Improvement of bovine in vitro embryo production by ovarian follicular wave synchronization prior to ovum pick-up.

This study evaluated the effects of the synchronization of ovarian follicular wave emergence on the efficiency of in vitro embryo production. Bos indicus cows (n = 20) were divided into two groups (control vs. synchronization) and subjected to repeated ovum pick-up (OPU) sessions (8 replicates each, with an interval of 21 days in a 2 × 2 crossover design) and subsequent in vitro embryo production. Cows in the control group (n = 10) were submitted to OPU procedures without any stimulation every 21 days. Animals in the synchronization group received a protocol-based progesterone implant, estradiol benzoate and prostaglandin on a random day of the estrus cycle (Day 0) and the OPU was performed on Day 5. After in vitro production, embryos were transferred to recipients synchronized at a fixed time and the diagnosis was performed 60 days later. An evaluation of the parameters for each OPU session revealed that donors that received the synchronization protocol pre-OPU showed a greater number of embryos (5.9 ± 0.5 vs. 4.5 ± 0.4; P = 0.037), higher rate of embryo production (45.8% vs. 38.5%; P = 0.001) and higher mean number of conceptions per group (2.2 ± 0.2 vs. 1.6 ± 0.2; P = 0.07) in relation to the group that did not receive hormonal treatment. We concluded that synchronization of the follicular wave prior to OPU showed positive effects on in vitro embryo production as well as on pregnancy rates.

Studies on in vitro bovine embryos during their transport / Estudo sobre o cultivo in vitro de embriões bovinos durante o transporte

The Brazilian livestock is based on the use and in the improvement of reproductive biotechnologies. Researches that aims to solve problems such as the distance between laboratories and the large cattle producing farms are necessary. The objective of this study was to evaluate the effectiveness of a culture system during long periods of transportation on bovine embryos produced in vitro. The oocytes obtained from slaughterhouse cows ovaries, passed through in vitro production of embryos procedures such as: maturation, fertilization and embryo culture and subsequently were allocated into the transportation system to compose the treatments: Tcontrol - control embryos kept in the incubator; T48 - embryos removed from the culture medium on the 5th day and transportation simulated for 48 hours; T24 - embryos removed from the culture medium on the 6th day and transportation simulated for 24 hours. After the treatments, the embryos were evaluated for blastocyst on the 7th day and hatching rate on the 9th day. The experimental design was completely randomized. No differences were found (P> 0.05) for blastocyst rate (31, 33 and 35%) and hatching rate (74, 78 and 80%), respectively, for Tcontrol, T48 and T24 treatments. It was concluded that the culture system during transport, up to 48 hours, was efficient when considering the embryonic viability, inferring that the transportation environment simulated atmosphere and temperature conditions of the laboratory in a satisfactory manner

A pecuária brasileira é, em parte, sustentada pela utilização e aperfeiçoamento de biotecnologias da reprodução. Pesquisas que buscam solucionar problemas como a distância existente entre os laboratórios e as grandes fazendas produtoras de gado são necessárias. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de um sistema de cultivo durante períodos longos de transporte de embriões bovinos produzidos in vitro. Os oócitos, obtidos de ovários de vacas de abatedouro, passaram pelos procedimentos de produção de embriões in vitro, e no quinto dia do cultivo, foram alocados no sistema de transporte para compor os tratamentos: Tcontrole embriões controle mantidos na incubadora; T48 - embriões retirados do meio de cultivo no 5º dia e simulado o transporte por 48 horas; T24 - embriões retirados do meio de cultivo no 6º dia e simulado o transporte por 24 horas. Após os tratamentos, os embriões foram avaliados quanto à taxa de blastocistos no 7º dia e a taxa eclosão no 9º dia. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com três tratamentos e cinco repetições cada. Não foram observadas diferenças (P> 0,05) na taxa de blastocisto (31, 33 e 35%) e na taxa de eclosão (74, 78 e 80%), respectivamente para os tratamentos Tcontrole, T48 e T24. Concluiu-se que o sistema de cultivo durante o transporte, por até 48 horas, foi eficiente quanto à viabilidade embrionária inferindo que o ambiente de transporte simulou as condições de atmosfera e de temperatura do laboratório de forma satisfatória

Studies on in vitro bovine embryos during their transport / Estudo sobre o cultivo in vitro de embriões bovinos durante o transporte

The Brazilian livestock is based on the use and in the improvement of reproductive biotechnologies. Researches that aims to solve problems such as the distance between laboratories and the large cattle producing farms are necessary. The objective of this study was to evaluate the effectiveness of a culture system during long periods of transportation on bovine embryos produced in vitro. The oocytes obtained from slaughterhouse cows ovaries, passed through in vitro production of embryos procedures such as: maturation, fertilization and embryo culture and subsequently were allocated into the transportation system to compose the treatments: Tcontrol - control embryos kept in the incubator; T48 - embryos removed from the culture medium on the 5th day and transportation simulated for 48 hours; T24 - embryos removed from the culture medium on the 6th day and transportation simulated for 24 hours. After the treatments, the embryos were evaluated for blastocyst on the 7th day and hatching rate on the 9th day. The experimental design was completely randomized. No differences were found (P> 0.05) for blastocyst rate (31, 33 and 35%) and hatching rate (74, 78 and 80%), respectively, for Tcontrol, T48 and T24 treatments. It was concluded that the culture system during transport, up to 48 hours, was efficient when considering the embryonic viability, inferring that the transportation environment simulated atmosphere and temperature conditions of the laboratory in a satisfactory manner(AU)

A pecuária brasileira é, em parte, sustentada pela utilização e aperfeiçoamento de biotecnologias da reprodução. Pesquisas que buscam solucionar problemas como a distância existente entre os laboratórios e as grandes fazendas produtoras de gado são necessárias. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de um sistema de cultivo durante períodos longos de transporte de embriões bovinos produzidos in vitro. Os oócitos, obtidos de ovários de vacas de abatedouro, passaram pelos procedimentos de produção de embriões in vitro, e no quinto dia do cultivo, foram alocados no sistema de transporte para compor os tratamentos: Tcontrole embriões controle mantidos na incubadora; T48 - embriões retirados do meio de cultivo no 5º dia e simulado o transporte por 48 horas; T24 - embriões retirados do meio de cultivo no 6º dia e simulado o transporte por 24 horas. Após os tratamentos, os embriões foram avaliados quanto à taxa de blastocistos no 7º dia e a taxa eclosão no 9º dia. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com três tratamentos e cinco repetições cada. Não foram observadas diferenças (P> 0,05) na taxa de blastocisto (31, 33 e 35%) e na taxa de eclosão (74, 78 e 80%), respectivamente para os tratamentos Tcontrole, T48 e T24. Concluiu-se que o sistema de cultivo durante o transporte, por até 48 horas, foi eficiente quanto à viabilidade embrionária inferindo que o ambiente de transporte simulou as condições de atmosfera e de temperatura do laboratório de forma satisfatória(AU)

Viabilidade de embriões vitrificados oriundos da fertilização in vitro de oócitos de vacas suplementadas com canola / Viability of vitrified embryos obtained from the in vitro fertilization of oocytes from cows supplemented with canola

Avaliou-se a produção de oócitos e embriões de vacas Nelore in vitro e a resistência à vitrificação. Foram utilizadas 12 vacas Nelore, distribuídas aleatoriamente em dois tratamentos: T1-tratados com canola em grão (2,0kg/animal/dia) e T2-controle. Cada animal foi aspirado quatro vezes para obtenção de óocitos para fecundação in vitro. Os oócitos foram quantificados e classificados em viáveis ou inviáveis. Os zigotos foram cultivados in vitro e, sete dias após, os embriões foram avaliados quanto à qualidade e grau de desenvolvimento e vitrificados em hastes próprias. Na sequência, foram descongelados e cultivados em 6, 12 e 24 horas, observando-se a taxa de expansão e eclosão. Não houve diferenças (P>0,05) no número total de oócitos viáveis, T1=12,7% e T2=11,0%, na taxa de clivagem, T1=60,6% e T2=61,4%, e taxa de blastocistos, T1=23,7% e T2=27,0%, em função do tratamento. Também não houve influência na taxa de re-expansão, T1=70,5 e T2=59,6%, após a vitrificação e descongelamento. Todavia houve diferença (P<0,06) para a taxa de eclosão, T1=69,2 e T2=35,7. Conclui-se que a adição de canola na dieta de vacas não alterou a produção de embriões; entretanto, os embriões resultantes de oócitos coletados de vacas alimentadas com canola são mais resistentes à vitrificação.

It was evaluated the production of oocytes and embryos from Nellore cows in vitro, as well as its resistance to vitrification, when the animals were supplemented with canola grains. Twelve Nellore cows were randomly divided into two treatments: T1-treated with Canola grains (2.0kg/animal/day) and T2-control. Each animal was submitted to other four aspirations, to obtain oocytes for the in vitro fertilization. The oocytes were quantified and classified as viable or not viable. The embryos were cultivated in vitro, seven days after the quality and the level of development of embryos was evaluated and they were vitrified in vitrification straws. Then, the embryos were thawed and grown during 6, 12 and 24 hours, and the rate of expansion and hatching were recorded. There were no differences (P> 0.05) in the whole number of viable oocytes T1: 12.7±1.71 and T2: 11.0±1.77, cleavage rate T1= 60.6±4,72 and T2= 61.4±4.88 or blastocysts rate T1=23,7±5.12 and T2=27,0±5.30 due to the treatment. The treatments did not influence the rate of re-expansion T1= 70,5±6.99 and T2: 59.6±7.09 after vitrification and thawing. However, there was a significant difference (P <0.06) in the hatching rate (T1: 69.17±7.43; T2: 35.66±6.86). Thus, we conclude that supplementation with canola grains did not change embryos production, but the embryos yielded from oocytes of cows fed canola grains are more resistant to vitrification.

Viabilidade de embriões vitrificados oriundos da fertilização in vitro de oócitos de vacas suplementadas com canola / Viability of vitrified embryos obtained from the in vitro fertilization of oocytes from cows supplemented with canola

Avaliou-se a produção de oócitos e embriões de vacas Nelore in vitro e a resistência à vitrificação. Foram utilizadas 12 vacas Nelore, distribuídas aleatoriamente em dois tratamentos: T1-tratados com canola em grão (2,0kg/animal/dia) e T2-controle. Cada animal foi aspirado quatro vezes para obtenção de óocitos para fecundação in vitro. Os oócitos foram quantificados e classificados em viáveis ou inviáveis. Os zigotos foram cultivados in vitro e, sete dias após, os embriões foram avaliados quanto à qualidade e grau de desenvolvimento e vitrificados em hastes próprias. Na sequência, foram descongelados e cultivados em 6, 12 e 24 horas, observando-se a taxa de expansão e eclosão. Não houve diferenças (P>0,05) no número total de oócitos viáveis, T1=12,7% e T2=11,0%, na taxa de clivagem, T1=60,6% e T2=61,4%, e taxa de blastocistos, T1=23,7% e T2=27,0%, em função do tratamento. Também não houve influência na taxa de re-expansão, T1=70,5 e T2=59,6%, após a vitrificação e descongelamento. Todavia houve diferença (P<0,06) para a taxa de eclosão, T1=69,2 e T2=35,7. Conclui-se que a adição de canola na dieta de vacas não alterou a produção de embriões; entretanto, os embriões resultantes de oócitos coletados de vacas alimentadas com canola são mais resistentes à vitrificação.(AU)

It was evaluated the production of oocytes and embryos from Nellore cows in vitro, as well as its resistance to vitrification, when the animals were supplemented with canola grains. Twelve Nellore cows were randomly divided into two treatments: T1-treated with Canola grains (2.0kg/animal/day) and T2-control. Each animal was submitted to other four aspirations, to obtain oocytes for the in vitro fertilization. The oocytes were quantified and classified as viable or not viable. The embryos were cultivated in vitro, seven days after the quality and the level of development of embryos was evaluated and they were vitrified in vitrification straws. Then, the embryos were thawed and grown during 6, 12 and 24 hours, and the rate of expansion and hatching were recorded. There were no differences (P> 0.05) in the whole number of viable oocytes T1: 12.7±1.71 and T2: 11.0±1.77, cleavage rate T1= 60.6±4,72 and T2= 61.4±4.88 or blastocysts rate T1=23,7±5.12 and T2=27,0±5.30 due to the treatment. The treatments did not influence the rate of re-expansion T1= 70,5±6.99 and T2: 59.6±7.09 after vitrification and thawing. However, there was a significant difference (P <0.06) in the hatching rate (T1: 69.17±7.43; T2: 35.66±6.86). Thus, we conclude that supplementation with canola grains did not change embryos production, but the embryos yielded from oocytes of cows fed canola grains are more resistant to vitrification.(AU)

Oocyte aspiration and in vitro embryo production in Jersey cows with selenium-supplemented diet / Aspiração de oócitos e produção de embriões in vitro de vacas Jersey suplementadas com selênio na dieta

The effects of selenium (Se) in Jersey cows' diet on the aspiration of oocytes and production of embryos in vitro were studied. Groups with five Jersey cows received 3.2mg or 9.6mg Se daily, provided in the feed concentrate. Six follicular aspirations were carried out every 15 days, using only the last 5. The oocytes were classified, and standard procedures were carried out for maturation, fertilization and cultivation. The total number of oocytes (35.11±2.65 vs 23.10±2.16) and degree 1 oocytes (11.61±2.65 vs 4.75±0.97) were higher in the group that received 9.6mg Se and the quantity of naked oocytes (3.23±0.87 vs 6.22±1.18) was lower in this group. The aspirated oocytes from the cows treated with 9.6mg Se/day resulted in higher (P<0.05) embryo production 21.98±2.37 vs 13.12±1.59). No difference was observed in serum Se concentration between the two groups. It is recommended that the daily diet be supplemented with 100g mineral salt containing 9.6mg Se, since this rate rendered a larger production of oocytes, higher quantity of degree 1 oocytes and greater production of embryos in the process of in vitro fertilization.

Avaliou-se o efeito do selênio (Se) adicional na dieta de vacas Jersey na aspiração de oócitos e produção de embriões in vitro. Dez vacas Jerseys receberam 3,2mg de Se por dia ou 9,6mg, vinculado ao concentrado. Realizaram-se seis aspirações foliculares, com intervalo médio de 15 dias, aproveitando as cinco últimas. Os oócitos foram classificados e realizaram-se os procedimentos padrões de maturação, fertilização e cultivo in vitro. O total de oócitos, 35,11±2,65 vs 23,10±2,16, e oócitos de qualidade 1, 11,61±1,58 vs 4,75±0,97, foram mais elevados no grupo que recebeu 9,6mg de Se e a quantidade de oócitos desnudos mais baixa, 3,21±0,87 vs 6,22±1,18. A produção de embriões foi maior no grupo tratado com 9,6mg de Se/vaca/dia, 21,98±2,37 vs 13,12±1,59. Não se observou diferença na concentração de Se no soro entre os dois grupos. Conclui-se que é possível recomendar o fornecimento de 100g de sal mineral, contendo 9,6mg de Se, adicionado à dieta, pois resultou em maior produção de oócitos, maior quantidade de oócitos de grau 1 e maior produção de embriões no processo de fecundação in vitro.

Oocyte aspiration and in vitro embryo production in Jersey cows with selenium-supplemented diet / Aspiração de oócitos e produção de embriões in vitro de vacas Jersey suplementadas com selênio na dieta

The effects of selenium (Se) in Jersey cows' diet on the aspiration of oocytes and production of embryos in vitro were studied. Groups with five Jersey cows received 3.2mg or 9.6mg Se daily, provided in the feed concentrate. Six follicular aspirations were carried out every 15 days, using only the last 5. The oocytes were classified, and standard procedures were carried out for maturation, fertilization and cultivation. The total number of oocytes (35.11±2.65 vs 23.10±2.16) and degree 1 oocytes (11.61±2.65 vs 4.75±0.97) were higher in the group that received 9.6mg Se and the quantity of naked oocytes (3.23±0.87 vs 6.22±1.18) was lower in this group. The aspirated oocytes from the cows treated with 9.6mg Se/day resulted in higher (P<0.05) embryo production 21.98±2.37 vs 13.12±1.59). No difference was observed in serum Se concentration between the two groups. It is recommended that the daily diet be supplemented with 100g mineral salt containing 9.6mg Se, since this rate rendered a larger production of oocytes, higher quantity of degree 1 oocytes and greater production of embryos in the process of in vitro fertilization.(AU)

Avaliou-se o efeito do selênio (Se) adicional na dieta de vacas Jersey na aspiração de oócitos e produção de embriões in vitro. Dez vacas Jerseys receberam 3,2mg de Se por dia ou 9,6mg, vinculado ao concentrado. Realizaram-se seis aspirações foliculares, com intervalo médio de 15 dias, aproveitando as cinco últimas. Os oócitos foram classificados e realizaram-se os procedimentos padrões de maturação, fertilização e cultivo in vitro. O total de oócitos, 35,11±2,65 vs 23,10±2,16, e oócitos de qualidade 1, 11,61±1,58 vs 4,75±0,97, foram mais elevados no grupo que recebeu 9,6mg de Se e a quantidade de oócitos desnudos mais baixa, 3,21±0,87 vs 6,22±1,18. A produção de embriões foi maior no grupo tratado com 9,6mg de Se/vaca/dia, 21,98±2,37 vs 13,12±1,59. Não se observou diferença na concentração de Se no soro entre os dois grupos. Conclui-se que é possível recomendar o fornecimento de 100g de sal mineral, contendo 9,6mg de Se, adicionado à dieta, pois resultou em maior produção de oócitos, maior quantidade de oócitos de grau 1 e maior produção de embriões no processo de fecundação in vitro.(AU)

Digestibilidade e metabólitos sanguíneos de vacas da raça Holandesa superovuladas que receberam Lac100® ou linhaça em grão como fontes de gordura / Digestibility and blood concentration of metabolites in superovulated dairy cows fed Lac100® or linseed as fat sources

Foram avaliados os efeitos de duas fontes de gordura, Lac100® (Yakult), fonte de ácido graxo ômega-6, e linhaça em grão (Linum usitatissimum) (LIN), fonte de ácido graxo ômega-3, sobre a digestibilidade aparente da matéria seca (DMS), proteína bruta (DPB), fibra em detergente neutro (DFDN), fibra em detergente ácido (DFDA) e extrato etéreo (DEE), e concentrações sanguíneas de HDL, LDL, VLDL, colesterol, triglicerídeos, glicose, cálcio, fósforo, N-ureico e progesterona. Foram utilizadas 10 vacas da raça Holandesa em lactação, distribuídas nos dois tratamentos, em um delineamento estatístico inteiramente casualizado. Os animais alimentados com Lac100® apresentaram maiores valores de DFDN (57,44 por cento vs. 50,80 por cento) e DEE (77,70 por cento vs. 72,18 por cento) quando comparados aos alimentados com LIN. Os animais alimentados com Lac100® apresentaram maiores concentrações de LDL (111,00 vs. 45,46mg/dL), HDL (82,27 vs. 64,93mg/dL) e colesterol total (203,60 vs. 116,13mg/dL) e menor concentração de N-ureico (13,22 vs. 15,19mg/dL) em relação aos animais alimentados com linhaça em grão. As concentrações sanguíneas de glicose, cálcio, fósforo e progesterona não foram alteradas. Os resultados sugerem que a fonte de gordura na dieta modifica a DFDN e a DEE e, as concentrações sanguíneas de LDL, HDL e colesterol total em vacas em lactação.

The effect of two sources of fat, calcium salts of soybean oil, Lac100® (Yakult), a source of omega-6 fatty acids or whole flaxseed (Linum usitatissiumum), a source of omega-3 fatty acids were evaluated to determine the apparent digestibility of dry matter (DDM), crude protein (DCP), neutral detergent fiber (DNDF), acid detergent fiber (DADF), and ether extract (DEE); and blood concentrations of HDL, LDL, VLDL, cholesterol, triglycerides, glucose, calcium, phosphorus, N-urea, and progesterone. Ten lactating Holstein cows were allocated in two treatments and a completely randomized design was used. Cows fed Lac100® had higher values of DNDF (57.44 percent vs. 50.80 percent) and DEE (77.70 percent vs. 72.18 percent) compared to those fed flaxseed. Cows fed Lac100® had higher blood concentrations of LDL (111.00 vs. 45.46mg/dL), HDL (82.27 vs. 64.93mg/dL), and total cholesterol (203.60 vs. 116.13mg/dL) and lower N-urea (13.22 vs. 15.19mg/dL) compared to those fed flaxseed. Blood concentrations of glucose, calcium, phosphorus, and progesterone were similar between the treatments. These results suggest that dietary fat modifies DNDF and DEE and blood concentrations of LDL, HDL, VLDL, and total cholesterol in lactating dairy cows.

Digestibilidade e metabólitos sanguíneos de vacas da raça Holandesa superovuladas que receberam Lac100® ou linhaça em grão como fontes de gordura / Digestibility and blood concentration of metabolites in superovulated dairy cows fed Lac100® or linseed as fat sources

Foram avaliados os efeitos de duas fontes de gordura, Lac100® (Yakult), fonte de ácido graxo ômega-6, e linhaça em grão (Linum usitatissimum) (LIN), fonte de ácido graxo ômega-3, sobre a digestibilidade aparente da matéria seca (DMS), proteína bruta (DPB), fibra em detergente neutro (DFDN), fibra em detergente ácido (DFDA) e extrato etéreo (DEE), e concentrações sanguíneas de HDL, LDL, VLDL, colesterol, triglicerídeos, glicose, cálcio, fósforo, N-ureico e progesterona. Foram utilizadas 10 vacas da raça Holandesa em lactação, distribuídas nos dois tratamentos, em um delineamento estatístico inteiramente casualizado. Os animais alimentados com Lac100® apresentaram maiores valores de DFDN (57,44 por cento vs. 50,80 por cento) e DEE (77,70 por cento vs. 72,18 por cento) quando comparados aos alimentados com LIN. Os animais alimentados com Lac100® apresentaram maiores concentrações de LDL (111,00 vs. 45,46mg/dL), HDL (82,27 vs. 64,93mg/dL) e colesterol total (203,60 vs. 116,13mg/dL) e menor concentração de N-ureico (13,22 vs. 15,19mg/dL) em relação aos animais alimentados com linhaça em grão. As concentrações sanguíneas de glicose, cálcio, fósforo e progesterona não foram alteradas. Os resultados sugerem que a fonte de gordura na dieta modifica a DFDN e a DEE e, as concentrações sanguíneas de LDL, HDL e colesterol total em vacas em lactação.(AU)

The effect of two sources of fat, calcium salts of soybean oil, Lac100® (Yakult), a source of omega-6 fatty acids or whole flaxseed (Linum usitatissiumum), a source of omega-3 fatty acids were evaluated to determine the apparent digestibility of dry matter (DDM), crude protein (DCP), neutral detergent fiber (DNDF), acid detergent fiber (DADF), and ether extract (DEE); and blood concentrations of HDL, LDL, VLDL, cholesterol, triglycerides, glucose, calcium, phosphorus, N-urea, and progesterone. Ten lactating Holstein cows were allocated in two treatments and a completely randomized design was used. Cows fed Lac100® had higher values of DNDF (57.44 percent vs. 50.80 percent) and DEE (77.70 percent vs. 72.18 percent) compared to those fed flaxseed. Cows fed Lac100® had higher blood concentrations of LDL (111.00 vs. 45.46mg/dL), HDL (82.27 vs. 64.93mg/dL), and total cholesterol (203.60 vs. 116.13mg/dL) and lower N-urea (13.22 vs. 15.19mg/dL) compared to those fed flaxseed. Blood concentrations of glucose, calcium, phosphorus, and progesterone were similar between the treatments. These results suggest that dietary fat modifies DNDF and DEE and blood concentrations of LDL, HDL, VLDL, and total cholesterol in lactating dairy cows.(AU)