PCR and qPCR for detection of Porcine Circovirus type 2 (PCV2) in captive white-lipped (Tayassu pecari) and collared (Tayassu tajacu) peccaries from Southern Brazil / PCR e qPCR para detecção de Circovírus Suíno tipo 2 (PCV2) em catetos (Pecari tajacu) e queixadas (Tayassu pecari) de cativeiro do Sul do Brasil

Porcine circovirus type 2 (PCV2) is an emergent virus found in commercial pig farms and may cause clinical or subclinical infection. The collared peccary (Pecari tajacu) and white-lipped peccary (Tayassu pecari) may also be infected by PCV2. Accordingly, the aim of this study was to identify PCV2 in whole blood samples of captive peccaries (16 collared and 6 white-lipped) by conventional and quantitative PCR (qPCR). Although the housekeeping gene (c-myc) DNA was successfully amplified, all 22 peccaries tested were negative for PCV2 by both molecular methods. In conclusion, although PCV2 may be endemic in free ranging wild pigs of Central and Northern Brazil, lack of serological and molecular PCV2 evidence (in whole blood) of both captive and free-range wild pigs may indicate low risk of disease in Southern Brazil.(AU)

O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é um vírus emergente encontrado em granjas comerciais de suínos que pode causar infecção clínica ou subclínica. Os catetos (Pecari tajacu) e as queixadas (Tayassu pecari) também podem se infectar com PCV2. Deste modo, o objetivo deste estudo foi identificar o PCV2 em amostras de sangue total de pecaris de cativeiro (16 catetos e seis queixadas) por PCR convencional e quantitativo (qPCR). Embora o gene constitutivo (c-myc) tenha sido amplificado com sucesso, todas as 22 amostras de pecaris avaliadas foram negativas para PCV2 em ambos os métodos moleculares. Em conclusão, embora o PCV2 seja endêmico em suínos selvagens de vida livre do Centro e Norte do Brasil, a ausência de evidência sorológica e molecular de PCV2 (em sangue total) de ambos pecaris de cativeiro e de vida livre no Sul do Brasil podem indicar baixo risco de doença no Sul do Brasil.(AU)

PCR and qPCR for detection of Porcine Circovirus type 2 (PCV2) in captive white-lipped (Tayassu pecari) and collared (Tayassu tajacu) peccaries from Southern Brazil / PCR e qPCR para detecção de Circovírus Suíno tipo 2 (PCV2) em catetos (Pecari tajacu) e queixadas (Tayassu pecari) de cativeiro do Sul do Brasil

Porcine circovirus type 2 (PCV2) is an emergent virus found in commercial pig farms and may cause clinical or subclinical infection. The collared peccary (Pecari tajacu) and white-lipped peccary (Tayassu pecari) may also be infected by PCV2. Accordingly, the aim of this study was to identify PCV2 in whole blood samples of captive peccaries (16 collared and 6 white-lipped) by conventional and quantitative PCR (qPCR). Although the housekeeping gene (c-myc) DNA was successfully amplified, all 22 peccaries tested were negative for PCV2 by both molecular methods. In conclusion, although PCV2 may be endemic in free ranging wild pigs of Central and Northern Brazil, lack of serological and molecular PCV2 evidence (in whole blood) of both captive and free-range wild pigs may indicate low risk of disease in Southern Brazil.

O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é um vírus emergente encontrado em granjas comerciais de suínos que pode causar infecção clínica ou subclínica. Os catetos (Pecari tajacu) e as queixadas (Tayassu pecari) também podem se infectar com PCV2. Deste modo, o objetivo deste estudo foi identificar o PCV2 em amostras de sangue total de pecaris de cativeiro (16 catetos e seis queixadas) por PCR convencional e quantitativo (qPCR). Embora o gene constitutivo (c-myc) tenha sido amplificado com sucesso, todas as 22 amostras de pecaris avaliadas foram negativas para PCV2 em ambos os métodos moleculares. Em conclusão, embora o PCV2 seja endêmico em suínos selvagens de vida livre do Centro e Norte do Brasil, a ausência de evidência sorológica e molecular de PCV2 (em sangue total) de ambos pecaris de cativeiro e de vida livre no Sul do Brasil podem indicar baixo risco de doença no Sul do Brasil.

Descrição de transmissão horizontal e vertical de Porcine circovirus 2b (PCV2b) em camundongos (CH3/Rockfeller) inoculados experimentalmente / Description of horizontal and vertical transmission in mice PCV2b (CH3 / Rockefeller) experimentally inoculated

The studies of mice susceptibility to PCV2 infection are still controversial, despite the importance of PCV2 infection in pigs. Therefore, the aim of this study is to verify the occurrence of horizontal and vertical transmission of PCV2b in mice experimentally infected. Two experiments were performed. In experiment 1 an infected male mice covered a female to verify vertical infection. The pups were tested to detected viral DNA. In experiment 2 the 21 days of age mice were inoculated with PCV2 and allocated with uninfected, i.e. contactantes, to evaluate the horizontal infection. Subsequently, the contactants and inoculated mice were tested for PCV2 DNA. The samples collected from both experiments had their DNA extracted and were further submitted to polymerase chain reaction (PCR). In experiment 1, after the gestation period, the female farrowed 10 mices of which 60% (6/10) were positive for the agent. In experiment 2, both the inoculated and the contacts animals showed no clinical changes and gross lesions of PCV2 infection, but viral DNA was recovered in four of the five animals of the contactant group. The detection of viral DNA in the offspring of the primo-infected females and in the mice that had contact with inoculated mice demonstrated that PCV2 can be transmitted vertically and horizontally.

Apesar da importância da infecção de PCV2 em suínos, os estudos de susceptibilidade de camundongos para a infecção por PCV2, ainda, são controversos. Portanto, o objetivo do presente estudo é verificar a ocorrência de transmissão horizontal e vertical de PCV2b em camundongos infectados experimentalmente. Foram realizados dois experimentos. No primeiro (experimento 1), para verificar a infecção vertical, um camundongo macho infectado cobriu uma fêmea e os filhotes foram testados. No segundo (experimento 2), para avaliar a infecção horizontal, camundongos de 21 dias de idade inoculados com PCV2 foram alocados com não infectados (caontactantes) e, posteriormente, os contactantes foram testados para PCV2. No experimento 1, após o período de gestação, a fêmea pariu 10 camundongos dos quais 60 % (6/10) foram positivos para o agente. No experimento 2, tanto animais inoculados quanto os contactantes, não apresentaram alterações clinicas e lesões macroscópicas de infecção de PCV2, mas o DNA viral foi recuperado em quatro dos cinco animais do grupo contactante. A detecção de DNA viral em filhotes de fêmeas primo-infectadas e em camundongo que tiveram contato com camundongo inoculados demonstrou que PCV2 pode ser transmitido vertical e horizontalmente. Esses resultados confirmam a importância dos roedores na manutenção e disseminação de PCV2 em granjas de suínos.

Descrição de transmissão horizontal e vertical de Porcine circovirus 2b (PCV2b) em camundongos (CH3/Rockfeller) inoculados experimentalmente / Description of horizontal and vertical transmission in mice PCV2b (CH3 / Rockefeller) experimentally inoculated

The studies of mice susceptibility to PCV2 infection are still controversial, despite the importance of PCV2 infection in pigs. Therefore, the aim of this study is to verify the occurrence of horizontal and vertical transmission of PCV2b in mice experimentally infected. Two experiments were performed. In experiment 1 an infected male mice covered a female to verify vertical infection. The pups were tested to detected viral DNA. In experiment 2 the 21 days of age mice were inoculated with PCV2 and allocated with uninfected, i.e. contactantes, to evaluate the horizontal infection. Subsequently, the contactants and inoculated mice were tested for PCV2 DNA. The samples collected from both experiments had their DNA extracted and were further submitted to polymerase chain reaction (PCR). In experiment 1, after the gestation period, the female farrowed 10 mices of which 60% (6/10) were positive for the agent. In experiment 2, both the inoculated and the contacts animals showed no clinical changes and gross lesions of PCV2 infection, but viral DNA was recovered in four of the five animals of the contactant group. The detection of viral DNA in the offspring of the primo-infected females and in the mice that had contact with inoculated mice demonstrated that PCV2 can be transmitted vertically and horizontally.(AU)

Apesar da importância da infecção de PCV2 em suínos, os estudos de susceptibilidade de camundongos para a infecção por PCV2, ainda, são controversos. Portanto, o objetivo do presente estudo é verificar a ocorrência de transmissão horizontal e vertical de PCV2b em camundongos infectados experimentalmente. Foram realizados dois experimentos. No primeiro (experimento 1), para verificar a infecção vertical, um camundongo macho infectado cobriu uma fêmea e os filhotes foram testados. No segundo (experimento 2), para avaliar a infecção horizontal, camundongos de 21 dias de idade inoculados com PCV2 foram alocados com não infectados (caontactantes) e, posteriormente, os contactantes foram testados para PCV2. No experimento 1, após o período de gestação, a fêmea pariu 10 camundongos dos quais 60 % (6/10) foram positivos para o agente. No experimento 2, tanto animais inoculados quanto os contactantes, não apresentaram alterações clinicas e lesões macroscópicas de infecção de PCV2, mas o DNA viral foi recuperado em quatro dos cinco animais do grupo contactante. A detecção de DNA viral em filhotes de fêmeas primo-infectadas e em camundongo que tiveram contato com camundongo inoculados demonstrou que PCV2 pode ser transmitido vertical e horizontalmente. Esses resultados confirmam a importância dos roedores na manutenção e disseminação de PCV2 em granjas de suínos.(AU)

Obtenção de animais negativos para Circovírus suíno 2 oriundos de granjas positivas: estratégia de manejo / Obtention of Porcine circovirus 2-negative pigs from PCV2-positive herds: strategy of handling

O objetivo do trabalho é descrever uma estratégia para a obtenção de animais negativos para o PCV2 oriundos de uma granja positiva para este vírus. Dezesseis leitões foram obtidos de fêmeas que tiveram os títulos de IgG anti-PCV2 e o DNA viral testados durante a gestação. Esses leitões, aos sete e dez dias de idade, foram transferidos para a unidade de pesquisa. Durante o período de 7 e 10 aos 49 e 52 dias de idade, amostras de soro, suabes nasal e fecal foram coletadas, a cada sete dias. Após esse período, três animais permaneceram na unidade de pesquisa e foram acompanhados dos 49 aos 114 dias de idade, com coletas realizadas a cada 28 dias. Não houve diferença significativa (p = 0,317) de viremia entre marrãs (n = 6) e porcas (n = 10). Com relação aos níveis de IgG, observou-se diferença significativa (p = 0,0213) entre porcas e marrãs. Os leitões (n = 16), obtidos de duas fêmeas, foram transferidos para a unidade de pesquisa. Os animais entre 7 e 10 dias e aos 49 e 52 dias de idade apresentaram queda de IgG e ausência de IgM anti-PCV2; e as amostras de soro, suabe nasal e fecal foram negativos para o DNA de PCV2. Após os 49 dias, nos três animais mantidos isolados, a detecção de IgG, IgM e DNA para PCV2 permaneceu negativa. Concluindo, a estratégia de manejo utilizada permitiu obter suínos negativos para PCV2 oriundo de granjas positivas para o agente

The present study describes a strategy to obtaining PCV2-negative animals from a PCV2-positive herd. Sixteen piglets were selected from females that had their IgG anti-PCV2 and viral circulation followed during pregnancy. These 7-days old piglets were transferred to the research unit. During the period from 7 to 49 days of age, serum, nasal and fecal swabs were collected every seven days. After this period, three animals remained in the research unit and were followed from 49 to 114 days of age, with samples taken each 28 days. No difference (p = 0.317) in viremia between gilts (n = 6) and sows (n = 10) were observed. Regarding the IgG levels, a significant difference (p = 0.0213) were found between gilts and sows. The piglets (n = 16), obtained from the two females, were transferred to the research unit. The animals between 7 and 10 and 49 and 52 days of age showed a decreased of the IgG title and absence of IgM; the serum and fecal and nasal swabs were negative for PCV2 DNA. After 49 days of age, the three remained animals negative for IgG, IgM and viral DNA for PCV2. In conclusion, the strategy of handling used herein allowed the obtention of PCV-2 negative pigs from PCV2-positive herds.