Aislamiento y caracterización de células mesenquimales derivadas de tejido adiposo / Isolation and characterization of mesenchymal cells from adipose tissue

Introducción : Existe un creciente interés científico en el potencial terapéutico de las células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo ( ADSCs, en inglés). Estas células son abundantes en el tejido adiposo, son de fácil obtención y con un alto potencial de diferenciación hacia linajes celulares especializados incluyendo adipocitos, osteocitos, condrocitos, miocitos, cardiomiocitos, tenocitos, vasos sanguíneos y neuronas. Este trabajo se desarrolló con el objetivo de implementar en el laboratorio un procedimiento para aislar y cultivar ADSCs, con características que corresponden a las informadas para este linaje celular.Método: los precursores de células adiposas humanas se obtuvieron de tejido subcutáneo abdominal. Las células se separaron enzimáticamente del tejido y se decantaron por centrifugación, luego de cultivadas, se caracterizaron en su capacidad de diferenciación y por su marcadores fenotípicos.Resultados: Las ADSCs aisladas se replicaron en estas condiciones de cultivo y mantuvieron un fenotipo estable durante todo el período de estudio. Se comprobó su potencial adipogénico y osteogénico in vitro, como corresponde a las células madre mesenquimales. El estudio por citometría de flujo mostró que estas células expresan CD73, CD90 y CD105 y son negativas para los marcadores de linaje hematopoyético CD34 y CD45.En los ensayos de inhibición in vitro, las ADSCs demostraron su capacidad para inhibir la proliferación de células T humanas. Conclusiones : La caracterización fenotípica y funcional de las ADSCs obtenidas a partir del tejido adiposo abdominal demuestra que es posible la obtención mediante cultivo in vitro de células mesenquimales humanas sin inducir diferenciación espontánea, manteniendo su integridad funcional y altos niveles de proliferación, lo que sienta las bases para el inicio de ensayos preclínicos y su uso futuro en la terapia celular en nuestro país(AU)

Introduction : There is growing scientific interest in the therapeutic potential of stem cells derived from adipose tissue (ADSCs). These cells are abundant in adipose tissue, are readily available and have a high potential fordifferentiation into specialized cell lineages including adipocytes, osteocytes, chondrocytes, myocytes, cardiomyocytes, tenocyte, endothelial cells and neurons. The aim of this work was to isolate, cultivate andcharacterize ADSCs.Methods : human adipose precursor cells were obtained from abdominal subcutaneous tissue. Cells were enzymatically separated from the tissue and decanted by centrifugation, cultured and finally analyzed.Results : The ADSCs were able to replicate in our culture conditions. The cells maintained their phenotype in different passages throughout the study period, confirming its feasibility for in vitro culture. Also the ADSCs were induced to adipogenic and osteogenic differentiation, verifying its potential as mesenchymal stem cells in vitro. The flow cytometric study showed that these cells expressed CD73, CD90 and CD105 (markers of mesenchymal cells) and they were negative for CD34 and CD45 (hematopoieticcell markers). The ADSCs were able to inhibit in vitro the proliferation of T cells.Conclusions : It is possible to obtain ADSCs by in vitro cultivation without adipogenic induction, maintaining its functional integrity and high proliferation; this cell could be an important tool for the cellular therapy in our country(AU)

Aislamiento y caracterización de células mesenquimales derivadas de tejido adiposo / Isolation and characterization of mesenchymal cells from adipose tissue

Introducción : Existe un creciente interés científico en el potencial terapéutico de las células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo ( ADSCs, en inglés). Estas células son abundantes en el tejido adiposo, son de fácil obtención y con un alto potencial de diferenciación hacia linajes celulares especializados incluyendo adipocitos, osteocitos, condrocitos, miocitos, cardiomiocitos, tenocitos, vasos sanguíneos y neuronas. Este trabajo se desarrolló con el objetivo de implementar en el laboratorio un procedimiento para aislar y cultivar ADSCs, con características que corresponden a las informadas para este linaje celular. Método: los precursores de células adiposas humanas se obtuvieron de tejido subcutáneo abdominal. Las células se separaron enzimáticamente del tejido y se decantaron por centrifugación, luego de cultivadas, se caracterizaron en su capacidad de diferenciación y por su marcadores fenotípicos. Resultados: Las ADSCs aisladas se replicaron en estas condiciones de cultivo y mantuvieron un fenotipo estable durante todo el período de estudio. Se comprobó su potencial adipogénico y osteogénico in vitro, como corresponde a las células madre mesenquimales. El estudio por citometría de flujo mostró que estas células expresan CD73, CD90 y CD105 y son negativas para los marcadores de linaje hematopoyético CD34 y CD45.En los ensayos de inhibición in vitro, las ADSCs demostraron su capacidad para inhibir la proliferación de células T humanas. Conclusiones : La caracterización fenotípica y funcional de las ADSCs obtenidas a partir del tejido adiposo abdominal demuestra que es posible la obtención mediante cultivo in vitro de células mesenquimales humanas sin inducir diferenciación espontánea, manteniendo su integridad funcional y altos niveles de proliferación, lo que sienta las bases para el inicio de ensayos preclínicos y su uso futuro en la terapia celular en nuestro país(AU)

Introduction : There is growing scientific interest in the therapeutic potential of stem cells derived from adipose tissue (ADSCs). These cells are abundant in adipose tissue, are readily available and have a high potential fordifferentiation into specialized cell lineages including adipocytes, osteocytes, chondrocytes, myocytes, cardiomyocytes, tenocyte, endothelial cells and neurons. The aim of this work was to isolate, cultivate andcharacterize ADSCs. Methods : human adipose precursor cells were obtained from abdominal subcutaneous tissue. Cells were enzymatically separated from the tissue and decanted by centrifugation, cultured and finally analyzed. Results : The ADSCs were able to replicate in our culture conditions. The cells maintained their phenotype in different passages throughout the study period, confirming its feasibility for in vitro culture. Also the ADSCs were induced to adipogenic and osteogenic differentiation, verifying its potential as mesenchymal stem cells in vitro. The flow cytometric study showed that these cells expressed CD73, CD90 and CD105 (markers of mesenchymal cells) and they were negative for CD34 and CD45 (hematopoieticcell markers). The ADSCs were able to inhibit in vitro the proliferation of T cells. Conclusions : It is possible to obtain ADSCs by in vitro cultivation without adipogenic induction, maintaining its functional integrity and high proliferation; this cell could be an important tool for the cellular therapy in our country(AU)

Aspectos radiográficos do sulco intertroclear de coelhos submetidos ao enxerto osteocondral alógeno associado à terapia com células mononucleares autógenas e dexametasona / Radiographic appearance of intertrochlear groove of rabbits submitted to osteochondral graft allographs associated to the therapy with mononuclear cell autographs and dexamethasone / Aspectos radiológicos de la ranura intertroclear de conejos sometidos a injerto osteocondral alógeno asociado a la terapia con células mononucleares autógenas y dexametasona

Vinte e quatro coelhos adultos foram separados em dois grupos (n=12) - controle (GI) e tratado (GII) e submetidos ao enxerto osteocondral alógeno para reparo ósseo e cartilaginoso do sulco troclear, conservado em glicerina a 98%. Os animais do GII receberam ainda injeção intra-articular de 2,0 x 106 células mononucleares autólogas e dexametasona intramuscular. Foram realizadas avalições radiográficas aos 45 e 90 dias de pós-operatório. Nos coelhos do grupo tratado e controle não foi notado sinais de reação características de enxerto-contra-hospedeiro e aos 45 e 90 dias de pós-operatório ocorre osteólise devido aos micromovimentos na interface implante-osso e pressão efetiva nos espaços articular. A implantação de enxerto alógeno conservado em glicerina, associado à inoculação de células mononucleares autógenas e dexametasona intramuscular promove intensa neoformação óssea e com bom reparo do defeito ósseo em coelhos.

Twenty-four adult rabbits were divided two groups (n = 12), control (GI) and treated (GII), and submitted to allogenic osteochondral graft for bone and cartilage repair of the trochlear groove, preserved in 98% glycerin. The GII yet received intra-articular injection of 2,0 x 106 autologous mononuclear cells and intramuscular dexamethasone. Radiographs at 45 and 90 days postoperatively avaliations were performed. In rabbits treated and control group was not skimmed signals characteristic reaction of graft-versus-host and at 45 and 90 days postoperatively osteolysis occurs due to micro motion at the implant-bone interface and effective pressure in the joint spaces. The implantation of allograft preserved in glycerol, associated with inoculation of autologous mononuclear cells and intramuscular dexamethasone intense bone and good repair of bone defects in rabbits neogenesis occurs.

Veinticuatro conejos adultos fueron divididos en dos grupos (n = 12) - control (GI) y tratado (GII) y sometidos a injerto osteocondral alógeno para reparo óseo y cartilaginoso de ranura tróclea, conservado en glicerina a 98%. Los animales del GII recibieron inyección interarticular de 2,0 x 106 células mononucleares autólogas y dexametasona intramuscular. Se realizó evaluaciones radiográficas a los 45 y 90 días posoperatorio. En los conejos tratados y del grupo control no se ha notado señales de reacciones características de injerto contra hospedero, y a los 45 y 90 días de posoperatorio ocurrió osteólisis debido a los micro movimientos en la interfaz, implante óseo y presión efectiva en los espacios articular. La implantación de injerto alógeno conservado en glicerina, asociado a la inoculación de células mononucleares autógenas y dexametasona intramuscular, promueve intensa neo formación ósea y con buen reparo del defecto óseo en conejos.