Stimulation of c-Src by prolactin is independent of Jak2.

Interaction of prolactin (PRL) with its receptor (PRLR) leads to activation of Jak and Src family tyrosine kinases. The PRL/growth hormone/cytokine receptor family conserves a proline-rich sequence in the cytoplasmic juxtamembrane region (Box 1) required for association and subsequent activation of Jaks. In the present work, we studied the mechanisms underlying c-Src kinase activation by PRL and the role that Jak2 plays in this process. PRL addition to chicken embryo fibroblasts (CEF) expressing the rat PRLR long form resulted in activation of c-Src and Jak2 and in tyrosine phosphorylation of the receptor. Receptor phosphorylation was due to associated Jak2, since in cells expressing either a Box 1 mutated PRLR (PRLR(4P-A)), which is unable to interact with Jak2, or a kinase-domain-deleted Jak2 (Jak2Deltak), PRL did not stimulate receptor phosphorylation. Interestingly, addition of PRL to cells expressing PRLR(4P-A) resulted in an activation of c-Src equivalent to that observed with the wild-type receptor. These findings indicate that PRL-mediated stimulation of c-Src was independent of Jak2 activation and of receptor phosphorylation. Our results suggest that PRL-activated Src could send signals to downstream cellular targets independently of Jak2.

Influence of prolactin on the differentiation of mouse B-lymphoid precursors.

Development and activation of immune cells are submitted to hormonal influences, as illustrated by the roles of corticosteroids in thymus, pregnancy-related estrogens in B-cell development, or prolactin (PRL) on T-cell generation and function. We have analyzed the putative role of PRL in B lymphopoiesis and differentiation. We chose as an experimental model the interleukin (IL)-3 dependent BaF-3 pro-B cell line, which was transfected with the rat long form of the PRL receptor (PRL-R) and transferred from IL-3- to PRL-enriched media. When stimulated with PRL, the PRL-R transfectants underwent some changes characteristic of B-cell differentiation: (a) IL-2R alpha chain became positively controlled by PRL; (b) antiapoptotic Bcl-2 protein was induced by PRL in a dose-dependent manner; and (c) transcription of the pre-B cell receptor encoding the lambda5 gene was strongly up-regulated. We attempted to evaluate the differentiation-promoting activity of PRL in more physiological conditions, and the presence of PRL-R in bone marrow B-cell precursors was revealed. Furthermore, PRL promoted significant expansions of defined B-lineage cell populations in short-term bone marrow cell cultures. These findings suggest that PRL, in collaboration with other cytokines and hormonal influences, modulates B-cell development.

[Expression of interferon alpha receptors in cell lines from human tumors. Relationship with the antiproliferative effect]. / Expresión de receptores para el interferón alfa en líneas celulares procedentes de tumores humanos. Relación con el efecto antiproliferativo.

Alpha Interferon (IFN) membrane receptor expression was studied in four human tumor cell lines from several origins: Burkitt's lymphoma (Daudi cells), cervix adenocarcinoma (HeLa cells), larynx carcinoma (HEp-2 cells) and a grade III-IV glioblastoma (GL-5 cells). The number of receptors per cell expressed in each case did not correlate with the sensitivity of the cytostatic effect of IFN alpha-2b. However, the Scatchard analysis of the affinity of the IFN-receptor complex did correlate with this effect. Daudi cells, which expressed 1927 receptors/cells with a high affinity (Kd = 3.30 x 10(-10) M) were the most sensitive to the antiproliferative effect. Growth inhibition was 30% with only 1.6pg/ml of IFN. HeLa cells expressed a mixture of high (Kd = 3.36 x 10(-10) M) and low (Kd = 3.21 x 10(-9) M) affinity binding sites and were also sensitive to the antiproliferative effect but less than Daudi. HEp-2 and GL-5 cells, on the contrary, were very little sensitive to the antiproliferative effect of IFN and only expressed low affinity binding sites (Kd = 1.20 x 10(-8) M and Kd = 8.33 x 10(-9) M) respectively. On the other hand, IFN alpha-2b binding assays to peripheral blood lymphocytes from 8 healthy individuals were also carried out as normal cells for comparison. The values obtained were 433 +/- 166 receptors per cell and Kd = 3.68 2.66 x 10(-10) M.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)

Efectos de los interferpnes alfa y gamma sobre células tumorales procedentes de gliomas humanos / Effect of alpha and gamma interferons on human glyoma cells

Tres cultivos celulares primarios procedentes de explantos de gliomas humanos malignos fueron caracterizados fenotípicamente en cuanto a su morfología, velocidad de crecimiento, capacidad tumorigénica en ratones desnudos y a sus sensibilidades al efecto citostático de los interferones * natural y gamma natural, usando un sistema de clonogenicidad en medio semisólido (Human Tumor Stem Cell Assay). Según el diagnóstico patológico, los cultivos celulares obtenidos resultaron ser un astrocitoma grado III (GL-3) y dos glioblastomas multiformes de grado III-IV (GL-2 y GL-5) con un tiempo de doblaje de 37,37 y 36,6 horas, respectivamente. Los tres cultivos tuvieron capacidad de producir tumores palpables en ratones desnudos. Sin embargo, los tumores de glioblastoma aparecieron a los 6 días después de la inoculación y el tumor de astrocitoma apareció a los 27 días, lo cual puede deberse a un grado mayor de indiferenciación de las células de glioblastoma, Los tres cultivos produjeron colonias en agar semosólido, denotando la pérdida de la dependencia de anclaje para su crecimiento. El mayor efecto en la inhibición del crecimiento de colonias de células tumorales fue producido por la preparación de interferón gamma de origen natural y de una manera dosis dependiente. Por el contrario, los tres cultivos celulares primarios mostraron una sensibilidad limitada a los interferones tipo *, que se manifestó de forma constante y que no excedió del 50

de inhibición de las colonias de células tumorales en las condiciones seleccionadas. Los resultados indicaron la presencia de células malignas en los cultivos obtenidos, lo cual es un aspecto importante a considerar en los ensayos de sensibilidad al efecto citostático realizados en el trabajo, y por otro lado, estos resultados pudieran sugerir la posibilidad del empleo de la preparación de interferón gamma natural en estos casos, y no así de los interferones de tipo *, como fue corroborado posteriormente (AU)

Efectos de los interferpnes alfa y gamma sobre células tumorales procedentes de gliomas humanos / Effect of alpha and gamma interferons on human glyoma cells

Tres cultivos celulares primarios procedentes de explantos de gliomas humanos malignos fueron caracterizados fenotípicamente en cuanto a su morfología, velocidad de crecimiento, capacidad tumorigénica en ratones desnudos y a sus sensibilidades al efecto citostático de los interferones * natural y gamma natural, usando un sistema de clonogenicidad en medio semisólido (Human Tumor Stem Cell Assay). Según el diagnóstico patológico, los cultivos celulares obtenidos resultaron ser un astrocitoma grado III (GL-3) y dos glioblastomas multiformes de grado III-IV (GL-2 y GL-5) con un tiempo de doblaje de 37,37 y 36,6 horas, respectivamente. Los tres cultivos tuvieron capacidad de producir tumores palpables en ratones desnudos. Sin embargo, los tumores de glioblastoma aparecieron a los 6 días después de la inoculación y el tumor de astrocitoma apareció a los 27 días, lo cual puede deberse a un grado mayor de indiferenciación de las células de glioblastoma, Los tres cultivos produjeron colonias en agar semosólido, denotando la pérdida de la dependencia de anclaje para su crecimiento. El mayor efecto en la inhibición del crecimiento de colonias de células tumorales fue producido por la preparación de interferón gamma de origen natural y de una manera dosis dependiente. Por el contrario, los tres cultivos celulares primarios mostraron una sensibilidad limitada a los interferones tipo *, que se manifestó de forma constante y que no excedió del 50 % de inhibición de las colonias de células tumorales en las condiciones seleccionadas. Los resultados indicaron la presencia de células malignas en los cultivos obtenidos, lo cual es un aspecto importante a considerar en los ensayos de sensibilidad al efecto citostático realizados en el trabajo, y por otro lado, estos resultados pudieran sugerir la posibilidad del empleo de la preparación de interferón gamma natural en estos casos, y no así de los interferones de tipo *, como fue corroborado posteriormente