An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens / Um ensaio RT-rtPCR para detecção de vírus da raiva em espécimes bovinos

Bovine rabies is endemic in most Brazilian States, including Rio Grande do Sul (RS), which has faced an unprecedented rabies outbreak between 2011 and 2018. We described a real-time reverse transcription quantitative PCR (RT-rtPCR) for detection of rabies virus (RABV) in bovine samples. The primers were designed targeting a highly conserved region of the nucleoprotein (N) gene of RABV obtained from cattle. The detection limit corresponded to 13 DNA copies and the intra- and inter-run repeatability was adequate (CV<9%) in all dilutions tested. Amplification of other pathogens associated with neurological disease in cattle or cross-contamination was not observed. Brain samples from cattle suspicious of rabies (n=21) were tested in triplicate by the RT-rtPCR and by the gold-standard direct fluorescent antibody test (DFAT), resulting in 100% of sensitivity and specificity of the RT-rtPCR. Testing of additional 41 bovine brain samples submitted to the routine DFAT testing yielded 37 (90.2%) concordant results (30 positive/7 negative) and 4 (9.7%) inconclusive in DFAT and RT-rtPCR positive. These results showed a good concordance between the tests and a higher sensitivity of the RT-rtPCR. This assay represents an alternative for RABV detection, either as a confirmatory test or for large-scale diagnosis in endemic regions.

A raiva bovina é endêmica na maioria dos estados brasileiros, inclusive no Rio Grande do Sul (RS), que enfrentou um surto de raiva sem precedentes entre 2011 e 2018. Descrevemos um PCR quantitativo de transcrição reversa em tempo real (RT-rtPCR) para detecção do vírus da raiva (RABV) em bovinos. Os primers foram desenhados visando uma região altamente conservada do gene da nucleoproteína (N) de RABV obtido de bovinos. O limite de detecção correspondeu a 13 cópias de DNA e a repetibilidade intra e inter-ensaios foi adequada (CV <9%) em todas as diluições testadas. Não foi observada amplificação de outros patógenos associados a doenças neurológicas em bovinos ou contaminação cruzada. Amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva (n = 21) foram testadas em triplicata no RT-rtPCR e pelo teste de anticorpo fluorescente padrão ouro (DFAT), resultando em 100% de sensibilidade e especificidade do RT-rtPCR. O teste de 41 amostras de cérebro bovino adicionais submetidas ao teste de DFAT de rotina rendeu 37 (90,2%) resultados concordantes (30 positivos / sete negativos) e quatro (9,7%) inconclusivos em DFAT e RT-rtPCR positivo. Esses resultados mostraram boa concordância entre os testes e maior sensibilidade do RT-rtPCR. Este ensaio representa uma alternativa para a detecção do vírus da raiva, seja como teste confirmatório ou para diagnóstico em larga escala em regiões endêmicas.

An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens / Um ensaio RT-rtPCR para detecção de vírus da raiva em espécimes bovinos

ABSTRACT: Bovine rabies is endemic in most Brazilian States, including Rio Grande do Sul (RS), which has faced an unprecedented rabies outbreak between 2011 and 2018. We described a real-time reverse transcription quantitative PCR (RT-rtPCR) for detection of rabies virus (RABV) in bovine samples. The primers were designed targeting a highly conserved region of the nucleoprotein (N) gene of RABV obtained from cattle. The detection limit corresponded to 13 DNA copies and the intra- and inter-run repeatability was adequate (CV<9%) in all dilutions tested. Amplification of other pathogens associated with neurological disease in cattle or cross-contamination was not observed. Brain samples from cattle suspicious of rabies (n=21) were tested in triplicate by the RT-rtPCR and by the gold-standard direct fluorescent antibody test (DFAT), resulting in 100% of sensitivity and specificity of the RT-rtPCR. Testing of additional 41 bovine brain samples submitted to the routine DFAT testing yielded 37 (90.2%) concordant results (30 positive/7 negative) and 4 (9.7%) inconclusive in DFAT and RT-rtPCR positive. These results showed a good concordance between the tests and a higher sensitivity of the RT-rtPCR. This assay represents an alternative for RABV detection, either as a confirmatory test or for large-scale diagnosis in endemic regions.

RESUMO: A raiva bovina é endêmica na maioria dos estados brasileiros, inclusive no Rio Grande do Sul (RS), que enfrentou um surto de raiva sem precedentes entre 2011 e 2018. Descrevemos um PCR quantitativo de transcrição reversa em tempo real (RT-rtPCR) para detecção do vírus da raiva (RABV) em bovinos. Os primers foram desenhados visando uma região altamente conservada do gene da nucleoproteína (N) de RABV obtido de bovinos. O limite de detecção correspondeu a 13 cópias de DNA e a repetibilidade intra e inter-ensaios foi adequada (CV <9%) em todas as diluições testadas. Não foi observada amplificação de outros patógenos associados a doenças neurológicas em bovinos ou contaminação cruzada. Amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva (n = 21) foram testadas em triplicata no RT-rtPCR e pelo teste de anticorpo fluorescente padrão ouro (DFAT), resultando em 100% de sensibilidade e especificidade do RT-rtPCR. O teste de 41 amostras de cérebro bovino adicionais submetidas ao teste de DFAT de rotina rendeu 37 (90,2%) resultados concordantes (30 positivos / sete negativos) e quatro (9,7%) inconclusivos em DFAT e RT-rtPCR positivo. Esses resultados mostraram boa concordância entre os testes e maior sensibilidade do RT-rtPCR. Este ensaio representa uma alternativa para a detecção do vírus da raiva, seja como teste confirmatório ou para diagnóstico em larga escala em regiões endêmicas.

Psoroptes ovis infestation of sheep in São Vicente do Sul, Rio Grande do Sul, Brazil / Sarna psoróptica ovina em São Vicente do Sul, Rio Grande do Sul, Brasil

Sheep psoroptic mange is a form of highly itchy and contagious dermatitis caused by the mite Psoroptes ovis. Here, we reporteda case of sheep psoroptic mange outbreak at a property in São Vicente do Sul, Rio Grande do Sul (RS), Brazil. Poor nutritional status, restless behavior, pruritus, wool fall, yellowish crusted skin lesions with edge exudate, erythema surrounding the lesions and presence of wool trapped between the teeth were observed in the herd. Complete blood count test showed marked eosinophilia, and parasitological examination of a skin scrape revealed P. ovis. Histopathological examination of a skin biopsy sample revealed eosinophilic pustular dermatitis. The treatment consisted of two administrations of 1% ivermectin at 1 mL/33 kg of body weight subcutaneously over an interval of 10 days. To the best of our knowledge, this is the first report of the occurrence of psoroptic mange at a sheep farm of RS with description of the clinical signs and laboratory and histopathological findings.(AU)

A sarna psoróptica ovina é uma dermatite altamente pruriginosa e contagiosa causada pelo ácaro Psoroptes ovis. Este trabalho registra o caso da doença em uma propriedade no município de São Vicente do Sul, Rio Grande do Sul (RS), Brasil. No rebanho foram observados mau estado de nutrição, comportamento inquieto, prurido, queda de lã, lesões crostosas amareladas na pele com exsudato nas bordas, eritema perilesional e presença de lã presa entre os dentes. O hemograma mostrou marcada eosinofilia e um raspado cutâneo demonstrou a presença de P. ovis no exame parasitológico. No exame histopatológico, oriundo de uma biópsia de pele, observou-se dermatite pustular eosinofílica. O tratamento consistiu de duas administrações de ivermectina a 1% na dose de 1ml/33kg de peso corporal por via subcutânea em um intervalo de 10 dias. Este é primeiro estudo relatando a ocorrência, sinais clínicos e achados laboratoriais/histopatológicos da sarna psoróptica em uma propriedade de criação de ovinos no RS.(AU)

Psoroptes ovis infestation of sheep in São Vicente do Sul, Rio Grande do Sul, Brazil / Sarna psoróptica ovina em São Vicente do Sul, Rio Grande do Sul, Brasil

ABSTRACT: Sheep psoroptic mange is a form of highly itchy and contagious dermatitis caused by the mite Psoroptes ovis. Here, we reporteda case of sheep psoroptic mange outbreak at a property in São Vicente do Sul, Rio Grande do Sul (RS), Brazil. Poor nutritional status, restless behavior, pruritus, wool fall, yellowish crusted skin lesions with edge exudate, erythema surrounding the lesions and presence of wool trapped between the teeth were observed in the herd. Complete blood count test showed marked eosinophilia, and parasitological examination of a skin scrape revealed P. ovis. Histopathological examination of a skin biopsy sample revealed eosinophilic pustular dermatitis. The treatment consisted of two administrations of 1% ivermectin at 1 mL/33 kg of body weight subcutaneously over an interval of 10 days. To the best of our knowledge, this is the first report of the occurrence of psoroptic mange at a sheep farm of RS with description of the clinical signs and laboratory and histopathological findings.

RESUMO: A sarna psoróptica ovina é uma dermatite altamente pruriginosa e contagiosa causada pelo ácaro Psoroptes ovis. Este trabalho registra o caso da doença em uma propriedade no município de São Vicente do Sul, Rio Grande do Sul (RS), Brasil. No rebanho foram observados mau estado de nutrição, comportamento inquieto, prurido, queda de lã, lesões crostosas amareladas na pele com exsudato nas bordas, eritema perilesional e presença de lã presa entre os dentes. O hemograma mostrou marcada eosinofilia e um raspado cutâneo demonstrou a presença de P. ovis no exame parasitológico. No exame histopatológico, oriundo de uma biópsia de pele, observou-se dermatite pustular eosinofílica. O tratamento consistiu de duas administrações de ivermectina a 1% na dose de 1ml/33kg de peso corporal por via subcutânea em um intervalo de 10 dias. Este é primeiro estudo relatando a ocorrência, sinais clínicos e achados laboratoriais/histopatológicos da sarna psoróptica em uma propriedade de criação de ovinos no RS.

Os riscos e danos nas intoxicações por paraquat em animais domésticos / The risks and injuries in the paraquat intoxication in domestic animals

O paraquat é um herbicida de contato não-seletivo. É amplamente utilizado na agricultura em mais de 100 países, pois apresenta baixo custo, grande eficácia e não possui efeitos poluentes cumulativos para o solo. Porém, ele é um produto muito tóxico para humanos e animais, podendo causar intoxicações fatais, principalmente pela falta de um antídoto eficaz na reversão do quadro clínico. O paraquat atua mediante mecanismos de indução do estresse oxidativo, produção aumentada de radicais livres associada à depleção dos sistemas antioxidantes do organismo. Sua toxicidade acomete rins, fígado, músculos, cérebro, dentre outros. Os pulmões são considerados os órgãos-alvo deste herbicida, levando a severas injúrias como edema, hemorragia, inflamação intersticial e fibrose pulmonar. A falência respiratória grave é a causa comum de morte. O tratamento da intoxicação, atualmente, é baseado em medidas que diminuam a absorção e aumentem a excreção. Entretanto, o uso de agentes antioxidantes e antifibróticos vem sendo estudado, pois há interesse crescente no estudo de substâncias que possam servir como antídoto nas intoxicações, uma vez que o paraquat aumenta os índices de morbidade e mortalidade.

Paraquat is a nonselective contact herbicide. It is widely used in agriculture because it is inexpensive and highly efficient. Moreover, it is not present cumulative pollutant effects. However, it is a very toxic product both for humans and animals. The intoxication produced can be fatal mainly by the lack of an efficient antidote to revert the clinical state of the subject. Paraquat acts on the oxidative stress-induced mechanisms. Thus, there is the increased production of the free radicals associated with the depletion of antioxidant systems of the organism. Paraquat toxicity attacks kidneys, liver, muscles, and brain, but lungs are the target organs. Severe injuries are observed such as edema, hemorrhage, interstitial inflammation and pulmonary fibrosis, culminating in serious respiratory failure with death. Nowadays, the treatment of paraquat intoxication is based in decrease of the absorption and increases the excretion. Moreover, the use of antioxidants and antifibrotic agents has being studied. There is an increasing interest in studies about substances that can serve as antidote in the poisonings, once paraquat increases the morbidity and mortality.