RESUMEN
Most of the available genotyping methods were applied and evaluated in Leptospira isolates and only few of them in a relevant sample size of blood specimens but not of sera. The objective of this study was to evaluate the utility of one partial 16S rRNA gene sequencing assay (16S rRNA) and an optimized. Multilocus sequence typing scheme (MLST) for Leptospira typing directly in serum samples. Confirmed leptospirosis patients (n = 228) from Argentina (2005-2016) were randomly included. Septicemic-phase serum samples (n = 228) were studied by two genotyping methods. Available immune-phase serum samples of the included patients (n = 159) were studied by MAT to compare serological and molecular results. In culture-proven cases (n = 8), genotyping results between clinical samples and isolates were compared. Typing success rate (TSR) was 21.9% for 16S rRNA and 11.4% for MLST (full allelic profile) and a positive trend in both TSR during the study period was observed. Two species (L. interrogans and L. borgpertesenii) were identified by both methods and MLST assigned 8 different STs. The probable serogroups identified by MLST were coincident with the presumptive infecting serogroups identified by MAT, but with different frequencies. The three serogroups (Canicola, Sejroe and Icterohaemorrhagiae) most frequently identified by MAT were also genotyped by MLST. Typing results via 16S rRNA and MLST in clinical samples and isolates of culture-proven cases, were consistent except for one case. Performance of partial 16S rRNA gene sequencing assay and the optimized MLST scheme directly in sera may increase and improve the knowledge about species and serogroups causing human leptospirosis, especially in countries with low rates of culture sample collection or Leptospira isolation.
RESUMEN
INTRODUCCIÓN La leptospirosis es una de las zoonosis de mayor prevalencia mundial. Es sub-diagnosticada debido a las formas clínicas leves, a la falta de conocimiento de la enfermedad, a la falta de accesibilidad y a las desventajas de las técnicas diagnósticas. Las provincias de Santa Fe, Entre Ríos y Buenos Aires concentran el mayor número de casos. OBJETIVOS Ampliar el sistema de vigilancia intensificada a 9 establecimientos de salud pública y privada de las provincias mencionadas. MÉTODOS Se incluyeron 64 pacientes con sospecha de leptospirosis (1 fallecidos), desde enero de 2016 hasta abril de 2017, a los que se les realizó TR, MAT, IgM-Elisa, PCR en tiempo real y cultivo. RESULTADOS Se obtuvieron 64 primeras muestras, 29 segundas y 7 terceras. Se confirmaron 11 casos por MAT (3), PCR en tiempo real (3) y por ambas técnicas (5). La PCR en tiempo real permitió la confirmación precoz, a partir del 2º día de evolución, en 8 pacientes. Las técnicas de screening (TR, IgM-Elisa) fueron positivas en todos los casos. Se aisló una cepa perteneciente al serogrupo Canicola. La tipificación molecular de las muestras positivas por PCR en tiempo real presentó similitud con L. interrogans, a 4 de ellos se les pudo definir el serogrupo; Pyrogenes (2), Icterohaemorrhagiae y Canicola. En los pacientes confirmados la clínica y epidemiologia de la enfermedad coincide con lo descripto por otros autores en nuestro país. DISCUSIÓN Los resultados de este trabajo demuestran la relevancia de la sospecha clínica-epidemiológica de la enfermedad, remarcan la importancia de la obtención de segundas muestras y la utilidad de las técnicas de screening en los laboratorios de la Red Nacional de Leptospirosis. También demuestran la precocidad del diagnóstico utilizando PCR en tiempo Real y la necesidad de implementar el cultivo de muestras clínicas para el aislamiento de Leptospira spp, de vital importancia para la prevención y control de la enfermedad.
