Can bovine embryos be successfully transferred after 40 years of cryopreservation? / [Os embriões bovinos podem ser transferidos com sucesso após 40 anos de criopreservação?]

ABSTRACT Global advances in reproductive biotechnology have allowed for the transfer of embryos from donor females with high genetic merit to recipients using the cryopreservation technique, which preserves an embryo of excellent quality and viability, thereby achieving a feasible pregnancy rate. The objective of this study was to evaluate the quality and viability of Holstein embryos that have been cryopreserved for more than 40 years under glycerol freezing. The embryos were transferred to the recipient heifers using a non-surgical method. Two 17-month-old Holstein heifers (360 kg live weights) which were clinically healthy and reproductively active were used as the recipients. Two bovine embryos of Grade 1 quality were thawed and evaluated for their morphology. Of the two embryo transfers, one pregnancy was achieved, resulting in the birth of a calf. Therefore, embryos frozen in liquid nitrogen and glycerol as a cryopreservative for more than 40 years maintained their quality and viability to produce a live calf.

RESUMO Os avanços globais em biotecnologia reprodutiva permitiram a transferência de embriões de fêmeas doadoras com alto mérito genético para receptoras, usando-se a técnica de criopreservação, que preserva um embrião de excelente qualidade e viabilidade, alcançando, assim, uma taxa de gravidez viável. O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade e a viabilidade de embriões Holstein, criopreservados por mais de 40 anos, sob congelamento de glicerol. Os embriões foram transferidos para as novilhas receptoras, usando-se um método não cirúrgico. Duas novilhas Holstein de 17 meses de idade (360kg de peso vivo), que eram clinicamente saudáveis e reprodutivamente ativas, foram utilizadas como receptoras. Dois embriões bovinos de qualidade Grau 1 foram descongelados e avaliados quanto à sua morfologia. Das duas transferências embrionárias, uma gravidez foi obtida, resultando no nascimento de um bezerro. Portanto, os embriões congelados em nitrogênio líquido e glicerol como criopreservante por mais de 40 anos mantiveram sua qualidade e viabilidade para produzir um bezerro vivo.

Freezing goat embryos at different developmental stages and quality using ethylene glycol and a slow cooling rate / Congelação de embriões caprinos em diferentes estádios de desenvolvimento e qualidade utilizando etileno glicol e taxa de resfriamento lenta

The efficiency of an alternative freezing protocol for goat embryos of different morphology and quality was tested. Fifty-eight embryos on Day 6-7 stage were transferred as fresh or after freeze-thawing (n=29/group). For freezing, embryos were placed into 1.5M ethylene-glycol solution for 10min. During this time, they were loaded in the central part of 0.25mL straw, separated by air bubble from columns containing PBS/BSA 0.4% plus 20% BFS. Straws were then frozen using a freezing machine from 20ºC to -6ºC at a cooling rate of 3ºC/min, stabilization for 15min (seeding after 5min), from -6 C to -32ºC at 0.6 C/min,and plunged into liquid nitrogen. Frozen embryos were thawed for 30s at 37ºC in a water bath. Embryos subjected to fresh transfer were maintained in holding medium (37ºC). Fresh and frozen-thawed embryos were transferred at day 7 post-estrus to 30 recipients. Kidding and kid born rates were similar (P> 0.05), respectively, for recipients receiving fresh (66.7% or 10/15; 55.2% or 16/29) or frozen-thawed (60% or 9/15; 51.7% or 15/29) embryos. The cryopreservation of goat embryos using slow-freezing protocol and 1.5MEG resulted in similar efficiency rates of fresh embryos.(AU)

Este estudo testou a eficiência de protocolo alternativo de criopreservação de embriões caprinos de diferentes qualidades morfológicas. Foram utilizados 58 embriões, coletados entre o sexto e o sétimo dia do ciclo estral (n=29/grupo). Embriões congelados passaram por solução 1,5M etilenoglicol por 10min e foram aspirados durante esse tempo para parte central de palheta 0,25mL, separada por bolhas de ar de colunas contendo PBS 0,4% BSA e 20% SFB. As palhetas foram congeladas em máquina de congelação de 20ºC a -6ºC, com taxa de resfriamento de 3ºC/min, estabilização por 15min (seeding após 5min), -6ºC a -32ºC a 0,6ºC/min, e imersas em nitrogênio líquido. Os embriões foram descongelados por 30s a 37ºC, em água. Embriões frescos foram mantidos em solução de manutenção (37ºC). Embriões frescos e congelados/descongelados foram transferidos para 30 receptoras no sétimo dia do ciclo estral. A taxa de partos e a de crias nascidas (respectivamente) foram similares (P>0,05) para receptoras recebendo embriões frescos (66,7% ou 10/15; 55,2% ou 16/29) ou congelados/descongelados (60,0% ou 9/15; 51,7% ou 15/29). O protocolo de criopreservação de embriões utilizado no presente estudo resultou em índices de eficiência semelhantes aos de embriões frescos.(AU)

Freezing goat embryos at different developmental stages and quality using ethylene glycol and a slow cooling rate / Congelação de embriões caprinos em diferentes estádios de desenvolvimento e qualidade utilizando etileno glicol e taxa de resfriamento lenta

The efficiency of an alternative freezing protocol for goat embryos of different morphology and quality was tested. Fifty-eight embryos on Day 6-7 stage were transferred as fresh or after freeze-thawing (n=29/group). For freezing, embryos were placed into 1.5M ethylene-glycol solution for 10min. During this time, they were loaded in the central part of 0.25mL straw, separated by air bubble from columns containing PBS/BSA 0.4% plus 20% BFS. Straws were then frozen using a freezing machine from 20ºC to -6ºC at a cooling rate of 3ºC/min, stabilization for 15min (seeding after 5min), from -6 C to -32ºC at 0.6 C/min,and plunged into liquid nitrogen. Frozen embryos were thawed for 30s at 37ºC in a water bath. Embryos subjected to fresh transfer were maintained in holding medium (37ºC). Fresh and frozen-thawed embryos were transferred at day 7 post-estrus to 30 recipients. Kidding and kid born rates were similar (P> 0.05), respectively, for recipients receiving fresh (66.7% or 10/15; 55.2% or 16/29) or frozen-thawed (60% or 9/15; 51.7% or 15/29) embryos. The cryopreservation of goat embryos using slow-freezing protocol and 1.5MEG resulted in similar efficiency rates of fresh embryos.(AU)

Este estudo testou a eficiência de protocolo alternativo de criopreservação de embriões caprinos de diferentes qualidades morfológicas. Foram utilizados 58 embriões, coletados entre o sexto e o sétimo dia do ciclo estral (n=29/grupo). Embriões congelados passaram por solução 1,5M etilenoglicol por 10min e foram aspirados durante esse tempo para parte central de palheta 0,25mL, separada por bolhas de ar de colunas contendo PBS 0,4% BSA e 20% SFB. As palhetas foram congeladas em máquina de congelação de 20ºC a -6ºC, com taxa de resfriamento de 3ºC/min, estabilização por 15min (seeding após 5min), -6ºC a -32ºC a 0,6ºC/min, e imersas em nitrogênio líquido. Os embriões foram descongelados por 30s a 37ºC, em água. Embriões frescos foram mantidos em solução de manutenção (37ºC). Embriões frescos e congelados/descongelados foram transferidos para 30 receptoras no sétimo dia do ciclo estral. A taxa de partos e a de crias nascidas (respectivamente) foram similares (P>0,05) para receptoras recebendo embriões frescos (66,7% ou 10/15; 55,2% ou 16/29) ou congelados/descongelados (60,0% ou 9/15; 51,7% ou 15/29). O protocolo de criopreservação de embriões utilizado no presente estudo resultou em índices de eficiência semelhantes aos de embriões frescos.(AU)

Transferência de embriões como ferramenta para formação de rebanho experimental ovino e análise dos fatores que podem maximizar a multiplicação do plantel / Embryo transfer as a tool to experimental sheep flock formation and stock multiplication factors analyses

Visando ao aumento do plantel de ovinos da raça Black Belly na estação experimental do Institut Scientifique de Recherche Agronomique (INRA) de Bourges, França, foram utilizadas 32 ovelhas da raça Black Belly superovuladas com FSH suíno nos últimos três dias de tratamento progestágeno de 14 dias. Após coleta cirúrgica, obtiveram-se 264 embriões transferíveis (8,2 ± 6,0/doadoras), sendo transferidos 232 a 88 receptoras da raça Romane pluríparas e 23 da raça Suffolk nulíparas. As taxas de parição e de sobrevivência embrionária foram 83,6 e 63%, respectivamente, sendo os melhores resultados observados em receptoras da raça Romane pluríparas do que nas nulíparas da raça Suffolk. O número de ovulações, de embriões transferidos e o estádio de desenvolvimento embrionário causaram efeito sobre a taxa de sobrevivência embrionária. As melhores taxas de parição e de sobrevivência embrionária foram obtidas de receptoras com mais de duas ovulações que receberam dois embriões no estádio de blastocisto.(AU)

With the purpose of increase the breeding of Black Belly sheep breed at the experimental station of the Institut Scientifique de Recherche Agronomique (INRA), Bourges, France, thirty-two Black Belly sheep were super ovulated with swine FSH on the last three days of a progesterone treatment. After surgical collect 264 embryos transferable were recovered (8.2 ± 6.0/ donor) and 232 were transferred to 88 multiparous Romane sheep receptors and 23 nulliparous Suffolk sheep. Birth rate and survival rate were 83.6 and 63% respectively, though the results form multiparous Romane sheep receptors were better than from nulliparous Suffolk sheep. The ovulations number, transferred embryos and development stage had an effect on embryo survival rate. The best birth and embryo survival rates were from receptors that had more than two ovulations and had two embryos implanted at the stage of blastocyst.(AU)

Transferência de embriões como ferramenta para formação de rebanho experimental ovino e análise dos fatores que podem maximizar a multiplicação do plantel / Embryo transfer as a tool to experimental sheep flock formation and stock multiplication factors analyses

Visando ao aumento do plantel de ovinos da raça Black Belly na estação experimental do Institut Scientifique de Recherche Agronomique (INRA) de Bourges, França, foram utilizadas 32 ovelhas da raça Black Belly superovuladas com FSH suíno nos últimos três dias de tratamento progestágeno de 14 dias. Após coleta cirúrgica, obtiveram-se 264 embriões transferíveis (8,2 ± 6,0/doadoras), sendo transferidos 232 a 88 receptoras da raça Romane pluríparas e 23 da raça Suffolk nulíparas. As taxas de parição e de sobrevivência embrionária foram 83,6 e 63%, respectivamente, sendo os melhores resultados observados em receptoras da raça Romane pluríparas do que nas nulíparas da raça Suffolk. O número de ovulações, de embriões transferidos e o estádio de desenvolvimento embrionário causaram efeito sobre a taxa de sobrevivência embrionária. As melhores taxas de parição e de sobrevivência embrionária foram obtidas de receptoras com mais de duas ovulações que receberam dois embriões no estádio de blastocisto.

With the purpose of increase the breeding of Black Belly sheep breed at the experimental station of the Institut Scientifique de Recherche Agronomique (INRA), Bourges, France, thirty-two Black Belly sheep were super ovulated with swine FSH on the last three days of a progesterone treatment. After surgical collect 264 embryos transferable were recovered (8.2 ± 6.0/ donor) and 232 were transferred to 88 multiparous Romane sheep receptors and 23 nulliparous Suffolk sheep. Birth rate and survival rate were 83.6 and 63% respectively, though the results form multiparous Romane sheep receptors were better than from nulliparous Suffolk sheep. The ovulations number, transferred embryos and development stage had an effect on embryo survival rate. The best birth and embryo survival rates were from receptors that had more than two ovulations and had two embryos implanted at the stage of blastocyst.

Influência da taxa de crescimento e estro da cobertura no desempenho reprodutivo da leitoa

A inseminação artificial da leitoa é recomendada levando em consideração a idade, o peso, a espessura de toucinho e o ciclo estral no qual se encontra a fêmea. Entretanto, apesar dessas variáveis estarem correlacionadas, nem sempre todos esse índices são obtidos. A leitoa representa alto impacto nos dias-não-produtivos do plantel e é fundamental que seja inseminada no momento correto pois a longevidade e o desempenho reprodutivo da fêmea suína estão diretamente relacionados com o momento dessa inseminação. Esta tese foi dividida em três trabalhos, objetivando avaliar os efeito da idade, do peso, do estro da cobertura e da taxa de crescimento no desempenho reprodutivo da leitoa. O primeiro experimento foi realizado com o objetivo de determinar se leitoas que apresentam maiores taxas de crescimento e apresentam o peso mínimo recomendado para cobertura em uma idade mais precoce podem ser inseminadas sem apresentarem prejuízos reprodutivos ou uma maior taxa de descarte até o 3º parto. Foram formados 3 grupos, conforme o peso e a idade na inseminação. O grupo 1 foi composto pelas fêmeas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g/dia) inseminadas com idade inferior a 210 dias. O grupo 2 foi formado também por leitoas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g) porém que foram inseminadas com idade igual ou superior a 210 dias. O grupo 3 foi formado por fêmeas inseminada

Influência da taxa de crescimento e estro da cobertura no desempenho reprodutivo da leitoa

A inseminação artificial da leitoa é recomendada levando em consideração a idade, o peso, a espessura de toucinho e o ciclo estral no qual se encontra a fêmea. Entretanto, apesar dessas variáveis estarem correlacionadas, nem sempre todos esse índices são obtidos. A leitoa representa alto impacto nos dias-não-produtivos do plantel e é fundamental que seja inseminada no momento correto pois a longevidade e o desempenho reprodutivo da fêmea suína estão diretamente relacionados com o momento dessa inseminação. Esta tese foi dividida em três trabalhos, objetivando avaliar os efeito da idade, do peso, do estro da cobertura e da taxa de crescimento no desempenho reprodutivo da leitoa. O primeiro experimento foi realizado com o objetivo de determinar se leitoas que apresentam maiores taxas de crescimento e apresentam o peso mínimo recomendado para cobertura em uma idade mais precoce podem ser inseminadas sem apresentarem prejuízos reprodutivos ou uma maior taxa de descarte até o 3º parto. Foram formados 3 grupos, conforme o peso e a idade na inseminação. O grupo 1 foi composto pelas fêmeas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g/dia) inseminadas com idade inferior a 210 dias. O grupo 2 foi formado também por leitoas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g) porém que foram inseminadas com idade igual ou superior a 210 dias. O grupo 3 foi formado por fêmeas inseminada

Influência da taxa de crescimento e estro da cobertura no desempenho reprodutivo da leitoa

A inseminação artificial da leitoa é recomendada levando em consideração a idade, o peso, a espessura de toucinho e o ciclo estral no qual se encontra a fêmea. Entretanto, apesar dessas variáveis estarem correlacionadas, nem sempre todos esse índices são obtidos. A leitoa representa alto impacto nos dias-não-produtivos do plantel e é fundamental que seja inseminada no momento correto pois a longevidade e o desempenho reprodutivo da fêmea suína estão diretamente relacionados com o momento dessa inseminação. Esta tese foi dividida em três trabalhos, objetivando avaliar os efeito da idade, do peso, do estro da cobertura e da taxa de crescimento no desempenho reprodutivo da leitoa. O primeiro experimento foi realizado com o objetivo de determinar se leitoas que apresentam maiores taxas de crescimento e apresentam o peso mínimo recomendado para cobertura em uma idade mais precoce podem ser inseminadas sem apresentarem prejuízos reprodutivos ou uma maior taxa de descarte até o 3º parto. Foram formados 3 grupos, conforme o peso e a idade na inseminação. O grupo 1 foi composto pelas fêmeas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g/dia) inseminadas com idade inferior a 210 dias. O grupo 2 foi formado também por leitoas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g) porém que foram inseminadas com idade igual ou superior a 210 dias. O grupo 3 foi formado por fêmeas inseminada

Influência da taxa de crescimento e estro da cobertura no desempenho reprodutivo da leitoa

A inseminação artificial da leitoa é recomendada levando em consideração a idade, o peso, a espessura de toucinho e o ciclo estral no qual se encontra a fêmea. Entretanto, apesar dessas variáveis estarem correlacionadas, nem sempre todos esse índices são obtidos. A leitoa representa alto impacto nos dias-não-produtivos do plantel e é fundamental que seja inseminada no momento correto pois a longevidade e o desempenho reprodutivo da fêmea suína estão diretamente relacionados com o momento dessa inseminação. Esta tese foi dividida em três trabalhos, objetivando avaliar os efeito da idade, do peso, do estro da cobertura e da taxa de crescimento no desempenho reprodutivo da leitoa. O primeiro experimento foi realizado com o objetivo de determinar se leitoas que apresentam maiores taxas de crescimento e apresentam o peso mínimo recomendado para cobertura em uma idade mais precoce podem ser inseminadas sem apresentarem prejuízos reprodutivos ou uma maior taxa de descarte até o 3º parto. Foram formados 3 grupos, conforme o peso e a idade na inseminação. O grupo 1 foi composto pelas fêmeas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g/dia) inseminadas com idade inferior a 210 dias. O grupo 2 foi formado também por leitoas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g) porém que foram inseminadas com idade igual ou superior a 210 dias. O grupo 3 foi formado por fêmeas inseminada

Influência da taxa de crescimento e estro da cobertura no desempenho reprodutivo da leitoa

A inseminação artificial da leitoa é recomendada levando em consideração a idade, o peso, a espessura de toucinho e o ciclo estral no qual se encontra a fêmea. Entretanto, apesar dessas variáveis estarem correlacionadas, nem sempre todos esse índices são obtidos. A leitoa representa alto impacto nos dias-não-produtivos do plantel e é fundamental que seja inseminada no momento correto pois a longevidade e o desempenho reprodutivo da fêmea suína estão diretamente relacionados com o momento dessa inseminação. Esta tese foi dividida em três trabalhos, objetivando avaliar os efeito da idade, do peso, do estro da cobertura e da taxa de crescimento no desempenho reprodutivo da leitoa. O primeiro experimento foi realizado com o objetivo de determinar se leitoas que apresentam maiores taxas de crescimento e apresentam o peso mínimo recomendado para cobertura em uma idade mais precoce podem ser inseminadas sem apresentarem prejuízos reprodutivos ou uma maior taxa de descarte até o 3º parto. Foram formados 3 grupos, conforme o peso e a idade na inseminação. O grupo 1 foi composto pelas fêmeas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g/dia) inseminadas com idade inferior a 210 dias. O grupo 2 foi formado também por leitoas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g) porém que foram inseminadas com idade igual ou superior a 210 dias. O grupo 3 foi formado por fêmeas inseminada

Influência da taxa de crescimento e estro da cobertura no desempenho reprodutivo da leitoa

A inseminação artificial da leitoa é recomendada levando em consideração a idade, o peso, a espessura de toucinho e o ciclo estral no qual se encontra a fêmea. Entretanto, apesar dessas variáveis estarem correlacionadas, nem sempre todos esse índices são obtidos. A leitoa representa alto impacto nos dias-não-produtivos do plantel e é fundamental que seja inseminada no momento correto pois a longevidade e o desempenho reprodutivo da fêmea suína estão diretamente relacionados com o momento dessa inseminação. Esta tese foi dividida em três trabalhos, objetivando avaliar os efeito da idade, do peso, do estro da cobertura e da taxa de crescimento no desempenho reprodutivo da leitoa. O primeiro experimento foi realizado com o objetivo de determinar se leitoas que apresentam maiores taxas de crescimento e apresentam o peso mínimo recomendado para cobertura em uma idade mais precoce podem ser inseminadas sem apresentarem prejuízos reprodutivos ou uma maior taxa de descarte até o 3º parto. Foram formados 3 grupos, conforme o peso e a idade na inseminação. O grupo 1 foi composto pelas fêmeas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g/dia) inseminadas com idade inferior a 210 dias. O grupo 2 foi formado também por leitoas que apresentaram alta taxa de crescimento (³700 g) porém que foram inseminadas com idade igual ou superior a 210 dias. O grupo 3 foi formado por fêmeas inseminada

Efeito da sacarose e da forma de arraçoamento sobre alguns parâmetros reprodutivos da leitoa

O trabalho foi realizado, no período de outubro a dezembro de 1996. Foram utilizadas 80 fêmeas híbridas F1, oriundas de cruzamentos de Landrace e Large White distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos: T1 fornecimento de ração sem glicose e de forma restrita, 2 kg ao dia (duas vezes ao dia); T2 fornecimento de ração sem glicose e à vontade; T3 fornecimento de ração com 20% de glicose e de forma restrita, 2 kg ao dia (duas vezes ao dia), e, T4 fornecimento de ração com 20% de sacarose, à vontade. Como fonte de glicose foi utilizado o açúcar cristal. A ração continha 3.150 kcal/Kg de E.D., 14%, de proteína bruta, 0,65 de lisina, 0,9% de cálcio e 0,45% de fósforo disponível. Todas as fêmeas foram pesadas individualmente ao alojamento e na apresentação do 1º e do 2º estro. Os tratamentos foram aplicados no momento em que as fêmeas manifestaram o 1º estro e terminaram quando estas apresentaram o 2º estro. As fêmeas foram inseminadas artificialmente (IA) no 2º estro e abatidas 28-34 dias após para a contagem do número de ovulações e número de embriões viáveis. Foram analisados, os dados referentes à taxa de prenhez, a taxa de sobrevivência embrionária e a taxa de retorno ao estro. A taxa de ovulação das fêmeas do T4 foi superior aquelas das fêmeas dos T1 e T3 (respectivamente 17,80; 15,26; 15,60) (p  ?0,01). T4 foram diferentes quanto ao número de embriões viáveis daqu

Bovine in vitro embryo production protocol: does it really influence embryo cryotolerance?

The protocol of  in vitro production (IVP) of bovine embryos is one of the critical factors determining embryo viability after cryopreservation. In this study were used two differents protocols to produce IVP bovine embryos, with variations in protein source, oocyte/zygote density per media volume, with the aim to determine the in vitro and in vivo embryo survival after vitrification using hand-pulled glass micropipettes. Expanded blastocysts (D7) were morphologically selected by size (?180 ?m) and osmotic behavior before they were randomly allocated to sub-groups by protocol: non-vitrified embryos (control; C) and vitrified embryos (V). For the evaluation of the in vitro survival, control embryos and a group of warmed vitrified embryos were in vitro-cultured (IVC) for 72 h. Re-expansion rates of warmed embryos at 24 h of IVC were 94.8% and 93.2% for Protocols 1 and 2, respectively. Hatching rates at 72 h of IVC of embryos from Protocol 1 (C=80% and V=75.8%) tended to be higher (P=0.0561, Chi2 test) than those from Protocol 2 (C=67.2% and V=59.3%). For the evaluation of in vivo survival, 21 vitrified embryos per protocol were singly non-surgically transferred to synchronized recipients (n=42) after the in-straw cryoprotectant dilution, resulting in 4 (19%) pregnancies per group on Day 60 of gestation. In conclusion, despite a lower variation on in vitro embryo development betwe

Efeito da sacarose e da forma de arraçoamento sobre alguns parâmetros reprodutivos da leitoa

O trabalho foi realizado, no período de outubro a dezembro de 1996. Foram utilizadas 80 fêmeas híbridas F1, oriundas de cruzamentos de Landrace e Large White distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos: T1 fornecimento de ração sem glicose e de forma restrita, 2 kg ao dia (duas vezes ao dia); T2 fornecimento de ração sem glicose e à vontade; T3 fornecimento de ração com 20% de glicose e de forma restrita, 2 kg ao dia (duas vezes ao dia), e, T4 fornecimento de ração com 20% de sacarose, à vontade. Como fonte de glicose foi utilizado o açúcar cristal. A ração continha 3.150 kcal/Kg de E.D., 14%, de proteína bruta, 0,65 de lisina, 0,9% de cálcio e 0,45% de fósforo disponível. Todas as fêmeas foram pesadas individualmente ao alojamento e na apresentação do 1º e do 2º estro. Os tratamentos foram aplicados no momento em que as fêmeas manifestaram o 1º estro e terminaram quando estas apresentaram o 2º estro. As fêmeas foram inseminadas artificialmente (IA) no 2º estro e abatidas 28-34 dias após para a contagem do número de ovulações e número de embriões viáveis. Foram analisados, os dados referentes à taxa de prenhez, a taxa de sobrevivência embrionária e a taxa de retorno ao estro. A taxa de ovulação das fêmeas do T4 foi superior aquelas das fêmeas dos T1 e T3 (respectivamente 17,80; 15,26; 15,60) (p  ?0,01). T4 foram diferentes quanto ao número de embriões viáveis daqu

Bovine in vitro embryo production protocol: does it really influence embryo cryotolerance?

The protocol of  in vitro production (IVP) of bovine embryos is one of the critical factors determining embryo viability after cryopreservation. In this study were used two differents protocols to produce IVP bovine embryos, with variations in protein source, oocyte/zygote density per media volume, with the aim to determine the in vitro and in vivo embryo survival after vitrification using hand-pulled glass micropipettes. Expanded blastocysts (D7) were morphologically selected by size (?180 ?m) and osmotic behavior before they were randomly allocated to sub-groups by protocol: non-vitrified embryos (control; C) and vitrified embryos (V). For the evaluation of the in vitro survival, control embryos and a group of warmed vitrified embryos were in vitro-cultured (IVC) for 72 h. Re-expansion rates of warmed embryos at 24 h of IVC were 94.8% and 93.2% for Protocols 1 and 2, respectively. Hatching rates at 72 h of IVC of embryos from Protocol 1 (C=80% and V=75.8%) tended to be higher (P=0.0561, Chi2 test) than those from Protocol 2 (C=67.2% and V=59.3%). For the evaluation of in vivo survival, 21 vitrified embryos per protocol were singly non-surgically transferred to synchronized recipients (n=42) after the in-straw cryoprotectant dilution, resulting in 4 (19%) pregnancies per group on Day 60 of gestation. In conclusion, despite a lower variation on in vitro embryo development betwe

Bovine in vitro embryo production protocol: does it really influence embryo cryotolerance?

The protocol of  in vitro production (IVP) of bovine embryos is one of the critical factors determining embryo viability after cryopreservation. In this study were used two differents protocols to produce IVP bovine embryos, with variations in protein source, oocyte/zygote density per media volume, with the aim to determine the in vitro and in vivo embryo survival after vitrification using hand-pulled glass micropipettes. Expanded blastocysts (D7) were morphologically selected by size (?180 ?m) and osmotic behavior before they were randomly allocated to sub-groups by protocol: non-vitrified embryos (control; C) and vitrified embryos (V). For the evaluation of the in vitro survival, control embryos and a group of warmed vitrified embryos were in vitro-cultured (IVC) for 72 h. Re-expansion rates of warmed embryos at 24 h of IVC were 94.8% and 93.2% for Protocols 1 and 2, respectively. Hatching rates at 72 h of IVC of embryos from Protocol 1 (C=80% and V=75.8%) tended to be higher (P=0.0561, Chi2 test) than those from Protocol 2 (C=67.2% and V=59.3%). For the evaluation of in vivo survival, 21 vitrified embryos per protocol were singly non-surgically transferred to synchronized recipients (n=42) after the in-straw cryoprotectant dilution, resulting in 4 (19%) pregnancies per group on Day 60 of gestation. In conclusion, despite a lower variation on in vitro embryo development betwe

Efeito da sacarose e da forma de arraçoamento sobre alguns parâmetros reprodutivos da leitoa

O trabalho foi realizado, no período de outubro a dezembro de 1996. Foram utilizadas 80 fêmeas híbridas F1, oriundas de cruzamentos de Landrace e Large White distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos: T1 fornecimento de ração sem glicose e de forma restrita, 2 kg ao dia (duas vezes ao dia); T2 fornecimento de ração sem glicose e à vontade; T3 fornecimento de ração com 20% de glicose e de forma restrita, 2 kg ao dia (duas vezes ao dia), e, T4 fornecimento de ração com 20% de sacarose, à vontade. Como fonte de glicose foi utilizado o açúcar cristal. A ração continha 3.150 kcal/Kg de E.D., 14%, de proteína bruta, 0,65 de lisina, 0,9% de cálcio e 0,45% de fósforo disponível. Todas as fêmeas foram pesadas individualmente ao alojamento e na apresentação do 1º e do 2º estro. Os tratamentos foram aplicados no momento em que as fêmeas manifestaram o 1º estro e terminaram quando estas apresentaram o 2º estro. As fêmeas foram inseminadas artificialmente (IA) no 2º estro e abatidas 28-34 dias após para a contagem do número de ovulações e número de embriões viáveis. Foram analisados, os dados referentes à taxa de prenhez, a taxa de sobrevivência embrionária e a taxa de retorno ao estro. A taxa de ovulação das fêmeas do T4 foi superior aquelas das fêmeas dos T1 e T3 (respectivamente 17,80; 15,26; 15,60) (p  ?0,01). T4 foram diferentes quanto ao número de embriões viáveis daqu