Cytotoxicity and in vitro activity of chard (Beta vulgaris L. var Cicla) extracts on porcine pancreatic islets / Citotoxicidad y actividad in vitro de extractos de acelga (Beta vulgaris L. var Cicla) en islotes pacreáticos porcinosa / Citotocidae e atividade in vitro de extratos de acelga (Beta vulgaris L. var Cicla) em ilhotas pancreáticas porcinas

Background: reports from traditional medicine suggest that chard (Beta vulgaris L. var Cicla) can have remarkable effects in diabetes therapy. Objective: to evaluate the cytotoxic activity of chard extracts in cell lines and determine the viability of cultured porcine pancreatic islets added with or without chard extracts. Methods: cytotoxic activity of chard extracts was assessed in non-tumor and tumor cell lines using the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] technique, and the ability of extracts to maintain porcine pancreatic islets viability and regeneration in vitro was tested. Results: the 50% cytotoxic concentration (CC50) of extracts for non-tumor cell lines was above 1,000 μg/mL, while it was 825 μg/mL, 283 μg/mL, 136 μg/mL and 380 μg/mL, for hexane, ethyl acetate, ethanol and water extracts in the tumor cell line, respectively. The CC50 ratio between cell lines indicates that ethanol extract is 7.5 times more toxic to tumor than non-tumor cell lines. There was an increase in viability of porcine pancreatic islets cultured with aqueous, ethyl acetate, and ethanol extracts compared with standard media (CMRL1066) and Cyclosporine A (CsA) control groups. Furthermore, a greater than one regeneration index of islets cultured with ethanol extract at 1,000 μg/mL and 500 μg/mL concentrations during 15 days was observed, which remained constant and was significantly higher than CsA group. Conclusions: these results suggest that chard metabolites should be researched to develop antitumor therapies and human pancreatic islets recovery in diabetes treatment.

Antecedentes: reportes de medicina tradicional sugieren que la planta acelga (Beta vulgaris L. var Cicla) es importante en el tratamiento de enfermedades como la diabetes. Objetivo: evaluar la citotoxicidad de concentraciones de extractos de acelga en líneas celulares y determinar la viabilidad de islotes pancreáticos porcinos cultivados con y sin extracto de acelga. Método: se evaluó la actividad citotóxica en líneas celulares tumorales y no tumorales, con la técnica del MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]. Específicamente se hicieron ensayos para comprobar si los extractos de acelga tienen la capacidad de mantener la viabilidad de islotes pancreáticos porcinos aislados e influir en su regeneración in vitro. Resultados: la concentración citotóxica al 50% (CC50) de los extractos en líneas no tumorales fue mayor de 1.000 μg/mL, mientras que para los extractos en hexano, acetato de etilo, etanol y agua fue de 825 μg/mL, 283 μg/mL, 136 μg/mL y 380 μg/mL, respectivamente, en líneas tumorales. La proporción CC50 encontrada indica que el extracto en etanol es 7,5 veces más tóxico para las líneas celulares tumorales que para las no tumorales. Igualmente encontramos un aumento en la viabilidad de los islotes pancreáticos porcinos cultivados con extracto acuoso, de acetato en etilo y etanol en comparación con el medio de cultivo estándar (CMRL1066) y un control inhibidor que contenía medio con Ciclosporina A (CsA). Además, se encontró que el índice de regeneración era mayor de uno en los islotes cultivados con el extracto en etanol a concentraciones de 1.000 μg/mL y 500 μg/mL durante 15 días, que se mantuvo constante y fue significativamente mayor en comparación con el grupo de CsA. Conclusión: estos resultados sugieren que los metabolitos de la acelga podrían ser utilizados en la investigación de nuevos fármacos para el desarrollo de terapias antitumorales y recuperación de islotes pancreáticos en el tratamiento de la diabetes.

Antecedentes: relatos encontrados em medicina sugerem que a planta acelga (Beta vulgaris L. var Cicla) tem un papel importante no tratamento das doenças como a diabetes. Objetivo: avaliar a citotoxicidade de concentrações de extratos em linhagens celulares e determinar a viabilidade de ilhotas pancreáticas de porcos cultivadas com e sem extrato de acelga. Métodos: neste trabalho foi avaliada a atividade citotóxica dos extratos da acelga em linhagens celulares tumorais e não tumorais, usando a técnica do MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyltetrazolium bromide]; além disso, foram feitos ensaios para verificar a capacidade que têm os extratos para manter a viabilidade das ilhotas pancreáticas isoladas de porcos e a influência em sua regeneração in vitro. Resultados: a concentração citotóxica ao 50% (CC50) dos extratos em linhagens não tumorais está acima de 1000 μg/mL, enquanto para os extratos de hexano, acetato de etilo, etanol y água é de 825 μg/mL, 283 μg/mL, 136 μg/mL y 380 μg/mL, respectivamente, em linhagens tumorais. A proporção CC50 entre a célula indica que o extrato de etanol é 7,5 vezes mais tóxico para as linhas celulares tumorais que para as linhas não tumorais. Houve um aumento na viabilidade dos isolados pancreáticos de porcos cultivados com extrato aquoso, de acetato de etilo y etanol, em comparação com o meio de cultura padrão (CMRL 1066) e um controle inibitório contendo meio com Ciclosporina A (CsA). Encontrou-se também uma taxa de regeneração maior do que um em ilhotas cultivadas com concentrações de 1000 μg/mL e 500 μg/mL durante 15 días, que se manteve constante e foi significativamente mais elevada em comparação com a CsA. Conclusões: estes resultados sugerem que os metabolitos da acelga poderiam ser usados para a pesquisa de novas drogas para o desenvolvimento de terapias antitumorais e recuperação de ilhotas pancreáticas para o tratamento da diabetes.

Diagnostic accuracy of HMGB-1, sTREM-1, and CD64 as markers of sepsis in patients recently admitted to the emergency department.

OBJECTIVES: The objectives were to evaluate the diagnostic accuracy for sepsis in an emergency department (ED) population of the cluster of differentiation-64 (CD64) glycoprotein expression on the surface of neutrophils (nCD64), serum levels of soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-1 (s-TREM-1), and high-mobility group box-1 protein (HMGB-1). METHODS: Patients with any of the following as admission diagnosis were enrolled: 1) suspected infection, 2) fever, 3) delirium, or 4) acute hypotension of unexplained origin within 24 hours of ED presentation. Levels of nCD64, HMGB-1, and s-TREM-1 were measured within the first 24 hours of the first ED evaluation. Baseline clinical data, Sepsis-related Organ Failure Assessment (SOFA) score, Acute Physiology and Chronic Health Evaluation (APACHE II) score, daily clinical and microbiologic information, and 28-day mortality rate were collected. Because there is not a definitive criterion standard for sepsis, the authors used expert consensus based on clinical, microbiologic, laboratory, and radiologic data collected for each patient during the first 7 days of hospitalization. This expert consensus defined the primary outcome of sepsis, and the primary data analysis was based in the comparison of sepsis versus nonsepsis patients. The cut points to define sensitivity and specificity values, as well as positive and negative likelihood ratios (LRs) for the markers related to sepsis diagnosis, were determined using receiver operative characteristics (ROC) curves. The patients in this study were a prespecified nested subsample population of a larger study. RESULTS: Of 631 patients included in the study, 66% (95% confidence interval [CI] = 62% to 67%, n = 416) had sepsis according with the expert consensus diagnosis. Among these sepsis patients, SOFA score defined 67% (95% CI = 62% to 71%, n = 277) in severe sepsis and 1% (95% CI = 0.3% to 3%, n = 6) in septic shock. The sensitivities for sepsis diagnosis were CD64, 65.8% (95% CI = 61.1% to 70.3%); HMGB-1, 57.5% (95% CI = 52.7% to 62.3%); and s-TREM-1, 60% (95% CI = 55.2% to 64.7%). The specificities were CD64, 64.6% (95% CI = 57.8% to 70.8%), HMGB-1, 57.8% (95% CI = 51.1% to 64.3%), and s-TREM-1, 59.2% (95% CI = 52.5% to 65.6%). The positive LR (LR+) for CD64 was 1.85 (95% CI = 1.52 to 2.26) and the negative LR (LR-) was 0.52 (95% CI = 0.44 to 0.62]; for HMGB-1 the LR+ was 1.36 (95% CI = 1.14 to 1.63) and LR- was 0.73 (95% CI = 0.62 to 0.86); and for s-TREM-1 the LR+ was 1.47 (95% CI = 1.22 to 1.76) and the LR- was 0.67 (95% CI = 0.57 to 0.79). CONCLUSIONS: In this cohort of patients suspected of having any infection in the ED, the accuracy of nCD64, s-TREM-1, and HMGB-1 was not significantly sensitive or specific for diagnosis of sepsis.

Fetal-maternal HLA-A and -B discordance is associated with placental RNase expression and anti-HIV-1 activity.

The incidence of maternal-to-fetal human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) transmission is 25-30% in absence of antiretroviral therapy, and is inversely associated with Human leukocyte antigens (HLA) class-I discordance. Based on our earlier report that mixed lymphocyte reactions (MLR) induce a ribonuclease (RNase) that inhibits HIV-1 replication, we proposed that maternal-fetal alloantigen stimulation activates factors that protect the fetus against vertically-transmitted infections. We investigate here whether the degree of mother-infant HLA discordance associates with the ability to produce anti-HIV-1 alloantigen-stimulated factor (ASF), and affects placental RNases. We also determine whether such HLA association is influenced by the mother's HIV-1 status. Paired maternal and cord blood leukocytes were tested for the induction of ASF by MLR, and typed for HLA-A and -B. The placentas were tested for mRNA expression of three RNases. Neonate anti-mother, but not mother anti-neonate MLR generated supernatants with anti-HIV-1 activity, that was associated with HLA class I discordance. This HLA association was not seen in the HIV-infected cohort. HLA class I discordance was also associated with expression of placental RNase 1. Our findings are consistent with the hypothesis that HLA class I discordance induces expression of RNases in the placenta that contribute to innate host resistance to HIV-1 and other viral infections.

Diagnostic accuracy of bronchoalveolar lavage samples in immunosuppressed patients with suspected pneumonia: analysis of a protocol.

BACKGROUND: Fast and accurate etiologic diagnosis of pneumonia in immunocompromised patients is essential for a good outcome. Utility of bronchoalveolar lavage (BAL) samples has already been established, but studies about them are scarce and limited to few countries. We aimed to evaluate the accuracy of a diagnostic protocol, emphasizing on local epidemiology, rapidity, and yield of different techniques. METHODS: One year prospective study of 101 consecutive immunosuppressed patients admitted with suspected pneumonia to a university hospital. They all had bronchoscopic BAL (n=109) and respiratory sampling. Conventional microbiological studies, cytomegalovirus pp65 antigenemia and transbronchial biopsy (TBB), whenever considered pertinent, were done. Results were analyzed along with other diagnostic procedures, clinical course and final outcome. RESULTS: HIV/AIDS infection was the most frequent cause of inclusion (n=80). Infections accounted for 79 out of 122 final diagnoses (64.8%). Our protocol identified 60 infectious and 3 noninfectious pathologies (general yield: 51.6%). Sensitivity in pulmonary infections was 75.9% (IC95%: 64.8-84.6%), specificity 86.0% (72.6-93.7%), positive predictive value 89.6% (79.1-95.3%), negative predictive value 69.4% (56.2-80.1%), accuracy 79.8% (71.7-86.2%). Mycobacterium spp. (n=27), bacteria (n=19), Pneumocystis jirovecii (n=18) and other fungi (histoplasmosis: 6, aspergillosis: 5, cryptococosis: 3) were the most common infectious pathogens. Direct microscopy allowed an early definite/presumptive diagnosis in 36/49 fungal and mycobacterial infections (73.5%). Up to 30% of mycobacterial infections were missed. CONCLUSIONS: Systematical study of BAL samples has a high diagnostic yield in our immunocompromised patients with suspected pneumonia. As economical and epidemiological conditions of regions are different, it should be tried everywhere.

Ribonucleases in HIV type 1 inhibition: effect of recombinant RNases on infection of primary T cells and immune activation-induced RNase gene and protein expression.

Ribonucleases (RNases) have therapeutic potential against cancer and viral diseases and have been reported to inhibit replication of the human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) in chronically infected cell lines. The ribonuclease eosinophil-derived neurotoxin (EDN) is responsible for the anti-HIV-1 activity of a soluble factor produced in response to human alloantigens (ASF). Four recombinant RNases (EDN; a four amino acid extension of the N-terminus EDN, -4EDN; RNase A; and angiogenin) were tested for inhibition of HIV-1 replication in PHA blasts. All RNases showed anti-HIV-1 activity, irrespective of whether the RNases were added before, during, or 2 h after infection. Polyclonal antibodies against the four RNases blocked the antiviral activity. ASF inhibited HIV-1 replication in vitro if added up to 4 h after infection. We demonstrated that allostimulation induced EDN, RNase A, and angiogenin mRNA expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), although only EDN protein was detected. We identified monocytes and dendritic cells, but not macrophages or T cells, as EDN-producing cells. These findings raise the possibilities that multiple naturally occurring RNases may contribute to protection against HIV-1 infection and could be considered for utilization in HIV-1 therapy.

[Presence of circulating cytomegalic cells in HIV negative immunosuppressed individuals following cytomegalovirus infection]. / Utilidad de la detección de células citomegálicas circulantes en pacientes inmunosuprimidos VIH negativos en el control de la infeccin por citomegalovirus.

OBJECTIVE: Immunofluorenscence methods to detect pp65 antigenemia were implemented for identifying the circulating virus-infected cells in individuals known to have cytomegalovirus infection and disease symptoms. MATERIAL AND METHODS: Between December-2002 and July-2003, 110 peripheral blood samples were obtained from 46 immunosuppressed patients. pp65 antigenemia and the presence of circulating cells were determined by indirect immunofluorescence using a commercial kit to detect CMV pp65 antigen in peripheral blood leukocytes. Antigenemia was positive when one or more cells was observed with multilobulated, homogenous fluorescent stain in the nucleus. The presence of infected circulating cells (peripheral blood mononuclear cells) was determined when an extended pattern of fluorescent stain was observed throughout the cytoplasm in cells of 35 to 50 microm. RESULTS: Eight antigenemias from 7 patients (15%) were positive. Of these, 4 (57%) were also positive for circulating infected cells and consisted of 3 kidney transplant recipients and 1 liver transplant recipient. The number of positive cells in antigenemia was greater in kidney-transplant recipients than in the rest of immunosupressed patients (457 vs. 1.96, p < 0.005). No association was seen between the presence of infected circulating cells, morbidity, mortality or the development of GVHD (p < 0.001). CONCLUSION: No correlation was observed between the presence of infected cells, antigenemia and mortality. To substantiate the lack of correlation amongst these factors, prospective studies with larger sample sizes are necessary. These studies will aid in better defining the clinical application in immunosupressed patients.

Utilidad de la detección de células citomegálicas circulantes en pacientes inmunosuprimidos VIH negativos en el control de la infección por citomegalovirus / Presence of circulating cytomegalic cells in HIV negative immunosuppressed individuals following cytomegalovirus infection

Objetivo. Buscar la correlación entre la presencia de células citomegálicas circulantes con la antigenemia pp65 para citomegalovirus y el desarrollo de complicaciones clínicas inherentes a infección y enfermedad por citomegalovirus. Materiales y métodos. Entre diciembre de 2002 y julio de 2003 se procesaron 110 muestras de sangre periférica, obtenidas de 46 pacientes inmunosuprimidos. La antigenemia pp65 y la presencia de células citomegálicas circulantes se determinaron mediante inmuno-fluorescencia indirecta utilizando un estuche comercial para la detección del antígeno pp65 de citomegalovirus. En leucocitos de sangre periférica, la antigenemia fue positiva cuando se encontró una o más células con tinción fluorescente, multilobulada y homogénea en el núcleo celular. Se determinó la presencia de células citomegálicas circulantes cuando se observaron células de gran tamaño (35 a 50 mm) con un patrón de tinción fluorescente extendido en todo el citoplasma celular en células mononucleares de sangre periférica. Resultados. Se encontraron ocho pruebas con antigenemia positiva, procedentes de siete pacientes (15 por ciento). De éstos, cuatro (57 por ciento) también presentaron células citomegálicas circulantes, tres habían recibido un trasplante renal y uno un trasplante hepático. El número de células positivas en la antigenemia fue mayor en los pacientes con trasplante renal que en el resto de pacientes inmunosuprimidos (457 vs.1,96; p<0,005). No se encontró asociación entre la presencia de células citomegálicas circulantes, la morbilidad, la mortalidad y el desarrollo de enfermedad injerto contra huésped (GVHD) (p<0,001). Discusión. No encontramos correlación entre la detección de células citomegálicas circulantes, la antigenemia y la mortalidad en estos pacientes. Sin embargo, es necesario realizar estudios prospectivos con un mayor número de individuos para determinar mejor dicha correlación y definir su utilidad clínica en pacientes inmunosuprimidos

Inmunologia del virus de la inmunodeficiencia humana / Immunology of the human immunodeficiency virus

Propósito: realizar una revisión de la literatura sobre las características de los mecanismos de respuesta inmune que se activan en cada una de las etapas de la infección por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), los tipos de respuesta observada entre diferentes subgrupos de individuos infectados y los factores genéticos, ambientales y virológicos que influyen o determinan la velocidad de progresión de la infección. Fuentes de los datos: se hizo una búsqueda sistemática de artículos originales en las bases de datos de PubMed y Medline publicados desde 1988 hasta abril de 2002, se revisaron los artículos identificados y las revisiones publicadas por expertos. Selección de los estudios: se encontraron 329 artículos. Se seleccionaron estudios clínicos y experimentales controlados o con grupos comparativos prospectivos y retrospectivos con datos suficientes sobre marcadores inmunológicos, virológicos y genéticos relacionados con la historia natural de la infección del VIH y la progresión de la enfermedad que permitieran calcular la razón de disparidad, Extracción de los datos: los artículos se clasificaron y analizaron de acuerdo a si se referían a marcadores inmunológicos, virológicos, genéticos de infección por VIH-1 y/o progresión a síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y si eran artículos originales o revisiones. En el caso de marcadores inmunológicos se clasificaron de acuerdo a si estudiaban la inmunidad humoral o celular. Resultados y síntesis de los datos: el sistema inmune es incapaz de asumir el control de la infección por el VIH-1 porque las células CD4+ son blanco del virus, se infectan en forma productiva y mueren rápidamente por diferentes mecanismos. Los linfocitos T CD8+ o células citotóxicas son importantes en la respuesta inmune anti-VIH-1, con una gran correlación entre una respuesta vigorosa y el control inicial de la replicación del VIH-1 durante la infección primaria...

Frecuencia de mutaciones en el correceptor CCR5 del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en diferentes grupos en Medellín, Colombia / Mutation frequency in CCR5 HIV virus Co-receptor, in different groups in Medellín

Introducción: la exposición repetida al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) no siempre llevan la infección, multiples factores de resistencia han sido propuestos, pero sólo una mutación, la delección de 32 pares de base (delta 32)en el gen que codifica por la molécula CCR5, confiere un alto grado de protección; esta molécula es el principal correceptor del virus: Objetivos: determinar la frecuencia de delta 32 en Medellín, Colombia y buscar otros polimorfismos en el gen ccr5 en individuos expuestos al VIH y seronegativos (ESNs). Materiales y métodos: la mutación delta 32 se determinó por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa en 218 individuos: 29 seropositivos (SP), 39 ESN y 150 individuos de la población general (PG). Por medio de la técnica de polimorfismos conformacionales de cadena simple (SSCP) se buscaron otras mutaciones en el gen ccr5 en la población de ESNs. Resultados: la frecuencia del alelo delta 32 fué de 3.8 por ciento para ESN, 2.7 por ciento para PG y 1.7 por ciento para SP. Entre los ESNs se encontró el único genotipo homocigótico mutado (ccr5/ delta 32/delta 32), se encontro en el 5.3 por ciento de la PG y en 2.6 por ciento de SP y de ESNs. Las diferencias en las frecuencias alélicas y genotipicas entre los grupos no fueron estadísticamente significativas. La comparación entre las frecuencias genotípicas esperadas y observadas mostró que estas frecuencias eran significativamente diferentes en el grupo de ESNs. Lo que sugirió en forma indirecta, un efecto protector del geneotipo gemocigótico mutado en delta 32/delta 32. No se encontró ninguna otra mutación en el gen ccr5. Conclusión: la baja frecuencia del genotipo homocigótico mutado delta 32/delta 32y la ausencia de otras mutaciones en ccr5 en los ESNs sugierén la presencia de otros mecanismos de resitencia a la infección por VIH en nuestra población

Infección viral del tracto respiratorio inferior

Las infecciones respiratorias agudas son una de las principales causas de morbilidad y mortalidad entre los niños. Con el desarrollo de tecnologías de diagnóstico rápido para la detección de antígenos virales es posible reconocer el agente viral de la infección respiratoria en horas. El diagnóstico etiológico de infección respiratoria viral es no sólo cada vez más importante para la selección apropiada de los pacientes que deben recibir tratamiento antiviral o con antibióticos, sino también para el control de la diseminación de las infecciones respiratorias virales en salas pediátricas. En la Clínica Amparo Infantil Santa Ana de Medellín ocurrió un brote de infección respiratoria aguda del tracto respiratorio inferior en el último trimestre de 1994 producida por virus. Los virus detectados fueron virus respiratorio sincitial 41.8 por ciento, adenovirus 33,3 por ciento, parainfluenza tipo 1, en el 8.3 por ciento e infección mixta en el 16.7 por ciento. Se describe el método diagnóstico utilizado en la detección de los antígenos virales y las características de este brote.