A descriptive study of culture media in Brazilian assisted reproduction clinics.

OBJECTIVE: The present study aimed to draw a profile of the most commonly used media and protocol characteristics from assisted reproduction technology (ART) facilities in Brazil. METHODS: To obtain an overview of ART methods and culture media, a questionnaire was given to embryologists from ART clinics in Brazil. Further research in scientific papers and journals was carried out for describing the processes around Brazil, USA and Europe. RESULTS: From the questionnaire, we found that the embryo medium mostly used is CSCMTM from Irvine Scientific, represented 37.04% in Brazilian ART clinics; interestingly, 70.37% of clinics exchange the embryo media bath; however, 70.37% do not change the media type. Transfers in Brazilian clinics were variable, but day 3 transfer was a procedure seen in 37.04%. The remaining embryos are habitually maintained in prolonged cultivation in 51.85% of the clinics interviewed. CONCLUSION: Although there are numerous studies trying to better understand embryo culture media influences, there is a lack of evidence for choosing one as the most appropriate. In short, it is a random decision for such an essential stage of In Vitro Fertilization.

Cultivos de células animais visando a altas concentrações celulares: processo em perfusão e suplementação com aminoácidos / Animal cell cultures aiming high cell concentrations: perfusion process and amino acids supplementation

Células animais são alvo de pesquisas visando sua utilização como plataforma para a expressão de proteínas recombinantes, desde vacinas veterinárias até fatores de coagulação para hemofílicos. Exemplos incluem células de inseto Drosophila melanogaster S2 e células de mamífero BHK-21, que vêm sendo estudadas visando a sua utilização para a produção da glicoproteína do vírus da raiva. Independentemente da estratégia de cultivo utilizada, altas concentrações celulares são em geral associadas a uma maior produção da proteína de interesse. O objetivo deste trabalho foi o de investigar estratégias que possibilitariam o cultivo de células animais em altas concentrações celulares. Células de inseto Drosophila melanogaster S2 produtoras da glicoproteína do vírus da raiva foram cultivadas em frascos agitados a 100 rpm e 28, em meio livre de soro SF 900 II suplementado com os aminoácidos asparagina, cisteína, prolina e serina. A adição dos quatro aminoácidos no meio de cultura refletiu em um aumento da concentração celular máxima (XV MÁX) em 16%. Cisteína, quando adicionada isoladamente no meio de cultura, refletiu em uma velocidade específica máxima de crescimento celular (MÁX) 56% maior. Nessa condição, o fator de conversão glicose a célula (YX/GLC) foi 47% maior, indicando um metabolismo de glicose mais eficiente na geração de células. Esses resultados indicam que cisteína é provavelmente substrato limitante do cultivo de células S2AcGPV em meio SF 900 II. [...] Na perfusão, a concentração celular foi cerca de 3 vezes maior do que no cultivo contínuo sem reciclo de células. Provou-se que é possível cultivar células BHK-21 adaptadas a crescimento em suspensão em altas concentrações celulares em escala laboratorial, utilizando biorreator de bancada e spin-filter interno como sistema de retenção celular.

Animal cells have been under research as a platform for the expression of recombinant proteins, ranging from veterinary vaccines to blood coagulation factors for treating hemophilia. Examples include insect Drosophila melanogaster S2 and hamster BHK-21 cells, currently being studied for the production of rabies virus glycoprotein. Regardless of the cultivation strategy, high cell concentrations are usually associated to a higher protein production. Thus, the aim of this research was to investigate animal cell cultivation strategies that would allow higher cell concentrations than those previously reported. Cells of Drosophila melanogaster S2 expressing the rabies virus glycoprotein (S2AcGPV) were cultivated in shake flasks at 100 rpm and 28 , in SF 900 II serum-free medium supplemented with the following amino acids: asparagine, cysteine, proline, and serine. The addition of the four amino acids to the medium increased the maximum cell concentration (XV MAX) in 16%. When only cysteine was added to the medium, the maximum specific growth rate (ÊMAX) was 56% higher. In this condition, the cell yield on glucose (YX/GLC) was 47% higher, indicating a more efficient glucose metabolism. These results show that cysteine is likely a limiting substrate of S2AcGPV cells growing in SF 900 II medium. [...] During perfusion, the cell maintenance coefficient was not negligible and represented 83% of total glucose consumption. These data indicate that the presence of an internal spin-filter may be associated to cell stress. In perfusion, cell concentration was about 3 times higher than that in continuous culture without cell recycle. In conclusion, it was proved that suspension-adapted BHK-21 cells can be cultivated in a laboratory-scale bioreactor with an internal spin-filter, in order to achieve high cell concentrations.

Recovery of mutans streptococci on MSB, SB-20 and SB-20M agar media.

OBJECTIVE: The recovery of mutans streptococci in saliva and dental biofilm samples depends, in part, on the culture medium used. In this study, we compared (i) the culture media Sucrose-Bacitracin agar (SB-20), Modified SB-20 (SB-20M) and Mitis Salivarius Bacitracin agar (MSB) in the count of colony forming units (cfu) of mutans streptococci and (ii) in the morphological and biochemical differentiation between Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus. DESIGN: Samples of non-stimulated saliva from 20 children were plated on SB-20, SB-20M and MSB, and incubated in microaerophilia at 37°C for 72h. Identification of microorganisms was based on analysis of colony morphology under stereomicroscopy. The biochemical identification of colonies was done by biochemical tests using sugar fermentation, resistance to bacitracin and hydrogen peroxide production. RESULTS: There was no significant difference (p>0.05) in the number of cfu of mutans streptococci recovered on SB-20 and SB-20M agar. Comparing the media, SB-20 and SB-20M yielded a larger number of mutans streptococci colonies (p<0.05) and were more effective than MSB in the identification of S. sobrinus (p<0.05), but not of S. mutans (p>0.05). CONCLUSION: There was no significant difference between SB-20 and SB-20M culture media in the count of mutans streptococci, demonstrating that the replacement of sucrose by coarse granular cane sugar did not alter the efficacy of the medium. Compared with MSB, SB-20 and SB-20M allowed counting a larger number of mutans streptococci colonies and a more effective morphological identification of S. sobrinus.

Evaluación del efecto del medio MS y la temperatura en el desarrollo de propágulos de Marchantia polymorpha L (Marchantiaceae) bajo condiciones in vitro y ex vitro / Evaluating the effect of MS medium and temperature in developing Marchantia polymorpha L (Marchantiaceae) propagules in in vitro and ex vitro conditions

En este trabajo de investigación se propagaron, bajo condiciones in vitro, propágulos de Marchantia polymorpha evaluando su desarrollo vegetativo mediante observaciones y registros semanales a cada cultivo por tratamiento en función del tiempo de desarrollo. En este contexto, se evaluó cualitativamente la forma y las características del talo, las cuales se valoraron mediante observaciones y registros semanales. Se analizaron los resultados cuantitativos mediante un análisis de varianza con diseño al azar y arreglo factorial 4 x 2, mediante la prueba estadística de Fisher. Las condiciones apropiadas de cultivo para propágulos de M. polymorpha se establecieron en una concentración de 25% de sales minerales Murashige y Skoog (1962), incubados a una temperatura de 25 ± 1 ºC. Luego de 13 semanas de desarrollo bajo condiciones in vitro, se adaptaron a condiciones naturales mediante un cambio de sustrato, y controlando la temperatura y humedad en el lugar de desarrollo. En esta etapa se evaluó la sobrevivencia de plantas durante 10 semanas; posteriormente al cambio de condiciones, y como característica cualitativa, se tuvo en cuenta el vigor del talo. Este protocolo de propagación de M. polymorpha, pionero en Colombia, es un modelo que permite conservar y cultivar de manera masiva diferentes especies de briófitos, especialmente aquellos que se encuentran en vías de extinción en nuestro país.

Marchantia polymorpha propagules were propagated in this research in in vitro conditions to assess their growth in terms of development time. Development rate and contamination regarding each treatment were also evaluated by weekly observations and crop records for each experimental unit per treatment. Talus shape and characteristics were also qualitatively evaluated by weekly observations and records. Fisher’s statistical test was used for analysing quantitative results by variance analysis with random design and 4 x 2 factorial arrangement. Appropriate conditions for cultivating M. polymorpha propagules were established at 25% Murashige and Skoog mineral salt concentration (1962), incubated at 25ºC ± 1ºC. After 13 weeks development in in vitro conditions, they were adapted to natural conditions by changing development site substrate and controlling temperature and humidity. Plant survival was evaluated for 10 weeks during this stage. Conditions were then changed and (as qualitative characteristic) talus vigour was taken into account. In was also determined that the ex vitro cultivation level should allow for gradual adjustment to new humidity, temperature and substrate conditions, taking special care that these conditions were not so altered as to become insurmountable. This pioneering M. polymorpha propagation protocol in Colombia is a model for the future maintenance and mass development of different bryophyte species, especially those which are endangered in our country.

Production and rheological characterization of biopolymer of Sphingomonas capsulata ATCC 14666 using conventional and industrial media.

This work was aimed at the production and rheological characterization of biopolymer by Sphingomonas capsulata ATCC 14666, using conventional and industrial media. The productivity reached the maximum of 0.038 g/L x h, at 208 rpm and 4% (w/v) of sucrose. For this condition, different concentrations of industrial medium were tested (2.66, 4, 6, and 8%). The best productivity was obtained using pretreated molasses 8% (w/v) (0.296 g/L x h), residue of textured soybean protein 6% (wt/v) (0.244 g/L x h) and crude molasses 8% (w/v) (0.192 g/L x h), respectively. Apparent viscosity presented similar results when compared with those in the literature for other biopolymers.

Metabolic flux redistribution in Corynebacterium glutamicum in response to osmotic stress.

Osmotic stress constitutes a major bacterial stress factor in the soil and during industrial fermentation. In this paper, we quantified the metabolic response, in terms of metabolic flux redistribution, of a lysine-overproducing strain of Corynebacterium glutamicum grown under continuous culture, to gradually increasing osmolality. Oxygen and carbon dioxide evolution rates, and the changes in concentration of extracellular, as well as intracellular, metabolites were measured throughout the osmotic gradient. The metabolic fluxes were estimated from these measurements and from the mass balance constraints at each metabolite-node of the assumed metabolic reaction network. Our results show that formation rates of compatible solutes--trehalose first and proline at a later stage of the gradient--increased with osmotic stress to equilibrate the external osmotic pressure. Estimated flux distributions indicate that the observed increase in the glucose specific uptake rate with osmotic stress is channeled through the main energy generating pathways-- glycolysis and the tricarboxylic acid cycle--while the flux through the pentose phosphate pathway remains constant throughout the gradient. This results in a significant increase in the net specific ATP production rate, which may possibly be used to support the higher energy requirements required for cellular maintenance at high osmolalities. Finally, nodal analysis confirmed that the PEP/pyruvate node is essentially rigid and that the glucose-6-phosphate, oxaloacetate and alpha-ketoglutarate nodes are flexible and therefore adaptable to changes in osmotic pressure in C. glutamicum.

Obtención de cultivo axénico de amastigotes de tres cepas de Leishmania (Leishmania) mexicana a partir de promastigotes aislados de pacientes con leishmaniasis cutánea localizada en México / Obtention of axenic cultivation of amastigotes of the three strains of Leishmania (Leishmania) mexicana using promastigotes isolated from patients with cutaneous leishmaniasis in Mexico

Introducción. La Leishmaniasis Cutánea Localizada, en la Península de Yucatán, es causada predominantemente por Leishmania (L.) mexicana. Las especies de Leishmania son parásitos intracelulares obligados dimórficos. Los promastigotes, formas flageladas y móviles, se replican y diferencian en el intestino del insecto vector. Los mastigotes, formas intracelulares inmóviles, viven dentro del fagolisosoma del macrófago huésped. Los amastigotes son más difíciles de obtener, debido a que se requieren ser aislados de tejidos y/o cultivos en líneas celulares de macrófagos. La alternativa es el cultivo axénico de formas de amastigotes. Material y métodos. El presente estudio describe la obtención de formas de amastigotes de tres cepas de Leishmania (L.) mexicana, (M/HOM/MX/94/VMC/663,M/HOM/MX/94/JM/758,M/HOM/MX/MX/95LPD/787), mediante la variación del pH y la temperatura de incubación en el medio de cultivo de Grace. Resultados. Los resultados mostraron un comportamiento diferente en cada cepa, determinado por la densidad celular y el porcentaje relativo de transformación. Los promastigotes de cada cepa se transformaron en más del 80 por ciento a formas de amastigotes al segundo día de incubación a pH 5.5 y temperatura de 35ºC. Por otro lado, la variación del pH, de 7.2 a 5.5 a 25ºC, permitió la transformación de promastigotes en metacíclicos. Conclusiones. La variación del pH y la temperatura de incubación permitió obtener las tres etapas de transformación del parásito (promastigotes, metacíclicos y amastigotes), los cuales podrán emplearse en futuros estudios bioquímicos e inmunológicos

Indices epidemiológicos de trematodos monogenésicos en branquias de colossoma macropomum bajo cultivo / Trematod monogenesis epidemiological index in gills of colossoma macropomum under culture

Los trematodos monogenésicos que parasitan las branquias de peces causan en éstos una enfermedad denominada dactilogirosis, la cual es de gran importancia económica para la acuacultura, ya que puede afectar seriamente la salud de peces sometidos a cultivo. Dicha enfermedad no había sido debidamente estudiada en las estaciones piscícolas, por tanto, en la Estación Experimental Papelón, centro de acuacultura ubicado en el Estado Portuguesa, se realizó un estudio con el objeto de conocer la variación poblacional mensual (prevalencia, frecuencia y abundancia) de los trematodos branquiales Anacanthorus spatulatus y Linguadactyloides brinkmanni. Para ello, se extirparon las branquias de 247 ejemplares de Colossoma macropomum y se procedió a identificar y cuantificar los trematodos; durante el período marzo 1992 a diciembre 1992 los resultados indicaron que la prevalencia global fué de 98.37 por ciento para A. spatulatus y 17.07 por ciento para L. brinkmanni. De 68.518 parásitos cuantificados, el 99.42 por ciento correspondió a A. spatulatus y el 0.57 por ciento para L. brinkmanni. En un 17.07 por ciento de los casos se detectó infestación mixta

Studies on prevalence of strongyloides infection in Holambra and Maceio, Brazil, by the agar plate faecal culture method

Foi feito levantamento sobre a prevalencia da infeccao por Strongyloides stercoralis em tres areas do Brasil, atraves do desenvolvimento de metodo de cultura de fezes (cultura em placa de agar). A infeccao por Strongyloides foi confirmada em 11,3 por cento de 432 pacientes examinados. A eficacia do diagnostico pela cultura em placa de agar foi de 93,9 por cento comparado com apenas 28,5 por cento e 26,5 por cento pelo metodo de Harada-Mori de cultura em papel de filtro e metodo de concentracao de fezes, quando amostras de fezes foram examinadas simultaneamente por estes tres metodos. Entre as 49 amostras positivas, aproximadamente 60 por cento foram confirmadas como positivas somente pela cultura em placa de agar. Estes resultados indicam que a cultura em placa de agar e um novo metodo sensivel para o diagnostico correto da infeccao cronica pelo Strongyloides

Sorotipos de pneumococos isolados de criancas com pneumonia: implicacao com a imunizacao especifica anti-pneumococica / Streptococcus pneumoniaie serotypes in children with pneumonia: vaccine especific for pneumococcal disease

Os autores identificaram q22 cepas de pneumococos isolados de 124 criancas internadas com pneumonia aguda durante um periodo de 15 anos. Estas pertenciam a 19 sorotipos (16 sorogrupos). A vacina anti-pneumococica com 23 antigenos permitiria potencial cobertura a 89,3 por cento dos casos de pneumonia, observando-se apenas os sorotipos envolvidos. Porem, e constatada eficacia reduzida desta vacina em criancas menores de dois anos, faixa etaria que abrange a maior parte dos casos estudados (mediana=1 ano). Outras vacinas anti-pneumococicas que contem um maximo de antigenos pertencentes a oito sorogrupos tem sido testadas. Nesta circunstancias os dados coletados no presente estudo sugerem a inclusao dos sorogrupos 1, 4, 5, 6, 7, 14, 19 e 23 que abrangem 89,3 por cento das cepas analisadas. O estudo constata variacao regional da frequencia dos sorogrupos de pneumococo implicados com patologias pediatricas.

Bacteremias hospitalares no Instituto do Coracao do Hospital das Clinicas FMUSP: estudo retrospectivo de quatro anos consecutivos / Nosocomial bacteremias at the \"Instituto do Coracao do Hospital das Clinicas da FMUSP\": retrospective study of 4 years

Os relatorios de ocorrencia de infeccoes hospitalares aos anos de 1989 a 1992 do Instituto do Coracao-HC-FMUSP(InCor) foram revistos com a finalidade de classificar as hemoculturas positivas em bacteremias primarias, bacteremias secundarias e contaminantes. Este trabalho descreve os resultados desta classificacao bem como os dados de prevalencia de bacteremias hospitalares, a letalidade associada e os principais agentes etiologicos envolvidos.

Assessment of media using B-D-Glucoronidase activity for the detection of Escherichia coli in water

Quatro meios de cultura contendo B-D-glucoronide MUG (Lauril Sulfato Fluorocult, ECD Fluorocult Agar, Caldo Lauril Triptose e Agar nutriente suplementados com MUG) foram comparados com meios convencionais (caldo Lauril Triptose, Caldo E.C. e Agar M-Endo LES) para verificar se havia diferenças entre eles na detecçäo de E. coli. As amostras de água foram contaminadas artificialmente com E.coli isoladas tanto do ambiente quanto de espécimes clínicos e analisados pelas técnicas dos tubos múltiplos e de membrana filtrante usando os meios acima descritos. Entre as cepas previamente analisadas para o preparo das amostras artificialmente contaminadas, 6,4 por cento näo apresentaram atividade B-D-Glucoronidase quando testadas com meio contendo MUG. Os resultados obtidos foram submetidos ao Teste de Wilcoxon que mostrou que Lauril Sulfato Fluorocult, caldo Lauril Triptose com MUG e Agar Nutriente com MUG foram täo sensíveis quanto o Caldo Lauril Triptose e meio E.C. e Agar M-Endo LES, e que o ECD Fluorocult Agar apresentou uma sensibilidade muito baixa. Esta técnica é de grande importância pois pode ser aplicada em métodos mais rápidos para detecçäo de E.coli e em automaçäo

Estado actual del manejo de gametos y preembriones / State-of art in gamete and pre-embryo management

El laboratorio de Gametos y Pre-embiones es una pieza fundamental en el éxito de los programas de Reproducción Asistida. Sus actividades abarcan la preparación de medios de cultivo óptimos, la capacitación espermática, el control de calidad de los medios y el equipo, la correcta identificación de la madurez de los ovocitos, la realización de la conjugación de los gametos, la observación sistemática de la segmentación del huevo, la criopreservación de gametos y pre-embriones, y el suministro de un medio ambiental adecuados para las fases extracorpóreas. Están en fase experiemental algunas técnicas que buscan mejorar la eficiencia de los procedimientos de Reproducción Asistida, tales como la micromanipulación celular y la detección temprana de alteraciones genéticas.

Comparación de tres métodos empleados para el control de calidad de medios de cultivo sólido / Comparison of three methods employed in tue quality control of solid culture media

El objetivo de este estudio fue comparar tres métodos utilizados en el control de calidad de medios de cultivo: a)el método original de Miles-Mirsa; b)el ecométrico y c)el método de estrías. Para comparar estos métodos, se evaluaron la productividad (crecimiento de un microorganismo que habitualmente se desarrolla en un medio de cultivo) y la selectividad (supresión del crecimiento de un microorganismo, que se espera sea inhibido en un medio de cultivo) de seis medios sólidos de cultivo usados para el aislamiento de Salmonella spp. y Shigella spp. Los resultados que se obtuvieron al comparar los 3 métodos, mediante la prueba de Chi2, reflejan que existe diferencia significativa (p<0.05) entre el método de estrías y los otros 2 en lo referente a la productividad, no existiendo diferencia significativa entre los 3 métodos, en cuanto a selectividad. De los 3 métodos ensayados, el ecométrico resultó el de más fácil y rápida ejecución

Comparación de tres métodos empleados para el control de calidad de medios de cultivo sólido / Comparison of three methods employed in tue quality control of solid culture media

El objetivo de este estudio fue comparar tres métodos utilizados en el control de calidad de medios de cultivo: a)el método original de Miles-Mirsa; b)el ecométrico y c)el método de estrías. Para comparar estos métodos, se evaluaron la productividad (crecimiento de un microorganismo que habitualmente se desarrolla en un medio de cultivo) y la selectividad (supresión del crecimiento de un microorganismo, que se espera sea inhibido en un medio de cultivo) de seis medios sólidos de cultivo usados para el aislamiento de Salmonella spp. y Shigella spp. Los resultados que se obtuvieron al comparar los 3 métodos, mediante la prueba de Chi2, reflejan que existe diferencia significativa (p<0.05) entre el método de estrías y los otros 2 en lo referente a la productividad, no existiendo diferencia significativa entre los 3 métodos, en cuanto a selectividad. De los 3 métodos ensayados, el ecométrico resultó el de más fácil y rápida ejecución

Primer encuentro interdepartamental del amaranto

La alimentacion en el tawantinsuyu, historia del millmi o kiwicha, investigaciones agricolas en el valle central de Tarija, el coime en los yungas, cultivo valor nutricional, donaciones alimentarias, industrializacion y posibilidades alimentarias

Evaluación de cuatro medios selectivas para el aislamiento de hongos patógenos

Se aislaron cuatro medios de cultivo comerciales para el aislamiento de hongos patógenos que contienen agar, peptona, glucosa, cicloheximida y cloranfenicol. En cada uno se determinó la frecuencia de aislamiento de hongos patógenos así como sus características morfológicas, su tiempo de crecimiento y la rapidez e intensidad de la contaminación bacteriana y/o micótica, con el objeto de puntualizar diferencias entre ellos. Se estudiaron 100 muestras de casos con sospecha clínica de dermatomicosis o micosis subcutáneas y 50 de pacientes con diagnostico presuntivo de micosis profunda. se aislaron 56 patógenos en el primer grupo y P. brasiliensis en tres esputos seriados