometry. Control fertilization rate was 87.83% and reached 23.4%, 28.5%, 30.4%, 20.0%, 30.3%, 36.7% respectively for 10, 15, 20, 25, 30, 35 mpf. Tetraploids were detected only at 15 mpf and 20 mpf. This is the first research of tetraploidy in jundiá obtained by hot and cold shocks, making possible the improvement of this technique.

Tetraploidia em Rhamdia quelen (Quoy e Gaimard, 1824) por choque térmico duplo (quente e frio) / Tetraploidy in Rhamdia quelen (Quoy & Gaimard 1824) by a dual thermal shock (heat and cold)

Avaliou-se a eficiência do choque térmico duplo para induzir tetraploidia em jundiá Rhamdia quelen em diferentes tempos pós-fertilização. Vinte mililitros de ovos (10, 15, 20, 25, 30 e 35 mpf minutos pós-fertilização) foram tratados com choque térmico quente (39±0,2ºC) durante 3 min seguido de choque térmico frio (1,0±0,1ºC) durante 30 min. Um grupo controle foi utilizado. As taxas de fertilização e de eclosão foram medidas 12 hpf (horas pós-fertilização) e 30 hpf, respectivamente. Decorridas 60 hpf, 25 larvas de cada unidade experimental foram fixadas para verificação da ploidia, por citometria de fluxo. A taxas de fertilização foram de 87,83% para o controle e de 23,4%; 28,5%; 30,4%; 20,0%; 30,3% e 36,7%, para os grupos tratados com choque térmico aos 10, 15, 20, 25, 30, 35 mpf, respectivamente. Encontraram-se tetraploides apenas nos grupos de ovos tratados aos 15 mpf e 20 mpf. Este é o primeiro trabalho de indução de tetraploidia em jundiá por choques térmicos quente e frio, o qual possibilitou o aperfeiçoamento dessa técnica.(AU)

The efficiency of double thermal shock to induce tetraploidy in Rhamdia quelen (jundiá) at different post-fertilization periods was assessed. Each test was performed with 20 mL of eggs (10, 15, 20, 25, 30 and 35 mpf minutes post-fertilization) exposed to hot thermal shock (39±0.2ºC) for 3 min, followed by cold thermal shock (1.0±0.1ºC) for 30 min. A control group was also employed. Fertilization and hatching rates were evaluated 12 and 30 hours post-fertilization (hpf), respectively. After 60 hpf, twenty-five larvae from each experimental unit were fixed to verify the ploidy by flow cytometry. Control fertilization rate was 87.83% and reached 23.4%, 28.5%, 30.4%, 20.0%, 30.3%, 36.7% respectively for 10, 15, 20, 25, 30, 35 mpf. Tetraploids were detected only at 15 mpf and 20 mpf. This is the first research of tetraploidy in jundiá obtained by hot and cold shocks, making possible the improvement of this technique.(AU)

Lavandula L. - aplicação da cultura in vitro à produção de óleos essenciais e seu potencial económico em Portugal / Lavandula L. - application of in vitro cultivation for the essential oils production and their economic potential in Portugal

RESUMO Os óleos essenciais são metabolitos secundários que possuem diversas propriedades com elevado interesse, nomeadamente as biológicas. Estas propriedades englobam todas as atividades que esta mistura de compostos voláteis (principalmente monoterpenos, sesquiterpenos e fenilpropanóides) exerce sobre os seres humanos, animais e outras plantas. Os óleos essenciais apresentam grande valor económico, sendo os do género Lavandula dos mais comercializados e estudados devido à sua aplicabilidade industrial e propriedades terapêuticas As lavandulas são colhidas na natureza ou propagadas por técnicas convencionais, nomeadamente por estacaria. Mais recentemente, protocolos de micropropagação foram desenvolvidos para algumas espécies, permitindo a produção de plantas em larga escala disponíveis em qualquer período do ano e sem comprometer a biodiversidade das espécies. O desenvolvimento de plantas tetraplóides capazes de aumentar a produção de óleo essencial nas suas flores é outro meio eficaz para aumentar potencialmente o valor das espécies de Lavandula. Em Portugal existem 5 espécies nativas do género Lavandula, amplamente distribuídas pelo país. Contudo, o seu potencial industrial permanece praticamente inexplorado e em termos de mercado o seu reconhecimento é muito reduzido. Trabalhos recentes, baseados na avaliação das propriedades biológicas dos óleos essenciais e a forma como eles podem exercer os seus efeitos contribuíram para a valorização do potencial económico das lavandulas em Portugal. Esta revisão tenta dar uma visão geral de que forma a aplicação das culturas in vitro pode levar a uma maior produção de óleos essenciais em Lavandula spp., dando especial ênfase às lavandulas nativas de Portugal.

ABSTRACT Essential oils are secondary metabolites plants and, among other features, they own several biological properties. The term “biological” includes all activities that these mixtures of volatile compounds (mainly monoterpenes, sesquiterpenes, and phenylpropanoids) maintain on humans, animals and other plants. Essential oils have great economic value, being the genus Lavandula one of the most commercialized and studied type due to its dits industrial applicability and therapeutic properties. Lavenders are harvested in the nature or propagated using traditional methodologies. More recently micropropagation protocols have been developed for several Lavandula species allowing a production of a high amount of plants available at any time of the year without compromising the biodiversity of the species. Another efficient way to potentially increase the value of Lavandula species is through the development of tetraploid plants, capable of raising the production of essential oils in flowers. In Portugal, there are 5 native species of the genus Lavandula, widely distributed throughout the country. However, native Portuguese lavenders remain mainly unexplored and have received poor recognition in markets. A recent study was carried out in order to evaluate the biological properties of the oils and also to understand how they may exercise their effects, contributing to enhance the economic potential of lavandulas in Portugal. This review attempts to provide an overview about the application of in vitrocultivations for the production of essential oils in Lavandulaspp., with special emphasis on native lavandulas of Portugal.

Caracterização citogenética para identificação dos níveis de ploidia em cinco espécies do gênero Mentha L / Citogenetic characterization to determination of ploidy level on five Mentha L. species

Neste trabalho foi feita a caracterização citogenética da: microsporogênese, tétrades, estimativa da viabilidade do pólen pelo método de coloração e contagem do número máximo de nucléolos por célula interfásica, para identificação dos níveis de ploidia, em cinco espécies do gênero Mentha L. Foram coletadas inflorescências em 30 plantas de cada espécie, em duas florações sucessivas, nos anos 2006 e 2007. As inflorescências foram tratadas em etanol-ácido acético (3:1), em temperatura ambiente durante seis horas, transferidas para álcool 70% (v/v) e conservadas em geladeira até análise. Nas análises da microsporogênese, tétrades e pólen o corante usado foi carmin propiônico 2% e na identificação dos nucléolos nitrato de prata (AgNO3). Os resultados demonstraram que as cinco espécies são poliplóides. M. crispa heptaplóide (2n=7x=84) com 11 nucléolos, M. spicata tetraplóide (2n=4x=48) com 8 nucléolos, M.x gentilis pentaplóide (2n=5x=60) com 12 nucleólos, M. piperita e M.x piperita ambas hexaplóides (2n=6x=72) com 8 e 9 nucléolos respectivamente. M. spicata e M. crispa mantiveram as mais altas porcentagens de células normais na microsporogênese, na formação de tétrades e na estimativa da viabilidade do pólen por coloração, sugerindo maior estabilidade meiótica quando comparados aos demais poliplóides estudados.

The cytogenetic characterization of five species of Mentha L. genus, including the data: regularity of microsporogenesis and tetrads, and polen viability, using the coloration method and the counting of the maximum number of nucleolus by interphasic cell were carried out in this study to identify the ploid levels. These analyses were performed from inflorescences collected in 30 plants of each species, during two successive florations in 2006 and 2007. Inflorescences were treated in 3:1 ethanol:acetic acid mixture at room temperature during six hours, then transferred to 70%(v/v) ethanol solution and refrigerated until the analysis. For microsporogenis, tetrad and pollen analysis, we used carmine propionic 2% (m/v) and for nucleolus identification, we used AgNO3 solution. It was possible to observe that all five species were polyploids. M. crispa heptaploid (2n=7x=84) with 11 nucleolus, M. spicata tetraploid (2n=4x=48) with 8 nucleolus, M. x gentilis pentaploid (2n=5x=60) with 12 nucleolus, M. piperita and M. x piperita both hexaploid (2n=6x=72) with 8 and 9 nucleolus respectively. M. spicata and M. crispa kept the highest percentual values of normal cells in microsporogenesis as well as in tetrads formation and pollen viability, suggesting a higher meiotic stability when compared to the other polyploids studied.

Cytogenetic aberrations in primary cell cultures of the ovarian surface epithelium / Aberraciones citogenéticas en cultivos primarios del epitelio superficial del ovario

Our objective was to determine the presence of chromosomal abnormalities in primary cultures of ovarian surface epithelial cells in women of different ages with no history of cancer. Throughout conventional cytogenetic techniques, we analyzed chromosome spreads of cultured ovarian epithelial cells from 10 donors who were 50 or more years old (B) and 16 controls between 20 and 49 years old (A), belonging to the mestizo population in Bogota DC, Colombia. Of the 26 cultures that were analyzed in passage 1, 61.5% had an abnormal chromosome complement (62.5% in A, and 60% in B). Abnormalities included polyploidies, endoduplications and monosomies. Deletions in chromosomes 3 and 11 were found in just one metaphase. None of the samples showed weaknesses or breakpoints. After transforming and applying the exact student’s t-test for variance heterogeneity, we found significant differences in the frequency of metaphases, that were higher in A than in B (p=0.05), and in the frequency of polyploidies, which were higher in B than in A (p=0.044). Through the application of the Mann-Whitney test, we determined that the frequency of endoduplications was higher in A than in B (p=0.126), without reaching significant differences. There were no significant differences in the frequency of monosomies. The level of significance was set at p £ 0.05. Taking into account that polyploidization is a marker of chromosomal instability and that the risk of cancer arising from the ovarian surface epithelium augments substantially after menopause, the increase in the frequency of age-associated polyploidies could be used as a predictor of ovarian cancer in women from an ethnically homogeneous population as the mestizo one in Bogota DC.

El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de anormalidades cromosómicas en cultivos primarios de células del epitelio superficial ovárico en mujeres de diferentes edades, sin antecedentes de cáncer. Mediante técnicas de citogenética convencional fueron analizados extendidos de células epiteliales ováricas histológicamente normales, provenientes de cultivos primarios de 10 donantes de 50 o más años (B) y de 16 donantes entre 20 y 49 años que se utilizaron como grupo control (A), pertenecientes a la población mestiza de Bogotá DC, Colombia. De 26 cultivos examinados en pase 1, 61,5% presentó complemento cromosómico anormal, 62,5% en A y 60% en B. Las anomalías numéricas halladas, todas en mosaico, incluyeron poliploidías, endoduplicaciones y monosomías. En una única célula en metafase de un cultivo, se presentaron deleciones en los cromosomas 3 y 11. Ninguna muestra presentó fragilidades o roturas. Previa aplicación de transformaciones, con la prueba exacta t-student para varianzas heterogéneas, se encontraron diferencias significativas en la frecuencia de células con metafase normal, mayor en A que en B (p=0,05) y en la de poliploidías, mayor en B que en A (p=0,044). Con la prueba exacta de Mann-Whitney se determinó que la frecuencia de endoduplicaciones en A fue mayor que en B (p=0,126), sin alcanzar diferencias significativas y que no hubo diferencias significativas en la frecuencia de monosomías. El nivel de significación fue p £ 0,05. Si se tiene en cuenta que la poliploidización es un marcador de inestabilidad cromosómica y, que además, el riesgo de aparición de cáncer derivado del epitelio superficial del ovario aumenta sustancialmente después de la menopausia, el incremento en la frecuencia de poliploidías asociado con la edad podría ser utilizado como predictor de cáncer ovárico en mujeres de una población étnicamente homogénea como la población mestiza de Bogotá DC.

Survival and development in vitro of Cattleya (Orchidaceae) submitted to treatments with different treatments of colchicines / Sobrevivência e desenvolvimento in vitro de Cattleya (Orchidaceae) submetida a tratamentos com colchicina

Polyploidy produces desirable characteristicsin orchids that are represented by increase of the floral pieces, succulency degree, intensification of color, durability and larger resistance of  flowers. The colchicine as polyploidy inductor agent in in vitro culture of plants has limitations, because when in high concentrations or very long treatments, it becomes poisonous for the vegetal tissues. The objective of this research work was to evaluate the influence of concentrations and times of exposition to the colchicine, on the survival and on the in vitro development of Cattleya tigrina. Protocorms were treated with colchicine in the concentrations of 0.5 and 1g.L-1 during 24, 48 and 72 hours. There were evaluated the tax of survival of the protocorms (%), percentage of plantlings with multiple buds and plant height after three and seven months. The increase of the concentration and of the time of exposition to  colchicine caused a larger plant mortality and an increase of  plantlings with reduced height. 

Nas orquidáceas, a poliploidia produz características desejáveis, que se traduzem em aumento das peças florais, grau de suculência, intensificação do colorido, durabilidade e maior resistência das flores. A colchicina como agente indutor de poliploidia em cultura de plantas in vitro tem suas limitações, pois em elevadas concentrações ou tratamentos muito prolongados, torna-se tóxica. O objetivo do trabalho foi avaliar a influência da concentração e do tempo de exposição à colchicina, na sobrevivência e no desenvolvimento in vitro de Cattleya tigrina. Protocormos foram tratados com colchicina em concentrações de 0,5 e 1g.L-1 durante 24, 48 e 72 horas. Foram avaliados taxa de sobrevivência dos protocormos (%), porcentagem de plântulas com múltiplas brotações e altura após três e sete meses. Com o aumento da concentração e do tempo de exposição à colchicina houve maior mortalidade e aumento do número de plântulas com múltiplas brotações e altura reduzida.

Microsporogenesis in Brachiaria bovonei (Chiov.) Robyns and B. subulifolia (Mez) Clayton (Poaceae)

Some African species of Brachiaria have been introduced into the Americas and became the most important forage for pastures in the tropics. New cultivars can be obtained either from direct selections from the natural existing variability in the germplasm collections or from interspecific hybridizations. Polyploidy is predominant in the genus Brachiaria and correlated with apomixis which complicates hybridization. The objective of cytological studies underway on the Brachiaria germplasm collection at Embrapa Beef Cattle is to determine the chromosome number and meiotic behavior of accessions. For the breeding of Brachiaria species, compatible sexual and apomictic accessions need to be identified. Microsporogenesis was evaluated in two accessions of Brachiaria bovonei (BO01 and BO05) and one accession of B. subulifolia (SU01). BO01 is pentaploid (2n = 5x = 45), BO05 is tetraploid (2n = 4x = 36), and SU01 is hexaploid (2n = 6x = 54), derived from x = 9. Meiotic abnormalities typical of polyploids, characterized by precocious chromosome migration to the poles in metaphases, laggard chromosomes in anaphases, and micronuclei in telophases and tetrads, were recorded in high frequency in all the accessions generating unbalanced gametes. Both accessions of B. bovonei presented chromosome stickiness. The results are discussed in the view of the Brachiaria breeding program objectives.

Algumas espécies africanas de Brachiaria foram introduzidas nas Américas e tornaram-se importantes pastagens nos trópicos. Novas cultivares podem ser obtidas por seleção direta da variabilidade genética existente na coleção de germoplasma ou por hibridização interespecífica. Poliploidia é predominante no gênero Brachiaria e correlacionada com apomixia, o que complica a hibridização. O objetivo dos estudos citogenéticos na coleção de germoplasma de Brachiaria da Embrapa Gado de Corte é determinar o número de cromossomos e o comportamento meiótico dos acessos. A microsporogênese foi avaliada em dois acessos de Brachiaria bovonei (BO01 e BO05) e um acesso de B. subulifolia (SU01). BO01 é pentaplóide (2n = 5x = 45), BO05 é tetraplóide (2n = 4x = 36), e SU01 é hexaplóide (2n = 6x = 54), todos derivados de x = 9. Anormalidades meióticas típicas de poliplóides, caracterizadas por migração precoce de cromossomos para os pólos em metáfases, cromossomos retardatários em anáfases, e micronúcleos em telófases e tétrades foram observadas em alta freqüência em todos os acessos gerando gametas geneticamente desbalanceados. Ambos os acessos de B. bovonei apresentaram aderências cromossômicas. Os resultados são discutidos sob o ponto de vista dos objetivos do melhoramento genético.

Microsporogenesis in Brachiaria bovonei (Chiov.) Robyns and B. subulifolia (Mez) Clayton (Poaceae)

Some African species of Brachiaria have been introduced into the Americas and became the most important forage for pastures in the tropics. New cultivars can be obtained either from direct selections from the natural existing variability in the germplasm collections or from interspecific hybridizations. Polyploidy is predominant in the genus Brachiaria and correlated with apomixis which complicates hybridization. The objective of cytological studies underway on the Brachiaria germplasm collection at Embrapa Beef Cattle is to determine the chromosome number and meiotic behavior of accessions. For the breeding of Brachiaria species, compatible sexual and apomictic accessions need to be identified. Microsporogenesis was evaluated in two accessions of Brachiaria bovonei (BO01 and BO05) and one accession of B. subulifolia (SU01). BO01 is pentaploid (2n = 5x = 45), BO05 is tetraploid (2n = 4x = 36), and SU01 is hexaploid (2n = 6x = 54), derived from x = 9. Meiotic abnormalities typical of polyploids, characterized by precocious chromosome migration to the poles in metaphases, laggard chromosomes in anaphases, and micronuclei in telophases and tetrads, were recorded in high frequency in all the accessions generating unbalanced gametes. Both accessions of B. bovonei presented chromosome stickiness. The results are discussed in the view of the Brachiaria breeding program objectives.

Algumas espécies africanas de Brachiaria foram introduzidas nas Américas e tornaram-se importantes pastagens nos trópicos. Novas cultivares podem ser obtidas por seleção direta da variabilidade genética existente na coleção de germoplasma ou por hibridização interespecífica. Poliploidia é predominante no gênero Brachiaria e correlacionada com apomixia, o que complica a hibridização. O objetivo dos estudos citogenéticos na coleção de germoplasma de Brachiaria da Embrapa Gado de Corte é determinar o número de cromossomos e o comportamento meiótico dos acessos. A microsporogênese foi avaliada em dois acessos de Brachiaria bovonei (BO01 e BO05) e um acesso de B. subulifolia (SU01). BO01 é pentaplóide (2n = 5x = 45), BO05 é tetraplóide (2n = 4x = 36), e SU01 é hexaplóide (2n = 6x = 54), todos derivados de x = 9. Anormalidades meióticas típicas de poliplóides, caracterizadas por migração precoce de cromossomos para os pólos em metáfases, cromossomos retardatários em anáfases, e micronúcleos em telófases e tétrades foram observadas em alta freqüência em todos os acessos gerando gametas geneticamente desbalanceados. Ambos os acessos de B. bovonei apresentaram aderências cromossômicas. Os resultados são discutidos sob o ponto de vista dos objetivos do melhoramento genético.

Regeneração hepática induzida por ressecção segmentar do fígado, em rato / Hepatic regeneration induced by segmental liver resection, in rats

OBJETIVO: Avaliar a regeneração progressiva do parênquima hepatocitário, nos seus aspectos macro e microscópicos, em pós-operatório imediato e tardio de ressecção segmentar do fígado. MÉTODO: Foram estudados 10 ratos machos albinos da raça Wistar, pesando entre 250 e 300 gramas, submetidos à hepatectomia parcial de lobo esquerdo, com retirada de cerca de 20 por cento da massa total do órgão. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos (n=5) para estudo no 7º (Grupo 1) e 21º (Grupo 2) dias pós-operatórios. Decorrido o tempo de acompanhamento, avaliou-se o aspecto macroscópico e microscópico do fígado. RESULTADOS: No Grupo 1, após sete dias, os animais apresentavam a cavidade abdominal com poucas aderências. O fígado mostrava reação cicatricial no local da ressecção, porém seu tamanho já era próximo ao normal. O exame histopatológico mostrou freqüentes sinais de poliploidia dos hepatócitos, além de tecido de granulação frouxo e desordenado, acompanhado de escasso infiltrado de células inflamatórias. O Grupo 2, após 21 dias, mostrava poucas aderências na cavidade abdominal, e o fígado com aspecto e dimensões próximos ao normal. A histologia mostrou tecido cicatricial mais denso, ordenado, sem sinais inflamatórios. Observou-se apenas pequeno grau de poliploidia hepatocitária. CONCLUSÃO: Após remoção cirúrgica de 20 por cento do parênquima hepático houve aumento temporário da renovação celular verificado por poliploidia hepatocitária.

BACKGROUND: To assess the progression of liver regeneration after partial hepatic resection. METHODS: Ten Wistar adult rats, of both sexes were studied. After anesthesia with ether, the animals were submitted to a left lobe parcial hepatectomy . Rats were randomly divided into two groups (n=5) according to the day macro and microscopic studies were carried out, 7th (Group 1) or 21st postoperative days. RESULTS: All rats survived throughout the experimental protocol. The main finding on the seventh day was intraabdominal adhesions. Microscopical examination showed hepatocyte proliferation (polyploid nuclei, mitotic activity) and pattern of acute inflammation. On the twenty-first day, liver aspect was normal. No inflammatory response was observed, and only a few poliploid nuclei were found. CONCLUSION: Recovery of the liver occurs after partial hepatectomy by means of hepatocyte poliploidy.

GAMETAS NÃO REDUZIDOS NO MELHORAMENTO DE PLANTAS

The role of unreduced (2n) gametes, those with the somatic chromosome number, in the origin of polyploids and in plant breeding are reviewed. It is accepted that polyploids originated in nature rather by fusion of unreduced gametes than by somatic duplication. These gametes are formed by meiotic non-reduction, in the first division restitution (FDR) or in the second division restitution (SDR). They are normally found in natural populations in very low frequencies, with some remarkable exceptions, and are under genetic and environmental influence. Detection of 2n gametes, which are much more studied in male meiosis, is mainly accomplished by pollen grains size and detection of dyads and tryads at the end of meiosis II. Unreduced gametes are utilized in plant breeding in two ways: in uni or bilateral polyploidization, which maintains in the newly formed polyploid the heterozygosis lost through somatic duplication, and as a bridge to transfer desirable genes from wild diploid species into the cultivated polyploid genepool, by example in alfalfa. The manipulation of unreduced gametes should be considered as an important tool in plant breeding.

Nesta revisão são abordados o papel dos gametas não reduzidos (gametas 2n), ou seja, aqueles com o número somático de cromossomos, na origem dos poliplóides, e sua utilização no melhoramento genético de plantas. Aceita-se que a origem dos poliplóides na natureza tenha ocorrido pela fusão de gametas não reduzidos e não pela duplicação somática. Esses gametas são formados por uma não redução cromossômica durante a meiose, que pode ocorrer de duas formas: na meiose I, pela RPD (restituição na primeira divisão), ou na meiose II, pela RSD (restituição na segunda divisão). Normalmente, são encontrados em baixíssimas freqüências em populações naturais, com notáveis exceções, e sua formação é influenciada por fatores genéticos e ambientais. A detecção dos gametas 2n, mais estudados na meiose masculina do que na feminina, é mais freqüentemente feita pela medida de grãos de pólen, ou pela presença de díades e tríades ao final da meiose II. No melhoramento, são utilizados basicamente de duas formas: na poliploidização sexual, uni ou bilateral, que mantém, no poliplóide, a heterozigose que é perdida durante a duplicação somática de cromossomos, e como uma ponte para transferir genes desejáveis de espécies silvestres diplóides para cultivadas poliplóides, como, por exemplo, no caso da alfafa. A manipulação de gametas não reduzidos deve ser considerada como uma ferramenta importante para o melhorista.

Gametas não reduzidos no melhoramento de plantas

The role of unreduced (2n) gametes, those with the somatic chromosome number, in the origin of polyploids and in plant breeding are reviewed. It is accepted that polyploids originated in nature rather by fusion of unreduced gametes than by somatic duplication. These gametes are formed by meiotic non-reduction, in the first division restitution (FDR) or in the second division restitution (SDR). They are normally found in natural populations in very low frequencies, with some remarkable exceptions, and are under genetic and environmental influence. Detection of 2n gametes, which are much more studied in male meiosis, is mainly accomplished by pollen grains size and detection of dyads and tryads at the end of meiosis II. Unreduced gametes are utilized in plant breeding in two ways: in uni or bilateral polyploidization, which maintains in the newly formed polyploid the heterozygosis lost through somatic duplication, and as a bridge to transfer desirable genes from wild diploid species into the cultivated polyploid genepool, by example in alfalfa. The manipulation of unreduced gametes should be considered as an important tool in plant breeding.

Nesta revisão são abordados o papel dos gametas não reduzidos (gametas 2n), ou seja, aqueles com o número somático de cromossomos, na origem dos poliplóides, e sua utilização no melhoramento genético de plantas. Aceita-se que a origem dos poliplóides na natureza tenha ocorrido pela fusão de gametas não reduzidos e não pela duplicação somática. Esses gametas são formados por uma não redução cromossômica durante a meiose, que pode ocorrer de duas formas: na meiose I, pela RPD (restituição na primeira divisão), ou na meiose II, pela RSD (restituição na segunda divisão). Normalmente, são encontrados em baixíssimas freqüências em populações naturais, com notáveis exceções, e sua formação é influenciada por fatores genéticos e ambientais. A detecção dos gametas 2n, mais estudados na meiose masculina do que na feminina, é mais freqüentemente feita pela medida de grãos de pólen, ou pela presença de díades e tríades ao final da meiose II. No melhoramento, são utilizados basicamente de duas formas: na poliploidização sexual, uni ou bilateral, que mantém, no poliplóide, a heterozigose que é perdida durante a duplicação somática de cromossomos, e como uma ponte para transferir genes desejáveis de espécies silvestres diplóides para cultivadas poliplóides, como, por exemplo, no caso da alfafa. A manipulação de gametas não reduzidos deve ser considerada como uma ferramenta importante para o melhorista.

Induction and identification of polyploids in Cattleya intermedia Lindl. (orchidaceae) by in vitro techniques

The effect of colchicine on the protocorm-like bodies of Cattleya intermedia L. (Orchidaceae) cultured in vitro was studied. Different concentrations of the drug (0.00, 0.05, 0.10 and 0.20%) as well as two times of culture (4 or 8 days) were tested to determine the best treatment for the induction of tetraploid plants. Of the 3 colchicine levels applied, 0.05 and 0.10% of drug treatments appeared to be effective on the production of mixoploids and tetraploids and could be further used in breeding programs. The suitability of stomatal area and stomata density as criteria for the distinction between diploids and tetraploids was also tested. The results suggested that tetraploid plants could be identified with a fair amount of certainty when the screening was based on the density of stomata.

No presente trabalho, foi estudado o efeito da colchicina em corpos semelhantes a protocormos de Cattleya intermedia L. (Orchidaceae). Diferentes concentrações da droga (0,00; 0,05; 0,10 e 0,20%), bem como diferentes tempos de cultura (4 ou 8 dias) foram testados para determinar o melhor tratamento para a indução de plantas tetraplóides. Dos três níveis de colchicina aplicados, os tratamentos com 0,05 e 0,10% da droga parecem ser mais efetivos na produção de mixoplóides e tetraplóides, sendo que tais tratamentos podem ser utilizados em programas de melhoramento. Como critério para distinção entre diplóides e tetraplóides, foram realizadas medidas de área de estômatos e densidade de estômatos das folhas. Os resultados sugerem que as plantas tetraplóides podem ser identificadas com elevado grau de certeza quando a seleção é realizada com base na densidade de estômatos.

Induction and identification of polyploids in Cattleya intermedia Lindl. (orchidaceae) by in vitro techniques

The effect of colchicine on the protocorm-like bodies of Cattleya intermedia L. (Orchidaceae) cultured in vitro was studied. Different concentrations of the drug (0.00, 0.05, 0.10 and 0.20%) as well as two times of culture (4 or 8 days) were tested to determine the best treatment for the induction of tetraploid plants. Of the 3 colchicine levels applied, 0.05 and 0.10% of drug treatments appeared to be effective on the production of mixoploids and tetraploids and could be further used in breeding programs. The suitability of stomatal area and stomata density as criteria for the distinction between diploids and tetraploids was also tested. The results suggested that tetraploid plants could be identified with a fair amount of certainty when the screening was based on the density of stomata.

No presente trabalho, foi estudado o efeito da colchicina em corpos semelhantes a protocormos de Cattleya intermedia L. (Orchidaceae). Diferentes concentrações da droga (0,00; 0,05; 0,10 e 0,20%), bem como diferentes tempos de cultura (4 ou 8 dias) foram testados para determinar o melhor tratamento para a indução de plantas tetraplóides. Dos três níveis de colchicina aplicados, os tratamentos com 0,05 e 0,10% da droga parecem ser mais efetivos na produção de mixoplóides e tetraplóides, sendo que tais tratamentos podem ser utilizados em programas de melhoramento. Como critério para distinção entre diplóides e tetraplóides, foram realizadas medidas de área de estômatos e densidade de estômatos das folhas. Os resultados sugerem que as plantas tetraplóides podem ser identificadas com elevado grau de certeza quando a seleção é realizada com base na densidade de estômatos.