Asunto(s)
Proteínas de Neoplasias/antagonistas & inhibidores , Inhibidores de Serina Proteinasa/farmacología , Serpinas/fisiología , Activador de Plasminógeno de Tipo Uroquinasa/antagonistas & inhibidores , Amidinas/síntesis química , Amidinas/farmacología , Amilorida/química , Amilorida/farmacología , Animales , Benzamidinas/química , Benzamidinas/farmacología , Guanidinas/química , Guanidinas/farmacología , Ratones , Ratones Noqueados , Modelos Biológicos , Estructura Molecular , Invasividad Neoplásica , Proteínas de Neoplasias/metabolismo , Fenotipo , Inhibidor 1 de Activador Plasminogénico/deficiencia , Inhibidor 1 de Activador Plasminogénico/genética , Inhibidor 1 de Activador Plasminogénico/farmacología , Inhibidor 1 de Activador Plasminogénico/fisiología , Inhibidor 2 de Activador Plasminogénico/deficiencia , Inhibidor 2 de Activador Plasminogénico/genética , Inhibidor 2 de Activador Plasminogénico/farmacología , Inhibidor 2 de Activador Plasminogénico/fisiología , Receptores de Superficie Celular/efectos de los fármacos , Receptores de Superficie Celular/metabolismo , Receptores del Activador de Plasminógeno Tipo Uroquinasa , Inhibidores de Serina Proteinasa/síntesis química , Relación Estructura-Actividad , Tiofenos/síntesis química , Tiofenos/farmacologíaRESUMEN
We have developed a protocol to isolate a gene from which only limited (amino-acid) sequence information is available. It involves two PCR amplifications using one constant primer and a set of nested primers and subsequent crosswise Southern hybridization. The amplified DNA giving a signal in both lanes is further processed for use in gene bank screening by applying standard procedures. In this way the structural gene for a thiol protease, BLH1, the homologue of the bleomycin A (a cancerostatic drug) resistance gene of rabbit (and man), was isolated from yeast genomic DNA.
Asunto(s)
Southern Blotting , Sondas de ADN/genética , Reacción en Cadena de la Polimerasa/métodos , Levaduras/genética , Secuencia de Aminoácidos , Secuencia de Bases , Clonación Molecular/métodos , Biblioteca de Genes , Datos de Secuencia MolecularRESUMEN
We have purified bleomycin hydrolase from yeast (molecular mass 55,000 Da). Using protein sequence-derived degenerate oligonucleotide primers and amplification by polymerase chain reaction, the yeast gene BLH1 was isolated and characterized. The deduced amino acid sequence (483 amino acids) exhibits surprisingly high homology to vertebrate bleomycin hydrolase (43% identical residues and 22% conserved exchanges). It contains three blocks of sequences found conserved in other members of the thiol proteinase family and thought to be associated with the catalytic centre. BLH1 is non-essential under all growth conditions tested. However, in the presence of 3.5 mg bleomycin/ml medium wild-type cells have a slight growth advantage compared to blh1 mutant cells.
Asunto(s)
Cisteína Endopeptidasas/genética , Genes Fúngicos , Péptidos/genética , Secuencia de Aminoácidos , Animales , Secuencia de Bases , Cisteína Endopeptidasas/aislamiento & purificación , Hígado/enzimología , Datos de Secuencia Molecular , Péptidos/aislamiento & purificación , Reacción en Cadena de la Polimerasa , Conejos , Homología de Secuencia de Ácido NucleicoRESUMEN
We present the complete cDNA and derived amino acid sequence of the non-collagenous domain NC1 of alpha 2(IV). Comparison with the corresponding NC1 domain of alpha 1(IV) reveals a high degree of homology at the protein level, in contrast to the barely homologous triple-helical sequences of both chains.
