Genetic characterization of Toxocara vitulorum in turkey by mitochondrial gene markers (cox1)

Background: Toxocara vitulorum is a involved in the Ascaridoidea family and is a large roundworm with a semi translucent, soft body surface and pinkish color. Female worms measure 8-30cm in length, male worms 6-25cm. The major hosts of T.vitulorum are buffalo (Bubalus bubalis) and cattle (Bos species) in the humid tropics of Asia, Africa and South America. The diagnosis of T. vitulorum infections is usually made by observing characteristic eggs in routine fecal examination. Serological methods are also used to diagnose Toxocariasis. However, in recent years, PCR, a new generation molecular diagnostic method, has been used. The genetic structure of T. vitulorum is little known compared with data available from other parasites. The present sutudy was designed to determine the T. vitulorum isolates by the genetic characterization of the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (cox1) gene.Materials, Methods & Results: Adult worms were collected from the feces of two calves (East Anatolian Red) during visits to the clinic at the Department of Internal Medicine of Van Yuzuncu Yil University, Faculty of Veterinary Medicine. Worms were washed thoroughly in 0.85 % saline to remove any debris and fixed into 70 % ethanol. After repeated and thoroughly washing the specimens, total genomic DNA of parasite extraction was performed be employing DNA extraction reagent kit (Thermo, GeneJET Genomic DNA Purification Kit) according to manufacturer’s recommendations. After DNA amplification, a 446 bp fragment of cox1 of T. vitulorum were obtained in all three isolates. All generated sequences were registered in GenBank database with accession numbers including MG905159, MG911729 and MG911730. The cox1 of T. vitulorum examined differed from another two isolates extracted from Germany beef cattle (KY313642.1) and Sri Lanka buffalo calf (FJ664617.1) at NCBI database.[...]

Genetic characterization of Toxocara vitulorum in turkey by mitochondrial gene markers (cox1)

Background: Toxocara vitulorum is a involved in the Ascaridoidea family and is a large roundworm with a semi translucent, soft body surface and pinkish color. Female worms measure 8-30cm in length, male worms 6-25cm. The major hosts of T.vitulorum are buffalo (Bubalus bubalis) and cattle (Bos species) in the humid tropics of Asia, Africa and South America. The diagnosis of T. vitulorum infections is usually made by observing characteristic eggs in routine fecal examination. Serological methods are also used to diagnose Toxocariasis. However, in recent years, PCR, a new generation molecular diagnostic method, has been used. The genetic structure of T. vitulorum is little known compared with data available from other parasites. The present sutudy was designed to determine the T. vitulorum isolates by the genetic characterization of the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (cox1) gene.Materials, Methods & Results: Adult worms were collected from the feces of two calves (East Anatolian Red) during visits to the clinic at the Department of Internal Medicine of Van Yuzuncu Yil University, Faculty of Veterinary Medicine. Worms were washed thoroughly in 0.85 % saline to remove any debris and fixed into 70 % ethanol. After repeated and thoroughly washing the specimens, total genomic DNA of parasite extraction was performed be employing DNA extraction reagent kit (Thermo, GeneJET Genomic DNA Purification Kit) according to manufacturers recommendations. After DNA amplification, a 446 bp fragment of cox1 of T. vitulorum were obtained in all three isolates. All generated sequences were registered in GenBank database with accession numbers including MG905159, MG911729 and MG911730. The cox1 of T. vitulorum examined differed from another two isolates extracted from Germany beef cattle (KY313642.1) and Sri Lanka buffalo calf (FJ664617.1) at NCBI database.[...](AU)

Detection of IgG antibodies to Toxocara vitulorum soluble larval extract (Ex) by Western Blotting in the colostrum and serum of buffalo cows and calves / Detecção de anticorpos IgG aos antígenos extratos solúveis (Ex) de larvas de Toxocara vitulorum pelo Western Blotting no colostro e no soro de vacas e bezerros búfalos

Toxacara vitulorum é um nematódeo que acomete principalmente bezerros búfalos na faixa etária de um a três meses de vida, causando grande morbidade ou mortalidade quando não tratados. A pesquisa objetivou a obtenção do antígeno extrato larval solúvel bruto(Ex) de larvas infectantes de T. vitulorum, bem como a separação das frações antigênicas pelo SDS-PAGE e pelo "Western blotting" (WB), utilizando-se soros imunes e colostros de búfalos naturalmente infectados com T. vitulorum. O acompanhamento do quadro parasitário dos bezerros búfalos.também foi realizado. Pôde-se verificar que o antígeno revelou 11 (11, 13, 16,22,25, 32, 43, 53, 68, 82 e 96 kDa) bandas protéicas. Quando analisadas pelo WB, cinco dessas bandas (43, 53, 68, 82 e 96 kDa) foram reconhecidas pelos anticorpos presentes nas amostras de soros e de colostros das búfalas e de soros dos bezerros búfalos com um de vida após mamarem o colostro. No entanto, somente as bandas de 53 a 96 kDa que foram as mais evidentes persistiram nos grupos de bezerros búfalos que se encontravam tanto no pico da infecção como no período de expulsão ou pós-expulsão dos helmintos adultos do intestino. As bandas antigênicas de 68 e de 92 kDa, por serem as mais proeminentes podem ser consideradas componentes para futuras vacinas contra T. vitulorum em búfalos.(AU)

Inibição da migração larval em tecidos de camundongos imunizados com antígenos de Toxocara vitulorum / Larval migration inhibition in tissues of mice immunized with Toxocara vitulorum antigens

Três grupos de camundongos foram imunizados com os seguintes antígenos de Toxocara vitulorum: fluido perientérico (pe) do parasita adulto, antígenos extrato solúvel bruto (Ex) e excretor/ secretor (ES) de larvas infectantes. Estes três grupos foram comparados com o grupo controle, não imunizado. Todos os grupos foram desafiados uma semana após a imunização com ovos infectantes deste parasita e necropsiados em três períodos diferentes após o desafio: sete horas, quatro dias e 30 dias pós-infecção. Realizou-se a contagem de ovos e de larvas nas fezes dos camundongos e o grupo imunizado com antígeno do fluído perientérico (Pe) foi o que eliminou a maior quantidade de larvas. Após a necropsia, realizou-se a retirada do intestino delgado, intestino grosso, fígado, pulmão, coração, cérebro e músculos (diafragma, língua e quadríceps femoral). Estes tecidos sofrearam digestão péptica e as larvas foram identificadas e contadas em cada um deles. O maior número de larvas foi encontrado no intestino grosso no período de sete horas após o desafio, em todos os grupos examinados, porém, este número foi significativamente inferior nos grupos imunizados. Com quatro dias após o desafio, as larvas concentravam-se, preferencialmente, no fígado e pulmões, e os grupos imunizados apresentaram uma quantidade muito menor de larvas, significativo para o fígado e pulmão em relação ao grupo controle. No período de 30 dias após o desafio, as larvas recuperadas no cérebro e no músculo, mesmo que em pequena quantidade, demonstraram capacidade de alcançar estes tecidos. A efetividade destaimunização baseou-se na redução do número de larvas de T. vitulorum no fígado no quarto dia pós-infecção em relação ao controle, que foi de 86%, 79% e 58% para o antígeno Ex, Pe e ES, respectivamente. O camundongo foi considerado um modelo apropriado para estudar a relação parasita-hospedeiro das infecções por T. vitulorum.(AU)