RESUMEN
Aspergillus ochraceus is an ochratoxin-producing fungus which contaminates coffee. In this study the antifungal effect of the yeast Hanseniaspora opuntiae on three Aspergillus ochraceus strains (IOC 4417, IOC 4462, Ao 14) was evaluated in vitro and on coffee fruits. H. opuntiae (106 and 107 cells mL-1) reduced in vitro fungal growth from 82% to 87%, when co-cultivated with A. ochraceus. The yeast cell free supernatant (CFS) inhibited conidial germination from 76.5% to 92.5%, and hyphal growth from 54% to 78%. The yeast (107 and 109 cells mL-1) applied on coffee fruits delayed fruit decay by A. ochraceus (IOC 4417 and Ao 14) until the 9th day, and was significantly different (p < 0.05) from the controls. Furthermore, the ultrastructure of the yeast-fungus interaction on the coffee fruit surface showed yeast attachment to A. ochraceus hyphae, and morphological alterations in fungal structures, with hyphal abnormalities, such as tortuous hyphae with irregular, non-uniform surface compared to the control without yeast. H. opuntiae showed efficacy as biocontrol agent and, to the best of our knowledge, this is the first study on the antifungal activity of H. opuntiae against A. ochraceus on coffee fruits Nevertheless, application of H. opuntiae to the crop in the field requires further studies.
Asunto(s)
Aspergillus ochraceus , Café , Café/metabolismo , Frutas/microbiología , Antifúngicos/farmacologíaRESUMEN
Some species belonging to the genus Aspergillus are potential producers of ochratoxin A (OA), a mycotoxin with nephrotoxic, immunosuppressive, teratogenic and carcinogenic effects. The aim of the present study was to identify the species of Aspergillus that contaminate the inside of coffee beans collected in the stage of maturation and drying, from 16 producing areas located in the northern region of the State of Paraná, in the South of Brazil. A total of 108 isolates of Aspergillus spp. was identified at the species level, by sequencing the internal transcribed spacer (ITS1-5.8S-ITS2) of ribosomal DNA (rDNA). The results revealed the presence of potentially ochratoxigenic species in 82% of the geographic regions studied, among which Aspergillus niger was the species most frequently detected, followed by A. ochraceus and A. carbonarius. The presence of A. carbonarius in immature coffee fruits harvested from trees is reported for the first time.
Algumas espécies pertencentes ao gênero Aspergillus possuem potencial para produção de Ocratoxina A (OA), uma micotoxina de efeitos nefrotóxicos, imunossupressivos, teratogênicos e carcinogênicos. Com o objetivo de identificar as espécies de Aspergillus que contaminam o interior de grãos de café, foram coletadas amostras em diferentes estádios de maturação do produto, em 16 propriedades produtoras do norte do estado do Paraná. Um total de 108 isolados de Aspergillus spp. foram identificados ao nível de espécie, pelo sequenciamento dos espaços internos transcritos (ITS1-5,8S-ITS2) do DNA ribossomal (rDNA). Os resultados revelaram a presença de espécies potencialmente ocratoxigênicas em 82% das regiões analisadas, sendo dentre estas, Aspergillus niger a espécie mais freqüentemente detectada,seguida por A. ochraceus, e A. carbonarius. É relatada pela primeira vez a presença de A. carbonarius em frutos de café coletados na árvore.
RESUMEN
Some species belonging to the genus Aspergillus are potential producers of ochratoxin A (OA), a mycotoxin with nephrotoxic, immunosuppressive, teratogenic and carcinogenic effects. The aim of the present study was to identify the species of Aspergillus that contaminate the inside of coffee beans collected in the stage of maturation and drying, from 16 producing areas located in the northern region of the State of Paraná, in the South of Brazil. A total of 108 isolates of Aspergillus spp. was identified at the species level, by sequencing the internal transcribed spacer (ITS1-5.8S-ITS2) of ribosomal DNA (rDNA). The results revealed the presence of potentially ochratoxigenic species in 82% of the geographic regions studied, among which Aspergillus niger was the species most frequently detected, followed by A. ochraceus and A. carbonarius. The presence of A. carbonarius in immature coffee fruits harvested from trees is reported for the first time.
Algumas espécies pertencentes ao gênero Aspergillus possuem potencial para produção de Ocratoxina A (OA), uma micotoxina de efeitos nefrotóxicos, imunossupressivos, teratogênicos e carcinogênicos. Com o objetivo de identificar as espécies de Aspergillus que contaminam o interior de grãos de café, foram coletadas amostras em diferentes estádios de maturação do produto, em 16 propriedades produtoras do norte do estado do Paraná. Um total de 108 isolados de Aspergillus spp. foram identificados ao nível de espécie, pelo sequenciamento dos espaços internos transcritos (ITS1-5,8S-ITS2) do DNA ribossomal (rDNA). Os resultados revelaram a presença de espécies potencialmente ocratoxigênicas em 82% das regiões analisadas, sendo dentre estas, Aspergillus niger a espécie mais freqüentemente detectada,seguida por A. ochraceus, e A. carbonarius. É relatada pela primeira vez a presença de A. carbonarius em frutos de café coletados na árvore.
RESUMEN
ITS and RAPD analyses were used to investigate molecular variations within samples of Paecilomyces isolates and to resolve five morphologically atypical isolates resembling P. fumosorosus, obtained from whitefly in Northern Paraná State. The ITS4-ITS5 amplicon was 700 base pairs (bp) long in all isolates. The five isolates of Paecilomyces not assigned to species produced restriction profiles identical to all the reference strains of P. fumosoroseus. The extent of fingerprint variability observed by RAPD was sufficient to discriminate all the isolates. The genetic similarity among unidentified isolates and strains of P. fumosoroseus was even higher than that observed among reference strains of this species, allowing us to conclude that isolates CNPso-P77, CNPso-P78, CNPso-P80, CNPso-P85 and CNPso-P91 are P. fumosoroseus.
As análises de RAPD (Polimorfismo de DNA Amplificado ao Acaso) e ITS (Sequências Internas Transcritas) foram utilizadas para investigar a variabilidade molecular entre isolados de Paecilomyces e para identificar cinco isolados morfologicamente atípicos, obtidos a partir de mosca branca no Norte do Estado do Paraná, que possuíam alguma semelhança com P. fumosoroseus. O produto da amplificação com os primers ITS4 e ITS5 apresentou 700 pares de bases para todos os isolados investigados. Os cinco isolados não identificados deram origem a padrões de restrição idênticos a todas as linhagens de P. fumosoroseus utilizadas como referência. A variabilidade observada nos perfis de RAPD foi suficiente para discriminar todos os isolados. A similaridade genética entre os isolados não identificados e as linhagens de P. fumosoroseus foi maior do que aquela observada entre as linhagens referência desta espécie. Este fato permitiu concluir que os isolados CNPso-P77, CNPso-P78, CNPso-P80, CNPso-P85 and CNPso-P91 pertencem à espécie P. fumosoroseus.
RESUMEN
ITS and RAPD analyses were used to investigate molecular variations within samples of Paecilomyces isolates and to resolve five morphologically atypical isolates resembling P. fumosorosus, obtained from whitefly in Northern Paraná State. The ITS4-ITS5 amplicon was 700 base pairs (bp) long in all isolates. The five isolates of Paecilomyces not assigned to species produced restriction profiles identical to all the reference strains of P. fumosoroseus. The extent of fingerprint variability observed by RAPD was sufficient to discriminate all the isolates. The genetic similarity among unidentified isolates and strains of P. fumosoroseus was even higher than that observed among reference strains of this species, allowing us to conclude that isolates CNPso-P77, CNPso-P78, CNPso-P80, CNPso-P85 and CNPso-P91 are P. fumosoroseus.
As análises de RAPD (Polimorfismo de DNA Amplificado ao Acaso) e ITS (Sequências Internas Transcritas) foram utilizadas para investigar a variabilidade molecular entre isolados de Paecilomyces e para identificar cinco isolados morfologicamente atípicos, obtidos a partir de mosca branca no Norte do Estado do Paraná, que possuíam alguma semelhança com P. fumosoroseus. O produto da amplificação com os primers ITS4 e ITS5 apresentou 700 pares de bases para todos os isolados investigados. Os cinco isolados não identificados deram origem a padrões de restrição idênticos a todas as linhagens de P. fumosoroseus utilizadas como referência. A variabilidade observada nos perfis de RAPD foi suficiente para discriminar todos os isolados. A similaridade genética entre os isolados não identificados e as linhagens de P. fumosoroseus foi maior do que aquela observada entre as linhagens referência desta espécie. Este fato permitiu concluir que os isolados CNPso-P77, CNPso-P78, CNPso-P80, CNPso-P85 and CNPso-P91 pertencem à espécie P. fumosoroseus.