Mycosynthesis of silver nanoparticles using psychrotrophic strains of Tulasnella albida Bourdot & Galzin from the South Orkney Islands (Antarctica).

This study is the first report on mycosynthesis of silver nanoparticles (NPs) using psychrotrophic Antarctic filamentous fungi, and the first report regarding Tulasnella (Basidiomycota). In this work, the ability to synthesize silver NPs from cell free filtrates of strains of Tulasnella albida isolated from Antarctica was assessed. All fungal filtrates were capable of synthesizing silver NPs with the addition of AgNO3. UV-vis spectroscopy, TEM and SEM microscopy analyses were performed to characterize the synthesized NPs. ATR-FTIR and Micro Raman spectroscopy analyses were conducted to find functional groups responsible for the reduction of AgNO3 and to detect the presence of silver oxide on the AgNPs. Theoretical calculations of optical absorption based on core-shell Ag-Ag2O were used to characterize the experimental absorption spectra of silver NPs colloids. Spherically shaped silver NPs, typically 2-3nm in diameter, were obtained. The largest ones showed a capping shell around them, which could be associated with the formation of small silver NPs. Functional groups corresponding to amides and alcohols were detected, confirming the presence of proteins as possible intermediates in the synthesis of AgNPs. On the other hand, the Micro Raman analysis confirms the presence of silver oxide on the surface of the AgNPs. This work presents a simple procedure for the synthesis of silver NPs using a psychrotrophic organism that could be interesting for the industry.

Presence of aprX gene in Pseudomonas spp. from refrigerated raw milk and their proteolytic ability / Presença do gene aprX em Pseudomonas spp. isolados de leite cru refrigerado e sua capacidade proteolítica

This study aimed to determine the frequency of Pseudomonas fluorescens, P. putida, and P. aeruginosa in refrigerated raw milk; their proteolytic potential; and your association with the aprX gene. Of the 173 isolates confirmed as belonging to Pseudomonas spp., 37% were P. fluorescens, 25.4% P. putida, and none belongs to P. aeruginosa. The aprX gene was distributed proportionally between P. putida (68%) and P. fluorescens (75%), but it was not associated with low or high proteolytic potential in both species. P. putida (16) and P. fluorescens (14) isolates with no aprX gene identified also had proteolytic potential. Considering the synthesis of proteases other than AprX by the isolates under study, we concluded that P. fluorescens and P. putida represented 62.4% of the Pseudomonas genus, with high probability of having the aprX gene and proteolytic potential. However, there was no association between the deteriorating potential with the presence of the aprX gene.(AU)

O objetivo do estudo foi verificar a frequência, em leite cru refrigerado de Pseudomonas fluorescens, P. putida e P. aeruginosa, o potencial proteolítico dos isolados e sua associação com a presença do gene aprX. Dos 173 isolados confirmados como pertencente ao gênero Pseudomonas spp, 37% foram P. fluorescens, 25,4% P. putida e nenhum pertencia à espécie P. aeruginosa. A prevalência do gene aprX se distribuiu proporcionalmente entre P.putida (68%) e P.fluorescens (75%) porém não foi associada ao baixo ou alto potencial proteolítico nas duas espécies avaliadas. P. putida (16) e P. fluorescens (14) que não tiveram o gene aprX identificado também expressaram potencial proteolítico, considerando-se a síntese de outras proteases além da AprX pelos isolados estudados. Concluiu-se que Pseudomonas fluorescens e P. putida representaram 62,4 % do gênero Pseudomonas ssp., com alta probabilidade da presença do gene aprX e potencial proteolítico, porém sem associação da expressão do potencial deteriorante com a presença do gene aprX.(AU)

Proteolytic behavior of isolated Pseudomonas spp. from refrigerated raw milk in different concentrations and storage temperatures / Comportamento proteolítico de Pseudomonas spp. isoladas de leite cru refrigerado em diferentes concentrações e temperaturas de estocagem

The objective of the work was to evaluate the multiplication capacity and proteolytic activity of different Pseudomonas spp. cell counts inoculated in milk and storaged under different temperature. Strains isolated from refrigerated raw milk (RRM) were confirmed at genus level by Polymerase Chain Reaction (PCR). The Pseudomonas spp. was cultured in cephalothin-sodium fusidate-cetrimide (CFC) agar-base (30?C for 48 h) until it reached 2 log and 6 log CFU mL-1. Three of eight strains confirmed as Pseudomonas spp were inoculated in sterile reconstituted whole milk powder and incubated at 2C, 4C, and 8C for 96 h. Primary proteolysis indices was determined by the Kjeldahl method. When taking into account the effect of storage time in Pseudomonas spp. population, it was found that the initial population (2 log CFU mL-1) showed significant difference in growth rates only from 0 h to 24 h, keeping at the same levels along 96 h. When a higher initial population was incubated (6 log CFU mL-1), it was not observed a significant difference for times tested. Related to the effect of storage time in proteolysis index, it was not observed a significant difference in samples inoculated with 2 and 6 log CFU mL-1 Pseudomonas spp. When we analyzed the influence of storage temperature on the bacterial multiplication, there was a significant difference in the Pseudomonas spp. population...

O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de multiplicação e a atividade proteolítica de diferentes populações de Pseudomonas spp. inoculadas em leite e estocadas em diferentes temperaturas. Cepas isoladas de leite cru refrigerado (LCR) tiveram o gênero confirmado pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Pseudomonas spp. foram isoladas em ágar pseudomonas adicionado de cephalothin-sodium fusidate-cetrimide (30?C por 48 h) até atingir as populações de 2 log e 6 log UFC mL-1. Três de oito cepas confirmadas como Pseudomonas spp. foram inoculadas em leite em pó integral reconstituído esterilizado e incubadas a 2C, 4C e 8C por 96 h. O índice de proteólise primária foi determinado pelo método de Kjeldahl. Considerando o efeito do tempo de estocagem na multiplicação de Pseudomonas spp., observou-se que nas baixas populações iniciais (2 log CFU mL-1) houve diferença significativa na multiplicação bacteriana apenas de 0 h para 24 h, mantendo-se estável ao longo das 96 horas de estocagem. Quando uma população inicial mais alta (6 log UFC mL-1) foi estocada, não observou-se diferença significativa entre o tempo zero e os demais testados. Em relação ao efeito do tempo de estocagem no índice de proteólise, não foi encontrada diferença significativa neste índice, nas amostras com inóculo inicial de 2 e 6 log UFC mL-1 de Pseudomonas spp. Quando foi analisado o efeito da...

Proteolytic behavior of isolated Pseudomonas spp. from refrigerated raw milk in different concentrations and storage temperatures / Comportamento proteolítico de Pseudomonas spp. isoladas de leite cru refrigerado em diferentes concentrações e temperaturas de estocagem

The objective of the work was to evaluate the multiplication capacity and proteolytic activity of different Pseudomonas spp. cell counts inoculated in milk and storaged under different temperature. Strains isolated from refrigerated raw milk (RRM) were confirmed at genus level by Polymerase Chain Reaction (PCR). The Pseudomonas spp. was cultured in cephalothin-sodium fusidate-cetrimide (CFC) agar-base (30?C for 48 h) until it reached 2 log and 6 log CFU mL-1. Three of eight strains confirmed as Pseudomonas spp were inoculated in sterile reconstituted whole milk powder and incubated at 2C, 4C, and 8C for 96 h. Primary proteolysis indices was determined by the Kjeldahl method. When taking into account the effect of storage time in Pseudomonas spp. population, it was found that the initial population (2 log CFU mL-1) showed significant difference in growth rates only from 0 h to 24 h, keeping at the same levels along 96 h. When a higher initial population was incubated (6 log CFU mL-1), it was not observed a significant difference for times tested. Related to the effect of storage time in proteolysis index, it was not observed a significant difference in samples inoculated with 2 and 6 log CFU mL-1 Pseudomonas spp. When we analyzed the influence of storage temperature on the bacterial multiplication, there was a significant difference in the Pseudomonas spp. population...(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de multiplicação e a atividade proteolítica de diferentes populações de Pseudomonas spp. inoculadas em leite e estocadas em diferentes temperaturas. Cepas isoladas de leite cru refrigerado (LCR) tiveram o gênero confirmado pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Pseudomonas spp. foram isoladas em ágar pseudomonas adicionado de cephalothin-sodium fusidate-cetrimide (30?C por 48 h) até atingir as populações de 2 log e 6 log UFC mL-1. Três de oito cepas confirmadas como Pseudomonas spp. foram inoculadas em leite em pó integral reconstituído esterilizado e incubadas a 2C, 4C e 8C por 96 h. O índice de proteólise primária foi determinado pelo método de Kjeldahl. Considerando o efeito do tempo de estocagem na multiplicação de Pseudomonas spp., observou-se que nas baixas populações iniciais (2 log CFU mL-1) houve diferença significativa na multiplicação bacteriana apenas de 0 h para 24 h, mantendo-se estável ao longo das 96 horas de estocagem. Quando uma população inicial mais alta (6 log UFC mL-1) foi estocada, não observou-se diferença significativa entre o tempo zero e os demais testados. Em relação ao efeito do tempo de estocagem no índice de proteólise, não foi encontrada diferença significativa neste índice, nas amostras com inóculo inicial de 2 e 6 log UFC mL-1 de Pseudomonas spp. Quando foi analisado o efeito da...(AU)

Pseudomonas spp. and P. fluorescens: population in refrigerated raw milk / Pseudomonas spp. e P. fluorescens: população em leite cru refrigerado

Raw milk samples were collected from cooling tanks (after they cooled for 48 h) in five dairy farms and the corresponding bulk tank (bulk milk transportation, BMT) when they arrived to the industry. Routine physical chemical analyzes and quantification of psychrotrophic (Pseudomonas spp. and P. fluorescens) and aerobic mesophilic (AM) populations were performed. Only relative density and titratable acidity values for samples of milk from three farms were in agreement to the quality parameters required by law. In the BMT, only the protein content has not reached the minimum value established by law, and counting was performed for AM (>105 colony forming units (CFU) mL-1) and psychrotrophic bacteria (2.8x106CFU mL-1). Pseudomonas spp. counting corresponded to 17.9% of the psychrotrophic population, and P. fluorescens was 3.4% of Pseudomonas spp . count. In milk samples from dairy farms, counts were variable for AM (3.4x105 to 3.7 x107CFU mL-1), psychrotrophic (4.0x104 to 3.1x106CFU mL-1), Pseudomonas spp. (2.3x104 to 1.8x105CFU mL-1), and P. fluorescens (62 to 8.4x103CFU mL-1). For the populations studied, no statistical difference (P>0.05) was observed between counts reported in milk samples collected in dairy farms (cooling tanks) and BMT. Therefore, the genera Pseudomonas spp. and P. fluorescens were not the most frequent psychrotrophic bacteria in this studied milk transportation line.

Amostras de leite foram coletadas de tanques de refrigeração (após 48h de refrigeração) em cinco fazendas de produção e do respectivo caminhão tanque (leite de conjunto, LC) ao chegar à indústria beneficiadora. Análises físico químicas de rotina e quantificação das populações de bactérias psicrotróficas (Pseudomonas spp. e P. fluorescens) e aeróbios mesófilos (AM) foram realizadas. Apenas os valores de densidade relativa e acidez titulável de amostras de leite de três fazendas estavam de acordo com a legislação. No LC, apenas o teor de proteína não atingiu o valor mínimo estabelecido por lei, e a contagem foi realizada para AM (>105 unidades formadoras de colônias (UFC) mL-1) e psicrotróficos (2,8x106UFC mL-1). A contagem de Pseudomonas spp. correspondeu a 17,9% da população de psicrotróficos, e 3,4% da contagem de Pseudomonas spp. eram da espécie P. fluorescens . Nas amostras de leite das fazendas de produtoras, as contagens foram variáveis para AM (3,4x105a 3,7x107UFC mL-1), psicrotróficos (4,0x104 a 3,1x106UFC mL-1), Pseudomonas spp. (2,3x104 a 1,8x105UFC mL-1) e P. fluorescens (62 a 8,4x103UFC mL-1). Para as populações estudadas, nenhuma diferença estatística (P>0,05) foi observada entre as contagens encontradas nas amostras de leite coletadas nas fazendas (tanques de resfriamento) e do LC. Portanto, o gênero Pseudomonas spp. e a espécie P. fluorescens não foram os psicrotróficos mais frequentes nesta linha de transporte de leite estudada.

Pseudomonas spp. and P. fluorescens: population in refrigerated raw milk / Pseudomonas spp. e P. fluorescens: população em leite cru refrigerado

Raw milk samples were collected from cooling tanks (after they cooled for 48 h) in five dairy farms and the corresponding bulk tank (bulk milk transportation, BMT) when they arrived to the industry. Routine physical chemical analyzes and quantification of psychrotrophic (Pseudomonas spp. and P. fluorescens) and aerobic mesophilic (AM) populations were performed. Only relative density and titratable acidity values for samples of milk from three farms were in agreement to the quality parameters required by law. In the BMT, only the protein content has not reached the minimum value established by law, and counting was performed for AM (>105 colony forming units (CFU) mL-1) and psychrotrophic bacteria (2.8x106CFU mL-1). Pseudomonas spp. counting corresponded to 17.9% of the psychrotrophic population, and P. fluorescens was 3.4% of Pseudomonas spp . count. In milk samples from dairy farms, counts were variable for AM (3.4x105 to 3.7 x107CFU mL-1), psychrotrophic (4.0x104 to 3.1x106CFU mL-1), Pseudomonas spp. (2.3x104 to 1.8x105CFU mL-1), and P. fluorescens (62 to 8.4x103CFU mL-1). For the populations studied, no statistical difference (P>0.05) was observed between counts reported in milk samples collected in dairy farms (cooling tanks) and BMT. Therefore, the genera Pseudomonas spp. and P. fluorescens were not the most frequent psychrotrophic bacteria in this studied milk transportation line.(AU)

Amostras de leite foram coletadas de tanques de refrigeração (após 48h de refrigeração) em cinco fazendas de produção e do respectivo caminhão tanque (leite de conjunto, LC) ao chegar à indústria beneficiadora. Análises físico químicas de rotina e quantificação das populações de bactérias psicrotróficas (Pseudomonas spp. e P. fluorescens) e aeróbios mesófilos (AM) foram realizadas. Apenas os valores de densidade relativa e acidez titulável de amostras de leite de três fazendas estavam de acordo com a legislação. No LC, apenas o teor de proteína não atingiu o valor mínimo estabelecido por lei, e a contagem foi realizada para AM (>105 unidades formadoras de colônias (UFC) mL-1) e psicrotróficos (2,8x106UFC mL-1). A contagem de Pseudomonas spp. correspondeu a 17,9% da população de psicrotróficos, e 3,4% da contagem de Pseudomonas spp. eram da espécie P. fluorescens . Nas amostras de leite das fazendas de produtoras, as contagens foram variáveis para AM (3,4x105a 3,7x107UFC mL-1), psicrotróficos (4,0x104 a 3,1x106UFC mL-1), Pseudomonas spp. (2,3x104 a 1,8x105UFC mL-1) e P. fluorescens (62 a 8,4x103UFC mL-1). Para as populações estudadas, nenhuma diferença estatística (P>0,05) foi observada entre as contagens encontradas nas amostras de leite coletadas nas fazendas (tanques de resfriamento) e do LC. Portanto, o gênero Pseudomonas spp. e a espécie P. fluorescens não foram os psicrotróficos mais frequentes nesta linha de transporte de leite estudada.(AU)

Pseudomonas spp. and P. fluorescens: population in refrigerated raw milk / Pseudomonas spp. e P. fluorescens: população em leite cru refrigerado

ABSTRACT: Raw milk samples were collected from cooling tanks (after they cooled for 48 h) in five dairy farms and the corresponding bulk tank (bulk milk transportation, BMT) when they arrived to the industry. Routine physical chemical analyzes and quantification of psychrotrophic ( Pseudomonas spp. and P. fluorescens ) and aerobic mesophilic (AM) populations were performed. Only relative density and titratable acidity values for samples of milk from three farms were in agreement to the quality parameters required by law. In the BMT, only the protein content has not reached the minimum value established by law, and counting was performed for AM (>105 colony forming units (CFU) mL-1) and psychrotrophic bacteria (2.8x106CFU mL-1). Pseudomonas spp. counting corresponded to 17.9% of the psychrotrophic population, and P. fluorescens was 3.4% of Pseudomonas spp . count. In milk samples from dairy farms, counts were variable for AM (3.4x105 to 3.7 x107CFU mL-1), psychrotrophic (4.0x104 to 3.1x106CFU mL-1), Pseudomonas spp. (2.3x104 to 1.8x105CFU mL-1), and P. fluorescens (62 to 8.4x103CFU mL-1). For the populations studied, no statistical difference (P>0.05) was observed between counts reported in milk samples collected in dairy farms (cooling tanks) and BMT. Therefore, the genera Pseudomonas spp. and P. fluorescens were not the most frequent psychrotrophic bacteria in this studied milk transportation line.

RESUMO: Amostras de leite foram coletadas de tanques de refrigeração (após 48h de refrigeração) em cinco fazendas de produção e do respectivo caminhão tanque (leite de conjunto, LC) ao chegar à indústria beneficiadora. Análises físico químicas de rotina e quantificação das populações de bactérias psicrotróficas ( Pseudomonas spp. e P. fluorescens ) e aeróbios mesófilos (AM) foram realizadas. Apenas os valores de densidade relativa e acidez titulável de amostras de leite de três fazendas estavam de acordo com a legislação. No LC, apenas o teor de proteína não atingiu o valor mínimo estabelecido por lei, e a contagem foi realizada para AM (>105 unidades formadoras de colônias (UFC) mL-1) e psicrotróficos (2,8x106UFC mL-1). A contagem de Pseudomonas spp. correspondeu a 17,9% da população de psicrotróficos, e 3,4% da contagem de Pseudomonas spp. eram da espécie P. fluorescens . Nas amostras de leite das fazendas de produtoras, as contagens foram variáveis para AM (3,4x105a 3,7x107UFC mL-1), psicrotróficos (4,0x104 a 3,1x106UFC mL-1), Pseudomonas spp. (2,3x104 a 1,8x105UFC mL-1) e P. fluorescens (62 a 8,4x103UFC mL-1). Para as populações estudadas, nenhuma diferença estatística (P>0,05) foi observada entre as contagens encontradas nas amostras de leite coletadas nas fazendas (tanques de resfriamento) e do LC. Portanto, o gênero Pseudomonas spp. e a espécie P. fluorescens não foram os psicrotróficos mais frequentes nesta linha de transporte de leite estudada.