Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.(AU)

Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.(AU)

Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.

Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.

Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

ABSTRACT: Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.

RESUMO: Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.

Consumption of minas frescal cheese may be a source of human infection by Campylobacter jejuni / Consumo de queijo minas frescal pode ser fonte de infecção humana por Campylobacter jejuni

Campylobacter spp. is an emerging pathogen that causes gastroenteritis in humans and the consumption of dairy food can characterize sources of infection. We aimed to verify the viability and a presence of transcripts associated with characteristics of virulence and adaptation of C. jejuni isolated from Minas Frescal cheeses, produced with contaminated milk and stored under refrigeration for up to ten days. The samples were analyzed for bioindicators, Campylobacter spp., pH, acidity, moisture and sodium chloride. Campylobacter spp. recovered were evaluated for the production of transcripts of: ciaB, dnaJ, p19 and sodB. The results were correlated with the viability of C. jejuni and changes in their transcriptome. Storage at lowtemperatures reduced C. jejuni from the first to the fourth day. The variations in humidity, pH and acidity influenced the decreasing of C. jejuni. There was a reduction in transcripts' production of the four genes, more pronounced on the fourth day, indicating the inability of the microorganism to perform its metabolic activities, due to the conditions of injury. Despite the presence of mechanisms of virulence and adaptation, C. jejuni could not remain viable four days after production. However, consumption of fresh cheese contaminated with Campylobacter jejuni can be a source of infection when consumed up to four days after production.

Campylobacter spp. é um patógeno emergente que causa gastroenterite em seres humanos e o consumo de produtos lácteos pode caracterizar fontes de infecção. O objetivo deste estudo foi verificar a viabilidade e a presença de transcritos associadas a características de virulência e adaptação de C. jejuniisoladas de queijos frescos, produzidos com leite contaminado e mantidos refrigeradas por dez dias. Foram analisados bioindicadores, Campylobacter spp., pH, acidez, umidade e cloreto de sódio. Campylobacter spp. recuperados foram avaliados quanto à produção dos transcritos: ciaB, dnaJ, p19 e sodB. Os resultados foram correlacionados com a viabilidade de C. jejuni e alterações no transcriptoma. O armazenamento em baixas temperaturas reduziu C. jejuni do primeiro ao quarto dia. As variações na umidade, pH e acidez influenciaram a queda de C. jejuni. Houve uma redução na produção de transcritos dos quatro genes, mais pronunciada no quarto dia, indicando a incapacidade do micro-organismo em realizar suas atividades metabólicas, devido às condições de injúria. Apesar da presença de mecanismos de virulência e adaptação, C. jejuni não permaneceu viável quatro dias após a produção. Porém, o consumo de queijo fresco contaminado com Campylobacter jejunipode ser uma fonte de infecção quando consumido até quatro dias após a produção.

Detecção de Campylobacter jejuni em produtos de frango utilizando separação imunomagnética / Detection of Campylobacter jejuni in chicken products using immunomagnetic separation

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda, e a carne de frango tem se mostrado uma importante fonte de transmissão. Este microrganismo é de difícil isolamento e os métodos convencionais muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e testar a técnica de separação imunomagnética (IMS) na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Micropartículas magnéticas ligadas a anticorpos policlonais anti-C. jejuni foram utilizadas para concentrar C. jejuni antes da semeadura em ágar. O protocolo foi comparado com o método convencional. C. jejuni foi recuperado do alimento experimentalmente contaminado por ambos os métodos, entretanto, quando foi usada a IMS, a presença de microrganismos contaminantes nos meios de cultura foi menor. C. jejuni foi isolado de 7% das amostras de alimento naturalmente contaminadas, usando IMS, e de 3% pelo método convencional. C. coli foi isolado de uma amostra pelo método convencional, mas não foi detectado pelo protocolo com IMS. A técnica de IMS pode ser usada para isolamento de C. jejuni de alimentos, oferecendo a vantagem de detectar em amostras o microrganismo cujo isolamento não é obtido por meio do método convencional.(AU)

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis and chicken meat has shown to be an important source of infection. This microorganism is difficult to isolate and the conventional methods are often inefficient and may lead to erroneous results. This study aimed at developing and testing the technique of immunomagnetic separation (IMS) in the detection of C. jejuni in chicken products. Microparticles magnetically connected anti-C. jejuni polyclonal antibodies were used to concentrate C. jejuni before agar seeding. The protocol was compared with the conventional method. C. jejuni was recovered from experimentally contaminated food for both methods, however, when the IMS was used, the presence of contaminating microorganisms in the means of culture was smaller. C. jejuni was isolated from 7% of samples of food naturally contaminated, using IMS, and 3% by conventional method. C. coli was isolated from a sample by conventional method, but it was not detected by protocol with IMS. The IMS technique can be used for isolation of C. jejuni in food, offering the advantage of detecting the microorganism in samples from which the isolation is not obtained with the use of the conventional method.(AU)

Viability and gene transcription of Campylobacter jejuni in infant milk formulas / Viabilidade e transcrição genética de Campylobacter jejuni em fórmulas lácteas infantis

This study simulated the contamination of two varieties of infant milk formulas (homemade and commercial) with 103 and 104 CFU/mLof Campylobacter jejuni, that were kept under refrigeration (4-7ºC) for up to 48 hours. The aim of this study was to verify the maintenance of the viability and ability of Campylobacter jejuni to produce transcripts of virulence and resistance to stress conditions during periods of 0 (after preparation), 24 and 48 hours. C. jejuni remained viable during all analyzed stages and thepresence of coliforms was not detected. In general, the counts reduced 1 log cycle after 48 hours for all samples, except the 104 CFU/mL inoculum of commercial formula, which reduced 2 log cycles, indicating greater injury of C. jejuni in this food matrix. C. jejuni showed to be more adapted to homemade matrix, due to high transcription of the gene related to cell invasion, ciaB, and more susceptible in the commercial matrix, due to the high transcription of genes related to conditions of stress tolerance (dnaJ, p19, sodB). The low infective dose of C. jejuni coupled with greater vulnerability of children less than five years indicate the need for care in the preparation and maintenance of infant formulas, to prevent the use of contaminated raw material and cross-contamination, especially in homemade formulations

Este estudo simulou a contaminação de duas variedades de fórmulas de leite infantil com Campylobacter jejuni (caseiras e comerciais), que foram mantidas sob refrigeração (4-7ºC) por até 48 horas. O objetivo do estudo foi verificar a manutenção da viabilidade e capacidade de produzir transcritos de virulência e resistência a condições de estresse durante os períodos de 0 (após preparação), 24 e 48 horas. C. jejunipermaneceu viável durante todas as etapas analisadas e a presença de coliformes não foi detectada. Em geral, as contagens reduziram 1 ciclo log após 48 horas para todas as amostras, exceto o inóculo de 104 CFU/mL na fórmula comercial, que reduziu 2 ciclos logarítmicos, indicando maior lesão de C. jejuni nesta matriz alimentar. C. jejuni mostrou-se mais adaptado à matriz popular, devido à alta transcrição do gene relacionado à invasão celular, ciaB, e mais suscetível na matriz comercial, devido à alta transcrição de genes relacionados a tolerância a condições de estresse (dnaJ, p19, sodB). A baixa dose infectante de C. jejuni, juntamente com maior vulnerabilidade de crianças menores de cinco anos, indicam a necessidade de cuidados na preparação e manutenção de fórmulas infantis, para prevenir o uso de matéria-prima contaminada e contaminação cruzada, especialmente em formulações caseiras.

Detecção de Campylobacter jejuni em produtos de frango utilizando separação imunomagnética / Detection of Campylobacter jejuni in chicken products using immunomagnetic separation

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda, e a carne de frango tem se mostrado uma importante fonte de transmissão. Este microrganismo é de difícil isolamento e os métodos convencionais muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e testar a técnica de separação imunomagnética (IMS) na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Micropartículas magnéticas ligadas a anticorpos policlonais anti-C. jejuni foram utilizadas para concentrar C. jejuni antes da semeadura em ágar. O protocolo foi comparado com o método convencional. C. jejuni foi recuperado do alimento experimentalmente contaminado por ambos os métodos, entretanto, quando foi usada a IMS, a presença de microrganismos contaminantes nos meios de cultura foi menor. C. jejuni foi isolado de 7% das amostras de alimento naturalmente contaminadas, usando IMS, e de 3% pelo método convencional. C. coli foi isolado de uma amostra pelo método convencional, mas não foi detectado pelo protocolo com IMS. A técnica de IMS pode ser usada para isolamento de C. jejuni de alimentos, oferecendo a vantagem de detectar em amostras o microrganismo cujo isolamento não é obtido por meio do método convencional.(AU)

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis and chicken meat has shown to be an important source of infection. This microorganism is difficult to isolate and the conventional methods are often inefficient and may lead to erroneous results. This study aimed at developing and testing the technique of immunomagnetic separation (IMS) in the detection of C. jejuni in chicken products. Microparticles magnetically connected anti-C. jejuni polyclonal antibodies were used to concentrate C. jejuni before agar seeding. The protocol was compared with the conventional method. C. jejuni was recovered from experimentally contaminated food for both methods, however, when the IMS was used, the presence of contaminating microorganisms in the means of culture was smaller. C. jejuni was isolated from 7% of samples of food naturally contaminated, using IMS, and 3% by conventional method. C. coli was isolated from a sample by conventional method, but it was not detected by protocol with IMS. The IMS technique can be used for isolation of C. jejuni in food, offering the advantage of detecting the microorganism in samples from which the isolation is not obtained with the use of the conventional method.(AU)

Campylobacter jejuni and Campylobacter coli originated from chicken carcasses modulate their transcriptome to translate virulence genes in human cells / Campylobacter jejuni e Campylobacter coli originadas de carcaças de frango modulam seu transcriptoma para traduzir genes de virulência em células humanas

The aim was to determine the spread of genetically similar profiles of Campylobacter in chicken carcasses and evaluate their ability to produce transcripts for ciaB, dnaJ, p19 and sodB genes, before and after cultivation in Caco-2 cells. The strains used were isolated from 420 samples of chicken carcasses chilled and frozen ready for marketing. The species were identified by PCR-multiplex, the phylogeny was determined by RAPD-PCR and the presence of transcripts was performed by RT-PCR. We identified 74 (17.6%) of Campylobacter strains, being 55 (74.3%) C. jejuni and 19 (25.7%) C. coli. The phylogenetic relationship demonstrated heterogeneity between isolates of the same species, with absence of clones, indicating the high level of diversity of circulating genotypes. The gene transcription showed conflicting results before and after the culture in Caco-2 cell, so that before cultivation isolates showed greater capacity to transcribe genes related to survival and after the interaction with human cells, the strains showed higher potential to transcribe genes associated with virulence. The result of this study contributes to the understanding of how these seemingly fragile microorganisms are the most prevalent bacterial agents in human gastroenteritis.(AU)

O objetivo foi determinar a disseminação de perfis geneticamente semelhantes de Campylobacter em carcaças de frango e avaliar sua capacidade de produzir transcritos para os genes ciaB, dnaJ, p19 e sodB, antes e após o cultivo em células Caco-2. As cepas utilizadas foram isoladas de 420 amostras de carcaças de frango resfriadas e congeladas prontas para comercialização. As espécies foram identificadas por PCR-multiplex, a filogenia foi determinada por RAPD-PCR e a presença de transcritos foi realizada por RT-PCR. Identificamos 74 (17,6%) das cepas de Campylobacter, sendo 55 (74,3%) C. jejuni e 19 (25,7%) C. coli. A relação filogenética demonstrou heterogeneidade entre isolados da mesma espécie, com ausência de clones, indicando o alto nível de diversidade dos genótipos circulantes. A transcrição gênica mostrou resultados conflitantes antes e após a cultura em células Caco-2, de modo que, antes do cultivo, os isolados apresentaram maior capacidade de transcrever genes relacionados à sobrevivência e após a interação com células humanas, as linhagens apresentaram maior potencial para transcrever genes associados à virulência. O resultado deste estudo contribui para a compreensão de como esses microrganismos aparentemente frágeis são os agentes bacterianos mais prevalentes na gastroenterite humana.(AU)

Campylobacter jejuni and Campylobacter coli originated from chicken carcasses modulate their transcriptome to translate virulence genes in human cells / Campylobacter jejuni e Campylobacter coli originadas de carcaças de frango modulam seu transcriptoma para traduzir genes de virulência em células humanas

The aim was to determine the spread of genetically similar profiles of Campylobacter in chicken carcasses and evaluate their ability to produce transcripts for ciaB, dnaJ, p19 and sodB genes, before and after cultivation in Caco-2 cells. The strains used were isolated from 420 samples of chicken carcasses chilled and frozen ready for marketing. The species were identified by PCR-multiplex, the phylogeny was determined by RAPD-PCR and the presence of transcripts was performed by RT-PCR. We identified 74 (17.6%) of Campylobacter strains, being 55 (74.3%) C. jejuni and 19 (25.7%) C. coli. The phylogenetic relationship demonstrated heterogeneity between isolates of the same species, with absence of clones, indicating the high level of diversity of circulating genotypes. The gene transcription showed conflicting results before and after the culture in Caco-2 cell, so that before cultivation isolates showed greater capacity to transcribe genes related to survival and after the interaction with human cells, the strains showed higher potential to transcribe genes associated with virulence. The result of this study contributes to the understanding of how these seemingly fragile microorganisms are the most prevalent bacterial agents in human gastroenteritis.(AU)

O objetivo foi determinar a disseminação de perfis geneticamente semelhantes de Campylobacter em carcaças de frango e avaliar sua capacidade de produzir transcritos para os genes ciaB, dnaJ, p19 e sodB, antes e após o cultivo em células Caco-2. As cepas utilizadas foram isoladas de 420 amostras de carcaças de frango resfriadas e congeladas prontas para comercialização. As espécies foram identificadas por PCR-multiplex, a filogenia foi determinada por RAPD-PCR e a presença de transcritos foi realizada por RT-PCR. Identificamos 74 (17,6%) das cepas de Campylobacter, sendo 55 (74,3%) C. jejuni e 19 (25,7%) C. coli. A relação filogenética demonstrou heterogeneidade entre isolados da mesma espécie, com ausência de clones, indicando o alto nível de diversidade dos genótipos circulantes. A transcrição gênica mostrou resultados conflitantes antes e após a cultura em células Caco-2, de modo que, antes do cultivo, os isolados apresentaram maior capacidade de transcrever genes relacionados à sobrevivência e após a interação com células humanas, as linhagens apresentaram maior potencial para transcrever genes associados à virulência. O resultado deste estudo contribui para a compreensão de como esses microrganismos aparentemente frágeis são os agentes bacterianos mais prevalentes na gastroenterite humana.(AU)

Prevalência e virulência de Campylobacter spp. em diferentes matrizes cárneas / Prevalence and virulence of Campylobacter spp. in different types of meats

Objetivou-se determinar a prevalência de Campylobacter em fígado de frango e bovino, pernil suíno e carne moída e suas características de virulência. Nos isolados, determinou-se a espécie e a presença de genes de virulência por PCR. Foram analisadas 660 amostras representativas das comercializadas no Brasil, compostas por: pernil suíno resfriado (138), fígado de frango (138), patinho bovino moído (138) e fígado bovino (246), provenientes de 53 marcas e sob diferentes serviços de inspeção durante o período de março de 2014 a maio de 2016. A identificação da espécie e a presença dos genes flaA, pldA, ciaB, cadF e cdtABC, luxS, danJ e sodB foram realizadas por PCR. Das amostras, 35/660 (5,3%) foram positivas para o gênero Campylobacter, sendo 9/35 (25,71%) identificadas como C. jejuni e 6/35 (17,14%) como C. coli. Os resultados indicam a necessidade de monitoramento das diferentes matrizes cárneas quanto a presença de Campylobacter.(AU)

Prevalência e virulência de Campylobacter spp. em diferentes matrizes cárneas / Prevalence and virulence of Campylobacter spp. in different types of meats

Objetivou-se determinar a prevalência de Campylobacter em fígado de frango e bovino, pernil suíno e carne moída e suas características de virulência. Nos isolados, determinou-se a espécie e a presença de genes de virulência por PCR. Foram analisadas 660 amostras representativas das comercializadas no Brasil, compostas por: pernil suíno resfriado (138), fígado de frango (138), patinho bovino moído (138) e fígado bovino (246), provenientes de 53 marcas e sob diferentes serviços de inspeção durante o período de março de 2014 a maio de 2016. A identificação da espécie e a presença dos genes flaA, pldA, ciaB, cadF e cdtABC, luxS, danJ e sodB foram realizadas por PCR. Das amostras, 35/660 (5,3%) foram positivas para o gênero Campylobacter, sendo 9/35 (25,71%) identificadas como C. jejuni e 6/35 (17,14%) como C. coli. Os resultados indicam a necessidade de monitoramento das diferentes matrizes cárneas quanto a presença de Campylobacter.

Maintenance of strains of Campylobacter jejuni in laboratories after use of cryoprotectors and pre-treatment of stress / Manutenção de cepas de Campylobacter jejuni em laboratório após uso de crioprotetores e pré-tratamento de estresse

This study evaluated the feasibility and the production of transcripts of sodB, p19, ciaB and dnaJ genes in strains of Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351, and 2383 IAL stored in whole UHT milk and or neopepton + 12% glycerol, submitted or not to pre-treatments at 4°C or 10°C for 30 minutes. The analyzes were performed immediately after freezing in liquid nitrogen (day 0) and after maintenance for 30, 60, and 90 days at -20ºC. The viability was evaluated by the traditional culture method and the production of transcripts by the RT-PCR technique. The quantification was only possible on the first day of analysis (day 0) and presented a mean of 3.0 x 107 CFU, and in the other periods of storage the strains presented confluent growth, not allowing their enumeration. The results indicated that whole UHT milk was more adequate for cryopreservation than the use of neopepton + 12% glycerol. The use of pre-treatments combined with the use of UHT milk as a cryoprotective medium stabilized the cells in order to transcribe the ciaB, dnaJ, sodBand p19 genes in the strains maintained under -20 ° for 30 to 60 days, indicating that they are more suitable methods for the maintenance of strains in the laboratory.(AU)

Este estudo avaliou a viabilidade e a produção de transcritos dos genes sodB, p19, ciaB e dnaJ em cepas de Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351 e 2383 IAL armazenadas em leite integral UHT e / ou neopeptona + 12% glicerol, submetidas ou não a pré-tratamentos a 4°C ou 10°C durante 30 minutos. As análises foram realizadas imediatamente após o congelamento em nitrogênio líquido (dia 0) e após a manutenção por 30, 60 e 90 dias à -20ºC. A viabilidade foi avaliada pelo método tradicional de cultura e a produção de transcritos, pela técnica de RT-PCR. A quantificação só foi possível no primeiro dia de análise (dia 0) e apresentou uma média de 3,0 x 107 UFC, e nos demais períodos de armazenamento as cepas apresentaram crescimento confluente, não permitindo sua enumeração. Os resultados indicaram que o leite integral UHT foi mais adequado para criopreservação em relação ao uso de neopeptona + 12% glicerol. A utilização de pré-tratamentos combinados com o uso de leite UHT como meio crioprotetor estabilizou as células para transcrever os genes ciaB, dnaJ, sodB e p19 nas cepas mantidas abaixo de -20° por 30 a 60 dias, indicando que são métodos mais adequados para a manutenção de cepas em laboratório.(AU)

Campylobacter jejuni and Campylobacter coli originated from chicken carcasses modulate their transcriptome to translate virulence genes in human cells

ABSTRACT: The aim was to determine the spread of genetically similar profiles of Campylobacter in chicken carcasses and evaluate their ability to produce transcripts for ciaB, dnaJ, p19 and sodB genes, before and after cultivation in Caco-2 cells. The strains used were isolated from 420 samples of chicken carcasses chilled and frozen ready for marketing. The species were identified by PCR-multiplex, the phylogeny was determined by RAPD-PCR and the presence of transcripts was performed by RT-PCR. We identified 74 (17.6%) of Campylobacter strains, being 55 (74.3%) C. jejuni and 19 (25.7%) C. coli. The phylogenetic relationship demonstrated heterogeneity between isolates of the same species, with absence of clones, indicating the high level of diversity of circulating genotypes. The gene transcription showed conflicting results before and after the culture in Caco-2 cell, so that before cultivation isolates showed greater capacity to transcribe genes related to survival and after the interaction with human cells, the strains showed higher potential to transcribe genes associated with virulence. The result of this study contributes to the understanding of how these seemingly fragile microorganisms are the most prevalent bacterial agents in human gastroenteritis.

RESUMO: O objetivo foi determinar a disseminação de perfis geneticamente semelhantes de Campylobacter em carcaças de frango e avaliar sua capacidade de produzir transcritos para os genes ciaB, dnaJ, p19 e sodB, antes e após o cultivo em células Caco-2. As cepas utilizadas foram isoladas de 420 amostras de carcaças de frango resfriadas e congeladas prontas para comercialização. As espécies foram identificadas por PCR-multiplex, a filogenia foi determinada por RAPD-PCR e a presença de transcritos foi realizada por RT-PCR. Identificamos 74 (17,6%) das cepas de Campylobacter, sendo 55 (74,3%) C. jejuni e 19 (25,7%) C. coli. A relação filogenética demonstrou heterogeneidade entre isolados da mesma espécie, com ausência de clones, indicando o alto nível de diversidade dos genótipos circulantes. A transcrição gênica mostrou resultados conflitantes antes e após a cultura em células Caco-2, de modo que, antes do cultivo, os isolados apresentaram maior capacidade de transcrever genes relacionados à sobrevivência e após a interação com células humanas, as linhagens apresentaram maior potencial para transcrever genes associados à virulência. O resultado deste estudo contribui para a compreensão de como esses microrganismos aparentemente frágeis são os agentes bacterianos mais prevalentes na gastroenterite humana.

Maintenance of strains of Campylobacter jejuni in laboratories after use of cryoprotectors and pre-treatment of stress / Manutenção de cepas de Campylobacter jejuni em laboratório após uso de crioprotetores e pré-tratamento de estresse

This study evaluated the feasibility and the production of transcripts of sodB, p19, ciaB and dnaJ genes in strains of Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351, and 2383 IAL stored in whole UHT milk and or neopepton + 12% glycerol, submitted or not to pre-treatments at 4°C or 10°C for 30 minutes. The analyzes were performed immediately after freezing in liquid nitrogen (day 0) and after maintenance for 30, 60, and 90 days at -20ºC. The viability was evaluated by the traditional culture method and the production of transcripts by the RT-PCR technique. The quantification was only possible on the first day of analysis (day 0) and presented a mean of 3.0 x 107 CFU, and in the other periods of storage the strains presented confluent growth, not allowing their enumeration. The results indicated that whole UHT milk was more adequate for cryopreservation than the use of neopepton + 12% glycerol. The use of pre-treatments combined with the use of UHT milk as a cryoprotective medium stabilized the cells in order to transcribe the ciaB, dnaJ, sodBand p19 genes in the strains maintained under -20 ° for 30 to 60 days, indicating that they are more suitable methods for the maintenance of strains in the laboratory.

Este estudo avaliou a viabilidade e a produção de transcritos dos genes sodB, p19, ciaB e dnaJ em cepas de Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351 e 2383 IAL armazenadas em leite integral UHT e / ou neopeptona + 12% glicerol, submetidas ou não a pré-tratamentos a 4°C ou 10°C durante 30 minutos. As análises foram realizadas imediatamente após o congelamento em nitrogênio líquido (dia 0) e após a manutenção por 30, 60 e 90 dias à -20ºC. A viabilidade foi avaliada pelo método tradicional de cultura e a produção de transcritos, pela técnica de RT-PCR. A quantificação só foi possível no primeiro dia de análise (dia 0) e apresentou uma média de 3,0 x 107 UFC, e nos demais períodos de armazenamento as cepas apresentaram crescimento confluente, não permitindo sua enumeração. Os resultados indicaram que o leite integral UHT foi mais adequado para criopreservação em relação ao uso de neopeptona + 12% glicerol. A utilização de pré-tratamentos combinados com o uso de leite UHT como meio crioprotetor estabilizou as células para transcrever os genes ciaB, dnaJ, sodB e p19 nas cepas mantidas abaixo de -20° por 30 a 60 dias, indicando que são métodos mais adequados para a manutenção de cepas em laboratório.

Prevalence of Tritrichomonas foetus and Campylobacter fetus subsp. venerealis among bulls slaughtered in the state of Minas Gerais, Brazil / Prevalência de Tritrichomonas foetus, Campylobacter fetus subsp. venerealis e de Campylobacter fetus subsp. fetus em touros abatidos no Estado de Minas Gerais, Brasil

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) and bovine genital trichomonosis (BGT) are globally widespread, predominantly sexually transmitted diseases that mainly affect herds in which natural mating takes place. Bulls serve as good epidemiological indicators for studying the causative agents of these diseases in cattle herds. The objective of the present work was to determine the prevalence of BGC and BGT among bulls sent to slaughterhouses in southern Minas Gerais, Brazil. Samples of preputial smegma from 200 sexually mature, non-castrated bulls of several ancestries were collected in 2013 from four regional slaughterhouses. The polymerase chain reaction (PCR) was employed to detect Tritrichomonas foetus, Campylobacter fetus subsp. fetus, and C. fetus subsp. venerealis. Isolation also was used aiming to diagnosis of BGT. All smegma samples were negative in culture for T. foetus. Molecular tests revealed 8% (16/200) of animals to be positive for T. foetus, 17.5% (35/200) for Campylobacter. fetus subsp. fetus, and 13.5% (27/200) for C. fetus subsp. venerealis. The results of the present study indicate that T. foetus, C. fetus subsp. venerealis, and C. fetus subsp. fetus are present among bulls slaughtered in southern Minas Gerais, and that BGC and BGT occur in this region. These diseases therefore need to be considered during differential diagnosis of reproductive diseases affecting cattle herds in which natural mating is employed.(AU)

A Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) e a Tricomonose Genital Bovina (TGB) são doenças de transmissão predominantemente venérea, de ampla disseminação mundial, acometendo principalmente rebanhos submetidos à monta natural. Touros constituem bons indicadores epidemiológicos para a pesquisa destes agentes nos rebanhos. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência da CGB e da TGB em touros encaminhados a abatedouros da região sul de Minas Gerais, Brasil. Amostras de esmegma prepucial de 200 touros (machos não castrados em idade compatível com a monta) de diversas genealogias foram coletadas em quatro abatedouros da região, no ano de 2013. A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi utilizada para detecção dos patógenos Tritrichomonas foetus, Campylobacter fetus subsp. fetus e Campylobacter fetus subsp. venerealis. O isolamento também foi utilizado para o diagnóstico da TGB. Todas as amostras analisadas apresentaram resultado negativo na cultura para isolamento de T. foetus. Por meio dos testes moleculares, verificaram-se prevalências de 8% (16/200) de animais positivos para T. foetus; 17,5% (35/200) para C. fetus subsp. fetus e de 13,5% (27/200) para C. fetus subsp. venerealis. Os dados do presente estudo apontaram a presença de T. foetus, C. fetus subsp. venerealis e C. fetus subsp. fetus em touros abatidos na região sul de Minas Gerais, evidenciando a ocorrência da TGB e da CGB nesta região e a necessidade de inclusão destas enfermidades no diagnóstico diferencial das doenças da reprodução em rebanhos bovinos submetidos à monta natural.(AU)

Ocorrência de ovinos portadores da infecção por Campylobacter spp. no estado de Pernambuco / Occurrence of sheep carrier of infection with Campylobacter spp. in the state of Pernambuco, Brazil

Objetivou-se com este estudo determinar a ocorrência e os fatores de risco associados à infecção por Campylobacter spp. em criações de ovinos no estado de Pernambuco, Brasil. Foram coletadas 421 amostras fecais de ovinos procedentes de 20 rebanhos para o isolamento de Campylobacter spp. As espécies Campylobacter fetus subsp. fetus e Campylobacter jejuni foram identificadas por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Para análise dos fatores de risco foi realizada uma análise univariada e posteriormente regressão logística a partir de questionário com perguntas objetivas sobre o manejo higiênico-sanitário e reprodutivo. A ocorrência para Campylobacter spp. foi de 4,5% (19/421; I.C. 2,8% - 7,1%). Das 19 amostras positivas no cultivo, oito (1,9%; I.C. 0,9% - 3,9%) foram classificadas como C. fetus subsp. fetus e sete (1,7%; I.C. 0,7% - 3,6%) como C. jejuni, com co-infecção em quatro amostras (0,95%). O número de focos identificados foi de 35,0% (7/20) das criações de ovinos que apresentavam pelo menos um animal positivo. Na análise de regressão logística não foi identificada nenhuma das variáveis como fator de risco. Este é o primeiro registro da infecção por Campylobacter spp. em rebanhos ovinos no Nordeste do Brasil, concluindo-se que a infecção ocorre nesses rebanhos. Dessa forma, se faz necessário à implementação de medidas de controle e prevenção, para impedir a propagação do agente entre as criações, evitando prejuízos para ovinocultura e riscos para saúde pública, uma vez que a campilobacteriose é considerada uma zoonose emergente.(AU)

The objective of this study was to determine the occurrence and risk factors associated with Campylobacter spp. infection in sheep in the State of Pernambuco, Brazil. A total of 421 fecal samples were collected from 20 herds for the isolation of Campylobacter spp. The species Campylobacter fetus and Campylobacter jejuni were identified by Polymerase Chain Reaction (PCR). To analyze the risk factors, logistic regression was conducted through a questionnaire about the hygienic-sanitary and reproductive management. The occurrence of Campylobacter spp. was 4.5% (19/421; C.I. 2.8 to 7.1%). Of the 19 positive samples isolated, eight (1.9% CI 0.9 to 3.9%) were classified as C. fetus subsp. fetus and seven (1.7% CI 0.7 to 3.5%) as C. jejuni, with co-infection in four samples (0.95%). The number of identified focuses was 35.0% (7/20) of the sheep herds that had at least one positive animal. The logistic regression analysis did not identify any of the variables as a risk factor. This appears to be the first report of infection with Campylobacter spp. in sheep herds in northeastern Brazil. Thus it is necessary to implement measures for control and prevention avoid damage to sheep production and risk to public health, since campylobacteriosis is considered an emerging zoonosis.(AU)

Ocorrência de ovinos portadores da infecção por Campylobacter spp. no estado de Pernambuco / Occurrence of sheep carrier of infection with Campylobacter spp. in the state of Pernambuco, Brazil

Objetivou-se com este estudo determinar a ocorrência e os fatores de risco associados à infecção por Campylobacter spp. em criações de ovinos no estado de Pernambuco, Brasil. Foram coletadas 421 amostras fecais de ovinos procedentes de 20 rebanhos para o isolamento de Campylobacter spp. As espécies Campylobacter fetus subsp. fetus e Campylobacter jejuni foram identificadas por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Para análise dos fatores de risco foi realizada uma análise univariada e posteriormente regressão logística a partir de questionário com perguntas objetivas sobre o manejo higiênico-sanitário e reprodutivo. A ocorrência para Campylobacter spp. foi de 4,5% (19/421; I.C. 2,8% - 7,1%). Das 19 amostras positivas no cultivo, oito (1,9%; I.C. 0,9% - 3,9%) foram classificadas como C. fetus subsp. fetus e sete (1,7%; I.C. 0,7% - 3,6%) como C. jejuni, com co-infecção em quatro amostras (0,95%). O número de focos identificados foi de 35,0% (7/20) das criações de ovinos que apresentavam pelo menos um animal positivo. Na análise de regressão logística não foi identificada nenhuma das variáveis como fator de risco. Este é o primeiro registro da infecção por Campylobacter spp. em rebanhos ovinos no Nordeste do Brasil, concluindo-se que a infecção ocorre nesses rebanhos. Dessa forma, se faz necessário à implementação de medidas de controle e prevenção, para impedir a propagação do agente entre as criações, evitando prejuízos para ovinocultura e riscos para saúde pública, uma vez que a campilobacteriose é considerada uma zoonose emergente.(AU)

The objective of this study was to determine the occurrence and risk factors associated with Campylobacter spp. infection in sheep in the State of Pernambuco, Brazil. A total of 421 fecal samples were collected from 20 herds for the isolation of Campylobacter spp. The species Campylobacter fetus and Campylobacter jejuni were identified by Polymerase Chain Reaction (PCR). To analyze the risk factors, logistic regression was conducted through a questionnaire about the hygienic-sanitary and reproductive management. The occurrence of Campylobacter spp. was 4.5% (19/421; C.I. 2.8 to 7.1%). Of the 19 positive samples isolated, eight (1.9% CI 0.9 to 3.9%) were classified as C. fetus subsp. fetus and seven (1.7% CI 0.7 to 3.5%) as C. jejuni, with co-infection in four samples (0.95%). The number of identified focuses was 35.0% (7/20) of the sheep herds that had at least one positive animal. The logistic regression analysis did not identify any of the variables as a risk factor. This appears to be the first report of infection with Campylobacter spp. in sheep herds in northeastern Brazil. Thus it is necessary to implement measures for control and prevention avoid damage to sheep production and risk to public health, since campylobacteriosis is considered an emerging zoonosis.(AU)

Seletividade e produtividade de meios de cultura para isolamento de Campylobacter spp

A campilobacteriose é uma zoonose emergente de origem alimentar causada por bactérias do gênero Campylobacter. Vários fatores dificultam o isolamento deste patógeno em amostras naturalmente contaminadas, por isso devem ser utilizadas metodologias normalizadas bem como meios de cultura com desempenho adequado, prevenindo a ocorrência de resultados falso negativos. Assim, avaliou-se a performance de meios de cultura recomendados pelas ISO 10272-1 para detecção de Campylobacter spp. com testes de seletividade e produtividade em culturas puras e o desempenho destes meios em amostras de carne de frango artificialmente contaminadas. Cepas ATCC de C. coli e C. jejuni e dos interferentes S. aureus, E. coli e Proteus mirabilis foram inoculadas nos meios indicados pelas normas oficiais e posteriormente inoculados em amostras fortificadas. Os meios testados, tanto em culturas puras quanto em amostras fortificadas, tiveram desempenho satisfatório, mostrando boa seletividade e produtividade, permitindo que os laboratórios optem pela combinação de meios com melhor performance para isolamento e identificação de Campylobacter spp. em amostras naturalmente contaminadas.(AU)

Campylobacteriosis is an emerging foodborne zoonotic disease caused by bacteria of the genus Campylobacter. Several factors hinder the isolation of this pathogen in naturally contaminated samples; therefore, standardized methods as well as high performance culture media should be used to avoid false negative results. Thus, the present study assessed the performance of culture media recommended by ISO 10272- 1 for the detection of Campylobacter spp. using selectivity and productivity testing in pure cultures and the efficiency of these media in artificially contaminated, samples. ATCC strains of C. coli and C. jejuni and of the interfering organisms S. aureus, E. coli and Proteus mirabilis were inoculated into the media indicated by official standards and later inoculated into enriched samples. The media tested both in pure cultures and in enriched samples yielded satisfactory results, with good selectivity and productivity, there by allowing laboratories to combine high performance methods for the isolation and identification of Campylobacter spp. in naturally contaminated samples.(AU)

Seletividade e produtividade de meios de cultura para isolamento de Campylobacter spp / Selectivity and productivity of culture media for isolation of Campylobacter spp

[{"text": "A campilobacteriose é uma zoonose\r\nemergente de origem alimentar\r\ncausada por bactérias do gênero\r\nCampylobacter. Vários fatores dificultam\r\no isolamento deste patógeno\r\nem amostras naturalmente contaminadas,\r\npor isso devem ser utilizadas\r\nmetodologias normalizadas bem\r\ncomo meios de cultura com desempenho\r\nadequado, prevenindo a ocorrência\r\nde resultados falso negativos.\r\nAssim, avaliou-se a performance\r\nde meios de cultura recomendados\r\npelas ISO 10272-1 para detecção\r\nde Campylobacterspp. com testes\r\nde seletividade e produtividade em\r\nculturas puras e o desempenho destes\r\nmeios em amostras de carne de\r\nfrango artificialmente contaminadas.\r\nCepas ATCC de C. coli e C. jejuni e\r\ndos interferentes S. aureus, E. coli e\r\nProteusmirabilis foram inoculadas\r\nnos meios indicados pelas normas\r\noficiais e posteriormente inoculados\r\nem amostras fortificadas. Os meios\r\ntestados, tanto em culturas puras\r\nquanto em amostras fortificadas,\r\ntiveram desempenho satisfatório,\r\nmostrando boa seletividade e produtividade,\r\npermitindo que os laboratórios\r\noptem pela combinação de\r\nmeios com melhor performance para\r\nisolamento e identificação de Campylobacter\r\nspp. em amostras naturalmente\r\ncontaminadas.(AU)", "_i": "pt"}]

Ocorrência da infecção por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus em búfalos no estado de Pernambuco, Brasil / Infection occurrence of Campylobacter fetus subsp. venerealis and Tritrichomonas foetus in buffaloes in the state of Pernambuco, Brazil

Objetivou-se com estudo determinar a ocorrência da infecção por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus em búfalos no estado de Pernambuco, Brasil. Foram coletadas 133 amostras biológicas (muco cervicovaginal e raspado prepucial) de animais, procedentes de oito propriedades, de diferentes regiões do estado. O material biológico coletado foi transferido para solução salina tamponada (PBS) e, posteriormente, inoculado em meios de transporte específicos, Lander para diagnóstico de C. fetus subsp. venerealis e Diamond para T. foetus. Para o diagnóstico das infecções por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus, as amostras foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) e cultivadas em meio ágar Columbia acrescido de antibiótico e Diamond, respectivamente. Para pesquisa de C. fetus subsp. venerealis, observou-se uma ocorrência de 1,8% (2/113) de animais positivos no exame microbiológico com confirmação pela PCR. Em relação à procedência, observou-se que 100% das amostras positivas pertenciam a dois machos do mesmo rebanho. Nenhum animal foi positivo na pesquisa de T. foetus. Este é o primeiro registro da infecção por C. fetus subsp. venerealis em búfalos no Brasil. Apesar da baixa ocorrência, recomenda-se adoção de medidas de controle, com o intuito de se evitar a disseminação do agente para outros rebanhos.(AU)

The objective this study was to determine the occurrence of infection with Campylobacter fetus subsp. venerealis and Tritrichomonas foetus in buffaloes in the State of Pernambuco, Brazil. Biological samples were collected (cervico vaginal mucus and shaved prepucial) of 113 animals, coming from 8 properties in different regions of the state. The biological material collected was transferred into phosphate buffered saline (PBS) and inoculated in the specific transport, Lander for diagnosis of C. fetus subsp. venerealis and Diamond for T. fetus subsequently. For the diagnosis of infection by Campylobacter fetus subsp. venrealis and Tritrichomonas foetus the samples were submitted to Polymerase Chain Reaction (PCR) grown in Columbia agar plus antibiotics and Diamond, respectively. There was an occurrence of 1.8% (2/113) of positive animals in the microbiological examination with confirmation by PCR, for C. fetus subsp. venerealis. We observed that 100% of positive samples were from two (2) males from the same herd. No animals were positive for T. foetus. This is the first report of infection with C. fetus subsp. venerealis in buffaloes in Brazil. Despite rare occurrence, control measures are recommended in order to prevent the spread of the agent to other herds.(AU)