ABSTRACT
Inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) receptors consist of three subtypes: IP3R1, IP3R2, and IP3R3. Although numerous IP3 receptor ligands have been synthesized, none of the subtype-selective ligands are known. We have developed a simple fluorescence method to examine the subtype selectivity of IP3 receptor ligands using FRET-based IP3 biosensors LIBRAvI, LIBRAvII, and LIBRAvIII. The addition of IP3 or adenophostin A (ADA) to permeabilized biosensor-expressing cells increased the fluorescence ratios of these biosensors in a concentration-dependent manner, and the potency of ADA relative to that of IP3 in terms of the changes in the fluorescence ratios of LIBRAvI, LIBRAvII, and LIBRAvIII was 43-, 22-, and 28-fold, respectively. This fluorescence-based method further showed that several ADA analogs had significant differences with respect to subtype selectivity and potency. These results highlight the important role played by the O-glycosidic structure of ADA in the selectivity of the ligands for IP3R1, as evidenced by the modified selectivity following replacement of the 5'-hydroxyl with a phenyl or phenethyl group. We also found that one ADA analog 5'-deoxy-5'-phenyladenophostin A possessed a partial agonistic effect on IP3R1. Together, the novel fluorescent methods described herein are useful for the evaluation of properties of IP3R ligands, including potency, efficacy, and subtype selectivity.
Subject(s)
Biosensing Techniques/methods , Calcium Channel Agonists/metabolism , Fluorescence Resonance Energy Transfer/methods , Inositol 1,4,5-Trisphosphate Receptors/metabolism , Adenosine/analogs & derivatives , Calcium Channel Agonists/analysis , Cell Line , Humans , Inositol 1,4,5-Trisphosphate Receptors/agonists , LigandsABSTRACT
La lesión renal como consecuencia de la hipertensión arterial no bien controlada está bien establecida. El tratamiento antihipertensivo reduce muy significativamente la lesión vascular renal en los pacientes hipertensos. A pesar de ello existe una elevada prevalencia de insuficiencia renal entre los pacientes hipertensos tratados y además supone una de las primeras causas de entrada en diálisis. Además, la lesión renal se acompaña de un marcado aumento del riesgo cardiovascular por su agregación con otros factores de riesgo cardiovascular. Por tanto, la prevención y la protección renal y del daño vascular de los pacientes hipertensos aparece como uno de los más relevantes desafíos terapéuticos de cara al futuro. Existen crecientes evidencias de que el control estricto de la presión arterial es beneficioso para retardar el avance del daño renal. Además, los agentes inhibidores de angiotensina son los fármacos antihipertensivos que han demostrado ser más renoprotectivos, especialmente en nefropatía diabética. Son necesarios amplios estudios en clínica humana para establecer definitivamente el tratamiento antihipertensivo más adecuado para la protección renal primaria (AU)
