Evaluation of diagnostic tests' sensitivity, specificity and predictive values in bovine carcasses showing brucellosis suggestive lesions, condemned by Brazilian Federal Meat Inspection Service in the Amazon Region of Brazil.

Cervical bursitis is a suggestive lesion of bovine brucellosis. Diagnostic sensitivity and specificity of two brucellosis serological tests, Rose Bengal (RB) and serum agglutination test with 2-mercaptoethanol (SAT/2-ME), and of isolation and identification (bacteriology) were evaluated through Bayesian latent class analysis (BLCA). A total of 165 paired serum and cervical bursitis samples detected at inspection by Brazilian federal meat inspection services were analyzed. The best model fit to the data occurred when accounting for the conditional dependence between serological tests. According to this model, RB and SAT/2-ME had almost the same sensitivity, 0.960 [0.903 - 0.992] and 0.963 [0.906 - 0.994] with 95 % Credible Interval (95 %CrI), respectively. Specificities were 0.9068 [0.562 - 0.997] and 0.875 [0.546 - 0.990] for RB and SAT/2-ME, respectively, also with 95 %CrI. Bacteriology had lower sensitivity than serological tests, 0.594 (95 %CrI: [0.525 - 0.794]) and the highest specificity of all evaluated tests, 0.992 (95 %CrI: [0.961-1.00]). Prevalence of infected animals was 0.829 (95 %CrI: [0.700-0.900]). BLCA showed that both RB and SAT/2-ME fitted to the purpose of initial screening the brucellosis suspect in carcasses with cervical bursitis in a reliable way. The results of RB or SAT/2-ME can guide the sanitary actions for brucellosis control and help the implementation of a risk-based surveillance system in the meat production chain. This strategy is especially true in remote areas with large beef cattle herds, raised extensively, where in vivo tests are rarely performed due to logistic and management constraints, as in the Northern region of Brazil.

Comparative study of Mycobacterium bovis primary isolation methods.

For the definitive diagnosis of bovine tuberculosis, isolation of the etiologic agent is required. However, there is no consensus on the best methodology for isolation of Mycobacterium bovis in Brazil. This study evaluated the most used decontaminants and culture media in the country, in order to identify the best combination for the Brazilian samples. Three decontaminants - 2% sodium hydroxide (w/v), 0.75% hexadecylpiridinium chloride (w/v) and 5% sulphuric acid (v/v) and four culture media - 7H11 Middlebrook with additives and OADC supplement "A" (7H11 A), the same media with another supplement trademark (7H11 B), tuberculosis blood agar (B83) and Stonebrink's medium were compared. Regarding the isolation, there were no significant differences between the decontaminants and media combinations, except 7H11A combined to any decontaminant. However, the mean colonies score was significantly greater when the samples were decontaminated with 5% sulphuric acid and inoculated in 7H11 B or SB, without significant difference between them, although colonies appeared earlier on 7H11B than on SB. The trademark of OADC supplement influenced the isolation rate and the number of isolated colonies in Middlebrook 7H11. An incubation time of four weeks was required to detect all positive samples in 7H11 B after decontamination with 5% sulphuric acid but there was an increase in the number of colonies until the sixth week of incubation. Overall, the best strategy for the primary isolation of M. bovis from Brazilian samples was the decontamination with 5% sulphuric acid (final concentration) and inoculation in Middlebrook 7H11 medium formulated with OADC supplement "B".

COMPARAÇÃO ENTRE AS PROVAS DE 2-MERCAPTOETANOL E DE FIXAÇÃO DE COMPLEMENTO PARA O DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO DA BRUCELOSE BOVINA EM ANIMAIS COM DIFERENTES HISTÓRICOS VACINAIS

Foi realizada comparação entre os testes de 2-mercaptoetanol e fixação de complemento pelos testes kappa e qui-quadrado de McNemmar a partir dos resultados obtidos em 194 amostras de soro sanguíneo bovino enviadas ao LANAGRO/MG para confirmação do diagnóstico da brucelose. Obtiveram-se 87,76% de resultados concordantes, com kappa igual a 0,75 (p 0,05) variando de 0,655 a 0,843 (95% de confiabilidade). Não foi observada discordância estatisticamente significativa entre as provas ao teste de qui-quadrado de McNemmar. Os resultados obtidos contribuem nas recomendações do PNCEBT quanto ao uso destes dois testes, no entanto, fica clara a necessidade de uma avaliação mais profunda dos mesmos em função dos resultados discordantes encontrados notadamente entre os soros de títulos mais baixos. Recomenda-se a construção de um banco de soros de referência que permitiria a validação dos mesmos de modo a reduzir a possibilidade de falso-negativos, mais danosos ao PNCEBT.

Validação interlaboratorial do teste de polarização fluorescente para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina

The purpose of this research was the interlaboratorial validation of the polarization fluorescence assay (PFA) for the serodiagnosis of bovine brucellosis, verifying the relative sensitivity, the relative specificity and the reproducibility of the test in four Brazilian laboratories. Serum samples from 1,389 bovines were selected and submitted to the rose Bengal (RBT) and 2-mercaptoethanol tests in one of the laboratories. The same samples were tested by the complement fixation (CFT) test and by the PFA in the four laboratories participating of the research. The reference population (golden standard) used to evaluate the PFA was the combination of the results of RBT, CFT and 2-ME. TG-ROC analysis was used to obtain the cut-off that provided the best combination of sensitivity and specificity. The agreement between laboratories was obtained by the kappa statistic and Pearson correlation coefficient (r). The PFA cut-off values were from 85.2 to 93.6. The sensitivity of the PFA assay varied from 91.7% to 97.3%, and the specificity values varied from 82.6% to 98.3%. When comparing PFA results from the four laboratories, the kappa values was between 0.69 and 0.95, which indicates, in most situations, excellent reproducibility, and the correlation coefficient varied from 0.76 to 0.99. The results showed that the PFA had a good performance, with high sensitivity and specificity. Compared to the conventional tests, the PFA has the advantages of being easy and quick to perform, and it is not prone to the occurrence of prozone, as the CFT or the 2-ME, nor to the occurrence of anti-complementary effect, as the CFT.

Esta investigação teve por objetivo validar o teste de polarização fluorescente (TPF) para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina, determinando a sensibilidade (SE) e a especificidade relativas (SP) e verificando a reprodutibilidade do teste em quatro laboratórios no Brasil. Foram selecionadas 1.389 amostras de soro sanguíneo, as quais foram inicialmente submetidas aos testes do antígeno acidificado tamponado (AAT) e mercaptoetanol (2-ME). As mesmas amostras foram submetidas à reação de fixação de complemento (RFC) e ao TPF. Para a avaliação do TPF, foi adotada a combinação dos resultados do AAT, da RFC e do 2-ME, utilizados como população de referência (padrão-ouro). Para a determinação do ponto de corte do TPF que proporciona a melhor combinação de sensibilidade e especificidade, foi usada a análise TG-ROC. A concordância entre os resultados dos quatro laboratórios foi determinada com base no indicador kappa e no coeficiente de correlação de Pearson. Os pontos de corte do TPF situaram-se entre 85,2 e 93,6 mP, conforme o laboratório. A sensibilidade variou de 91,7 a 97,3%, e a especificidade situou-se na faixa de 82,6 a 98,3%. Na comparação entre os resultados do TPF dos quatro laboratórios, o indicador kappa ficou entre 0,69 e 0,95, o que indica, na maioria das situações, reprodutibilidade excelente, e o coeficiente de correlação variou entre 0,76 e 0,99. Os resultados indicaram que o TPF apresentou bom desempenho, na maioria das situações, com sensibilidade e especificidade elevadas. Em comparação com os testes convencionais, o TPF apresenta as vantagens de ser de execução mais rápida e mais fácil e não estar sujeito à ocorrência de prozona, como a RFC e o 2-ME, nem de atividade anticomplementar, como a RFC.

Validação interlaboratorial do teste de polarização fluorescente para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina

The purpose of this research was the interlaboratorial validation of the polarization fluorescence assay (PFA) for the serodiagnosis of bovine brucellosis, verifying the relative sensitivity, the relative specificity and the reproducibility of the test in four Brazilian laboratories. Serum samples from 1,389 bovines were selected and submitted to the rose Bengal (RBT) and 2-mercaptoethanol tests in one of the laboratories. The same samples were tested by the complement fixation (CFT) test and by the PFA in the four laboratories participating of the research. The reference population (golden standard) used to evaluate the PFA was the combination of the results of RBT, CFT and 2-ME. TG-ROC analysis was used to obtain the cut-off that provided the best combination of sensitivity and specificity. The agreement between laboratories was obtained by the kappa statistic and Pearson correlation coefficient (r). The PFA cut-off values were from 85.2 to 93.6. The sensitivity of the PFA assay varied from 91.7% to 97.3%, and the specificity values varied from 82.6% to 98.3%. When comparing PFA results from the four laboratories, the kappa values was between 0.69 and 0.95, which indicates, in most situations, excellent reproducibility, and the correlation coefficient varied from 0.76 to 0.99. The results showed that the PFA had a good performance, with high sensitivity and specificity. Compared to the conventional tests, the PFA has the advantages of being easy and quick to perform, and it is not prone to the occurrence of prozone, as the CFT or the 2-ME, nor to the occurrence of anti-complementary effect, as the CFT.

Esta investigação teve por objetivo validar o teste de polarização fluorescente (TPF) para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina, determinando a sensibilidade (SE) e a especificidade relativas (SP) e verificando a reprodutibilidade do teste em quatro laboratórios no Brasil. Foram selecionadas 1.389 amostras de soro sanguíneo, as quais foram inicialmente submetidas aos testes do antígeno acidificado tamponado (AAT) e mercaptoetanol (2-ME). As mesmas amostras foram submetidas à reação de fixação de complemento (RFC) e ao TPF. Para a avaliação do TPF, foi adotada a combinação dos resultados do AAT, da RFC e do 2-ME, utilizados como população de referência (padrão-ouro). Para a determinação do ponto de corte do TPF que proporciona a melhor combinação de sensibilidade e especificidade, foi usada a análise TG-ROC. A concordância entre os resultados dos quatro laboratórios foi determinada com base no indicador kappa e no coeficiente de correlação de Pearson. Os pontos de corte do TPF situaram-se entre 85,2 e 93,6 mP, conforme o laboratório. A sensibilidade variou de 91,7 a 97,3%, e a especificidade situou-se na faixa de 82,6 a 98,3%. Na comparação entre os resultados do TPF dos quatro laboratórios, o indicador kappa ficou entre 0,69 e 0,95, o que indica, na maioria das situações, reprodutibilidade excelente, e o coeficiente de correlação variou entre 0,76 e 0,99. Os resultados indicaram que o TPF apresentou bom desempenho, na maioria das situações, com sensibilidade e especificidade elevadas. Em comparação com os testes convencionais, o TPF apresenta as vantagens de ser de execução mais rápida e mais fácil e não estar sujeito à ocorrência de prozona, como a RFC e o 2-ME, nem de atividade anticomplementar, como a RFC.

Validação interlaboratorial do teste de polarização fluorescente para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina

The purpose of this research was the interlaboratorial validation of the polarization fluorescence assay (PFA) for the serodiagnosis of bovine brucellosis, verifying the relative sensitivity, the relative specificity and the reproducibility of the test in four Brazilian laboratories. Serum samples from 1,389 bovines were selected and submitted to the rose Bengal (RBT) and 2-mercaptoethanol tests in one of the laboratories. The same samples were tested by the complement fixation (CFT) test and by the PFA in the four laboratories participating of the research. The reference population (golden standard) used to evaluate the PFA was the combination of the results of RBT, CFT and 2-ME. TG-ROC analysis was used to obtain the cut-off that provided the best combination of sensitivity and specificity. The agreement between laboratories was obtained by the kappa statistic and Pearson correlation coefficient (r). The PFA cut-off values were from 85.2 to 93.6. The sensitivity of the PFA assay varied from 91.7% to 97.3%, and the specificity values varied from 82.6% to 98.3%. When comparing PFA results from the four laboratories, the kappa values was between 0.69 and 0.95, which indicates, in most situations, excellent reproducibility, and the correlation coefficient varied from 0.76 to 0.99. The results showed that the PFA had a good performance, with high sensitivity and specificity. Compared to the conventional tests, the PFA has the advantages of being easy and quick to perform, and it is not prone to the occurrence of prozone, as the CFT or the 2-ME, nor to the occurrence of anti-complementary effect, as the CFT.

Esta investigação teve por objetivo validar o teste de polarização fluorescente (TPF) para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina, determinando a sensibilidade (SE) e a especificidade relativas (SP) e verificando a reprodutibilidade do teste em quatro laboratórios no Brasil. Foram selecionadas 1.389 amostras de soro sanguíneo, as quais foram inicialmente submetidas aos testes do antígeno acidificado tamponado (AAT) e mercaptoetanol (2-ME). As mesmas amostras foram submetidas à reação de fixação de complemento (RFC) e ao TPF. Para a avaliação do TPF, foi adotada a combinação dos resultados do AAT, da RFC e do 2-ME, utilizados como população de referência (padrão-ouro). Para a determinação do ponto de corte do TPF que proporciona a melhor combinação de sensibilidade e especificidade, foi usada a análise TG-ROC. A concordância entre os resultados dos quatro laboratórios foi determinada com base no indicador kappa e no coeficiente de correlação de Pearson. Os pontos de corte do TPF situaram-se entre 85,2 e 93,6 mP, conforme o laboratório. A sensibilidade variou de 91,7 a 97,3%, e a especificidade situou-se na faixa de 82,6 a 98,3%. Na comparação entre os resultados do TPF dos quatro laboratórios, o indicador kappa ficou entre 0,69 e 0,95, o que indica, na maioria das situações, reprodutibilidade excelente, e o coeficiente de correlação variou entre 0,76 e 0,99. Os resultados indicaram que o TPF apresentou bom desempenho, na maioria das situações, com sensibilidade e especificidade elevadas. Em comparação com os testes convencionais, o TPF apresenta as vantagens de ser de execução mais rápida e mais fácil e não estar sujeito à ocorrência de prozona, como a RFC e o 2-ME, nem de atividade anticomplementar, como a RFC.

Bovine and human brucellosis diagnosed in county slaughterhouse of São Luis - MA, Brazil / Brucelose bovina e humana diagnosticada em matadouro municipal de São Luís - MA, Brasil

Brucellosis is an infectious and contagious disease caused by bacteria of the genus Brucella, infecting animals and humans, presenting a major economic and public health impact, especially in developing countries. In this context, the objectives were to diagnose anti-Brucella spp. aglutinins, isolate Brucella spp. in cattle, and to verify the frequency of soropositive workers, from a slaughthouse in São Luiz-MA. Samples of blood were collected to obtain the serum, as well as exsudate and fibrosed part of serous sacks. Blood samples from 59 workers from the slaughterhouse were also collected. These samples were analyzed through the tests of soroaglutination test (AAT) and 2-Mercaptoetanol (2-ME) and complement fixation. From the 419 cattle samples examined, 25 animals (5.97%) soropositives were found, from which 28.00% (7/25) had bursitis and the presence of Brucella spp. was confirmed by isolation. Of the human samples, six (10.17%) were positive in the test of 2-ME. The prevalence rate of anti-Brucella spp. aglutinins in cattle is above the national average and of the Northeast. The prevalence of infection in workers from the slaughterhouse in the county of São Luis could pose serious problems to public health, requiring the establishment of a Program of Sanitary Education for workers of the slaughterhouse.

A brucelose é uma doença infecto-contagiosa provocada por bactérias do gênero Brucella, que infectam animais e o homem, apresentando um grande impacto econômico e de saúde pública, sobretudo em países em desenvolvimento. Neste contexto objetivou-se diagnosticar aglutininas anti-Brucella sp., isolar Brucella sp. em bovinos, e verificar a freqüência de trabalhadores soropositivos, provenientes de um abatedouro municipal em São Luís - MA. Amostras de sangue foram colhidas, para obtenção do soro, bem como exsudato e parte fibrosada de bolsas serosas. Também foram colhidos sangue de 59 funcionários do abatedouro. Estas amostras foram analisadas através dos testes de Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e 2-Mercaptoetanol (2-ME) e Fixação de Complemento. Das 419 amostras bovinas examinadas, verificou-se que 25 animais (5,97%) foram soropositivos, dos quais, 28,00% (7/25) apresentaram bursite e a presença de Brucella sp. foi confirmada por isolamento bacteriano. Das amostras humanas, seis (10,17%) foram positivas, no teste de 2-ME. A taxa de prevalência de aglutinas anti-Brucella sp. em bovinos encontra-se acima da média nacional e do Nordeste. A prevalência da infecção em funcionários de abatedouros no Município de São Luís pode acarretar sérios problemas à saúde pública, necessitando a implantação de um Programa de Educação Sanitária para funcionários de abatedouros.

Bovine and human brucellosis diagnosed in county slaughterhouse of São Luis - MA, Brazil / Brucelose bovina e humana diagnosticada em matadouro municipal de São Luís - MA, Brasil

Brucellosis is an infectious and contagious disease caused by bacteria of the genus Brucella, infecting animals and humans, presenting a major economic and public health impact, especially in developing countries. In this context, the objectives were to diagnose anti-Brucella spp. aglutinins, isolate Brucella spp. in cattle, and to verify the frequency of soropositive workers, from a slaughthouse in São Luiz-MA. Samples of blood were collected to obtain the serum, as well as exsudate and fibrosed part of serous sacks. Blood samples from 59 workers from the slaughterhouse were also collected. These samples were analyzed through the tests of soroaglutination test (AAT) and 2-Mercaptoetanol (2-ME) and complement fixation. From the 419 cattle samples examined, 25 animals (5.97%) soropositives were found, from which 28.00% (7/25) had bursitis and the presence of Brucella spp. was confirmed by isolation. Of the human samples, six (10.17%) were positive in the test of 2-ME. The prevalence rate of anti-Brucella spp. aglutinins in cattle is above the national average and of the Northeast. The prevalence of infection in workers from the slaughterhouse in the county of São Luis could pose serious problems to public health, requiring the establishment of a Program of Sanitary Education for workers of the slaughterhouse. 

A brucelose é uma doença infecto-contagiosa provocada por bactérias do gênero Brucella, que infectam animais e o homem, apresentando um grande impacto econômico e de saúde pública, sobretudo em países em desenvolvimento. Neste contexto objetivou-se diagnosticar aglutininas anti-Brucella sp., isolar Brucella sp. em bovinos, e verificar a freqüência de trabalhadores soropositivos, provenientes de um abatedouro municipal em São Luís - MA. Amostras de sangue foram colhidas, para obtenção do soro, bem como exsudato e parte fibrosada de bolsas serosas. Também foram colhidos sangue de 59 funcionários do abatedouro. Estas amostras foram analisadas através dos testes de Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e 2-Mercaptoetanol (2-ME) e Fixação de Complemento. Das 419 amostras bovinas examinadas, verificou-se que 25 animais (5,97%) foram soropositivos, dos quais, 28,00% (7/25) apresentaram bursite e a presença de Brucella sp. foi confirmada por isolamento bacteriano. Das amostras humanas, seis (10,17%) foram positivas, no teste de 2-ME. A taxa de prevalência de aglutinas anti-Brucella sp. em bovinos encontra-se acima da média nacional e do Nordeste. A prevalência da infecção em funcionários de abatedouros no Município de São Luís pode acarretar sérios problemas à saúde pública, necessitando a implantação de um Programa de Educação Sanitária para funcionários de abatedouros.

Concentrações de imunoglobulinas G em colostro de vacas mestiças holandês-zebu

Eighty-eight healthy crossbred holstein-zebu (HZ) dairy cows were distributed in four groups as follow: Group 1 = less than 70% HZ (19 cows); Group 2 = 75% HZ animals, corresponding to ¾ HZ (46 cows); Group 3 = crossbred animals between 80 to 90% HZ, corresponding to 13/16 HZ and 7/8 HZ (11 cows); Group 4 = cows more than 90% HZ (12 animals). After birth, colostrum samples were obtained from each cow and than were analyzed for immunoglobulin G (IgG) concentration by single radial immunodifusion assay. IgG colostral concentrations were not influenced by group of crossbred HZ and its mean concentration (145.97mg/m img src="http:/img/fbpe/cr/v31n6/a19img01.gif">) were higher than that related for purebreds Bos taurus dairy cows. Considering these results, it was concluded that artificial methods of feeding colostrum to crossbred HZ calves are not necessary. Probably, assisted natural sucking as soon after birth as possible is enough to get passive immune transfer.

Oitenta e oito vacas leiteiras mestiças holandês-zebu (HZ) foram distribuídas de acordo com a percentagem de grau de sangue holandês em quatro grupos: Grupo 1 = animais com menos de 70% de grau de sangue holandês (19 vacas); Grupo 2 = animais com 75% de grau de sangue holandês, que equivale a ¾ HZ (46 vacas); Grupo 3 = mestiços entre 80 e 90% de grau de sangue holandês, que corresponderam a 13/16 HZ e 7/8 HZ (11 vacas); Grupo 4 = vacas com mais de 90% de grau de sangue holandês (12 vacas). Após o parto, amostras de colostro da primeira ordenha foram colhidas e, posteriormente, submetidas à imunodifusão radial simples para determinações dos níveis de imunoglobulinas G (IgG). Os resultados obtidos permitiram concluir que as concentrações de IgG não são influenciadas pelos graus de sangue estudados e seus valores médios (145,94mg/m img src="http:/img/fbpe/cr/v31n6/a19img01.gif">) são muito superiores aos relatados para animais de raças taurinas puras. Por esse motivo, não se justifica o emprego de métodos artificiais de fornecimento do colostro em se tratando de mestiços HZ. Ademais, o nível elevado de IgG observado no colostro sugere que a adoção da prática da mamada natural assistida seja adequada para assegurar que, na maioria das vezes, os neonatos não venham a apresentar falhas de transferência de imunidade passiva.

Concentrações de imunoglobulinas G em colostro de vacas mestiças holandês-zebu

Eighty-eight healthy crossbred holstein-zebu (HZ) dairy cows were distributed in four groups as follow: Group 1 = less than 70% HZ (19 cows); Group 2 = 75% HZ animals, corresponding to ¾ HZ (46 cows); Group 3 = crossbred animals between 80 to 90% HZ, corresponding to 13/16 HZ and 7/8 HZ (11 cows); Group 4 = cows more than 90% HZ (12 animals). After birth, colostrum samples were obtained from each cow and than were analyzed for immunoglobulin G (IgG) concentration by single radial immunodifusion assay. IgG colostral concentrations were not influenced by group of crossbred HZ and its mean concentration (145.97mg/m img src="http:/img/fbpe/cr/v31n6/a19img01.gif">) were higher than that related for purebreds Bos taurus dairy cows. Considering these results, it was concluded that artificial methods of feeding colostrum to crossbred HZ calves are not necessary. Probably, assisted natural sucking as soon after birth as possible is enough to get passive immune transfer.

Oitenta e oito vacas leiteiras mestiças holandês-zebu (HZ) foram distribuídas de acordo com a percentagem de grau de sangue holandês em quatro grupos: Grupo 1 = animais com menos de 70% de grau de sangue holandês (19 vacas); Grupo 2 = animais com 75% de grau de sangue holandês, que equivale a ¾ HZ (46 vacas); Grupo 3 = mestiços entre 80 e 90% de grau de sangue holandês, que corresponderam a 13/16 HZ e 7/8 HZ (11 vacas); Grupo 4 = vacas com mais de 90% de grau de sangue holandês (12 vacas). Após o parto, amostras de colostro da primeira ordenha foram colhidas e, posteriormente, submetidas à imunodifusão radial simples para determinações dos níveis de imunoglobulinas G (IgG). Os resultados obtidos permitiram concluir que as concentrações de IgG não são influenciadas pelos graus de sangue estudados e seus valores médios (145,94mg/m img src="http:/img/fbpe/cr/v31n6/a19img01.gif">) são muito superiores aos relatados para animais de raças taurinas puras. Por esse motivo, não se justifica o emprego de métodos artificiais de fornecimento do colostro em se tratando de mestiços HZ. Ademais, o nível elevado de IgG observado no colostro sugere que a adoção da prática da mamada natural assistida seja adequada para assegurar que, na maioria das vezes, os neonatos não venham a apresentar falhas de transferência de imunidade passiva.