RESUMEN
Hundred-three Escherichia coli strains of serogroup O128 were serotyped and examined for virulenceassociated genes. The 59 representative strains of all serotypes were submitted to ribotyping. The serotypes O128:H35 (41.7%), O128:H2 (14.6%), O128:H- (8.7%) and O128:H8 (6.8%) were the most frequently found. Serotype O128ab:H2 strains only carried the eae and bfpA sequences. These strains exhibited the LA-like adhesion pattern. Serotype O128ab:H8 strains and some non-motile strains reacted only with the eae probe, and they were classified as atypical EPEC. The O128:H35 strains corresponded to the enteroaggregative category. Enterotoxigenic strains were found among O128ac:H7, O128ac:H21, O128ac:H27 and O128ac:H- strains. Clonal group A comprised the majority of virulence markers - harbouring strains, while clonal group B included mainly those strains devoid of any virulence marker.
Foram estudadas 103 cepas de Escherichia coli do sorogrupo O128, quanto às características fenotípicas e genotípicas associadas à virulência. Cinqüenta e nove cepas representantes de todos os sorotipos foram submetidas a ribotipagem. Os sorotipos mais freqüentes foram O128:H35 (41,7%), O128:H2 (14,6%), O128:H- (8,7%) e O128:H8 (6,8%). Diferentes grupos enteropatogênicos foram identificados. Somente as cepas do sorotipo O128:H2 foram positivas para as sondas eae and bfpA e apresentaram o padrão de adesão AL-like. Cepas do sorotipo O128:H8 e algumas imóveis reagiram apenas com a sonda eae e foram classificadas como EPEC atípicas. As cepas O128:H35 corresponderam à categoria enteroagregativa e os sorotipos O128:H7, O128:H21, O128:H27 e as cepas imóveis foram classificadas como enterotoxigênicas. Todas as cepas que apresentaram marcadores de virulência pertenciam ao grupo clonal A, enquanto que no grupo clonal B estavam incluídas as cepas desprovidas dos fatores de virulência pesquisados.
RESUMEN
The aim of the present work was to evaluate an environmental monitoring program for clean rooms, or classified environments, involved in the filling and quality control of biological products produced by Butantan Institute, São Paulo, Brazil. This monitoring established the quantification, characterization and seasonality of the microorganisms in air and operators and, moreover, determined the alert and action limits. The total detectable microbial number showed some contrasts in installed air purification systems and in the operational impact on adopted procedures. The typical microbial population consisted of Staphylococcus sp, Micrococcus sp, Bacillus sp and Penicillium sp. The highest microorganism concentration occurred during summer and springtime. The established internal alert and action limits supported the operational procedures. Therefore, the environmental monitoring program is recommended for other laboratories involved in the production of vaccines, hyperimmune sera and biopharmaceuticals.
O presente trabalho teve por objetivo avaliar um programa de monitoramento microbiológico ambiental para áreas limpas, ou ambientes classificados, envolvidas na produção, envasamento e controle dos imunobiológicos produzidos pelo Instituto Butantan. Este monitoramento permitiu a quantificação, a caracterização e a sazonalidade da população microbiana presente no ar e nos operadores, e a determinação dos limites de alerta e ação. O número total de bactérias detectáveis revelou diferenças nos sistemas de purificação de ar instalados e o impacto operacional ocasionado pelos procedimentos realizados. A população microbiana característica foi composta por bactérias dos gêneros Staphylococcus sp, Micrococcus sp, Bacillus sp e por fungos filamentosos do gênero Penicillium sp. A maior concentração de microrganismos ocorreu nos períodos de verão e primavera. Os limites internos de alerta e ação estabelecidos asseguram os procedimentos operacionais, recomendando o monitoramento microbiológico ambiental a outros laboratórios envolvidos na produção de vacinas, soros hiperimunes e imunobiológicos.
RESUMEN
A capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which detects LT-I toxin produced by enterotoxigenic Escherichia coli strains, has beendeveloped. This capture assay was performed using the IgG enriched fraction of anti-LT-I antiserum and IgG2b anti-LT-I monoclonal antibody and allowed a clear distinction between E. coli LT-I - producing and non-producing strains. The estimated accuracy of the assay is 78% for sensitivity, 94% for specificity and 92% for efficiency. Thus, the capture immunoassayis a sensitive tool for detection of E. coli, which produces heat-labile enterotoxin, and is suitable for use in clinical laboratories and epidemiological surveys in developing world.
O objetivo do presente trabalho foi a padronização de um imunoensaio de captura para detecção de amostras de E. coli produtoras da toxina LT-I. Este ensaio de captura foi desenvolvido utilizando-se a fração enriquecida em IgG do anticorpo policlonal anti-LT e um anticorpo monoclonal caracterizado como IgG2b. Através deste método verificou-se uma clara distinção entre cepas de E. coli produtoras e não produtoras da toxina (p 0,0001), sendo a sensibilidade do método de 78%, a especificidade de 94% e a eficiência de 92%. Assim, o imunoensaio de captura mostrou-se como uma ferramenta sensível para a detecção de amostras de E. coli que produzem a enterotoxina termo-lábil, podendo ser aplicado em laboratórios clínicos e inquéritos epidemiológicos em paises em desenvolvimento.
RESUMEN
Intimins are outer membrane proteins expressed by enteric bacterial pathogens capable of inducing intestinal attachment-and-effacement lesion (A/E). Through immunoblotting, immunofluorescence, flow citometry and immunogold we observed that the obtained polyclonal antibody against conserved intimin region recognizes the different intimin subtypes and suggests that it can be used as a tool for EPEC and EHEC detection. Besides, immuno-dot assay seems to be a possible alternative as a capture method.
EPEC e EHEC constituem um risco significativo para a saúde pública em diferentes partes do mundo. Ambas colonizam a mucosa intestinal e subvertem as funções celulares do epitélio intestinal ao produzirem uma lesão histopatológica característica, conhecida por lesão A/E (attaching-and-effacing), na qual a intimina é uma das proteínas envolvidas. A família das intiminas apresenta também uma região conservada, que compreende os aminoácidos de 388 a 667 (Int 388-667). O objetivo do presente trabalho foi a obtenção de um anticorpo policlonal contra a região conservada de intimina. A caracterização fenotípica das amostras de EPEC e EHEC utilizando este anticorpo permitiu observar-se a maneira variável que ele reconhece os diversos subtipos de intimina e sugere que ele seja uma ferramenta para detecção destes patógenos, sendo o ensaio de immuno-dot o método de captura de escolha.
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Intimins are outer membrane proteins expressed by enteric bacterial pathogens capable of inducing intestinal attachment-and-effacement lesion (A/E). Through immunoblotting, immunofluorescence, flow citometry and immunogold we observed that the obtained polyclonal antibody against conserved intimin region recognizes the different intimin subtypes and suggests that it can be used as a tool for EPEC and EHEC detection. Besides, immuno-dot assay seems to be a possible alternative as a capture method.
EPEC e EHEC constituem um risco significativo para a saúde pública em diferentes partes do mundo. Ambas colonizam a mucosa intestinal e subvertem as funções celulares do epitélio intestinal ao produzirem uma lesão histopatológica característica, conhecida por lesão A/E (attaching-and-effacing), na qual a intimina é uma das proteínas envolvidas. A família das intiminas apresenta também uma região conservada, que compreende os aminoácidos de 388 a 667 (Int 388-667). O objetivo do presente trabalho foi a obtenção de um anticorpo policlonal contra a região conservada de intimina. A caracterização fenotípica das amostras de EPEC e EHEC utilizando este anticorpo permitiu observar-se a maneira variável que ele reconhece os diversos subtipos de intimina e sugere que ele seja uma ferramenta para detecção destes patógenos, sendo o ensaio de immuno-dot o método de captura de escolha.
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A capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which detects LT-I toxin produced by enterotoxigenic Escherichia coli strains, has beendeveloped. This capture assay was performed using the IgG enriched fraction of anti-LT-I antiserum and IgG2b anti-LT-I monoclonal antibody and allowed a clear distinction between E. coli LT-I - producing and non-producing strains. The estimated accuracy of the assay is 78% for sensitivity, 94% for specificity and 92% for efficiency. Thus, the capture immunoassayis a sensitive tool for detection of E. coli, which produces heat-labile enterotoxin, and is suitable for use in clinical laboratories and epidemiological surveys in developing world.
O objetivo do presente trabalho foi a padronização de um imunoensaio de captura para detecção de amostras de E. coli produtoras da toxina LT-I. Este ensaio de captura foi desenvolvido utilizando-se a fração enriquecida em IgG do anticorpo policlonal anti-LT e um anticorpo monoclonal caracterizado como IgG2b. Através deste método verificou-se uma clara distinção entre cepas de E. coli produtoras e não produtoras da toxina (p 0,0001), sendo a sensibilidade do método de 78%, a especificidade de 94% e a eficiência de 92%. Assim, o imunoensaio de captura mostrou-se como uma ferramenta sensível para a detecção de amostras de E. coli que produzem a enterotoxina termo-lábil, podendo ser aplicado em laboratórios clínicos e inquéritos epidemiológicos em paises em desenvolvimento.
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Fifty fecal specimens from animals of the São Paulo City Zoo were cultured for Campylobacter jejuni. The organism was isolated from 4 out 20 primates and it was not found in the other mammals and birds assayed in this study.
Foram estudadas 50 amostras de fezes obtidas de diversas espécies animais da Fundação Parque Zoológico de São Paulo. C. jejuni foi isolado em 4 dos 20 primatas estudados, não sendo encontrado nas fezes de outros mamíferos e aves ingressados neste estudo.
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Fifty fecal specimens from animals of the São Paulo City Zoo were cultured for Campylobacter jejuni. The organism was isolated from 4 out 20 primates and it was not found in the other mammals and birds assayed in this study.
Foram estudadas 50 amostras de fezes obtidas de diversas espécies animais da Fundação Parque Zoológico de São Paulo. C. jejuni foi isolado em 4 dos 20 primatas estudados, não sendo encontrado nas fezes de outros mamíferos e aves ingressados neste estudo.