Antioxidant activity, cytotoxicity, phenolic content, and phytochemical composition of Pithecellobium Diversifolium benth: a pilot study / Atividade antioxidante, citotóxica, conteúdo fenólico e composição fitoquímica de Pithecellobium Diversifolium benth: um estudo piloto / Actividad antioxidante, citotóxica, contenido fenólico y composición fitoquímica de Pithecellobium Diversifolium benth: un estudio piloto

Species of Pithecellobium (Fabaceae) are used in traditional medicine to treat diabetes, cough, bronchitis, and inflammation. This study aims to evaluate the content and determine the antioxidant activity, phenolic compounds content, and cytotoxicity of the extract and the fractions of Pithecellobium diversifolium. This is unprecedented research with an exotic species from the Caatinga, northeastern Brazil, using High-performance Liquid Chromatography-Electrospray Ionization-Mass Spectrometry (HPLC-ESI-MS). The MeOH fractions of leaves and stem barks showed a high content of flavonoids (198.1 ± 106.50 and 542.7 ± 2.52 mg EqQ/g). The CH2Cl2 fraction of peels showed a high content of total phenolic compounds (516.7 ± 3.00 mg EqAG /g). The DPPH test showed that the CH2Cl2 fraction (leaves) held an EC50 of 0.08 ± 0.02, a higher value than that observed for the standards used in the test­Butylated hydroxyanisole (BHA), Butylated hydroxytoluene (BHT), and ascorbic acid. The AcOEt and MeOH fractions of peels presented moderate cytotoxicity with values below 500 µg/mL. The MeOH fraction of leaves showed seven major compounds: myricetin, quercetin, quercetin-arabinofuranoside, apigenin-triglycosides, and apigenin-diglucoside, being the last three unpublished in studies involving the genus. The tests conducted in this study show the potential of P. diversifolium as a promising source of biomolecules with therapeutic applicability.

Espécies de Pithecellobium (Fabaceae) são usadas na medicina tradicional para tratar diabetes, tosse, bronquite e inflamação. Este estudo teve como objetivo avaliar o teor e determinar a atividade antioxidante, o teor de compostos fenólicos e a citotoxicidade do extrato e das frações de Pithecellobium diversifolium, uma pesquisa inédita com uma espécie exótica da Caatinga do Nordeste do Brasil, utilizando a instrumentação Clae-IES. As frações MeOH das folhas e cascas do caule apresentaram alto teor de flavonoides (198,1 ± 106,50 e 542,7 ± 2,52 mg EqQ/g). A fração CH2Cl2 das cascas apresentou um elevado teor de compostos fenólicos totais (516,7 ± 3,00 mg EqAG/g). O teste DPPH mostrou que a fração CH2Cl2 (folhas) apresentou um EC50 de 0,08 ± 0,02, valor superior ao observado para os padrões utilizados no teste ­ Butil hidroxianisol (BHA), Butil hidroxitolueno (BHT) e ácido ascórbico. As frações AcOEt e MeOH das cascas apresentaram citotoxicidade moderada com valores inferiores a 500 µg/mL. A fração MeOH das folhas apresentou sete compostos majoritários: miricetina, quercetina, quercetina-arabinofuranosídeo, apigenina-triglicosídeos e apigenina-diglucosídeo, sendo os três últimos inéditos em estudos envolvendo o gênero. Os testes realizados demonstram o potencial de P. diversifolium, uma promissora fonte de biomoléculas com aplicabilidade terapêutica.

Las especies de Pithecellobium (Fabaceae) se utilizan en la medicina tradicional para tratar diabetes, tos, bronquitis e inflamación. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el contenido y determinar la actividad antioxidante, el contenido de compuestos fenólicos y la citotoxicidad del extracto y de las fracciones de Pithecellobium diversifolium, un estudio inédito con una especie exótica de la Caatinga de la región Nordeste de Brasil, que utilizó la instrumentación HPLC-ESI. Las fracciones MeOH de hojas y cortezas de tallo mostraron un alto contenido de flavonoides (198,1 ± 106,50 y 542,7 ± 2,52 mg EqQ/g). La fracción CH2Cl2 de las cortezas presentó un alto contenido de compuestos fenólicos totales (516,7 ± 3,00 mg EqAG/g). El ensayo DPPH mostró que la fracción CH2Cl2 (hojas) tenía EC50 de 0,08 ± 0,02, valor superior a lo observado para los estándares utilizados en el ensayo ­Butilhidroxianisol (BHA), butilhidroxitolueno (BHT) y ácido ascórbico. Las fracciones AcOEt y MeOH de las cortezas presentaron una citotoxicidad moderada con valores inferiores a 500 µ g/mL. La fracción MeOH de las hojas contiene siete compuestos principales: miricetina, quercetina, quercetina-arabinofuranosido, apigenina-triglucósidos y apigenina-diglucósido, de los cuales los tres últimos son inéditos en estudios sobre el género. Las pruebas realizadas demuestran el potencial de P. diversifolium, una fuente prometedora de biomoléculas con aplicabilidad terapéutica.

Purificação de IgM a partir de plasma humano empregando cromatografias de troca catiônica

Human plasma is full of therapeutic proteins that can be used to treat several diseases, among these proteins are immunoglobulins. IgG is currently the most important blood product because it accounts for around 30% of the market, which was estimated at 20 billion dollars in 2016 and continues to grow. IgM has multiple functions, such as controlling infections, producing dendritic cells and controlling tissue homeostasis. Because of its pentameric structure, IgM can also bind to antigens with greater avidity than other immunoglobulins. However, there are no commercially available IgM concentrates. In this work we studied the purification of plasma-derived IgM using liquid chromatography techniques and resins that can be easily scaled up. In the first step, plasma was purified on a Sepharose 4FF gel-filtration column. The enriched IgM fraction called F2 was then used as sample for cation exchange resin purifications. Experiments were initially carried out on Hi-Trap SP FF with the undiluted F2, five times diluted F2 and ten times diluted F2. Then we scaled up the purification using a 23mL SP Sepharose FF column using F2 diluted 10 times as loading sample. Our results indicate that the best of sample volume was 100mL, which corresponds to 63mg of protein. At pH 6.0 36% of IgM was not adsorbed on the column and 50% was adsorbed. At pH 5.0 IgM was recovered only in the Elution fraction, but the recovery was very poor (38%). Finally we carry out a purification at pH 5.0 using NaCl gradient to elute the adsorbed proteins. Due to the low concentration of proteins in the collected fractions, it was only possible to observe by immunoturbidimetry that 37.3% of IgM eluted in the 300mM NaCl to 500mM NaCl gradient. In this fraction, polyacrylamide gels show that IgG and albumin were present. The results obtained were preliminary and did not yet allow comparison of purification using cation exchange resin with anion exchange resins.

O plasma humano está repleto de proteínas terapêuticas que podem ser utilizadas no tratamento de várias doenças, entre essas proteínas estão as imunoglobulinas. O IgG é atualmente o hemoderivado mais importante porque é responsável por cerca de 30% do mercado, que era estimado em 20 bilhões de dólares em 2016 e continua a crescer. IgM tem múltiplas funções, como controle de infecções, produção de células dendríticas e controle da homeostase dos tecidual. Por conta de sua estrutura pentamérica, o IgM também pode-se ligar a antígenos com maior avidez do que outras imunoglobulinas. Entretanto não existem concentrados de IgM disponíveis comercialmente. Neste trabalho estudamos a purificação de IgM derivada de plasma usando técnicas de cromatografia líquida e resinas que podem ser facilmente escalonadas. Na primeira etapa foi feita a purificação de plasma em uma coluna de gel-filtração Sepharose 4FF. A fração enriquecida de IgM F2 foi então usada como amostra de entrada para as purificações em resina de troca catiônica. Primeiramente foram feitos experimentos em Hi-Trap SP FF com a amostra sem diluir, diluída cinco e dez vezes. Em seguida escalonamos a purificação empregando uma coluna SP Sepharose FF de 23mL usando como amostra de entrada F2 diluída 10 vezes. Verificamos que o volume ideal de amostra aplicada era de 100mL que corresponde a 63mg de proteína de amostra. Verificamos que em pH 6,0 36% de IgM não é adsorvido na coluna e 50% é adsorvido. Em pH 5,0 IgM foi recuperado somente na fração de Eluição, porém a recuperação foi muito baixa (38%). O último passo foi realizar uma purificação em pH 5,0 usando gradiente de NaCl para eluição das proteínas adsorvidas. Devido a baixa concentração de proteínas nas frações recolhidas foi possível apenas observar por imunoturbidimetria que 37,3% de IgM elui no gradiente NaCl 300mM ao NaCl 500mM. Nessa fração os géis de poliacrilamida mostram que IgG e Albumina estão presentes. Os resultados obtidos são preliminares e ainda não permitem comparar a purificação em resina de troca catiônica com resina de troca aniônica.

Assessment of aflatoxin B1 contamination in rice and maize

Introduction: Aflatoxins B1 are among the most common poisonous mycotoxins produced by certain fungi that harm animals and crops. Mycotoxins can cause a variety of adverse health effects and pose a serious health threat to humans. The Maximum Residue Limits of aflatoxin B1 in processed cereals and ingredients are 2 parts per billion (ppb) and 5 ppb, respectively. Objectives: To evaluate the status of aflatoxin B1 contamination in rice, corn and staple food produced in Ha Giang province compared with the maximum permitted levels. Methods: A total of 210 rice and maize samples were analyzed to quantify the level of aflatoxin B1. Analysis of mycotoxins was conducted by High Performance Liquid Chromatography using a fluorescence detector. Results: It was found that rice, rice products, maize, and maize products had a mean aflatoxin B1 content of 1.79 ppb, 2.55 ppb, 2.19 ppb, and 6.35 ppb, respectively. The results also showed that 71.9% of samples were contaminated with mycotoxins, and 14.28% of samples exceeded the maximum allowable limit. Conclusion: The concentration of aflatoxin B1 in 14.28% of the samples are over permissible limits by nationwide regulations.

Introducción: La aflatoxina B1 se encuentra entre las micotoxinas más comunes y venenosas producidas por ciertos hongos que dañan a los animales y los cultivos. Las micotoxinas pueden causar una variedad de efectos adversos para la salud y representar una grave amenaza para la salud de los seres humanos. Los límites máximos de residuos de aflatoxina B1en cereales e ingredientes procesados son de 2 ppb y 5 ppb, respectivamente. Objetivos: Evaluar el estado de contaminación por aflatoxina B1 en arroz, maíz y alimentos básicos producidos en la provincia de Ha Giang, en comparación con los niveles máximos permitidos. Métodos: Se analizaron un total de 210 muestras de arroz y maíz para cuantificar el nivel de aflatoxina B1. El análisis de micotoxinas se realizó mediante cromatografía líquida de alta resolución, utilizando un detector de fluorescencia. Resultados: Se encontró que el arroz, los productos de arroz, el maíz y los productos de maíz tenían un contenido medio de aflatoxin B1, de 1,79 ppb, 2,55 ppb, 2,19 ppb y 6,35 ppb, respectivamente. Los resultados también mostraron que el 71,9 % de las muestras estaban contaminadas con micotoxinas y el 14,28 % de las muestras excedieron el límite máximo permitido. Conclusión: La concentración de aflatoxina B1 en el 14,28 % de las muestras está por encima de los límites permisibles por la norma nacional.

Validación de la metodología para cuantificar el fluconazol y sus impurezas orgánicas en materia prima por cromatografía líquida de alta resolución / Method validation for the quantification of fluconazole and its organic impurities in raw material using high-performance liquid chromatography

Introducción. La eficiencia de una metodología para analizar una sustancia farmacológica puede verse afectada por las condiciones reales del laboratorio de cada país, incluyendo el clima. Por esta razón, se requiere validar el método con las pautas recomendadas para ello y optimizar el proceso, para asegurar el éxito y la confianza en los resultados. Objetivo. Validar una metodología para la cuantificación simultánea del fluconazol (materia prima) y sus impurezas orgánicas mediante cromatografía líquida de alta resolución con detector de arreglo de diodos en condiciones de clima tropical y con todos los requisitos normativos. Materiales y métodos. Se hicieron pruebas previas a la validación del método: idoneidad del sistema, estudio de filtros, límite de cuantificación, ausencia del error sistemático, estudios de degradación forzada y estabilidad de las soluciones. Además, se validaron: la especificidad, la linealidad, la exactitud, la precisión y la robustez. Resultados. La pureza espectral del método se logró al obtener la separación de los productos de degradación de los picos de los analitos. La estabilidad de las soluciones no se vio afectada, en la frecuencia evaluada de 24 horas, a temperatura ambiente y de refrigeración. Se obtuvo una linealidad con coeficientes de correlación mayores o iguales a 0,999 para la valoración y mayores o iguales a 0,997 para las impurezas. La recuperación estuvo en el rango de 98 a 102,0 % de fluconazol, con una exactitud entre el 80 y el 120 % para las impurezas. El factor de repetibilidad y reproducibilidad no superó la desviación estándar relativa del 2,0 % para la valoración y, la del 5,0 %, para las impurezas, lo cual mostró una solidez adecuada del método. Además, se obtuvo un tiempo corto de ejecución del análisis, lo que permitió la rápida determinación de la calidad de la materia prima. Conclusión. Se demostró que el método de cuantificación de fluconazol, validado por cromatografía líquida de alta resolución con detector de arreglo de diodos, es lo suficientemente selectivo, preciso, exacto, lineal y robusto; además, es capaz de generar resultados analíticos veraces en condiciones de uso reales, incluyendo el clima tropical de Colombia.

Introduction. The real laboratory conditions of each country, including climate, can affect the method's efficiency in analyzing a pharmacological substance. Thus, it is necessary to validate the process according to the corresponding guidelines and optimize it to ensure success and confidence in the results. Objective. The objective was to validate a methodology for fluconazole and its organic impurities quantification in raw material using high-performance liquid chromatography, with a diode array detector, under tropical climate conditions, and complying with all regulatory requirements. Materials and methods. We performed pre-validation tests of the method consisting of system adequacy, filters study, quantification limit, absence of systematic error, forced degradation studies, and solutions stability. In addition, we validated the specificity, linearity, accuracy, precision, and robustness of the system. Results. Separation of the degradation products from the analyte peaks allowed the achievement of the method's spectral purity. The solution's stability was not affected during the evaluated time (24 hours) at room temperature and under refrigeration. Linearity resulted in correlation coefficients greater than or equal to 0.999 for the evaluation and greater than or equal to 0.997 for impurities. We obtained a fluconazole recovery varying from 98 to 102% with an accuracy between 80 to 120% for impurities detection. The repeatability and reproducibility factor did not exceed a relative standard deviation of 2.0% for the evaluation and of 5.0% for the impurities, demonstrating the adequate robustness of the method. In addition, a short analysis execution time allowed the quick determination of the raw material quality. Conclusion. We demonstrated that the fluconazole quantification method validated by high-performance liquid chromatography is sufficiently selective, precise, exact, linear, and robust to generate accurate analytical results under real conditions, including the tropical climate of Colombia.

Perfil de muestras de ketamina analizadas entre el 2017-2022 / Profile of ketamine´s samples analyzed during 2017-2022

La ketamina es un anestésico disociativo que actúa como antagonista no competitivo del receptor NMDA (N-metil-D-aspartato). Actualmente se utiliza como anestésico y analgésico en medicina veterinaria y en algunas áreas de la medicina humana. La sensación disociativa que produce la ketamina comúnmente denominada “K-Hole o fuera del cuerpo”, es placentera para algunos individuos, y ha llevado a la ketamina a ganar popularidad como droga recreativa. En el presente estudio se evaluó la cantidad de muestras positivas a ketamina provenientes de distintas fiscalías de Chile entre el 2017-2022, colocando atención a muestras liquidas transparentes, donde se cuantificaron 49 muestras mediante HPLC/UV-DAD, obteniendo resultados en porcentaje de ketamina clorhidrato. Se observó si existe una relación en cuanto a la concentración y procedencia de incautación con productos veterinarios o humanos de venta legal que contienen esta sustancia. Se puede concluir que entre los años 2017 al 2022 hubo un aumento significativo en el análisis de muestras positivas a ketamina pasando de 72 muestras en el 2017 a 3202 muestras el 2022. En cuanto a las muestras liquidas transparentes positivas a ketamina, no presentaron una tendencia definida en los años evaluados. Con respecto a la concentración de ketamina clorhidrato, se aprecia que las concentraciones se encuentran en el rango de 8-12%, observándose una directa relación con la ketamina de uso veterinario que se encuentra al 10% de ketamina clorhidrato, paralelamente, la procedencia de incautación de ketamina liquida a nivel nacional, se concentra en las regiones de Arica y Parinacota y Tarapacá.(AU)

Ketamine is a dissociative anesthetic that act as non-competitive antagonist at N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors. Nowadays, ketamine is used in veterinary medicine and some areas on human medicine as anesthetic and analgesic. The dissociative effect produced by ketamine called “k-Hole or out of body” is pleasant to some individuals, and has led to it gaining in popularity as a recreational drug. The present study evaluated the number of positives samples for ketamine from different Chilean prosecutors between 2017 and 2022. In addition, the study paid attention in transparent liquid samples, quantifying 49 of them at random by HPLC/UV-DAD obtain the percentage of ketamine hydrochloride, and correlate this result with the concentration of veterinary and human drugs for legal sale, also, evaluate the origin of seizure of these liquid samples at the national level. Between 2017 and 2022, there was a significant increase of positive samples for ketamine, from 72 samples in 2017 to 3202 samples in 2022. Otherwise, transparent liquid samples positives for ketamine did not show a defined trend in the years evaluated. Results of the quantification of liquid samples are in the range of 8-12%; these results show a direct relation with veterinary ketamine products, which are available at 10% of ketamine hydrochloride. Additionally, the origin of seizure of liquid ketamine at the national level is concentrated in the north regions of Chile: Arica and Parinacota, and Tarapacá.(AU)

Determining the Presence of 5-Fluorouracil in Hamster Saliva by HPLC / Determinação, por CLAE, da Presença do 5-Fluorouracil em Saliva de Hamsters

Abstract Introduction: Various methods of analysis for the assay of chemotherapeutic agent 5-Fluorouracil (5-FU) in human and animal biological fluids have previously been reported. However, there is no standardization for detecting 5-FU in the hamsters' saliva that received the chemotherapeutic agent. Objective: Considering that the administration of 5-FU in some way changes the morphology and function of the salivary glands, and that the presence of the chemotherapeutic agents in the oral mucosa may lead to some oral complications, the aim of this study was to determine the presence of 5-FU in the hamsters' saliva that received the chemotherapeutic agent, by means of the High Performance Liquid Chromatography technique (HPCL) since this animal model is used in studies of 5-FU induced oral mucositis and glandular hypofunction. Methods: Twelve animals were divided into 4 groups: CP and CPI, in which the animals received pilocarpine (CP) or pilocarpine + isoproterenol (CPI) and the chemotherapy vehicle intraperitoneally; and Groups QP and QPI, in which the animals received the same secretagogues listed above, and the chemotherapeutic agent 5-FU, respectively. After the secretagogue administration, saliva was collected from all the animals for a period of 60 mins. Subsequently, the saliva was frozen at -80 ˚C for later determination of the chemotherapeutic agent by HPLC. After the the chromatograms analysis, and based on the results obtained, it was possible to identify the presence of 5-FU in the saliva samples from hamsters that received the chemotherapeutic agent intraperitonally, by the HPLC technique. (AU)

Resumo Vários métodos de análise para o ensaio do quimioterápico 5-Fluorouracil (5-FU) em fluidos biológicos de humanos e animais, foram previamente relatados. No entanto, não há uma padronização para detecção de 5-FU na saliva de hamsters que receberam o quimioterápico. Considerando que a administração do 5-FU altera de alguma maneira a morfologia e função das glândulas salivares, e que a presença do quimioterápico na mucosa oral pode levar a algumas complicações orais, este trabalho teve como objetivo de determinar a presença de 5-FU na saliva de hamsters que receberam o quimioterápico pela técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), uma vez que este modelo animal é usado nos estudos com mucosite oral e hipofunção glandular, induzidas por 5-FU. Doze animais foram divididos em 4 grupos: CP e CPI, onde os animais receberam intraperitonealmente pilocarpina (CP) ou pilocarpina + isoproterenol (CPI) e o veículo do quimioterápico, e os grupos QP e QPI, onde os animais receberam, respectivamente, os mesmos secretagogos listados acima e o quimioterápico 5-FU. Após a administração do secretagogo, foi coletada a saliva de todos os animais, por um período de 60 min. Em seguida, a saliva foi congelada a -80 ˚C para posterior determinação do quimioterápico por CLAE. Após análise dos cromatogramas, e com base nos resultados obtidos, foi possível identificar a presença do 5-FU nas amostras de saliva de hamsters que receberam o quimioterápico via intraperitoneal pela técnica da CLAE. (AU)

Ferramenta in silico para desenvolvimento de métodos cromatográficos - aplicação em misturas de filtros solares / In silico tool for development of chromatographic methods - application in mixtures of sunscreensPalavras-chave em inglês

Planejamento de Experimentos (DoE) permite obter e explorar conhecimentos sobre inúmeros sistemas, facilitando a coleta de informações com reduzido número de experimentos. No entanto, DoE é restrito ao delineamento do desenho experimental. Para superar essa limitação e permitir uma previsão precisa dos tempos de retenção para uma seleção de filtros UV orgânicos sob diversas condições, usamos a Relação Quantitativa entre Estrutura e Retenção combinada com o método de Monte Carlo para desenvolver uma plataforma in silico capaz de prever o perfil cromatográfico de filtros UV orgânicos. Sete analitos foram usados para estabelecer o modelo de predição: benzofenona-3, avobenzona, ethilhexil triazona, octil dimetil PABA, metoxicinamato de octila, tinosorb® S e octocrileno. Os valores residuais obtidos no modelo de análise de regressão múltipla mostraram distribuição normal, homocedasticidade e independência. Os coeficientes de determinação (R2) e predição (R2 pred) foram de 99,82% e 99,71%, respectivamente. A plataforma in silico apresentou grande potencial para predição do perfil cromatográfico de filtros UV orgânicos, da coeluição de analitos, de seus parâmetros cromatográficos, além de permitir, sem experimentação, uma visão geral do comportamento de retenção de compostos sob diversas condições cromatográficas

Design of Experiments (DoE) allows obtaining and explorer knowledge about innumerous systems, facilitating the information collection with reduced number of experiments. However, DoE is restricted to the limited range which experimental design was delineated. In order to overcome this limitation and enable accurate prediction of retention times for a selection of organic UV filters under various conditions, we used the Quantitative Structure-Retention Relationships tool combined with Monte Carlo method to develop an in silico platform capable of predicting chromatographic profile of organic UV filters. Seven analytes were used to established to prediction model: benzophenone-3, butyl methoxydibenzoilmethane, ethylhexyl triazone, ethylhexyl dimetyl PABA, ethylhexyl methoxycinnamate, bisethylhexyloxyphenol methoxyphenyl triazine and octocrylene. Residual values obtained from multiple regression analysis model showed normal distribution, homoscedasticity, and independence. Determination (R2) and prediction (R2 pred) coefficients were found to be 99,82% and 99,71%, respectively. In silico platform presented great potential for predicting chromatographic profile of organic UV filters, analytes coelution, chromatographic parameters and allowing, without experimentation, an overview of retention behavior of compounds under various chromatographic conditions

Purificação da imunoglobulina M a partir da utilização de frações do plasma humano empregando técnicas de cromatografia líquida

Immunoglobulin M (IgM) is a pentamer of approximately 950kDa, consisting of two heavy chains of 75kDa each, two light chains of 25kDa and a J chain of 15kDa. IgM is a promising therapeutic candidate due to increasing evidence suggesting its potential as a tumor marker, anti-inflammatory and immunomodulatory activities. In order to exploit its full potential, it is important that large amounts of IgM are available at low cost. In this work, two purification steps that were already being developed by the laboratory were explored. Purification by metal affinity chromatography (IMAC) and cation exchange of the pool from plasma purification on Sepharose 4FF followed by ANX Sepharose FF was evaluated. In IMAC, the purification was evaluated at pHs 5.0, 6.0 and 7.0 and the results indicate that with pH 6.0 in IMAC-Co2+ we obtained IgM with better recovery and greater purity. By varying the NaCl concentration in the equilibrium buffer between 250mM and 500mM, we found that IgM was obtained with greater purity in the purification in which 250mM NaCl was used in the equilibrium buffer. Using the cation exchange column, the results obtained were not satisfactory. The purity of IgM, calculated by the ImageJ program, was approximately 75%. To increase the purity of IgM, purification on the Superdex 200 gel filtration column will be evaluated.

A imunoglobulina M é um pentâmero de aproximadamente 950kDa, sendo composto por duas cadeias pesadas de 75kDa cada, duas cadeias leves de 25kDa e uma cadeia J de 15kDa. IgM é um candidato terapêutico promissor devido ao aumento de evidências que sugerem seu potencial de marcador tumoral, atividades anti-inflamatória e imunomoduladoras. Com o intuito de que todo seu potencial seja explorado, é importante que grandes quantidades de IgM estejam disponíveis a baixo custo. Nesse trabalho foram exploradas duas etapas de purificação que já estavam sendo desenvolvida pelo laboratório. Aplicou-se cromatografia de afinidade ao metal (IMAC) na fração 350mM proveniente da ANX Sepharose FF, com o intuito de obter IgM com alto grau de pureza. Foi observado que a melhor faixa de trabalho foi em pH 6,0 utilizando como metal imobilizado o cobalto e solução contendo NaCl 250mM. Como segunda estratégia, aplicou-se cromatografia de troca catiônica na fração 350mM diluído 10 vezes com água purificada e ao contrário da IMAC, não obtivemos resultados satisfatórios em relação a pureza de IgM. Apesar dos resultados alcançados, ainda é necessário o desenvolvimento de novas estratégias e estudos para o aumento de IgM, a fim de se obter uma imunoglobulina mais pura para possível uso terapêutico.

Phytochemical characterization, and antioxidant and antibacterial activities of the hydroethanolic extract of Anadenanthera peregrina stem bark / Caracterização fitoquímica, atividade antioxidante e antibacteriana do extrato hidroetanólico de cascas do caule de Anadenanthera peregrina

The Brazilian Cerrado biome consists of a great variety of endemic species with several bioactive compounds, and Anadenanthera peregrina (L.) Speg is a promising species. In this study, we aimed to perform phytochemical characterization and evaluate the antioxidant and antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli of the hydroethanolic extract of A. peregrina stem bark. The barks were collected in the Botanical Garden of Goiânia, Brazil. The hydroethanolic extract was obtained by percolation and subjected to physicochemical screening, total phenolic content estimation, high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprinting, and antioxidant (IC50 values were calculated for the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay - DPPH) and antibacterial activity determination. The pH of the extract was 5.21 and density was 0.956 g/cm3. The phytochemical screening indicated the presence of cardiac glycosides, organic acids, reducing sugars, hemolytic saponins, phenols, coumarins, condensed tannins, flavonoids, catechins, depsides, and depsidones derived from benzoquinones. The extract showed intense hemolytic activity. The total phenolic content was 6.40 g GAE 100 g-1. The HPLC fingerprinting analysis revealed the presence of gallic acid, catechin, and epicatechin. We confirmed the antioxidant activity of the extract. Furthermore, the extract did not inhibit the growth of E. coli colonies at any volume tested, but there were halos around S. aureus colonies at all three volumes tested. These results contribute to a better understanding of the chemical composition of A. peregrina stem bark and further support the medicinal applications of this species.

O bioma Cerrado brasileiro apresenta em uma grande variedade de espécies endêmicas com diversos compostos bioativos, e Anadenanthera peregrina (L.) Speg é uma espécie promissora. Neste estudo, objetivamos realizar a caracterização fitoquímica e avaliar as atividades antioxidantes e antibacterianas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli do extrato hidroetanólico de cascas do caule de A. peregrina. As cascas foram coletadas no Jardim Botânico de Goiânia, Brasil. O extrato hidroetanólico foi obtido por percolação e submetido a triagem físicoquímica, estimativa de conteúdo fenólico total, impressão digital por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e determinação da atividade antioxidante (valores de IC50 foram calculados para o ensaio 2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e antibacteriana. O pH do extrato foi de 5,21 e a densidade foi de 0,956 g/cm3. A triagem fitoquímica indicou a presença de glicosídeos cardíacos, ácidos orgânicos, açúcares redutores, saponinas hemolíticas, fenóis, cumarinas, taninos condensados, flavonóides, catequinas, depsídios e depsidonas derivados de benzoquinonas. O extrato mostrou intensa atividade hemolítica. O conteúdo fenólico total foi de 6,40 g de GAE 100 g-1. A análise por impressão digital por HPLC revelou a presença de ácido gálico, catequina e epicatequina. Confirmamos a atividade antioxidante do extrato. Além disso, o extrato não inibiu o crescimento de colônias de E. coli em nenhum volume testado, mas houve halos em torno das colônias de S. aureus nos três volumes testados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da composição química da casca de A. peregrina e apoia ainda mais as aplicações medicinais desta espécie.

Phytochemical characterization, and antioxidant and antibacterial activities of the hydroethanolic extract of Anadenanthera peregrina stem bark / Caracterização fitoquímica, atividade antioxidante e antibacteriana do extrato hidroetanólico de cascas do caule de Anadenanthera peregrina

The Brazilian Cerrado biome consists of a great variety of endemic species with several bioactive compounds, and Anadenanthera peregrina (L.) Speg is a promising species. In this study, we aimed to perform phytochemical characterization and evaluate the antioxidant and antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli of the hydroethanolic extract of A. peregrina stem bark. The barks were collected in the Botanical Garden of Goiânia, Brazil. The hydroethanolic extract was obtained by percolation and subjected to physicochemical screening, total phenolic content estimation, high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprinting, and antioxidant (IC50 values were calculated for the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay - DPPH) and antibacterial activity determination. The pH of the extract was 5.21 and density was 0.956 g/cm3. The phytochemical screening indicated the presence of cardiac glycosides, organic acids, reducing sugars, hemolytic saponins, phenols, coumarins, condensed tannins, flavonoids, catechins, depsides, and depsidones derived from benzoquinones. The extract showed intense hemolytic activity. The total phenolic content was 6.40 g GAE 100 g-¹. The HPLC fingerprinting analysis revealed the presence of gallic acid, catechin, and epicatechin. We confirmed the antioxidant activity of the extract. Furthermore, the extract did not inhibit the growth of E. coli colonies at any volume tested, but there were halos around S. aureus colonies at all three volumes tested. These results contribute to a better understanding of the chemical composition of A. peregrina stem bark and further support the medicinal applications of this species.

O bioma Cerrado brasileiro apresenta em uma grande variedade de espécies endêmicas com diversos compostos bioativos, e Anadenanthera peregrina (L.) Speg é uma espécie promissora. Neste estudo, objetivamos realizar a caracterização fitoquímica e avaliar as atividades antioxidantes e antibacterianas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli do extrato hidroetanólico de cascas do caule de A. peregrina. As cascas foram coletadas no Jardim Botânico de Goiânia, Brasil. O extrato hidroetanólico foi obtido por percolação e submetido a triagem físico química, estimativa de conteúdo fenólico total, impressão digital por cromatografia líquida de alta eficiência(HPLC) e determinação da atividade antioxidante (valores de IC50 foram calculados para o ensaio 2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e antibacteriana. O pH do extrato foi de 5,21 e a densidade foi de 0,956 g/cm3. A triagem fitoquímica indicou a presença de glicosídeos cardíacos, ácidos orgânicos, açúcares redutores, saponinas hemolíticas, fenóis, cumarinas, taninos condensados, flavonóides, catequinas, depsídios e depsidonas derivados de benzoquinonas. O extrato mostrou intensa atividade hemolítica. O conteúdo fenólico total foi de 6,40 g de GAE 100 g-1. A análise por impressão digital por HPLC revelou a presença de ácido gálico, catequina e epicatequina. Confirmamos a atividade antioxidante do extrato. Além disso, o extrato não inibiu o crescimento de colônias de E. coli em nenhum volume testado, mas houve halos em torno das colônias de S. aureus nos três volumes testados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da composição química da casca de A. peregrina e apoia ainda mais as aplicações medicinais desta espécie.

Phytochemical characterization, and antioxidant and antibacterial activities of the hydroethanolic extract of Anadenanthera peregrina stem bark

Abstract The Brazilian Cerrado biome consists of a great variety of endemic species with several bioactive compounds, and Anadenanthera peregrina (L.) Speg is a promising species. In this study, we aimed to perform phytochemical characterization and evaluate the antioxidant and antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli of the hydroethanolic extract of A. peregrina stem bark. The barks were collected in the Botanical Garden of Goiânia, Brazil. The hydroethanolic extract was obtained by percolation and subjected to physicochemical screening, total phenolic content estimation, high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprinting, and antioxidant (IC50 values were calculated for the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay - DPPH) and antibacterial activity determination. The pH of the extract was 5.21 and density was 0.956 g/cm3. The phytochemical screening indicated the presence of cardiac glycosides, organic acids, reducing sugars, hemolytic saponins, phenols, coumarins, condensed tannins, flavonoids, catechins, depsides, and depsidones derived from benzoquinones. The extract showed intense hemolytic activity. The total phenolic content was 6.40 g GAE 100 g-1. The HPLC fingerprinting analysis revealed the presence of gallic acid, catechin, and epicatechin. We confirmed the antioxidant activity of the extract. Furthermore, the extract did not inhibit the growth of E. coli colonies at any volume tested, but there were halos around S. aureus colonies at all three volumes tested. These results contribute to a better understanding of the chemical composition of A. peregrina stem bark and further support the medicinal applications of this species.

Resumo O bioma Cerrado brasileiro apresenta em uma grande variedade de espécies endêmicas com diversos compostos bioativos, e Anadenanthera peregrina (L.) Speg é uma espécie promissora. Neste estudo, objetivamos realizar a caracterização fitoquímica e avaliar as atividades antioxidantes e antibacterianas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli do extrato hidroetanólico de cascas do caule de A. peregrina. As cascas foram coletadas no Jardim Botânico de Goiânia, Brasil. O extrato hidroetanólico foi obtido por percolação e submetido a triagem físico-química, estimativa de conteúdo fenólico total, impressão digital por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e determinação da atividade antioxidante (valores de IC50 foram calculados para o ensaio 2,2-difenil-1-picril-hidrazil) e antibacteriana. O pH do extrato foi de 5,21 e a densidade foi de 0,956 g/cm3. A triagem fitoquímica indicou a presença de glicosídeos cardíacos, ácidos orgânicos, açúcares redutores, saponinas hemolíticas, fenóis, cumarinas, taninos condensados, flavonóides, catequinas, depsídios e depsidonas derivados de benzoquinonas. O extrato mostrou intensa atividade hemolítica. O conteúdo fenólico total foi de 6,40 g de GAE 100 g-1. A análise por impressão digital por HPLC revelou a presença de ácido gálico, catequina e epicatequina. Confirmamos a atividade antioxidante do extrato. Além disso, o extrato não inibiu o crescimento de colônias de E. coli em nenhum volume testado, mas houve halos em torno das colônias de S. aureus nos três volumes testados. Estes resultados contribuem para uma melhor compreensão da composição química da casca de A. peregrina e apoia ainda mais as aplicações medicinais desta espécie.

Validation of a method employing liquid chromatography to identify and quantify glycomacropeptide of casein in raw milk / Validación de un método mediante cromatografía líquida para identificar y cuantificar glicomacropéptido de caseína en la leche cruda

Background: The information on official testing methods, or regulatory methods in Colombia to test whey in milk is limited; this restriction of information goes against the possibility of mitigating the risk of food fraud. Objectives: The validation of an HPLC method to determine casein glycomacropeptide (c-GMP), a protein that countries such as Brazil, Spain, and Ecuador have used as an indicator of raw milk adulteration with whey, was carried out. Methods: A 10mL sample of raw milk is precipitated with 24% TCA using ultrasound, a process followed by filtration. The collected fraction ensured the separation of c-GMP and then injected into the liquid chromatography. Results: A 30 minutes analysis allowed the determination of c-GMP with a retention time of 12.9 ± 0.5 minutes. The performance characteristics method in the validation exercise were: recovery percentage 99.97%, linearity R2> 0.95; % RSD accuracy <5.3%. Conclusion, the method exhibits desirable attributes for the intended purpose

Antecedentes: En Colombia la información de dominio público en metodologías de análisis de lactosuero en leche es limitada, restringiendo la posibilidad de acceder a ellas para mitigar el riesgo de fraude alimentario. Objetivos: Se realizó validación de un método por HPLC para determinar en leche cruda c-GMP, proteína usada como indicador de adulteración en países como Brasil y Ecuador. Metodos: Una muestra de 10mL de leche cruda es precipitada con TCA al 24% empleando ultrasonido, proceso seguido por filtración. La fracción recolectada aseguró la separación del c-GMP para luego inyectar al cromatógrafo líquido. Resultados: La determinación de c-GMP permitió el análisis en 30 minutos con tiempo de retención de 12,9 ± 0,5 minutos. Las características de desempeño del método en el ejercicio de validación fueron: porcentaje de recuperación 99,97%, linealidad R2>0,95; precisión %RSD< 5,3%. Conclusión: el método al final del ejercicio exhibe atributos para el fin previsto

Estudio comparativo: cromatografía liquida de alta presión versus electroforesis de hemoglobina. Diagnóstico de anemia drepanocítica / Comparative study: high pressure liquid chromatography versus hemoglobin electrophoresis. Diagnosis of sickle cell anemia

La anemia de células falciformes (ACF) es la hemoglobinopatía hereditaria más común en el mundo. El diagnóstico definitivo se hace por electroforesis de hemoglobina (EFH), relativamente costosa. Por ello ante la sospecha diagnóstica se solicita Metabisulfito de sodio al 2% (MS2), que tiene un menor costo, aporta solo resultados cualitativos, y la confiabilidad depende de quien interprete. Se busca una alternativa económicamente accesible y con mayor certeza diagnóstica. Objetivo: describir y comparar los valores de Hemoglobina S (HbS) obte- nidos mediante cromatografía líquida de alta presión (CLAP) y electroforesis de hemoglobina. Pacientes y Métodos: investigación cuantitativa, descriptiva, no experimental, en las comuni- dades de Masca y Pueblo Nuevo, Omoa, Cortés, en el 2017. Las comunidades tienen 2545 habitantes, de quienes se tomó muestra probabilística de 369. Encontrando 20 personas con prueba de MS2 positiva. En estos 20 casos se solicitó también CLAP y EFH. Los datos fueron analizados con SPSS versión 23, calculando frecuencias, porcentajes y medidas de tendencia central. Resultados: El 50% de los casos eran fenotípicamente mestizos. Los valores de CLAP estuvieron comprendidos entre 26.1% y 68.3% y los de electroforesis de hemoglobina entre 27.3% y 100%. La media aritmética de CLAP fue de 35.53 vs 45.3 para EFH. Conclu- sión: El valor de Hb S medido por EFH es cercano al obtenido por CLAP, por lo que este método podría usarse para un diagnóstico más rápido y a menor costo...(AU)

High peak of carbamylated hemoglobina discordant with urea level: a case report / Pico alto da hemoglobina carbamilada discordante com o nível de ureia: relato de caso

ABSTRACT Hemoglobin A1c (HbA1c) measurement is commonly performed in diabetes mellitus patients to monitor glycemic control over the last three to four months. Carbamylated hemoglobin, which is the hemoglobin that binds to isocyanic acid derived from urea, is one of the possible analytical interference in the uremic patient. When measured by ion-exchange high-performance liquid chromatography (HPLC), carbamylated hemoglobin forms a peak that overlaps the peak of HbA1c, causing a falsely elevated HbA1c result. We report a case of a 60-years-old man who had a spurious increase in HbA1c, with a high carbamylated hemoglobin peak disproportionate to the urea value. Subsequent hemoglobin analysis using hemoglobin electrophoresis and HPLC hemoglobin testing system suggested hemoglobin J (Hb J) variant. Our case highlighted the possibility of misleading HbA1c interpretation in the presence of a high carbamylated hemoglobin peak, but not proportionate to urea value. In this study, Hb J was detected. A method free from hemoglobin variant interference should be used ideally, and monitoring glycemic control should be performed using alternative methods, such as serum fructosamine or continuous glucose monitoring.

RESUMEN La prueba de la hemoglobina glicosilada A1c (HbA1c) se realiza comúnmente en pacientes con diabetes mellitus para monitorear el control glucémico durante los últimos tres o cuatro meses. La hemoglobina carbamilada, que es la hemoglobina que se une al ácido isociánico derivado de la urea, es una de las posibles interferencias analíticas en el paciente urémico. Cuando se mide mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) de intercambio iónico, la hemoglobina carbamilada forma un pico que se superpone al pico de HbA1c, lo que provoca un resultado de HbA1c falsamente elevado. Presentamos el caso de un hombre de 60 años que tuvo un aumento espurio de HbA1c, con un pico de hemoglobina carbamilada alto desproporcionado al valor de urea. El análisis de hemoglobina posterior mediante electroforesis de hemoglobina y el sistema de prueba de hemoglobina HPLC sugirió una variante de hemoglobina J (Hb J). Nuestro caso destacó la posibilidad de una interpretación engañosa de la HbA1c en presencia de un pico de hemoglobina carbamilada alto, pero no proporcional al valor de urea. En este estudio, se detectó Hb J. Lo ideal sería utilizar un método libre de interferencia de variantes de hemoglobina, y la monitorización del control glucémico debería realizarse mediante métodos alternativos, como la fructosamina sérica o la monitorización continua de la glucosa.

RESUMO A dosagem de hemoglobina A1c (HbA1c) é comumente realizada em pacientes com diabetes mellitus para monitorar o controle glicêmico nos últimos três a quatro meses. A hemoglobina carbamilada - hemoglobina que se liga ao ácido isociânico derivado da ureia - é uma das possíveis interferências analíticas no paciente urêmico. Quando medida por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) por troca iônica, a hemoglobina carbamilada forma um pico que se sobrepõe ao pico da HbA1c, causando um resultado falsamente elevado da HbA1c. Relatamos o caso de um homem de 60 anos de idade que apresentava um aumento espúrio de HbA1c, com alto pico de hemoglobina carbamilada desproporcional ao valor de ureia. A análise subsequente da hemoglobina usando eletroforese de hemoglobina e sistema de teste de hemoglobina por HPLC sugeriu a variante de hemoglobina J (Hb J). Nosso caso destacou a possibilidade de interpretação enganosa da HbA1c na presença de um pico alto de hemoglobina carbamilada, mas não proporcional ao valor da ureia. Neste estudo, foi detectada a Hb J. Um método isento de interferência de variantes da hemoglobina deve ser idealmente usado, e o monitoramento do controle glicêmico deve ser feito usando métodos alternativos, como frutosamina sérica ou monitoramento contínuo da glicose.

Alterações idade-dependente nas vias metabólicas de folículos dentários: um estudo piloto / Age-related metabolic pathways changes in dental follicles: a pilot study

Envelhecer não é uma escolha; é nosso destino. O declínio funcional dependente do tempo que afeta a maioria dos organismos vivos está vinculado às alterações em variados processos celulares, incluindo senescência celular, alterações epigenéticas, instabilidade genômica, exaustão de células-tronco, entre outras. As alterações morfológicas relacionadas à idade nos folículos dentários associados a dentes não-erupcionados têm sido investigadas há décadas, principalmente motivado pelo fato de que cistos e tumores podem surgir em associação a dentes inclusos e/ou impactados. Quanto mais entendemos a fisiologia dos folículos dentários, mais nos tornamos capazes de contextualizar eventos biológicos que podem estar associados à ocorrência de lesões odontogênicas cuja incidência aumenta com a idade. Assim, nosso objetivo foi avaliar as alterações metabólicas relacionadas à idade em amostras de folículos dentários associados à terceiros molares inferiores inclusos/impactados de indivíduos adolescentes e adultos. Uma amostra de conveniência de folículos dentários fixados em formalina e embebidos em parafina de indivíduos adolescentes (<16 anos, n= 13) e adultos (>26 anos, n= 7) foi selecionada. As amostras foram preparadas e submetidas à cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massa (HPLC-MS) em análise metabolômica untargeted. Análises uni- e multivariadas foram conduzidas, e a previsão de vias alteradas foi realizada pelas abordagens mummichog e GSEA. Folículos dentários de indivíduos adolescentes e adultos mostraram diferenças nas vias relacionadas à biossíntese do hormônio esteróide C21, biossíntese dos ácidos biliares, metabolismo da galactose, biossíntese de androgênio e estrogênio, metabolismo do amido e sacarose e metabolismo do lipoato. Nossos achados sugerem que, assim como outros tecidos humanos, os folículos dentários associados a dentes não erupcionados apresentam, durante o envelhecimento, alterações em nível metabólico, o que pode abrir caminho para novos estudos sobre biologia, fisiologia e patologia oral.

Aging is not a matter of choice; it is our fate. The 'time-dependent functional decline that affects most living organisms' is coupled with several alterations in cellular processes, including cell senescence, epigenetic alterations, genomic instability, stem cell exhaustion, amongst others. Age-related morphological changes in dental follicles have been investigated for decades, mainly motivated by the fact that cysts and tumors may arise in association with a unerupted and/or impacted teeth. The more we understand dental follicles' physiology, the more we become able to contextualize biological events that can be associated with the occurrence of odontogenic lesions which incidence increases with age. Thus, our objective was to assess age-related changes in metabolic pathways of dental follicles associated with unerupted/impacted mandibular third molars from young and adult individuals. For this purpose, a convenience sample of formalin-fixed paraffin-embedded dental follicles from young (<16 y.o., n = 13) and adult (>26 y.o., n = 7) individuals was selected. Samples were analyzed by high-performance liquid chromatography-mass spectrometry (HPLC-MS)-based untargeted metabolomics. Multivariate and univariate analyses were conducted, and the prediction of altered pathways was performed by mummichog and GSEA approaches. Dental follicles from young and older individuals showed differences in pathways related to C21-steroid hormone biosynthesis, bile acid biosynthesis, galactose metabolism, androgen and estrogen biosynthesis, starch and sucrose metabolism and lipoate metabolism. Our findings support that similar to other human tissues, dental follicles associated with unerupted tooth show alterations at a metabolic level with aging, which can pave the way for further studies on oral pathology, oral biology and physiology.

Phenolic compounds, biological activities and trace elements of Capparis ovata var. canescens / Compuestos fenólicos, actividades biológicas y elementos traza de Capparis ovata var. canescens

Introduction: Capparis species (Capparaceae), also called caper, grow naturally in various regions of the world. Caper is a plant with medicinal and aromatic properties. Flower buds, root bark, and fruits of the plant areused in folk medicine due to their analgesic, wound healing,cell regeneration, tonic, and diuretic effects. Objective: The aim of this research was to evaluate in vitro (anti-urease, antioxidant, anticholinesterase) and in vivo (anti-inflammatory) biological activities of caper (C. ovatavar.canescens). In addition, we aimed to identify its major phenolic compounds using high performance liquid chromatography with a photodiode array detector (HPLC-DAD) and confirmate them using quadrupole time-of-flight liquid chromatography with tandem mass spectrometry (Q-TOF-LC/MS). Also, we quantified the concentrations of several trace and major elements in plant samples using inductively coupled plasma-mass spectrometry (ICP-MS). Methods: The antioxidant, anti-urease and anticholinesterase activities of different plant extracts were evaluated using DPPH, FRAP, ABTS/TEAC, Indophenol and Ellman tests. The identification of phenolic compounds and trace element contents was performed using HPLC and Q-TOF-LC/MS and ICP-MS. Results: Soxhlet methanol extract exhibited the strongest anti-urease, antioxidant (ABTS/TEAC) and anticholinesterase activity. Soxhlet and maceration methanol extracts demonstrated significant anti-inflammatory effect in the altered edema size after the second hour of carrageenan injection. The active phenolic compounds in Soxhlet methanol extract were identified as rutin, quercetin-hexoside-hexoside, quercetin-3-O-hexoside and kaempferol-3-O-rutinoside. In addition, the average concentrations of vanadium, chromium, manganese, cobalt, copper, nickel, arsenic, selenium, zinc and lead were within the permissible limits defined by WHO for medicinal plants. However, it was found that the concentrations of cadmium and iron were higher than the maximum permissible limits. Conclusion: Our results suggest that although caper has a strong biological activity, it should be consumed carefully due to the excess amount of cadmium and iron elements it contains.

Introducción: Las especies de Capparis (Capparaceae), también llamadas alcaparras, crecen naturalmente en varias regiones del mundo. La alcaparra es una planta con propiedades medicinales y aromáticas. Los botones florales, la corteza de la raíz y los frutos de la planta se usan en la medicina popular debido a sus efectos analgésicos, cicatrizantes, de regeneración celular, tónicos y diuréticos. Objetivo: El objetivo de esta investigación fue evaluar las actividades biológicas in vitro (anti-ureasa, antioxidante, anticolinesterasa) e in vivo (antiinflamatorio) de la alcaparra (C. ovata var. canescens). Además, nuestro objetivo fue identificar sus principales compuestos fenólicos mediante cromatografía líquida de alto rendimiento con un detector de matriz de fotodiodos (HPLC-DAD) y confirmarlos mediante cromatografía líquida con espectrometría de masas en tándem (Q-TOF-LC/MS). Además, cuantificamos las concentraciones de varios elementos traza y elementos mayores en muestras de la planta utilizando espectrometría de masas con plasma acoplado inductivamente (ICP-MS). Métodos: Se evaluaron las actividades antioxidantes, anti-ureasa y anticolinesterasa de diferentes extractos de la planta usando las pruebas DPPH, FRAP, ABTS/TEAC, Indofenol y Ellman. La identificación de los compuestos fenólicos y el contenido de los elementos traza se realizó mediante HPLC y Q-TOF-LC/MS e ICP-MS. Resultados: El extracto de metanol Soxhlet exhibió la mayor actividad anti-ureasa, antioxidante (ABTS/TEAC) y anticolinesterasa. Los extractos de metanol Soxhlet y por maceración demostraron un efecto antiinflamatorio significativo en el tamaño alterado del edema después de la segunda hora de la inyección de carragenano. Los compuestos fenólicos activos en el extracto de metanol Soxhlet se identificaron como rutina, quercetina-hexósido-hexósido, quercetina-3-O-hexósido y kaempferol-3-O-rutinósido. Además, las concentraciones promedio de vanadio, cromo, manganeso, cobalto, cobre, níquel, arsénico, selenio, zinc y plomo estaban dentro de los límites permisibles definidos por la OMS para las plantas medicinales. Sin embargo, se encontró que las concentraciones de cadmio y hierro fueron más altas que los límites máximos permitidos. Conclusión: Nuestros resultados sugieren que, aunque la alcaparra tiene una fuerte actividad biológica, debe consumirse con cuidado debido al exceso de cadmio y hierro que contiene.

RP-HPLC-DAD determination of free amino acids in cocoa samples during fermentation and roasting / Determinación de aminoácidos libres en muestras de cacao durante la fermentación y el tostado por cromatografía líquida con detección DAD / Determinação de aminoácidos livres em amostras de cacau durante a fermentação e torrefação por cromatografia líquida com detecção DAD

Abstract Amino acids (AA) composition in cocoa beans can predict the synthesis of compounds which affect cocoa flavor. Thus, their determination is of great interest for the community implied in the commercialization and production of cocoa. In consequence, in this work, the analysis of AA produced during cocoa beans fermentation and roasting was carried out. A high-performance liquid chromatographic method with DAD detection at 254 nm was optimized and validated for their selective determination in six varieties of cocoa beans with different genotypes, all of them grown in Venezuela. AA were extracted by defatted milled cocoa powder ultrasonication using purified water at 70 °C. Then, they were derivatized with phenyl isothiocyanate, and their derivatives were separated, using a reversed-phase column with gradient elution, achieving a satisfactory resolution among the peaks (greater than 1.0) in less than 29 min. 110 cocoa samples were analyzed. Results showed a significant content of free AA, ranging from 3.87 to 5.97 g/kg in absence of fermentation with a predominance of acidic AA. Moreover, there is a progressive increase in the AA content while fermentation process occurs, with a predominance of hydrophobic AA such as alanine, valine, isoleucine, leucine, phenylalanine, and tyrosine. On the other hand, all cocoa types showed a partial degradation of free AA during the roasting step, especially the hydrophobic ones.

Resumen La determinación de aminoácidos (AA) en granos de cacao es de gran interés ya que estos son considerados como unos de los precursores de su sabor y aroma. Por esta razón, el presente trabajo tuvo como objetivo optimizar y validar un método por cromatografía líquida con detección DAD a 254 nm para la determinación selectiva de AA durante la fermentación y tostado en seis variedades de granos de cacao con diferentes genotipos, todos estos cultivados en Venezuela. Los AA se extrajeron del polvo de cacao molido y desgrasado con agua pura a 70 ºC, utilizando la técnica de ultrasonido. Luego, se derivatizaron con fenilotiocianato para separar sus derivados con buena resolución en menos de 29 min en una columna de fase reversa, utilizando gradiente de elución. Se analizaron 110 muestras de cacao. Los resultados mostraron un contenido significativo de AA libres, entre 3,87 y 5,97 g/kg, en ausencia de fermentación con predominio de AA ácidos, y un aumento progresivo en el contenido de AA, mientras ocurre el proceso de fermentación, con un predominio de AA hidrófobos como alanina, valina, isoleucina, leucina, fenilalanina y tirosina. Además, todos los tipos de cacao mostraron una degradación parcial de AA libres durante la etapa de tostado, especialmente los AA hidrófobos.

Resumo A determinação dos aminoácidos (AA) nos grãos de cacau é importante, pois são considerados um dos precursores de seu sabor e aroma. Neste trabalho, um método foi otimizado e validado por cromatografia líquida com detecção DAD a 254 nm para a determinação seletiva de AA durante a fermentação e torrefação em seis variedades de grãos de cacau com diferentes genótipos, todos cultivados na Venezuela. Os AAs foram extraídos do pó de cacau moído e desengordurados com água pura a 70 ºC usando a técnica de ultrassom. Em seguida, foram derivatizados com feniltiocianato, e os derivados foram separados com boa resolução em menos de 29 minutos em uma coluna de fase invertida usando eluição em gradiente. Foram analisadas 110 amostras de cacau. Os resultados mostraram um conteúdo significativo de AA livre entre 3,87 e 5,97 g/kg na ausência de fermentação com predominância de AA ácidos e um aumento progressivo no conteúdo de AA enquanto o processo de fermentação ocorre com predominância de AA hidrófobos como alanina, valina, isoleucina, leucina, fenilalanina e tirosina. Além disso, todos os tipos de cacau apresentaram uma degradação parcial do AA livre durante a fase de torrefação, principalmente o AA hidrofóbico.

Validación del método analítico por cromatografía líquida de alta resolución para la cuantificación de conservantes en jugo de naranja / Validation of the analytical method by liquid chromatography of high resolution for the quantification of preservatives in orange juice

INTRODUCCIÓN: la validación es el establecimiento de la evidencia documental de que un procedimiento analítico conducirá, con un alto grado de seguridad a la obtención de resultados precisos y exactos dentro de las especificaciones y los atributos de calidad previamente establecidos. OBJETIVO: Validar el método analítico por cromatografía líquida de alta resolución para la cuantificación de conservantes en jugo de naranja. MÉTODOS: el método fue validado siguiendo los parámetros referidos en la USP 40 ­ NF 35: especificidad, linealidad, precisión (repetibilidad instrumental, repetibilidad del método y precisión intermedia) y exactitud. RESULTADOS: el método analítico propuesto es selectivo/específico, presenta una excelente linealidad dentro del rango de 100 a 1000 ppm, la Precisión presentó resultados de CV < 2% siendo óptimos. La recuperación se encuentra entre 97 a 102% demostrando excelente exactitud. CONCLUSIÓN: se cumplieron todos los parámetros y criterios de validación por lo tanto el método es específico, selectivo, lineal en el intervalo de concentraciones de 100 a 1000 ppm, sensible, preciso, reproducible y exacto

INTRODUCTION: validation is the establishment of documentary evidence that an analytical procedure will lead, with a high degree of security, to obtaining precise and exact results within the specifications and previously established quality attributes. OBJECTIVE: validate the analytical method by high resolution liquid chromatography for the quantification of preservatives in orange juice. METHODS: the method was validated following the parameters referred to in USP 40 - NF 35, they are specificity, linearity, precision (instrumental repeatability, repeatability of the method and intermediate precision) and accuracy. RESULTS: the proposed analytical method is selective/specific, it presents an excellent linearity within the range of 100 to 1000 ppm, the precision presented results of CV <2% being optimal. The recovery is between 97 to 102% CONCLUSION: all the parameters and validation criteria were met, therefore the method is specific, selective, linear in the concentration range of 100 to 1000 ppm, sensitive, precise, reproducible and exact

Purificação de IgM do plasma humano empregado cromatografia líquida

Immunoglobulin M (IgM) is a pentameter of approximately 950 kDa and Each subunit is composed of two heavy chains of about 65 kDa, two light chains of 25 kDa and one J or junction chain, with a molecular weight of about 15 kDa. IgM is a promising therapeutic candidate. In the world the first human IgM-enriched immunoglobulin is Pentaglobin ® , it is superior to normal IgG preparations in eliminating infectious pathogens and neutralizing their endoexotoxins. In this work we purified IgM from human plasma with a Sepharose 4FF size exclusion column and modified the cut defined in previous experiments of fraction 2 (IgM enriched fraction), aiming at higher purity and elimination of contaminating proteins, we applied the fraction in the anionic exchange column ANX Sepharose FF and in the affinity column IMAC Co2+. Objectives: To verify the IgM purification strategy using the filtration gel columns, followed by ion exchange and metal affinity chromatography after modifying the location of the cut of the filtration gel column fraction and analyze IgM yield after this modification. Materials and Methods: Plasma was applied directly to the Sepharose 4FF filtration gel column. The IgM rich fraction was subsequently applied to the ANX Sepharose FF anion exchange column, the fraction with the highest IgM recovery was applied to an IMAC Co2+ metal affinity column at pH 5.0 and pH 6.0 O collected from all fractions were analyzed by the Bradford test, polyacrylamide gel and turbidimetry. Results and discussion: The new cut of fraction 2 of Sepharose 4 FF was not higher than the IgM yield, but twice as much total immunoglobulins were recovered, in the ANX column Sepharose 4 FF was recovered 77% of IgM in the fraction 350mM-1, but in this fraction it contains only 60% of immunoglobulins (IgM and IgA), requiring a new purification step, and IgG and Albumin do not bind strongly to the column, eluted in the flowthrough, allowing a good separation of these proteins. The 350mM fraction was applied to the IMAC Co2+ affinity column to increase igM purity at pH 5.0 and 6.0, the IgM recovery in the flowthroug is similar, but in the polyacrylamide gel of pH 6.0 it is possible to analyze that the high mass proteins bind more strongly to the column than at pH 5.0, and in quantitative tests the purification factor of pH 6.0 is higher than pH 5.0.Conclusion: The new cut of fraction 2 of the Sepharose 4FF column was not efficient in reducing contaminant proteins and IgM yield, the ANX Sepharose FF column is efficient in separating IgG and albumin from IgM even with higher protein load, the metal affinity column IMAC Co2+ was not effective in separating total IgM from contaminant proteins even at different pH's employed, and new strategies and studies for increasing immunoglobulin purity need to be developed.

A imunoglobulina M (IgM) é um pentâmero de aproximadamente 950 kDa e cada subunidade é composta por duas cadeias pesadas de cerca de 65 kDa, duas cadeias leves de 25 kDa e uma cadeia J ou de junção, com um peso molecular de cerca de 15 kDa. IgM é como candidato terapêutico promissor. No mundo a primeira imunoglobulina humana enriquecida com IgM é Pentaglobin ® , ele é superior às preparações normais de IgG na eliminação de patógenos infecciosos e neutralização de suas endo-exotoxinas. Neste trabalho purificamos IgM do plasma humano com uma coluna de exclusão por tamanho Sepharose 4FF e modificamos o corte definido em experimentos anteriores da fração 2 (fração enriquecida com IgM), visando de maior pureza e eliminação de proteínas contaminantes, aplicamos a fração na coluna de troca aniônica ANX Sepharose FF e na coluna de afinidade IMAC Co2+. Objetivos: Verificar a estratégia de purificação de IgM empregando as colunas de gel filtração, seguida de troca iônica e cromatografia de afinidade a metal após a modificação da localização do corte da fração da coluna de gel filtração e analisar rendimento de IgM após esta modificação. Materiais e Métodos: O plasma foi aplicado diretamente na coluna de gel filtração Sepharose 4FF. A fração rica em IgM e foi posteriormente aplicado na coluna de troca aniônica ANX Sepharose FF, a fração com maior recuperação de IgM foi aplicada em uma coluna de afinidade a metal IMAC Co2+ em pH 5,0 e pH 6,0 O recolhido de todas as frações foram analisadas pelo ensaio de Bradford, gel de poliacrilamida e turbidimetria. Resultados e discussão: O novo corte da fração 2 da Sepharose 4 FF não se apresentou superior em relação ao rendimento de IgM, porem o dobro de imunoglobulinas totais foram recuperadas, na coluna ANX Sepharose 4 FF foi recuperada 77% da IgM na fração 350mM-1, porém nesta fração contém apenas 60% de imunoglobulinas (IgM e IgA), necessitando de uma nova etapa de purificação, e IgG e a Albumina não se ligam fortemente a coluna, eluiram no flowthrough, permitindo uma boa separação dessas proteínas. A fração 350mM foi aplicada na coluna de afinidade IMAC Co2+ para aumento da pureza de igM em pH 5,0 e 6,0, a recuperação de IgM no flowthroug são parecidos, porém no gel de poliacrilamida do pH 6,0 é possível analisar que as proteínas de alta massa se ligam mais fortemente a coluna que no pH 5,0, e em ensaios quantitativos o fator de purificação do pH 6,0 é superior ao pH 5,0.Conclusão: O novo corte da fração 2 da coluna Sepharose 4FF não foi eficiente para a diminuição de proteínas contaminantes e rendimento de IgM, a coluna ANX Sepharose FF é eficiente na separação de IgG e albumina da IgM mesmo com maior carga de proteínas, a coluna de afinidade a metal IMAC Co2+ não se mostrou efetiva na separação total de IgM de proteínas contaminantes mesmo em diferentes pH’s empregados, sendo necessário desenvolvimento de novas estratégias e estudos para o aumento de pureza das imunoglobulinas.

Qualidade por Design Analítico (AQbD) aplicado no desenvolvimento e otimização de métodos cromatográficos / Analytical Quality by Design (AQbD) applied in the development and optimization of chromatographic methods

O guia Q8(R2) do guia ICH descreve Qualidade por Design (QbD) como "uma abordagem sistemática para desenvolvimento farmacêutico que começa com objetivos predefinidos e enfatiza produto, entendimento e controle dos processos, baseado em dados científicos sólidos e gestão do risco da qualidade". Os métodos analíticos são considerados parte integrante do desenvolvimento farmacêutico. Assim, a Qualidade por Design Analítico (AQbD) é justificável e recomendada para obter flexibilidade regulatória, reduzir os resultados fora de especificação, obter um alto grau de robustez e um método analítico econômico. O Planejamento de Experimentos (DoE) é um conjunto de ferramentas estatísticas que inclui delineamentos de triagem e otimização, no qual os fatores são sistematicamente variados para determinar seus efeitos nas respostas, o que permite a determinação de quais fatores são os mais significantes, a identificação de qual configuração de fatores resulta em respostas otimizadas e a identificação de interações entre os fatores. As abordagens QbD e AQbD permitem a melhoria contínua ao longo do ciclo de vida do produto farmacêutico e do método analítico, inclusive para reduzir a variabilidade do produto, melhorar o desempenho do processo, reduzir resultados fora da especificação, melhorar o desempenho analítico, entre outros. O Cloridrato de Verapamil foi escolhido como molécula teste para desenvolvimento do projeto. Na primeira etapa do estudo foi realizado uma triagem com 13 fatores e 20 experimentos, utilizando o delineamento Plackett-Burman, seguiu-se para a próxima etapa com 7 fatores e 16 experimentos através do delineamento fatorial fracionado (Res.: IV). A etapa de otimização foi realizada com 3 fatores e 20 experimentos utilizando o delineamento central composto. Após todas as etapas do estudo, as seguintes condições foram consideradas ideais: Fase móvel A - Tampão formiato de amônio 10 mM pH 3,0, Fase móvel B - Amoníaco 2,0% em acetonitrila, eluição do tipo gradiente, coluna cromatográfica XSelect CSH C18 (100mm x 4,6mm x 3,5 µm), fluxo de 0,7 mL/min, volume de injeção de 2 µL para teor e 10 µL para produtos de degradação. Os métodos desenvolvidos são robustos, validados e indicativos de estabilidade

The ICH guide Q8 (R2) describes Quality by Design as "a systematic approach to pharmaceutical development that begins with predefined goals and emphasizes product, understanding and control of processes, based on solid scientific data and Quality Risk Management ". Analytical methods are considered an integral part of pharmaceutical development. Thus, the application of QbD approach to analytical method development is justifiable and a recommended strategy to attain regulatory flexibility, to reduce out-of-specification results, to achieve a high degree of robustness and a cost-effective analytical method. DoE is a set of statistical tools which include screening designs and optimization designs. In DoE approach, the controlled input factors are systematically varied to determine their effects on the output responses, which allows the determination of the most important input factors, the identification of input factors setting leading to optimized output responses, and the identification of interactions between input factors. The QbD and AQbD approach allows the continuous improvement throughout the lifecycle of pharmaceutical product and analytical method, including to reduce product variability, to improve process performance, to reduce out-of-specification results, to improve analytical performance, among others. Verapamil Hydrochloride was chosen as a test molecule for the development of the project. In the first phase of the study, a 13-factor and 20-experiment screening was performed using the Plackett-Burman design, followed by the 7-factor and 16-experiment next stage through fractional factorial design (Res .: IV). The optimization step was performed with 3 factors and 20 experiments using the composite central design. After performing all the study steps, the following conditions were considered ideal: Mobile Phase A - 10 mM ammonium formate buffer pH 3.0, Mobile Phase B - 2.0% ammonia in acetonitrile, gradient elution, column chromatographic XSelect CSH C18 (100mm x 4.6mm x 3.5µm), flow rate of 0.7ml / min, injection volume of 2µL for assay and 10µL for degradation products. The methods developed are robust, validated and stability indicating