Prevalence and risk factors for Leptospira spp. in dairy cattle in western Paraná, Brazil / Prevalência e estudo dos fatores de risco da Leptospira spp. em bovinos leiteiros na região Oeste do Paraná, Brasil

Leptospirosis is caused by spirochete bacteria of the genus Leptospira and is considered the most widespread zoonosis worldwide. It is an important agent that causes animal production to decrease. In cattle, it affects especially the reproductive tract. The objective of this study was to determine the seroprevalence of Leptospira spp., molecularly detect the bacteria in tissues of aborted fetuses, and identify the main risk factors associated with infection in cattle in dairy farms in Western Paraná. For this purpose, 600 bovine serum samples from 60 properties and 17 bovine fetuses from nine properties were collected. Data about the properties were also collected through an epidemiological questionnaire to assess the main risk factors associated with Leptospira spp. infection. The serum samples were analyzed using microscopic agglutination test (MAT), and the fetal tissues using nested polymerase chain reaction (nested PCR). Seroprevalence of Leptospira spp. in dairy cattle in Western Paraná was 39.83% (239/600) and none of the analyzed fetuses were positive for Leptospira spp. The main risk factors identified are related to the production system, reproductive management, and the presence of dogs on the property. Leptospira spp. infection is widely spread in the cattle population in Western Paraná.(AU)

A leptospirose tem como agente as bactérias espiroquetas do gênero Leptospira e é considerada a zoonose mais difundida pelo mundo. É um importante agente que causa diminuição da produção animal, sendo que nos bovinos ela acomete especialmente o trato reprodutivo. O objetivo desse estudo foi determinar a soroprevalência de Leptospira spp., detectar molecularmente a bactéria em tecidos de fetos abortados e identificar os principais fatores de risco associados à infecção em bovinos provenientes de propriedades leiteiras da região Oeste do Paraná. Para isso, foram coletadas 600 amostras de soro bovino provenientes de 60 propriedades e 17 fetos bovinos de nove propriedades. A partir de um questionário epidemiológico, também foram coletados dados das propriedades para avaliar os principais fatores de risco associados à infecção por Leptospira spp. As amostras de soro foram analisadas pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM) e os tecidos fetais por meio da Dupla Reação em Cadeia pela Polimerase (nested-PCR). A soroprevalência de Leptospira spp. em bovinos leiteiros da região Oeste do Paraná foi de 39,83% (239/600). Nenhum feto analisado apresentou resultado positivo para Leptospira spp. Os principais fatores de risco identificados estão relacionados ao perfil de produção, manejo reprodutivo e a presença de cães na propriedade. A infecção por Leptospira spp. está amplamente distribuída na população bovina da região Oeste do estado do Paraná.(AU)

Evaluation of fecal smear methods for research on Cryptosporidium spp. oocysts in the feces of dairy calves / Avaliação dos métodos de esfregaço fecal para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. nas fezes de bezerros da bovinocultura de leite

The objective of this study is to compare the direct fecal smear (DFS) and centrifugal sedimentation (CS) methods in the detection of Cryptosporidium spp. oocysts in fecal samples of dairy calves. One hundred and fourteen fecal samples were collected from calves aged up to six months from 10 dairy farms located in Palotina and Francisco Alves, Paraná, Brazil. The microscopic analysis revealed the presence of Cryptosporidium spp. oocysts in 51.75% (59/114) of the samples in both methods. In CS, 48.25% (55/114) of the samples were positive, while in DFS slides, only 6.14% (7/114) were positive. Only 4 samples were positive exclusively in DFS. To ensure that there were no false-negative results in the microscopic analysis, the 55 samples that were negative in both DFS and CS were selected for molecular analysis using the nested PCR (nPCR). Of these 55 samples, 24% (13/55) were positive and forwarded for sequencing part of the genome, which made it possible to identify C. parvum, C. bovis and C. ryanae. Besides the characterization of the Cryptosporidium species, it was possible to identify bacteria of the genus Acinetobacter interfering directly in the analyzed samples. The microscopic analysis also revealed higher sensitivity when CS was used to make the fecal smears. However, some samples that were negative in this technique had positive PCR results. Thus, molecular analysis is indicated to confirm cases of Cryptosporidium spp. Further studies are necessary to prove the specificities of the used primers since the results obtained in nPCR were positive for the protozoan but, when genetic sequencing was performed, Acinetobacter spp. was identified.(AU)

O objetivo deste trabalho foi comparar os métodos de esfregaço fecal direto (DFS) e centrífugo sedimentação (CS) para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bezerros leiteiros. Foram coletadas 114 amostras fecais de bezerros com até seis meses de idade, provenientes de dez propriedades leiteiras localizadas nos municípios de Palotina e Francisco Alves, Paraná. Por meio da análise microscópica, foi possível observar oocistos de Cryptosporidium spp. em 51,75% (59/114) das amostras. Pelo método da CS foi identificada positividade em 48,25% (55/114) das amostras, enquanto nas lâminas pelo método do esfregaço fecal direto (DFS), apenas 6,14% (7/114) foram positivas. Somente 4 amostras foram positivas exclusivamente no método do DFS. Para assegurar que na análise microscópica não houvesse resultados falso-negativos, as 55 amostras negativas para os dois métodos de confecção de lâminas (DFS e CS) foram selecionadas para análise molecular por meio da técnica de Nested PCR. Das 55 amostras submetidas a nPCR, 24% (13/55) apresentaram-se positivas e foram encaminhadas para o sequenciamento genético de uma porção do genoma, o qual possibilitou identificar as espécies de C. parvum, C. bovis e C. ryanae. Além da caracterização das espécies de Cryptosporidium, foi possível identificar a presença de bactérias do gênero Acinetobacter interferindo diretamente nas amostras analisadas. A análise microscópica revelou maior sensibilidade quando o método de CS foi usado para a confecção dos esfregaços fecais, entretanto, amostras negativas por meio dessa metodologia apresentaram resultados positivos na nPCR. Desta forma, para a confirmação dos casos de Cryptosporidium spp., é indicado a realização da análise molecular. Novos estudos são necessários para se comprovar a especificidade dos primers utilizados, uma vez que na nPCR o resultado obtido foi positivo, porém ao realizar o sequenciamento genético houve a identificação de Acinetobacter spp.(AU)

Evaluation of different transmission routes of Cystoisospora suis in a farm using prophylactic toltrazuril / Avaliação de diferentes vias de transmissão de Cystoisospora suis em uma granja utilizando toltrazuril profilático

Coccidiosis is an enteric disease caused by protozoa, especially Cystoisospora suis which can lead to large losses in production. Its transmission occurs through different routes, mainly affecting piglets in the first weeks of life and normally progressing with diarrhea unresponsive to antibiotic therapy. The objective of this work was to evaluate, in two seasons of the year, the occurrence of C. suis in piglets and sows, the transmission routes and source of infection and the influence of the preventive use of toltrazuril on these epidemiological parameters. Two experiments were carried out, the first being in winter; under the influence of prophylactic use of toltrazuril; and the second in the summer, six months after the suspension of the prophylactic use of toltrazuril. The study included 36 sows (18 controls, 18 treated toltrazuril). The following samples were collected: rest of the sows, water from the individual drinkers in each cage, organic swabs present in the keepers' shoes, environmental swabs pre and housing, present in the cages in the rooms and accumulations of the maternity cage. As were disclosed to coproparaological and PCR exams. The presence of C. bebe ocysts is the winter and summer control following samples: sow feces (2.84%) of the winter and summer control groups (7.60%) of the winter and summer treated groups and the treated group winter and summer, rectal swabs from litters (9.03%) in the control and treated groups in winter, collected from the environment (20.22%) from all groups. Like others, they were negative for the presence of the parasite. There was no difference between the control and toltrazuril groups and no positive samples were observed in the summer. The possible route of transmission of the agent in the present work was the water from the douros. Preventive therapy with toltrazuril in farms with low infection pressure is not necessary to control C. suis.(AU)

A coccidiose é uma doença entérica, causada por protozoários, destacando o Cystoisospora suis que pode levar a grandes perdas na produção. Sua transmissão ocorre por diferentes rotas, afetando principalmente leitões nas primeiras semanas de vida e cursando normalmente com quadros de diarreia não responsivos à antibioticoterapia. O objetivo do trabalho foi avaliar, em duas estações do ano, a ocorrência de C. suis em leitões e matrizes, as vias de transmissão e fonte de infecção e a influência do uso preventivo do toltrazuril sobre estes parâmetros epidemiológicos, Dois experimentos foram realizados, sendo o primeiro no inverno; sob efeito do uso profilático do toltrazuril; e o segundo no verão, seis meses após a suspensão do uso profilático do toltrazuril. O estudo incluiu 36 porcas (18 controles, 18 tratadas com toltrazuril). As seguintes amostras foram coletadas: fezes das porcas, água dos bebedouros individuais de cada gaiola, suabes retais de cada leitegada, resíduos orgânicos presentes no calçado dos tratadores, suabes ambientais pré e pós alojamento, insetos presentes nas salas analisadas e fezes acumuladas nas gaiolas da maternidade. As amostras foram submetidas a exames coproparasitológicos e PCR. A presença de oocistos de C. suis foi detectada nas seguintes amostras: fezes das porcas (2,84%) dos grupos controle do inverno e verão, água dos bebedouros (7,60%) dos grupos tratado do inverno e verão e do grupo controle do verão, suabes retais das leitegadas (9,03%) nos grupos controle e tratado no inverno, fezes coletadas do ambiente (20,22%) de todos os grupos. As outras amostras foram negativas para a presença do parasita. Não houve diferença entre o grupo controle e tratado e não foram observadas amostras positivas no verão. A possível via de transmissão do agente no presente trabalho foi a água dos bebedouros. A terapia preventiva com toltrazuril em granjas com baixa pressão de infecção não é necessária para o controle de C. suis.(AU)

Efficiency of sanitary management of litter in Eimeria spp. control in poultry housing of Western Paraná, Brazil.

The objective of this research was to evaluate the control of coccidiosis in the litter of commercial poultry housing in the Western region of Paraná, Brazil, which adopts sanitary management to control Salmonellosis. Three litter treatments were selected, proposed by an integrating company in the region: fermentation associated with liming (FL); liming (L) and fermentation (F). Stool samples were collected from 18 poultry housing, in a completely randomized experimental design, testing different collection areas in the sheds, from the 5th day of the birds' housing, repeated weekly until the 40th day, during five successive flocks. The incidence of coccidiosis was determined by oocysts count in feces (OoPG), testing the interactions between treatment, age of birds and the number of flocks housed. Samples were selected to identify, through the Multiplex PCR, species of the genus Eimeria. circulating in the shed. The results showed that in litter where fermentation was adopted, the efficiency to control the sporulation of Eimeria spp. was significantly (p <0.05) higher than in the other treatments. The use of the Multiplex PCR technique requires improvements in the preparation of samples for the extraction of genetic material.

Efficiency of sanitary management of litter in Eimeria spp. control in poultry housing of Western Paraná, Brazil / Eficiência dos manejos sanitários de cama no controle de Eimeria spp. em aviários no Oeste do Paraná, Brasil

Abstract The objective of this research was to evaluate the control of coccidiosis in the litter of commercial poultry housing in the Western region of Paraná, Brazil, which adopts sanitary management to control Salmonellosis. Three litter treatments were selected, proposed by an integrating company in the region: fermentation associated with liming (FL); liming (L) and fermentation (F). Stool samples were collected from 18 poultry housing, in a completely randomized experimental design, testing different collection areas in the sheds, from the 5th day of the birds' housing, repeated weekly until the 40th day, during five successive flocks. The incidence of coccidiosis was determined by oocysts count in feces (OoPG), testing the interactions between treatment, age of birds and the number of flocks housed. Samples were selected to identify, through the Multiplex PCR, species of the genus Eimeria. circulating in the shed. The results showed that in litter where fermentation was adopted, the efficiency to control the sporulation of Eimeria spp. was significantly (p <0.05) higher than in the other treatments. The use of the Multiplex PCR technique requires improvements in the preparation of samples for the extraction of genetic material.

Resumo O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência dos manejos sanitários aplicados à cama de aviários comerciais para o controle da salmonelose nas criações de frango de corte, na região Oeste do Paraná, e verificar seu efeito no controle da coccidiose. Foram selecionados três tratamentos de cama: a fermentação associada à calagem (FL); calagem (L) e fermentação (F). As amostras de fezes foram coletadas de 18 aviários, com um delineamento experimental inteiramente casualizado, testando-se diferentes áreas de coleta. As coletas foram realizadas a partir do 5° dia do alojamento e se repetiram semanalmente até o 40° dia, durante cinco lotes sucessivos. A incidência da parasitose foi determinada pela contagem de oocistos por grama de fezes (OoPG), testando as interações entre tratamento, idade das aves e número de lotes alojados. Amostras de fezes foram selecionadas para identificar os oocistos esperulados das espécies do gênero Eimeria circulantes no galpão, por meio do Multiplex PCR. Observou-se que a fermentação foi significativamente (p<0,05) mais eficiente, comparando-se o mesmo lote ao longo de todos os observados. A utilização da técnica de PCR Multiplex, precisa ser padronizada para amostras de campo.