Avaliação da técnica de vitrificação de ovários de camundongos da linhagem B6D2F1, pertencentes ao Instituto de Ciência e Tecnologia em Biomodelos - ICTB/Fiocruz-RJ / Evaluation of ovary vitrification technique from B6D2F1 strain belonging to the Institute of Biomodels Science and Technology ICTB / Fiocruz-RJ

Objetivou-se testar a vitrificação de ovários de camundongos do ICTB/Fiocruz. Inicialmente, fez-se coleta e maturação in vitro dos oócitos de ovários a fresco e vitrificados, bem como avaliação de estruturas no cultivo embrionário, pós-fertilização in vitro. Fêmeas B6D2F1 foram eutanasiadas para remoção dos ovários (n=60) e divididas em três grupos: grupo 1 (n=30 animais) - oócito de ovários vitrificados, maturados e fertilizados in vitro (120 fragmentos); grupo 2 (n=15) (controle 1) - oócitos coletados a fresco, maturados e fertilizados in vitro; e grupo 3 (n=15) (controle 2) - oócitos maturados in vivo e fertilizados in vitro. A técnica foi verificada no desenvolvimento embrionário in vitro, que foi avaliado pelo teste de qui-quadrado (BioStat 5.0). Recuperaram-se 123, 224 e 328 oócitos nos G1, G2 e G3, respectivamente. Observaram-se diferenças significativas nas taxas de clivagem às 24 horas (embriões ≥ 2 células) entre G1 (8%) e G2 (32%) (P<0,1) e G1 e G3 (49%) (P<0,05), mas não entre G2 e G3 (P>0,05). Para blastocistos, às 96 horas, os grupos G1, G2 e G3 apresentaram, respectivamente, 6%, 11% e 46%, diferindo significativamente entre eles (P<0,05). A vitrificação de ovários, a maturação oocitária e a fertilização in vitro são alternativas para a produção de embriões de camundongos in vitro.(AU)

This work aimed test ovarian vitrification of hybrid mouse from ICTB/Fiocruz. Protocol collection and oocyte in vitro maturation from fresh and vitrified ovaries was established and embryos were evaluated after fertilization. B6D2F1 females were euthanized for ovarian removal (n= 60) and divided into 3 groups: G1 (n= 30) - ovaries fragmented (n= 120), vitrified, matured and fertilized; G2 (n= 15) - in vitro fertilization of oocytes matured in vitro from fresh ovaries; G3 (n= 15) - ampulla region oocytes in vitro fertilizated. Viability was verified by thawing, oocyte in vitro maturation and fertilization. In vitro embryo development of each group was evaluated by Chi-square test (BioStat 5.0). 123, 224 and 328 oocytes were recovered from G1, G2 and G3, respectively. Significant differences were observed in cleavage rates at 24 hours (embryos with 2 cells or more) between G1 (8%) and G2 (32%) (P< 0.1) and G1 and G3 (49%) (P< 0.05) but not between G2 and G3 (P> 0.05). Blastocysts at 96 hours presented 6%, 11% and 46%, respectively for G1, G2 and G3, differing significantly (P< 0.05). Ovary vitrification, oocyte in vitro maturation and in vitro fertilization were available for the production of in vitro mouse embryos.(AU)

Avaliação da técnica de vitrificação de ovários de camundongos da linhagem B6D2F1, pertencentes ao Instituto de Ciência e Tecnologia em Biomodelos - ICTB/Fiocruz-RJ / Evaluation of ovary vitrification technique from B6D2F1 strain belonging to the Institute of Biomodels Science and Technology ICTB / Fiocruz-RJ

Objetivou-se testar a vitrificação de ovários de camundongos do ICTB/Fiocruz. Inicialmente, fez-se coleta e maturação in vitro dos oócitos de ovários a fresco e vitrificados, bem como avaliação de estruturas no cultivo embrionário, pós-fertilização in vitro. Fêmeas B6D2F1 foram eutanasiadas para remoção dos ovários (n=60) e divididas em três grupos: grupo 1 (n=30 animais) - oócito de ovários vitrificados, maturados e fertilizados in vitro (120 fragmentos); grupo 2 (n=15) (controle 1) - oócitos coletados a fresco, maturados e fertilizados in vitro; e grupo 3 (n=15) (controle 2) - oócitos maturados in vivo e fertilizados in vitro. A técnica foi verificada no desenvolvimento embrionário in vitro, que foi avaliado pelo teste de qui-quadrado (BioStat 5.0). Recuperaram-se 123, 224 e 328 oócitos nos G1, G2 e G3, respectivamente. Observaram-se diferenças significativas nas taxas de clivagem às 24 horas (embriões ≥ 2 células) entre G1 (8%) e G2 (32%) (P<0,1) e G1 e G3 (49%) (P<0,05), mas não entre G2 e G3 (P>0,05). Para blastocistos, às 96 horas, os grupos G1, G2 e G3 apresentaram, respectivamente, 6%, 11% e 46%, diferindo significativamente entre eles (P<0,05). A vitrificação de ovários, a maturação oocitária e a fertilização in vitro são alternativas para a produção de embriões de camundongos in vitro.(AU)

This work aimed test ovarian vitrification of hybrid mouse from ICTB/Fiocruz. Protocol collection and oocyte in vitro maturation from fresh and vitrified ovaries was established and embryos were evaluated after fertilization. B6D2F1 females were euthanized for ovarian removal (n= 60) and divided into 3 groups: G1 (n= 30) - ovaries fragmented (n= 120), vitrified, matured and fertilized; G2 (n= 15) - in vitro fertilization of oocytes matured in vitro from fresh ovaries; G3 (n= 15) - ampulla region oocytes in vitro fertilizated. Viability was verified by thawing, oocyte in vitro maturation and fertilization. In vitro embryo development of each group was evaluated by Chi-square test (BioStat 5.0). 123, 224 and 328 oocytes were recovered from G1, G2 and G3, respectively. Significant differences were observed in cleavage rates at 24 hours (embryos with 2 cells or more) between G1 (8%) and G2 (32%) (P< 0.1) and G1 and G3 (49%) (P< 0.05) but not between G2 and G3 (P> 0.05). Blastocysts at 96 hours presented 6%, 11% and 46%, respectively for G1, G2 and G3, differing significantly (P< 0.05). Ovary vitrification, oocyte in vitro maturation and in vitro fertilization were available for the production of in vitro mouse embryos.(AU)

Influência de diferentes tipos de dieta sobre a obtenção de embriões coletados de camundongos fêmeas (Mus musculus) superovuladas / Influence of different diet types on embryo obtention from superovulated female mice (Mus musculus)

O objetivo deste trabalho foi comparar a influência da administração, na fase pré-púbere, de diferentesdietas alimentares e formas de esterilização da ração sobre o número de embriões de duas células e a quantidadede estruturas coletadas de camundongos fêmeas superovuladas. Foram utilizados animais B6.129P2-Nos2,divididos em quatro grupos, conforme a ração comercial ingerida: G1- comum autoclavada; G2- comum nãoautoclavada; G3- para fins de reprodução e G4- comum irradiada. Os animais foram pesados semanalmente ealimentados com 184g da ração do grupo correspondente. Após duas semanas, as fêmeas foram superovuladas eacasaladas com machos férteis. Aquelas positivas tiveram sua tuba lavada com meio M2, e as estruturasembrionárias coletadas e classificadas. Os resultados foram analisados por análise de variância e teste de Tukey.Fêmeas do G3 apresentaram maior ganho de peso do que as do G1 e do G4, mas semelhante às do G2. Já emrelação à recuperação de embriões de duas células, as do G2 e do G4 obtiveram os melhores resultados, semvariação entre si. O grupo que apresentou as menores taxas de recuperação de embriões de duas células foi o G3.Conclui-se que o uso de ração comercial para reprodução na fase pré-púbere aumentou o ganho de peso dosanimais, mas não o número de embriões de duas células em fêmeas superovuladas.

The aim of this study was to observe the influence, in prepuberal phase, of different diets andsterilization types on number of 2-cells embryos/ total quantity of structures recovered from superovulatedfemale mice. B6.129P2-Nos2 animals were divided into 4 groups according to the commercial diet: G1-commonautoclaved; G2- common not-autoclaved; G3-reproduction and G4-common irradiated. Animals were weightedweekly and fed with 184 g of corresponding diet. After two weeks, females were superovulated and mated withfertile males. Those positives had their tuba washed with M2 medium and the embryonic structures collected andclassified. The results were analyzed by Variance Analysis and Tukey Test. G3 females had higher weight gainthan G1 and G4, but similar to G2. In relation to recovery of 2 cells embryos, G2 and G4 had obtained the bestresults, without variation among themselves. The group that presented the smallest recovery rates of 2 cellsembryos was G3. It was concluded that the use of reproduction diet in prepuberal phase increased animals’weight gain, but not number of 2-cells embryos in superovulated female mice.

Influência de diferentes tipos de dieta sobre a obtenção de embriões coletados de camundongos fêmeas (Mus musculus) superovuladas / Influence of different diet types on embryo obtention from superovulated female mice (Mus musculus)

O objetivo deste trabalho foi comparar a influência da administração, na fase pré-púbere, de diferentesdietas alimentares e formas de esterilização da ração sobre o número de embriões de duas células e a quantidadede estruturas coletadas de camundongos fêmeas superovuladas. Foram utilizados animais B6.129P2-Nos2,divididos em quatro grupos, conforme a ração comercial ingerida: G1- comum autoclavada; G2- comum nãoautoclavada; G3- para fins de reprodução e G4- comum irradiada. Os animais foram pesados semanalmente ealimentados com 184g da ração do grupo correspondente. Após duas semanas, as fêmeas foram superovuladas eacasaladas com machos férteis. Aquelas positivas tiveram sua tuba lavada com meio M2, e as estruturasembrionárias coletadas e classificadas. Os resultados foram analisados por análise de variância e teste de Tukey.Fêmeas do G3 apresentaram maior ganho de peso do que as do G1 e do G4, mas semelhante às do G2. Já emrelação à recuperação de embriões de duas células, as do G2 e do G4 obtiveram os melhores resultados, semvariação entre si. O grupo que apresentou as menores taxas de recuperação de embriões de duas células foi o G3.Conclui-se que o uso de ração comercial para reprodução na fase pré-púbere aumentou o ganho de peso dosanimais, mas não o número de embriões de duas células em fêmeas superovuladas.(AU)

The aim of this study was to observe the influence, in prepuberal phase, of different diets andsterilization types on number of 2-cells embryos/ total quantity of structures recovered from superovulatedfemale mice. B6.129P2-Nos2 animals were divided into 4 groups according to the commercial diet: G1-commonautoclaved; G2- common not-autoclaved; G3-reproduction and G4-common irradiated. Animals were weightedweekly and fed with 184 g of corresponding diet. After two weeks, females were superovulated and mated withfertile males. Those positives had their tuba washed with M2 medium and the embryonic structures collected andclassified. The results were analyzed by Variance Analysis and Tukey Test. G3 females had higher weight gainthan G1 and G4, but similar to G2. In relation to recovery of 2 cells embryos, G2 and G4 had obtained the bestresults, without variation among themselves. The group that presented the smallest recovery rates of 2 cellsembryos was G3. It was concluded that the use of reproduction diet in prepuberal phase increased animalsweight gain, but not number of 2-cells embryos in superovulated female mice.(AU)