Comparison of techniques for corneal epithelium cell culture for the collection of conditioned medium / Comparação das técnicas de cultivo de células epiteliais da córnea para a coleta de meio condicionado

ABSTRACT Purposes: To determine the best protocol in obtaining the higher yield of conditioned culture medium to be used for the bone marrow mesenchymal stem cell differentiation into corneal epithelial cells, five techniques for the primary culture of human corneal epithelial cells were evaluated. Methods: The studied culture techniques of corneal epithelial cells were: explants in culture flasks with and without hydrophilic surface treatment, on amniotic membrane, with enzymatic digestion, and by corneal scraping. The conditioned culture medium collected from these cultures was used to differentiate human bone marrow mesenchymal stem cells into corneal epithelial cells, which were characterized using flow cytometry with pan-cytokeratin and the corneal-specific markers, cytokeratin 3 and cytokeratin 12. Results: The culture technique using flasks with hydrophilic surface treatment resulted in the highest yield of conditioned culture medium. Flasks without surface treatment resulted to a very low success rate. Enzymatic digestion and corneal scraping showed contamination with corneal fibroblasts. The culture on amniotic membranes only allowed the collection of culture medium during the 1st cell confluence. The effectiveness of cell differentiation was confirmed by cytometry analysis using the collected conditioned culture medium, as demonstrated by the expressions of cytokeratin 3 (95.3%), cytokeratin 12 (93.4%), and pan-cytokeratin (95.3%). Conclusion: The culture of corneal epithelial cell explants in flasks with hydrophilic surface treatment is the best technique for collecting a higher yield of conditioned culture medium to be used to differentiate mesenchymal stem cells.

RESUMO Objetivos: Foram estudadas cinco técnicas de cultivo primário de células epiteliais de córnea humana para se determinar o melhor protocolo para a obtenção do maior rendimento de meio de cultivo condicionado para ser utilizado na diferenciação de células tronco mesenquimais para células epiteliais de córnea. Métodos: As técnicas de cultivo estudadas foram: explantes em frascos de cultivo com e sem tratamento hidrofílico de superfície, sobre membrana amniótica, com digestão enzimática e por raspado de córnea. O meio de cultivo condicionado foi coletado e as células tronco mesenquimais induzidas a se diferenciarem em células epiteliais da córnea utilizando o meio de cultivo condicionado. As células foram caracterizadas por citometria de fluxo com pan-citoqueratina e com os marcadores específicos da córnea, citoqueratina 3 e citoqueratina 12. Resultados: A técnica utilizando frascos com o tratamento de superfície apresentou o maior rendimento de meio de cultivo condicionado. Os frascos sem tratamento de superfície levaram a uma taxa de sucesso muito baixa. A digestão enzimática e a raspagem da córnea mostraram contaminação das culturas com fibroblastos de córnea. A cultura sobre membranas amnióticas só permitiu a coleta do meio de cultivo condicionado durante a 1ª confluência celular. A análise de citometria de fluxo confirmou o sucesso da diferenciação celular utilizando o meio de cultivo condicionado coletado, demonstrada pela expressão de citoqueratina 3 (95,3%), citoqueratina 12 (93,4%) e pan-citoqueratina (95,3%). Conclusão: O cultivo de explantes de células tronco mesenquimais em frascos com tratamento hidrofílico de superfície é a melhor técnica para a obtenção de um alto rendimento de meio de cultivo condicionado.

Efeito da curcumina e três análogos ­ DMAD, DMAM E RI75 ­ sobre viabilidade, diferenciação e expressão gênica em pré-osteoblastos / Effect of curcumin and three of its analogues - DMAD, DMAM and RI75 - on pre-osteoblast cells' viability, differentiation, and gene expression

A curcumina, encontrada nos rizomas da cúrcuma (Curcuma longa L.), tem sido amplamente estudada devido aos seus potenciais benefícios à saúde que, entre outros, incluem propriedades anti-inflamatórias, antioxidantes e cicatrizantes. No entanto, devido à sua baixa biodisponibilidade e farmacocinética desfavorável, compostos análogos são desenvolvidos e estudados para obter melhores características biofarmacêuticas e aumentar os efeitos biológicos. Neste trabalho, avaliamos a atividade da curcumina e três de seus análogos sintéticos (DMAD, DMAM e RI75) sobre a viabilidade e diferenciação de uma linhagem celular pré-osteoblástica (MC3T3-E1). A expressão dos genes fator de crescimento endotelial vascular (vegf), do ligante 12 da quimiocina de motivo C-X-C (cxcl12) e do fator de transcrição runt- related 2 (runx2) também foi avaliada. As células foram estimuladas com curcumina e os três análogos usando concentrações de 10, 30 ou 50 µM. A curcumina e os análogos testados apresentaram nenhuma, ligeira ou moderada citotoxicidade celular em comparação com o controle negativo, após 24, 48 e 72 horas, nas concentrações testadas. Os resultados de atividade de mineralização para a curcumina e o análogo DMAD não apresentaram diferença estatística com o grupo controle, enquanto os análogos DMAM e RI75 apresentaram menor atividade de mineralização. Nenhuma das substâncias apresentou expressão gênica diferencial de cxcl12, um ativador de células endoteliais e inflamatórias. Por outro lado, em comparação com o controle, o análogo de curcumina RI75 mostrou regulação positiva de runx2 e vegf, ambos relacionados ao reparo tecidual. Os resultados sugerem que os análogos DMAD, DMAM e RI75 apresentam citotoxicidade semelhante ou inferior à curcumina natural e maior atividade biológica, com destaque para o análogo RI75, sendo substâncias com potencial promissor para biomodificações de materiais.

Curcumin, found in the rhizomes of turmeric (Curcuma longa L.), has been widely studied due to its potential health benefits which, among others, include anti inflammatory, antioxidant and healing properties. However, due to their low bioavailability and unfavorable pharmacokinetics, analogous compounds are developed and studied to obtain better biopharmaceutical characteristics and increase biological effects. In this work, we evaluated the activity of curcumin and three of its synthetic analogues (DMAD, DMAM and RI75) on the viability and differentiation of a pre-osteoblastic cell line (MC3T3-E1). The expression of the genes vascular endothelial growth factor (vegf), C-X-C motif chemokine ligand 12 (cxcl12) and runt related transcription factor 2 (runx2) was also evaluated. Cells were stimulated with curcumin and the three analogues using concentrations of 10, 30 or 50 µM. Curcumin and the analogues tested showed no, slight or moderate cellular cytotoxicity compared to the negative control, after 24, 48 and 72 hours, at the concentrations tested. The mineralization activity results for curcumin and the DMAD analogue showed no statistical difference with the control group, while the DMAM and RI75 analogues showed lower mineralization activity. None of the substances showed differential gene expression of cxcl12, an activator of endothelial and inflammatory cells. On the other hand, compared to the control, the curcumin analogue RI75 showed upregulation of runx2 and vegf, both related to tissue repair. The results suggest that the DMAD, DMAM and RI75 analogues present similar or lower cytotoxicity compared to natural curcumin and greater biological activity, especially the RI75 analogue, being, therefore, substances with promising potential for biomodification of materials.

Culture of rat mesenchymal stem cells on PHBV-PCL scaffolds: analysis of conditioned culture medium by FT Raman spectroscopy / Cultivo de células-tronco mesenquimais de rato sobre arcabouços de PHBV-PCL: análise do meio de cultura condicionado por espectroscopia de FT-Raman

Mesenchymal stem cells (MSCs) have great potential for application in cell therapy and tissue engineering procedures because of their plasticity and capacity to differentiate into different cell types. Given the widespread use of MSCs, it is necessary to better understand some properties related to osteogenic differentiation, particularly those linked to biomaterials used in tissue engineering. The aim of this study was to develop an analysis method using FT-Raman spectroscopy for the identification and quantification of biochemical components present in conditioned culture media derived from MSCs with or without induction of osteogenic differentiation. All experiments were performed between passages 3 and 5. For this analysis, MSCs were cultured on scaffolds composed of bioresorbable poly(hydroxybutyrate co-hydroxyvalerate) (PHBV) and poly(ε-caprolactone) (PCL) polymers. MSCs (GIBCO®) were inoculated onto the pure polymers and 75:25 PHBV/PCL blend (dense and porous samples). The plate itself was used as control. The cells were maintained in DMEM (with low glucose) containing GlutaMAX® and 10% FBS at 37ºC with 5% CO2 for 21 days. The conditioned culture media were collected and analyzed to probe for functional groups, as well as possible molecular variations associated with cell differentiation and metabolism. The method permitted to identify functional groups of specific molecules in the conditioned medium such as cholesterol, phosphatidylinositol, triglycerides, beta-subunit polypeptides, amide regions and hydrogen bonds of proteins, in addition to DNA expression. In the present study, FT-Raman spectroscopy exhibited limited resolution since different molecules can express similar or even the same stretching vibrations, a fact that makes analysis difficult. There were no variations in the readings between the samples studied. In conclusion, FT-Raman spectroscopy did not meet expectations under the conditions studied.

As células-tronco mesenquimais (MSCs) possuem grande potencial para aplicação em procedimentos terapêuticos ligados a terapia celular e engenharia de tecidos, considerando-se a plasticidade e capacidade de formação em diferentes tipos celulares por elas. Dada a abrangência no emprego das MSCs, há necessidade de se compreender melhor algumas propriedades relacionadas à diferenciação osteogênica, particularmente liga à biomateriais usados em engenharia de tecidos. Este projeto objetiva o desenvolvimento de uma metodologia de análise empregando-se a FT-Raman para identificação e quantificação de componentes bioquímicos presentes em meios de cultura condicionados por MSCs, com ou sem indução à diferenciação osteogênica. Todos os experimentos foram realizados entre as passagens 3 e 5. Para essas análises, as MSCs foram cultivadas sobre arcabouços de polímeros biorreabsorvíveis de poli (hidroxibutirato-co-hidroxivalerato) (PHBV) e o poli (ε-caprolactona) (PCL). As MSCs (GIBCO®) foram inoculadas nos polímeros puros e na mistura 75:25 de PHBV / PCL (amostras densas e porosas). As células foram mantidas em DMEM (com baixa glicose) contendo GlutaMAX® e 10% de SFB a 37oC com 5% de CO2 por 21 dias. A própria placa foi usada como controle. Os meios de cultura condicionados foram coletados e analisadas em FT-Raman para sondagem de grupos funcionais, bem como possíveis variações moleculares associadas com a diferenciação e metabolismo celular. Foi possível discernir grupos funcionais de moléculas específicas no meio condicionado, como colesterol, fosfatidilinositol, triglicerídeos, forma Beta de polipeptídeos, regiões de amida e ligações de hidrogênio de proteínas, além da expressão de DNA. Na presente avaliação, a FT-Raman apresentou como uma técnica de resolução limitada, uma vez que modos vibracionais de estiramento próximos ou mesmo iguais podem ser expressos por moléculas diferente, dificultando a [...].

Culture of rat mesenchymal stem cells on PHBV-PCL scaffolds: analysis of conditioned culture medium by FT-Raman spectroscopy

Abstract Mesenchymal stem cells (MSCs) have great potential for application in cell therapy and tissue engineering procedures because of their plasticity and capacity to differentiate into different cell types. Given the widespread use of MSCs, it is necessary to better understand some properties related to osteogenic differentiation, particularly those linked to biomaterials used in tissue engineering. The aim of this study was to develop an analysis method using FT-Raman spectroscopy for the identification and quantification of biochemical components present in conditioned culture media derived from MSCs with or without induction of osteogenic differentiation. All experiments were performed between passages 3 and 5. For this analysis, MSCs were cultured on scaffolds composed of bioresorbable poly(hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate) (PHBV) and poly(-caprolactone) (PCL) polymers. MSCs (GIBCO®) were inoculated onto the pure polymers and 75:25 PHBV/PCL blend (dense and porous samples). The plate itself was used as control. The cells were maintained in DMEM (with low glucose) containing GlutaMAX® and 10% FBS at 37oC with 5% CO2 for 21 days. The conditioned culture media were collected and analyzed to probe for functional groups, as well as possible molecular variations associated with cell differentiation and metabolism. The method permitted to identify functional groups of specific molecules in the conditioned medium such as cholesterol, phosphatidylinositol, triglycerides, beta-subunit polypeptides, amide regions and hydrogen bonds of proteins, in addition to DNA expression. In the present study, FT-Raman spectroscopy exhibited limited resolution since different molecules can express similar or even the same stretching vibrations, a fact that makes analysis difficult. There were no variations in the readings between the samples studied. In conclusion, FT-Raman spectroscopy did not meet expectations under the conditions studied.

Resumo As células-tronco mesenquimais (MSCs) possuem grande potencial para aplicação em procedimentos terapêuticos ligados a terapia celular e engenharia de tecidos, considerando-se a plasticidade e capacidade de formação em diferentes tipos celulares por elas. Dada a abrangência no emprego das MSCs, há necessidade de se compreender melhor algumas propriedades relacionadas à diferenciação osteogênica, particularmente liga à biomateriais usados em engenharia de tecidos. Este projeto objetiva o desenvolvimento de uma metodologia de análise empregando-se a FT-Raman para identificação e quantificação de componentes bioquímicos presentes em meios de cultura condicionados por MSCs, com ou sem indução à diferenciação osteogênica. Todos os experimentos foram realizados entre as passagens 3 e 5. Para essas análises, as MSCs foram cultivadas sobre arcabouços de polímeros biorreabsorvíveis de poli (hidroxibutirato-co-hidroxivalerato) (PHBV) e o poli (-caprolactona) (PCL). As MSCs (GIBCO®) foram inoculadas nos polímeros puros e na mistura 75:25 de PHBV / PCL (amostras densas e porosas). As células foram mantidas em DMEM (com baixa glicose) contendo GlutaMAX® e 10% de SFB a 37oC com 5% de CO2 por 21 dias. A própria placa foi usada como controle. Os meios de cultura condicionados foram coletados e analisadas em FT-Raman para sondagem de grupos funcionais, bem como possíveis variações moleculares associadas com a diferenciação e metabolismo celular. Foi possível discernir grupos funcionais de moléculas específicas no meio condicionado, como colesterol, fosfatidilinositol, triglicerídeos, forma Beta de polipeptídeos, regiões de amida e ligações de hidrogênio de proteínas, além da expressão de DNA. Na presente avaliação, a FT-Raman apresentou como uma técnica de resolução limitada, uma vez que modos vibracionais de estiramento próximos ou mesmo iguais podem ser expressos por moléculas diferente, dificultando a análise. Não houve variações nas leituras entre as amostras estudadas, concluindo-se que a FT-Raman não atendeu às expectativas nas condições estudadas.

Culture of rat mesenchymal stem cells on PHBV-PCL scaffolds: analysis of conditioned culture medium by FT-Raman spectroscopy / Cultivo de células-tronco mesenquimais de rato sobre arcabouços de PHBV-PCL: análise do meio de cultura condicionado por espectroscopia de FT-Raman

Abstract Mesenchymal stem cells (MSCs) have great potential for application in cell therapy and tissue engineering procedures because of their plasticity and capacity to differentiate into different cell types. Given the widespread use of MSCs, it is necessary to better understand some properties related to osteogenic differentiation, particularly those linked to biomaterials used in tissue engineering. The aim of this study was to develop an analysis method using FT-Raman spectroscopy for the identification and quantification of biochemical components present in conditioned culture media derived from MSCs with or without induction of osteogenic differentiation. All experiments were performed between passages 3 and 5. For this analysis, MSCs were cultured on scaffolds composed of bioresorbable poly(hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate) (PHBV) and poly(ε-caprolactone) (PCL) polymers. MSCs (GIBCO®) were inoculated onto the pure polymers and 75:25 PHBV/PCL blend (dense and porous samples). The plate itself was used as control. The cells were maintained in DMEM (with low glucose) containing GlutaMAX® and 10% FBS at 37oC with 5% CO2 for 21 days. The conditioned culture media were collected and analyzed to probe for functional groups, as well as possible molecular variations associated with cell differentiation and metabolism. The method permitted to identify functional groups of specific molecules in the conditioned medium such as cholesterol, phosphatidylinositol, triglycerides, beta-subunit polypeptides, amide regions and hydrogen bonds of proteins, in addition to DNA expression. In the present study, FT-Raman spectroscopy exhibited limited resolution since different molecules can express similar or even the same stretching vibrations, a fact that makes analysis difficult. There were no variations in the readings between the samples studied. In conclusion, FT-Raman spectroscopy did not meet expectations under the conditions studied.

Resumo As células-tronco mesenquimais (MSCs) possuem grande potencial para aplicação em procedimentos terapêuticos ligados a terapia celular e engenharia de tecidos, considerando-se a plasticidade e capacidade de formação em diferentes tipos celulares por elas. Dada a abrangência no emprego das MSCs, há necessidade de se compreender melhor algumas propriedades relacionadas à diferenciação osteogênica, particularmente liga à biomateriais usados em engenharia de tecidos. Este projeto objetiva o desenvolvimento de uma metodologia de análise empregando-se a FT-Raman para identificação e quantificação de componentes bioquímicos presentes em meios de cultura condicionados por MSCs, com ou sem indução à diferenciação osteogênica. Todos os experimentos foram realizados entre as passagens 3 e 5. Para essas análises, as MSCs foram cultivadas sobre arcabouços de polímeros biorreabsorvíveis de poli (hidroxibutirato-co-hidroxivalerato) (PHBV) e o poli (ε-caprolactona) (PCL). As MSCs (GIBCO®) foram inoculadas nos polímeros puros e na mistura 75:25 de PHBV / PCL (amostras densas e porosas). As células foram mantidas em DMEM (com baixa glicose) contendo GlutaMAX® e 10% de SFB a 37oC com 5% de CO2 por 21 dias. A própria placa foi usada como controle. Os meios de cultura condicionados foram coletados e analisadas em FT-Raman para sondagem de grupos funcionais, bem como possíveis variações moleculares associadas com a diferenciação e metabolismo celular. Foi possível discernir grupos funcionais de moléculas específicas no meio condicionado, como colesterol, fosfatidilinositol, triglicerídeos, forma Beta de polipeptídeos, regiões de amida e ligações de hidrogênio de proteínas, além da expressão de DNA. Na presente avaliação, a FT-Raman apresentou como uma técnica de resolução limitada, uma vez que modos vibracionais de estiramento próximos ou mesmo iguais podem ser expressos por moléculas diferente, dificultando a análise. Não houve variações nas leituras entre as amostras estudadas, concluindo-se que a FT-Raman não atendeu às expectativas nas condições estudadas.

The ethics of nursing care for transgender people / A ética do cuidado de enfermagem às pessoas transgênero / La ética de la atención de enfermería a las personas transgénero

ABSTRACT Objectives: to discuss ethical aspects in nursing care for transgender people. Methods: reflective study based on the dilemmas that emerges in nursing care for transgender people. The report was structured around the four bioethical principles. Results: health care for trans people is complex, transversal to many devices and specialties and longitudinal in time, that is why it requires coordinated action. There is an ethical framework in which the nursing care must be observed in the care of this group. Final Considerations: the nurse as a health worker can assume several general lines in the care of transgender patients. So, complementary training should be provided not only to professionals, but also to students of nursing and other health sciences.

RESUMO Objetivos: discutir aspectos éticos na assistência de enfermagem às pessoas transgênero. Métodos: estudo reflexivo a partir dos dilemas que surgem no cuidado de enfermagem às pessoas transgênero. O relato foi estruturado em torno dos quatro princípios bioéticos. Resultados: a atenção à saúde de pessoas trans é complexa, transversal a muitos dispositivos e especialidades e longitudinal no tempo, por isso requer ação coordenada. Existe um referencial ético no qual se enquadram os cuidados de enfermagem que devem ser observados no atendimento a esse grupo. Considerações Finais: o enfermeiro como agente de saúde pode assumir diversas linhas gerais no atendimento a pacientes transgênero. Para tal, deve ser proporcionada formação complementar não só aos profissionais, mas também aos estudantes de enfermagem e outras ciências da saúde.

RESUMEN Objetivos: debatir sobre aspectos éticos en la atención de enfermería a personas transgénero. Métodos: estudio reflexivo fundamentado sobre los dilemas que se plantean en los cuidados de enfermería a personas transgénero. El relato se ha estructurado en torno a los cuatro principios bioéticos. Resultados: la atención sanitaria a las personas trans es compleja, transversal a muchos dispositivos y especialidades y longitudinal en el tiempo por lo que precisa de la actuación coordinada. Existe un marco ético en el que se encuadran los cuidados de enfermería que se precisan en la atención a este colectivo. Consideraciones Finales: la enfermera como agente de salud puede asumir diversas líneas generales en la atención a pacientes transgénero. Para ello, se debe brindar formación adicional no solo a los profesionales, también a los estudiantes de enfermería y de las demás ciencias de la salud.

Culture of rat mesenchymal stem cells on PHBV-PCL scaffolds: analysis of conditioned culture medium by FT Raman spectroscopy / Cultivo de células-tronco mesenquimais de rato sobre arcabouços de PHBV-PCL: análise do meio de cultura condicionado por espectroscopia de FT-Raman

Mesenchymal stem cells (MSCs) have great potential for application in cell therapy and tissue engineering procedures because of their plasticity and capacity to differentiate into different cell types. Given the widespread use of MSCs, it is necessary to better understand some properties related to osteogenic differentiation, particularly those linked to biomaterials used in tissue engineering. The aim of this study was to develop an analysis method using FT-Raman spectroscopy for the identification and quantification of biochemical components present in conditioned culture media derived from MSCs with or without induction of osteogenic differentiation. All experiments were performed between passages 3 and 5. For this analysis, MSCs were cultured on scaffolds composed of bioresorbable poly(hydroxybutyrate co-hydroxyvalerate) (PHBV) and poly(ε-caprolactone) (PCL) polymers. MSCs (GIBCO®) were inoculated onto the pure polymers and 75:25 PHBV/PCL blend (dense and porous samples). The plate itself was used as control. The cells were maintained in DMEM (with low glucose) containing GlutaMAX® and 10% FBS at 37ºC with 5% CO2 for 21 days. The conditioned culture media were collected and analyzed to probe for functional groups, as well as possible molecular variations associated with cell differentiation and metabolism. The method permitted to identify functional groups of specific molecules in the conditioned medium such as cholesterol, phosphatidylinositol, triglycerides, beta-subunit polypeptides, amide regions and hydrogen bonds of proteins, in addition to DNA expression. In the present study, FT-Raman spectroscopy exhibited limited resolution since different molecules can express similar or even the same stretching vibrations, a fact that makes analysis difficult. There were no variations in the readings between the samples studied. In conclusion, FT-Raman spectroscopy did not meet expectations under the conditions studied.(AU)

As células-tronco mesenquimais (MSCs) possuem grande potencial para aplicação em procedimentos terapêuticos ligados a terapia celular e engenharia de tecidos, considerando-se a plasticidade e capacidade de formação em diferentes tipos celulares por elas. Dada a abrangência no emprego das MSCs, há necessidade de se compreender melhor algumas propriedades relacionadas à diferenciação osteogênica, particularmente liga à biomateriais usados em engenharia de tecidos. Este projeto objetiva o desenvolvimento de uma metodologia de análise empregando-se a FT-Raman para identificação e quantificação de componentes bioquímicos presentes em meios de cultura condicionados por MSCs, com ou sem indução à diferenciação osteogênica. Todos os experimentos foram realizados entre as passagens 3 e 5. Para essas análises, as MSCs foram cultivadas sobre arcabouços de polímeros biorreabsorvíveis de poli (hidroxibutirato-co-hidroxivalerato) (PHBV) e o poli (ε-caprolactona) (PCL). As MSCs (GIBCO®) foram inoculadas nos polímeros puros e na mistura 75:25 de PHBV / PCL (amostras densas e porosas). As células foram mantidas em DMEM (com baixa glicose) contendo GlutaMAX® e 10% de SFB a 37oC com 5% de CO2 por 21 dias. A própria placa foi usada como controle. Os meios de cultura condicionados foram coletados e analisadas em FT-Raman para sondagem de grupos funcionais, bem como possíveis variações moleculares associadas com a diferenciação e metabolismo celular. Foi possível discernir grupos funcionais de moléculas específicas no meio condicionado, como colesterol, fosfatidilinositol, triglicerídeos, forma Beta de polipeptídeos, regiões de amida e ligações de hidrogênio de proteínas, além da expressão de DNA. Na presente avaliação, a FT-Raman apresentou como uma técnica de resolução limitada, uma vez que modos vibracionais de estiramento próximos ou mesmo iguais podem ser expressos por moléculas diferente, dificultando a [...].(AU)

Genetic differentiation of five sea cucumber species from the Red Sea, Hurghada, Egypt / Diferenciação genética de cinco espécies de pepino-do-mar do Mar Vermelho, Hurghada, Egito

This study aimed to assess the genetic differentiation and relationship among five sea cucumber species from the Red Sea in Egypt, namely Holothuria atra, H. impatiens, H. leucospilota, Actinopyga crassa and A. mauritiana, using Inter Simple Sequence Repeated (ISSR) and Start Codon Targeted (SCoT) markers. A collection of 100 specimens, with 20 individuals per species, was gathered for the analysis. With ten ISSR primers, 135 amplified bands were detected, including 11 distinct species-specific bands, indicating high-level polymorphism among species. Using ten SCoT primers, 151 amplicons were generated, including 30 species-specific bands, with 52% polymorphic bands indicating high-level polymorphism among species. The degree of genetic similarity (GS) among the different genotypes of species was calculated based on ISSR bands analysis, which ranged from 93% between H. atra and H. impatiens to 86% between H. atra and A. crassa. The highest genetic similarity was observed between H. atra and H. impatiens (90%), while the lowest was identified between A. crassa and A. mauritiana (75%) using SCoT bands. Notably, the ISSR and SCoT-based DNA analysis revealed similar genetic relationships between H. atra and H. impatiens compared to other sea cucumber species studied. This study provides new insights into the genetic diversity and relationship among sea cucumber species in the Red Sea, which could have implications for their conservation and management.

Este estudo teve como objetivo avaliar a diferenciação genética e a relação entre cinco espécies de pepinos-do-mar do Mar Vermelho no Egito, quais sejam, Holothuria atra, Holothuria impatiens, Holothuria leucospilota, Actinopyga crassa e Actinopyga mauritiana, usando marcadores Inter Simple Sequence Repeated (ISSR) e Start Codon Targeted (SCoT). Uma coleção de 100 espécimes, com 20 indivíduos por espécie, foi reunida para análise. Com 10 primers ISSR, 135 bandas amplificadas foram detectadas, incluindo 11 bandas específicas de espécies distintas, indicando polimorfismo de alto nível entre as espécies. Usando 10 primers SCoT, 151 amplicons foram gerados, incluindo 30 bandas específicas da espécie, com 52% de bandas polimórficas indicando polimorfismo de alto nível entre as espécies. O grau de similaridade genética (GS) entre os diferentes genótipos das espécies foi calculado com base na análise das bandas ISSR, que variou de 93% entre H. atra e H. impatiens a 86% entre H. atra e A. crassa. A maior similaridade genética foi observada entre H. atra e H. impatiens (90%), enquanto a menor foi identificada entre A. crassa e A. mauritiana (75%) usando bandas SCoT. Notavelmente, a análise de DNA baseada em ISSR e SCoT revelou relações genéticas semelhantes entre H. atra e H. impatiens em comparação com outras espécies de pepino-do-mar estudadas. Este estudo fornece novas informações sobre a diversidade genética e a relação entre as espécies de pepino-do-mar no Mar Vermelho, o que pode ter implicações para sua conservação e manejo.

Spatiotemporal differentiation and spatial correlation of agricultural total factor productivity in China: an estimation based on the data of prefecture-level cities / Diferenciação espaço-temporal e correlação espacial da produtividade fatorial total agrícola na China: uma estimativa baseada em dados de cidades em nível de prefeitura

The improvement of agricultural TFP is critical to promoting the high-quality development of agriculture. This paper described and identified the spatiotemporal differentiation characteristics and spatial correlation of China's agricultural TFP in 283 prefecture-level cities from 2001 to 2018 using the Metafroniter-Malmquist and Moran index. The results showed that: (1) From 2001 to 2018, China's agricultural TFP was 6.64%, and its growth was mainly driven by agricultural technological progress. The contribution of agricultural technological efficiency was small. The growth law showed an "inverted U-shaped" growth trend of first rising and then falling. (2) China's agricultural TFP has significant characteristics of regional unbalanced growth. (3) The growth rate of agricultural TFP in most prefecture-level cities is medium and slow, and most prefecture-level cities relied on agricultural technological progress to promote growth. (4) The agricultural TFP of various cities showed a significant spatial correlation phenomenon of "high-high" or "low-low." This study has significant theoretical and practical value for maintaining the stable growth of China's agricultural TFP and promoting the high-quality development of China's agriculture.

A melhoria do TFP agrícola é fundamental para promover o desenvolvimento de alta qualidade da agricultura. Este artigo descreve e identifica as características de diferenciação espaço-temporal e a correlação espacial do TFP agrícola chinês em 283 cidades de nível de prefeitura, de 2001 a 2018, usando os índices Metafroniter-Malmquist e Moran. Os resultados mostram que: (1) De 2001 a 2018, o TFP agrícola da China foi de 6,64%, e seu crescimento foi impulsionado principalmente pelo progresso tecnológico agrícola. A contribuição da eficiência tecnológica agrícola foi pequena. A lei de crescimento mostrou uma tendência de crescimento "em forma de U invertido" de primeiro aumento e depois queda. (2) O TFP agrícola chinês apresenta características significativas de crescimento desequilibrado regional. (3) A taxa de crescimento do TFP agrícola na maioria das cidades de nível de prefeitura é média e lenta, e a maioria das cidades de nível de prefeitura depende do progresso tecnológico agrícola para promover o crescimento. (4) O TFP agrícola de várias cidades apresentou um fenômeno de correlação espacial significativo de "alto-alto" ou "baixo-baixo". Este estudo tem valor teórico e prático significativo para manter o crescimento estável do TFP agrícola da China e promover o desenvolvimento de alta qualidade da agricultura da China.

Spatiotemporal differentiation and spatial correlation of agricultural total factor productivity in China: an estimation based on the data of prefecture-level cities / Diferenciação espaço-temporal e correlação espacial da produtividade fatorial total agrícola na China: uma estimativa baseada em dados de cidades em nível de prefeitura

ABSTRACT: The improvement of agricultural TFP is critical to promoting the high-quality development of agriculture. This paper described and identified the spatiotemporal differentiation characteristics and spatial correlation of China's agricultural TFP in 283 prefecture-level cities from 2001 to 2018 using the Metafroniter-Malmquist and Moran index. The results showed that: (1) From 2001 to 2018, China's agricultural TFP was 6.64%, and its growth was mainly driven by agricultural technological progress. The contribution of agricultural technological efficiency was small. The growth law showed an "inverted U-shaped" growth trend of first rising and then falling. (2) China's agricultural TFP has significant characteristics of regional unbalanced growth. (3) The growth rate of agricultural TFP in most prefecture-level cities is medium and slow, and most prefecture-level cities relied on agricultural technological progress to promote growth. (4) The agricultural TFP of various cities showed a significant spatial correlation phenomenon of "high-high" or "low-low." This study has significant theoretical and practical value for maintaining the stable growth of China's agricultural TFP and promoting the high-quality development of China's agriculture.

RESUMO: A melhoria do TFP agrícola é fundamental para promover o desenvolvimento de alta qualidade da agricultura. Este artigo descreve e identifica as características de diferenciação espaço-temporal e a correlação espacial do TFP agrícola chinês em 283 cidades de nível de prefeitura, de 2001 a 2018, usando os índices Metafroniter-Malmquist e Moran. Os resultados mostram que: (1) De 2001 a 2018, o TFP agrícola da China foi de 6,64%, e seu crescimento foi impulsionado principalmente pelo progresso tecnológico agrícola. A contribuição da eficiência tecnológica agrícola foi pequena. A lei de crescimento mostrou uma tendência de crescimento "em forma de U invertido" de primeiro aumento e depois queda. (2) O TFP agrícola chinês apresenta características significativas de crescimento desequilibrado regional. (3) A taxa de crescimento do TFP agrícola na maioria das cidades de nível de prefeitura é média e lenta, e a maioria das cidades de nível de prefeitura depende do progresso tecnológico agrícola para promover o crescimento. (4) O TFP agrícola de várias cidades apresentou um fenômeno de correlação espacial significativo de "alto-alto" ou "baixo-baixo". Este estudo tem valor teórico e prático significativo para manter o crescimento estável do TFP agrícola da China e promover o desenvolvimento de alta qualidade da agricultura da China.

Automutilações: uma problemática dos limites / Self-mutilations: a problem of limits / Les automutilations: une problématique des limites / Automutilaciones: una problemática de límites

O objetivo do presente artigo é analisar a estreita relação entre o fenômeno das automutilações e a problemática dos limites, tendo como ponto de partida o ataque à pele como condição de possibilidade para essa prática. A pele remete à sensorialidade e às primeiras noções de eu, tendo como função proteger nossa individualidade e fundamentar nossa troca com o outro. Ela contém uma premissa de integração, constituindo-se como uma fronteira que marca os limites da própria existência. Nas automutilações, a agressão à pele denuncia um prejuízo na construção da diferenciação entre sujeito e objeto, deixando em evidência uma confusão nos limites do sujeito. Nossa hipótese é a de que o recurso ao corpo, mais especificamente o ataque à pele, nas automutilações, surge como uma tentativa de contenção do eu em momentos nos quais o sujeito sente que pode haver o risco da perda da integridade narcísica.

Resumos This paper analyzes the close relationship between self-mutilation and the problem of limits, understanding the attack on the skin as a condition of possibility for this practice. The skin, which leads us to sensoriality and the first notions of self, acts to protect our individuality and support our interactions with the Other. It contains a premise of integration, constituting a boundary that marks the limits of existence itself. In self-mutilations, the attack on the skin reveals a loss in the the differentiation between subject and object, revealing a confusion in the subject's limits. The text posits that the recourse of the body, by attacking the skin, in self-mutilations, emerges as an attempt to contain the self in moments when the subject feels at risk of losing their narcissistic integrity.

Cet article analyse la relation étroite entre le phénomène d'automutilation et le problème des limites, en comprenant l'attaque de la peau comme une condition de possibilité de cette pratique. La peau, qui renvoie à la sensorialité et aux premières notions de soi, agit pour protéger notre individualité et soutenir nos interactions avec l'Autre. Elle contient une prémisse d'intégration, constituant une frontière qui marque les limites l'existence elle-même. Dans les automutilations, l'atteinte à la peau révèle une perte dans la construction de la différenciation entre sujet et objet, témoignant d'une confusion dans les limites du sujet. Le texte postule que le recours au corps, en attaquant la peau, dans les automutilations, émerge comme une tentative de contenir le soi dans les moments où le sujet sent en danger de perdre son intégrité narcissique.

El objetivo de este artículo es analizar la estrecha relación entre el fenómeno de las automutilaciones y el problema de los límites, teniendo como punto de partida el ataque a la piel como condición de posibilidad para esta práctica. La piel se refiere a la sensorialidad y a las primeras nociones del yo, teniendo como función proteger nuestra individualidad y fundamentar nuestro intercambio con el otro. Contiene una premisa de integración, constituyendo una frontera que marca los límites de la existencia misma. En las automutilaciones, la agresión a la piel revela una pérdida en la construcción de la diferenciación entre sujeto y objeto, evidenciando una confusión en los límites del sujeto. Nuestra hipótesis es que recurrir al cuerpo, más específicamente atacar la piel, en las automutilaciones, aparece como un intento de contener al yo en momentos en los que el sujeto siente que puede haber riesgo de pérdida de la integridad narcisista.

Avaliação da diferenciação das células da medula óssea de camundongos AIRmax e AIRmin tratados com DMBA e/ou crotoxina

The development of leukemic is related to environmental and genetic factors. When exposed to aromatic hydrocarbons (PAH), such as the carcinogen and immunosuppressant 7,12-dimethylbenz(a)anthracene (DMBA), the individuals can develop neoplasias. The objective of the present study was to investigate the modulatory effects of crotoxin under the action of DMBA in the bone marrow of mice of the AIR lines. Crotoxin is the main component of Crotalus durrissus terrificus venom, responsible for high toxicity, and has an immunomodulatory, anti-inflammatory, and analgesic effect with significant therapeutic potential. In this work, we used mice phenotypically selected for maximum (AIRmax) or minimum (AIRmin) acute inflammatory response and that have low (Ahrd) or high (Ahrb1) affinity alleles of the aryl hydrocarbon receptor (AHR), conferring resistance or susceptibility to the risk of developing cancer. Mice were treated intraperitoneally with 50mg/kg DMBA and subcutaneously with 54μg/kg of Crotoxin and after 48 hours, bone marrow cells were obtained for total and differential counts. The results showed that DMBA treatment caused the depletion of immature neutrophil and monocyte bone marrow populations only in AIRmin mice. The administration of crotoxin provided a recovery of these populations in these mice. The results also showed the importance of the polymorphism of the Ahr gene concerning resistance or susceptibility to PAHs, suggesting an inhibition of the cell cycle by DMBA and a reversal of this effect by Crotoxin. Thus, new approaches should be explored to evaluate the DMBA's role in the cell cycle of different cell populations and the role of Crotoxin as a protector action.

O desenvolvimento da leucemia está relacionado a fatores ambientais e genéticos. Quando expostos a hidrocarbonetos aromáticos (HPA), como o carcinogênico e imunossupressor 7,12-dimetilbenz(a)antraceno (DMBA), os indivíduos podem desenvolver neoplasias. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos modulatórios da crotoxina sob a ação da DMBA na medula óssea de camundongos da linhagem AIR. A crotoxina é o principal componente do veneno de Crotalus durrissus terrificius, responsável pela alta toxicidade, e tem efeito imunomodulador, anti-inflamatório e analgésico com importante potencial terapêutico. Neste trabalho, foram utilizados camundongos fenotipicamente selecionados para resposta inflamatória aguda máxima (AIRmax) ou mínima (AIRmin) e que apresentam alelos de baixa afinidade (Ahrd) ou alta (Ahrb1) ao receptor de hidrocarboneto de aril (AHR), conferindo resistência ou suscetibilidade ao risco de desenvolver câncer. Os camundongos foram tratados por via intraperitoneal com 50mg/kg de DMBA e subcutaneamente com 54μg/kg de Crotoxina e após 48 horas, células da medula óssea foram obtidas para contagens totais e diferenciais. Os resultados mostraram que o tratamento com DMBA causou a depleção de populações imaturas de neutrófilos e monócitos da medula óssea apenas em camundongos AIRmin. A administração de crotoxina proporcionou uma recuperação dessas populações nesses camundongos. Os resultados também mostraram a importância do polimorfismo do gene Ahr em relação à resistência ou suscetibilidade aos HPA, sugerindo uma inibição do ciclo celular pela DMBA e uma reversão desse efeito pela Crotoxina. Assim, novas abordagens devem ser exploradas para avaliar o papel do DMBA no ciclo celular de diferentes populações celulares e o papel da Crotoxina como ação protetora.

Macho ou fêmea? Como o sexo dos vertebrados é determinado / Male or female? How the vertebrate sex are determined / ¿Macho o hembra? Cómo se determina el sexo de los vertebrados

La reproducción sexual es la forma de propagación más antigua y universal utilizada por los vertebrados. Los mecanismos que controlan la determinación sexual y la diferenciación en estos animales son diversos y dependen de una amplia variedad de factores genéticos, así como en algunos casos de factores ambientales. El sexo genético puede definirse por factores genéticos hereditarios que se determinan en la fertilización. Por otro lado, la diferenciación gonadal depende de la activación de factores transcripcionales que se expresan durante la ventana de diferenciación sexual. Dichos factores pueden tener su expresión alterada por condiciones ambientales como la temperatura y la osmolaridad, entre otros. Estos procesos sexuales se dividen clásicamente en determinación y diferenciación sexual, respectivamente. Con base en tales hechos, esta revisión tiene como objetivo mostrar los fundamentos básicos de los procesos de determinación y diferenciación sexual en vertebrados, enfatizando el grupo de peces teleósteos.(AU)

Sexual reproduction is the oldest and universal form of propagation used by vertebrates. The mechanisms that control sexual determination and differentiation in these animals are diverse and depend on a wide variety of genetic factors as well as in some cases environmental factors. Genetic sex can be define by hereditary genetic factors that are determined in fertilization. On the other hand, gonadal differentiation depends on the activation of transcriptional factors that are expressed during the sexual differentiation window. Such factors may have their expression altered by environmental conditions such as temperature and osmolarity, among others. These sexual processes are classically divided into sexual determination and differentiation, respectively. Based on such facts, this review aims to show the basic theoretical reasoning of the processes of sexual determination and differentiation in vertebrates, emphasizing the group of teleost fishes.(AU)

A reprodução sexual é a forma de propagação mais antiga e universal utilizada pelos vertebrados. Os mecanismos que controlam a determinação e diferenciação sexual nestes animais são diversos e dependem de uma grande variedade de fatores genéticos bem como em alguns casos de fatores ambientais. O sexo genético pode ser definido por fatores genéticos hereditários que são determinados na fecundação. Por outro lado, a diferenciação gonadal depende da ativação de fatores transcricionais que são expressos durante a janela de diferenciação sexual. Tais fatores podem ter sua expressão alterada por condições ambientais como a temperatura e a osmolaridade dentre outros. Estes processos sexuais são classicamente divididos em determinação e diferenciação sexual, respectivamente. Baseados em tai fatos, esta revisão tem como objetivo mostrar a fundamentação básica dos processos de determinação e diferenciação sexual em vertebrados com ênfase no grupo dos peixes teleósteos.(AU)

Potential effect of hyaluronic acid and triamcinolone acetate, alone or combined, on chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells / Efecto potencial del ácido hialurónico y del acetato de triamcinolona solos o combinados sobre la diferenciación condrogénica de células-tronco mesenquimales / Efeito potencial do ácido hialurônico e triancinolona acetonida, isolados e combinados, na diferenciação condrogênica de células-tronco mensenquimais

Abstract Background: Osteoarthritis is a complex degenerative disease with several factors contributing to joint damage. Objective: To compare the potential effect of hyaluronic acid (HA) and triamcinolone acetonide (TA), alone or combined, on the in vitro chondrogenic differentiation process of mesenchymal stem cells (MSCs). Methods: MSCs were divided into four groups: Control, HA, TA, and HA/TA combined. Each treatment group was cultured for 14 days in chondrogenic differentiation medium. The chondrogenic differentiation potential was assessed by histology and immunohistochemistry. Results: The HA and HA/TA-treated MSCs presented histological characteristics similar to native chondrocytes. The extracellular matrix (ECM) of TA-treated MSCs was compact and organized. Glycosaminoglycan staining was intense in Control, moderate in TA, slight in HA/TA, and undetectable in HA. Type II collagen immunoreactivity was high in the TA-treated ECM and MSCs. Conclusions: Histological analysis shows that HA influences morphological development similar to chondrocytes of the MSCs, but with low expression of specific cartilage molecules. The TA promotes formation of a compact and organized ECM.

Resumen Antecedentes: La osteoartritis es una enfermedad degenerativa compleja en la cual varios factores contribuyen al daño articular. Objetivo: Comparar el efecto del ácido hialurónico (HA) y acetónido de triamcinolona (TA), solos o en combinación, en el proceso de diferenciación condrogénica in vitro de células madre mesenquimales (MSCs). Métodos: Las MSCs fueron divididas en cuatro grupos: Control, HA, TA y HA/TA, y cultivadas por 14 días en medio de diferenciación condrogénica para cada tratamiento. El potencial de diferenciación condrogénica fue analizado por medio de histología e inmunohistoquímica. Resultados: Las MSCs tratadas con HA y HA/TA, presentaron características histológicas similares a los condrocitos nativos, y la matriz extracelular (ECM) de MSCs tratadas con TA fue más compacta y organizada. La tinción de glicosaminoglicanos fue intensa en el Control, moderada en TA, ligera en HA/TA, y sin tinción en HA. La inmunoreactividad para colágeno tipo II fue más alta en las MSCs y ECM tratadas con TA. Conclusión: El análisis histológico muestra que el HA influencia un desarrollo morfológico similar a los condrocitos de las MSCs, pero con baja expresión de moléculas específicas de cartílago. La TA promueve la formación de una ECM compacta y organizada.

Resumo Antecedentes: A osteoartrite é uma doença degenerativa complexa, na qual vários fatores contribuem ao dano articular. Objetivo: Comparar o efeito do ácido hialurônico (HA) e Triancinolona acetonida (TA), só ou combinado no processo de diferenciação condrogênica in vitro de células tronco mesenquimais (MSCs). Métodos: MSCs foram divididas em 4 grupos: Controle, HA, TA y HA/TA e cultivadas por 14 dias com meio de diferenciação condrogênica e seus respectivos tratamentos. O potencial de diferenciação condrogênica foi acessado por meio de histologia e imunohistoquímica. Resultados: Histologicamente, MSCs tratadas com HA e HA/TA apresentaram características semelhantes de condrócitos nativos, e a matriz extracelular de MSCs tratadas com TA foi mais compacta e organizada. A coloração para glicosaminoglicanos foi intensa no Controle, moderada no TA, leve no HA/TA e sem coloração com HA. Para os grupos tratamento, a imunoreatividade para colágeno tipo II foi maior nas células e matriz extracelular tratadas com TA. Conclusão: Mediante análise histológica, o HA influenciou o desenvolvimento morfológico semelhante a condrócitos das MSCs, mas com baixa expressão de moléculas específicas de cartilagem. A TA promoveu a formação de uma matriz extracelular compacta e organizada.

A arte da diferenciação do modo humano: Nise da Silveira: o elo perdido entre duas tradições / The art of differentiating the human way: Nise da Silveira: the missing link between two traditions / El arte de diferenciar el modo humano: Nise da Silveira: el eslabón perdido entre dos tradiciones

Neste artigo, elaboramos um diálogo entre a psicologia analítica de Carl Jung e a filosofia da imanência de Baruch Spinoza a partir das "Cartas a Spinoza" de Nise da Silveira. Principalmente através da análise das três primeiras cartas, propomo-nos uma visada ao pensamento da Dra. Nise focada na epistemologia das ciências da mente humana e na gênese dos conceitos da psicologia analítica, tais como o processo de individuação. Tais cartas constituem um verdadeiro exercício de imaginação ativa. ■

In this article, we elaborated a dialogue between the analytical psychology of Carl Jung and the immanence philosophy of Baruch Spinoza based on "Letters to Spinoza" of Nise da Silveira. Mainly through the analysis of the first three letters, we propose a view to the thinking of Dra. Nise focused on the epistemology of the sciences of the human mind and on the genesis of the concepts of analytical psychology, such as the individuation process. Such letters constitute a real exercise of active imagination. ■

En este artículo, elaboramos un diálogo entre la psicología analítica de Carl Jung y la filosofía de la inmanencia de Baruch Spinoza basada en las "Cartas a Spinoza" de Nise da Silveira. Principalmente a través del análisis de las tres primeras letras, proponemos una mirada al pensamiento de la Dra. Nise centrada en la epistemología de las ciencias de la mente humana y en la génesis de los conceptos de psicología analítica, como el proceso de individuación. Estas cartas son un verdadero ejercicio de imaginación activa. ■

Importancia teórica de la capacidad coordinativa de diferenciación de los gestos técnicos en fútbol sub-12 / Importância teórica da capacidade de coordenação da diferenciação de gestos técnicos no futebol sub-12 / Theoretical importance of the coordinative capacity of differentiation of technical gestures in U-12 soccer

RESUMEN La coordinación motriz se define como la capacidad neuromuscular de trabajar conjuntamente diferentes componentes de la preparación deportiva, de los sentidos y segmentos corporales con precisión. Por ello, mejorar los alcances y limitaciones teóricas de los entrenadores nacionales, en términos de utilidad e importancia del entrenamiento coordinativo en general y la capacidad de diferenciación de los gestos técnicos en particular, posibilita potenciar prospectivamente el proceso docente-educativo. El objetivo de esta investigación consiste en validar teóricamente algunos indicadores que rigen la importancia y la prioridad del entrenamiento coordinativo y de diferenciación de los gestos técnicos en futbolistas sub-12. Esta investigación descriptivo-explicativa es de orden correlacional y se basa en cuatro indicadores teóricos, evaluados por 22 especialistas nacionales e internacionales, clasificados en dos grupos independientes (grupo 1: especialistas nacionales; grupo 2: especialistas internacionales). De forma general, no se evidencian diferencias significativas en las calificaciones de dos indicadores estudiados (ImC: p=0.974 y PeC: p=0.923), existiendo diferencias significativas en el resto (ImD: p=0.000 y PeD: p=0.003); en estos dos últimos, se obtiene un mayor rango promedio, a favor del grupo 2 (grupo 1: ImD=6.92; grupo 2: ImD=17.00; grupo 1: PeD=7.83; grupo 2: PeD=15.90). La validación por especialista evidencia la importancia teórica que reviste el entrenamiento de la capacidad de coordinación en futbolistas de iniciación. Además, se evidencia un nivel significativo de importancia y prioridad en los especialistas internacionales en el entrenamiento de la diferenciación del fútbol sub-12, con respecto a los especialistas nacionales.

RESUMO A coordenação motora é definida como a capacidade neuromuscular de trabalhar em conjunto diferentes componentes da preparação desportiva, dos sentidos e dos segmentos corporais com precisão. Assim, a melhoria do âmbito e das limitações teóricas dos treinadores nacionais, em termos de utilidade e importância da formação de coordenação em geral e da capacidade de diferenciar gestos técnicos em particular, torna possível melhorar prospectivamente o processo ensino-educativo. O objetivo desta investigação é validar teoricamente alguns indicadores que regem a importância e a prioridade da formação coordenadora e a diferenciação dos gestos técnicos nos jogadores de futebol sub-12. Esta investigação descritiva-explicativa é de ordem correlativa e baseia-se em quatro indicadores teóricos, avaliados por 22 especialistas nacionais e internacionais, classificados em dois grupos independentes (grupo 1: especialistas nacionais; grupo 2: especialistas internacionais). Em geral, não há diferenças significativas nas classificações de dois indicadores estudados (ImC: p=0,974 e PeC: p=0,923), com diferenças significativas no resto (ImD: p=0,000 e PeD: p=0,003); nos dois últimos, obtém-se um intervalo médio mais elevado, a favor do grupo 2 (grupo 1: ImD=6,92; grupo 2: ImD=17,00; grupo 1: PeD=7,83; grupo 2: PeD=15,90). A validação por especialistas evidencia a importância teórica da formação da capacidade de coordenação em jogadores de futebol principiantes. Além disso, é evidenciado um nível significativo de importância e prioridade nos especialistas internacionais no treino de diferenciação no futebol sub-12, no que diz respeito aos especialistas nacionais.

ABSTRACT Motor coordination is defined as the neuromuscular capacity to work together different components of sports training, senses and body segments with precision. Therefore, improving the theoretical scope and limitations of national coaches in usefulness and importance terms of coordination training in general, and the capacity to differentiate technical gestures in particular, makes it possible to prospectively enhance the teaching-educational process. The objective of this work is theoretically validate some indicators that govern the importance and priority of coordination training and differentiation of technical gestures in U-12 soccer players. This is a descriptive-explanatory correlational research, studied four theoretical indicators evaluated by 22 national and international specialists classified into two independent groups (Group 1: National Specialists; Group 2; International Specialists), comparing results and deducing future national strategies to improve the coordinating component and the differentiation of technical gestures in U-12 players. In general, there are no significant differences in the scores of two indicators studied (ImC: p=0.974 and PeC: p=0.923), with significant differences in the rest (ImD: p=0.000 and PeD: p=0.003); in the latter two, a higher average range is obtained, in favor of group 2 (group 1: ImD=6.92; group 2: ImD=17.00; group 1: PeD=7.83; group 2: PeD=15.90). The validation by specialist evidences the theoretical importance of the training of the coordination capacity in initiation soccer players. In addition, a significant level of importance and priority is evidenced in the international specialists in the training of differentiation in U-12 soccer, with respect to the national specialists.

GDF-15 como Biomarcador em Doenças Cardiovasculares / GDF-15 as a Biomarker in Cardiovascular Disease

Resumo Nos últimos anos, vários biomarcadores estão ganhando importância clínica na avaliação diagnóstica e prognóstica de pacientes com doenças cardiovasculares. O fator de crescimento e diferenciação celular-15 (GDF-15) é uma citocina induzida por estresse e inflamação, membro da família do TGF-, cuja produção no miocárdio foi demonstrada experimentalmente em resposta à injúria isquêmica ou sobrecarga cardíaca. Este novo marcador foi positivamente correlacionado com aumento do risco de eventos cardiovasculares em estudos populacionais e configurou-se preditor independente de mortalidade e prognóstico adverso em pacientes com doença arterial coronariana e insuficiência cardíaca. Este trabalho tem como objetivo revisar o valor diagnóstico e prognóstico do GDF-15 em diferentes cenários na cardiologia.

Abstract In the last years, several diagnostic and prognostic biomarkers have been studied in cardiovascular disease. Growth differentiation factor-15 (GDF-15), a cytokine belonging to the transforming growth factor- (TGF-) family, is highly up-regulated in stress and inflammatory conditions and has been correlated to myocardial injury and pressure cardiac overload in animal models. This new biomarker has been positively correlated with increased risk of cardiovascular events in population studies and shown an independent predictor of mortality in patients with coronary artery disease and heart failure. This review aimed to summarize the current evidence on the diagnostic and prognostic value of GDF-15 in different settings in cardiology.

Macho ou fêmea? Como o sexo dos vertebrados é determinado / Male or female? How the vertebrate sex are determined / ¿Macho o hembra? Cómo se determina el sexo de los vertebrados

La reproducción sexual es la forma de propagación más antigua y universal utilizada por los vertebrados. Los mecanismos que controlan la determinación sexual y la diferenciación en estos animales son diversos y dependen de una amplia variedad de factores genéticos, así como en algunos casos de factores ambientales. El sexo genético puede definirse por factores genéticos hereditarios que se determinan en la fertilización. Por otro lado, la diferenciación gonadal depende de la activación de factores transcripcionales que se expresan durante la ventana de diferenciación sexual. Dichos factores pueden tener su expresión alterada por condiciones ambientales como la temperatura y la osmolaridad, entre otros. Estos procesos sexuales se dividen clásicamente en determinación y diferenciación sexual, respectivamente. Con base en tales hechos, esta revisión tiene como objetivo mostrar los fundamentos básicos de los procesos de determinación y diferenciación sexual en vertebrados, enfatizando el grupo de peces teleósteos.

Sexual reproduction is the oldest and universal form of propagation used by vertebrates. The mechanisms that control sexual determination and differentiation in these animals are diverse and depend on a wide variety of genetic factors as well as in some cases environmental factors. Genetic sex can be define by hereditary genetic factors that are determined in fertilization. On the other hand, gonadal differentiation depends on the activation of transcriptional factors that are expressed during the sexual differentiation window. Such factors may have their expression altered by environmental conditions such as temperature and osmolarity, among others. These sexual processes are classically divided into sexual determination and differentiation, respectively. Based on such facts, this review aims to show the basic theoretical reasoning of the processes of sexual determination and differentiation in vertebrates, emphasizing the group of teleost fishes.

A reprodução sexual é a forma de propagação mais antiga e universal utilizada pelos vertebrados. Os mecanismos que controlam a determinação e diferenciação sexual nestes animais são diversos e dependem de uma grande variedade de fatores genéticos bem como em alguns casos de fatores ambientais. O sexo genético pode ser definido por fatores genéticos hereditários que são determinados na fecundação. Por outro lado, a diferenciação gonadal depende da ativação de fatores transcricionais que são expressos durante a janela de diferenciação sexual. Tais fatores podem ter sua expressão alterada por condições ambientais como a temperatura e a osmolaridade dentre outros. Estes processos sexuais são classicamente divididos em determinação e diferenciação sexual, respectivamente. Baseados em tai fatos, esta revisão tem como objetivo mostrar a fundamentação básica dos processos de determinação e diferenciação sexual em vertebrados com ênfase no grupo dos peixes teleósteos.

Influência do uso combinado do EDTA em procedimento endodôntico regenerativo: estudo experimental em modelo animal e revisão sistemática / Influence of combined use of EDTA in regenerative endodontic procedure: animal study and systematic review

Os objetivos deste estudo foram: 1. Verificar a influência do uso do ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) no processo de reparo após revascularização pulpar em molares imaturos de ratos, avaliando a formação de tecido mineralizado, presença de infiltrado inflamatório, e presença/maturação de fibras colágenas; 2. Verificar a influência do uso do EDTA na presença de fatores de crescimento após revascularização pulpar em molares imaturos de ratos, avaliando a imunomarcação do fator de transformação do crescimento (TGF)-ß1 e fator de crescimento de fibroblastos (FGF)-2; 3. Verificar a influência do uso do EDTA em fatores relacionados ao procedimento endodôntico regenerativo, por meio de revisão sistemática. Para as análises experimentais, molares inferiores direito ou esquerdo de 12 ratos Wistar (4 semanas) tiveram as polpas removidas, e foram divididos aleatoriamente nos grupos (n = 6): NaOCl - irrigação com hipoclorito de sódio (NaOCl) 2,5%; e NaOCl-EDTA ­ NaOCl 2,5%, seguido de EDTA 17%. Após, foi induzido o sangramento intracanal por sobreinstrumentação com lima K #15 e os dentes foram selados. Molares inferiores que não receberam intervenção destes animais, foram aleatoriamente selecionados como controle (controle-15d; n = 3). Outros molares inferiores direito ou esquerdo de três animais que não receberam qualquer intervenção, foram utilizados como controle-imediato (n = 3). Após 15 dias, os animais dos grupos experimentais e controle-15d foram eutanasiados; animais do grupo controle-imediato foram eutanasiados imediatamente no dia da experimentação. As peças foram preparadas para análise histológica (hematoxilinaeosina), análise do colágeno (picrosírius red e Tricrômio de Masson), e imunohistoquímica (TGF-ß1 e FGF-2). Os resultados foram submetidos a testes estatísticos específicos (p<0,05). Para a revisão sistemática, dois autores independentes conduziram busca em bases de dados eletrônicas (até fevereiro2021), extração dos dados e avaliação do risco de viés. Análise dos fatores de crescimento foi considerada desfecho primário. Em relação à formação de tecido mineralizado, o grupo NaOCl-EDTA teve mais espécimes com aumento concomitante da espessura e comprimento da raiz, apesar de todos espécimes dos grupos experimentais mostrarem presença de cemento neoformado; no entanto, houve fechamento parcial do forame apical em NaOCl e completo em NaOCl-EDTA, em alguns espécimes. A maioria dos espécimes dos grupos experimentais apresentaram infiltrado inflamatório até o terço médio do canal radicular. Foi observada maior neoformação tecidual nos espécimes do NaOCl-EDTA (p<0,05). Em relação ao colágeno, apesar do grupo NaOCl-EDTA apresentar maior quantidade de colágeno na extremidade radicular, não houve diferença significativa com o grupo EDTA, e ambos apresentaram maior quantidade de fibras imaturas nessa região; no centro do terço apical do canal radicular, houve equivalência de fibras maduras e imaturas nos grupos, sem diferença significativa. Houve significativa imunomarcação de TGF-ß1 no grupo NaOCl-EDTA comparado ao NaOCl (p<0,05), mas não houve diferença na imunomarcação de FGF-2. Conclui-se que: 1. EDTA influenciou positivamente a presença de tecido neoformado nos canais radiculares após revascularização pulpar, mas não influenciou na maturação colágena; 2. EDTA influencia a imunomarcação de TGF-ß1, mas não de FGF-2; 3. A revisão sistemática revelou que o EDTA pode aumentar a liberação de TGF-ß da dentina, além da migração, adesão e diferenciação celular.

The objectives of this study were: 1. To evaluate the influence of the use of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) in the repair process after pulp revascularization in immature rat molars, by evaluating mineralized tissue formation, presence of inflammatory infiltrate, and the presence/maturation of collagen fibers; 2. To evaluate the influence of EDTA in the presence of growth factors after pulp revascularization in immature molars of rats, by analyzing the immunolabelling of transforming growth factor (TGF)-ß1 and fibroblast growth factor (FGF)-2; 3. To evaluate the influence of the use of EDTA on the factors associated with the regenerative endodontic procedure, through a systematic review. For experimental analyses, lower right or left molars of 12 Wistar rats (4-week-old) had pulp tissue removed, and they were randomly separated in the groups (n = 6): NaOCl - irrigation with 2.5% NaOCl; and NaOCl-EDTA - 2.5% NaOCl followed by 17% EDTA. Afterwards, blood clot was induced by inserting a 15 K-file beyond the apex, and teeth were sealed. Lower untreated molars from these animals were randomly selected as control (control-15d; n = 3). Other lower right or left molars of other three animals that did not receive any intervention, they were used as control-immediate (n = 3). After 15 days, the rats from the experimental and the control-15d groups were killed; animals from control-immediate group were killed immediately at the experimental period. The jaws were prepared for histological (haematoxylin-eosin); collagen analysis (picrosirius red and Masson's trichrome); and immunohistochemical analyses (TGF-ß1 and FGF-2). Data were submitted to statistical tests (p<0.05). For systematic review, two authors independently performed a search in electronic databases (up to February-2021), data extraction and risk of bias evaluation. The release of growth factors was the primary outcome. Regarding mineralized tissue formation, NaOCl-EDTA group had more specimens with a concomitant increase in root thickness and length, and all specimens from the experimental groups showed neoformed cementum-like tissue; however, some specimens of NaOCl showed partial apical closure, while NaOCl-EDTA had complete apical closure. Most specimens from the experimental groups had inflammatory infiltrate extending to the middle third of root canals. A significant tissue neoformation was observed in the NaOCl-EDTA specimens (p<0.05). For collagen, the NaOClEDTA group showed more collagen fibers in the root tip, without significant difference compared to NaOCl group, where both groups showed greater amount of immature fibers in this region; in the center of the apical third, there was similar amount of mature and immature fibers from both groups, without significant differences. There was significant TGF-ß1 immunolabeling in the NaOCl-EDTA group compared to NaOCl group (p<0,05), but there was no significant difference in FGF-2 immunolabeling. In conclusion: 1. EDTA positively influenced the presence of newly formed tissue in root canals after pulp revascularization, but it did not influence collagen maturation; 2. EDTA influenced TGF-ß1 immunolabeling, but it did not influence FGF-2; 3. The systematic review showed that the use of EDTA can enhance TGF-ß release from dentin, in addition to increase cell migration, adherence and differentiation.

Influência da funcionalização do biovidro, preparado pela rota sonoquímica, com o fármaco teriparatida 10% na resposta celular in vitro e in vivo / Influence of bioglass functionalization, prepared by the sonochemistry route, with the 10% therapeutic drug in the cell response in vitro and in vivo

O objetivo neste estudo foi avaliar a influência do biovidro 45S5 funcionalizado com teriparatida 10% na diferenciação e atividade de células mesenquimais, e no reparo ósseo em defeitos críticos realizados em ratas ovariectomizadas. Primeiramente, o biomaterial foi produzido e caracterizado antes e após a funcionalização. Para o estudo in vitro, foram diferenciados osteoblastos obtidos a partir de células mesenquimais, isoladas de fêmures de ratas ovariectomizadas. Após diferenciação, as células foram submetidas ao MEV, MTT, conteúdo de proteína total, atividade de fosfatase alcalina (ALP), formação de nódulos de mineralização. No estudo in vivo, foram utilizadas 40 ratas Wistar, as quais foram inicialmente divididas em dois grupos (n=20), grupo submetido à ovariectomia bilateral (OVX) e grupo submetido à cirurgia simulada de ovariectomia (Sham). Após 60 dias destes procedimentos, independente do grupo, todas as ratas foram submetidas à confecção de defeitos ósseos críticos de 5,0 mm, na calvária. No lado direito foram preenchidos com coágulo (controle), enquanto que do lado esquerdo metade dos animais receberam preenchimento no defeito ósseo de biovidro (BG) e a outra metade recebeu como material de preenchimento o biovidro funcionalizado com teriparatida 10% (BGT). Após 2 e 6 semanas, os animais foram eutanasiados (n=10). A caracterização por MEV, espectroscopia de energia dispersiva (EDS), espectroscopia de infravermelho por transformação de Fourier (FTIR) e o potencial Zeta demonstraram que as amostras após a funcionalização apresentaram características morfológicas topográficas e químicas modificadas, indicativas de que a superfície foi quimicamente alterada pelo processo de funcionalização. Na análise in vitro, observou que os grupos experimentais não foram citotóxicos, propiciaram um ambiente adequado à atividade e diferenciação celular, e ainda permitiram o espraiamento celular sobre as amostras. Na análise histológica descritiva os grupos experimentais, demonstraram neoformação óssea na região do defeito em ambos grupos e períodos. Na análise histomorfométrica, somente o grupo biovidro funcionalizado com o fármaco no grupo OVX no período de 6 semanas diferiu estatisticamente dos demais grupos (p<0,05) no período de 2 semanas. Conclui-se que estudos de longo prazo devem ser realizados para fornecer informações adicionais sobre o desempenho biológico da ação sinérgica entre os biovidros e a liberação do fármaco teriparatida(AU)

The objective of this study was to evaluate the influence of the 45S5 bioglass functionalized with 10% teriparatide on the differentiation and activity of mesenchymal cells, and on bone repair in critical defects performed in ovariectomized rats. First, the biomaterial was produced and characterized before and after functionalization. For the in vitro study, osteoblasts obtained from mesenchymal cells, isolated from femurs of ovariectomized rats, were differentiated. After differentiation, the cells were submitted to SEM, MTT, total protein content, alkaline phosphatase activity (ALP), formation of mineralization nodules. In the in vivo study, 40 Wistar rats were used, which were initially divided into two groups (n = 20), a group undergoing bilateral ovariectomy (OVX) and a group undergoing simulated ovariectomy surgery (Sham). After 60 days of these procedures, regardless of the group, all rats were subjected to the making of 5.0 mm critical bone defects at calvaria, which were filled on the right side with a clot (control) and on the left side half of the animals received filling in the bone defect of bioglass (BG) and the other half received as functional filler the bioglass functionalized with 10% teriparatide (BGT). After 2 and 6 weeks, the animals were euthanized. SEM characterization, dispersive energy spectroscopy (EDS), Fourier transformation infrared spectroscopy (FTIR) and analysis of the Zeta potential demonstrated that the samples after functionalization showed modified topographic and chemical morphological characteristics, indicating that the surface was chemically altered by the functionalization process. The experimental groups were not cytotoxic and provided an adequate environment for cell adhesion and differentiation. Additionally, the analysis performed by SEM showed that all samples allowed cell spreading. In the descriptive histological analysis, the experimental groups demonstrated characteristics of bone neoformation with the presence of bone tissue in both periods. In the histomorphometric analysis, only the bioglass group functionalized with the drug in the OVX group differed statistically from the other groups (p <0.05) in both periods. It is concluded that long-term studies must be carried out to provide additional information on the biological performance of the synergistic action between bio-glasses and the release of the drug teriparatide.Concluded that long-term studies should be carried out to provide additional information on the mechanisms necessary to evaluate the biological performance of the synergistic action between bioglasses and the release of the drug teriparatide(AU)