Refrigeração de sêmen canino em meio diluente à base de água de coco (Cocos nucifera) natural / Canine semen refrigeration in a natural coconut water (Cocos nucifera)-based extender / Refrigeración de semen canino en un medio diluyente natural a base de agua de coco (Cocos nucifera)

A inseminação artificial em cadelas contribui para o melhoramento genético da espécie, previne algumas doenças sexualmente transmissíveis a partir da cópula e possibilita a reprodução de animais que não poderiam copular de forma natural, seja por motivos anatômicos, geográficos ou comportamentais. Todavia, nem sempre é possível utilizar o sêmen fresco, sendo assim necessário um diluente para resfriar e mantê-lo viável por determinado período. Diante disso, o objetivo com este trabalho foi analisar o sêmen canino diluído em água de coco e refrigerado, à 5 ºC em diferentes tempos. Foram utilizados cinco cães da raça Hounds do Brasil, realizando três colheitas de sêmen de cada animal, com intervalos de sete dias. Os ejaculados foram mantidos a temperatura de 37ºC e realizado análises macroscópicas (volume, cor, aspecto e odor) e microscópicas (motilidade, vigor, concentração e morfologia espermática). Em seguida, os ejaculados foram diluídos em água de coco natural a uma concentração de 200 milhões de espermatozoides/mL, e mantidos à temperatura de 5 °C, por até 72 horas. Nos intervalos de seis, doze, vinte e quatro, trinta e seis, quarenta e oito, e setenta e duas horas, as amostras foram avaliadas quanto a motilidade e vigor espermático. Os ejaculados frescos apresentaram em média volume de 6,2 mL, cor branca, aspecto aquoso a leitoso, odor "sui generis", motilidade espermática de 89,5 %, vigor espermático 4,3, concentração média de 418 x106espermatozoides/mL e 7,3% de alterações patológicas. Após o início do resfriamento à 5 ºC, os valores de motilidade e vigor diminuíram com o passar do tempo, sendo os menores valores encontrados após 48 e 72 horas. O diluente a água de coco in natura mostrou-se eficiente para refrigeração de sêmen canino, à 5 ºC, conservando-o por um período de até 36h após a colheita, conforme preconizado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.(AU)

improvement of the species, prevents some sexually transmitted diseases through copulation and allows the reproduction of animals that could not copulate naturally, either for anatomical, geographic or behavioral reasons. However, it is not always possible to use fresh semen, thus requiring a diluent to cool and keep it viable for a certain period. Therefore, the objective of this work was to analyze canine semen diluted in coconut water and refrigerated at 5 ºC at different times. Five Brazilian Hounds were used, performing three semen collections from each animal, with intervals of seven days. The ejaculates were kept at a temperature of 37 ºC and macroscopic (volume, color, appearance and odor) and microscopic (motility, vigor, concentration and sperm morphology) analyzes were performed. Then, the ejaculates were diluted in natural coconut water at a concentration of 200 million sperm/mL, and kept at a temperature of 5 °C for up to 72 hours. At intervals of six, twelve, twenty-four, thirty-six, forty-eight, and seventy-two hours, samples were evaluated for sperm motility and vigor. Fresh ejaculates had an average volume of 6.2 mL, white color, watery to milky appearance, "sui generis" odor, 89.5% sperm motility, 4.3 sperm vigor, average concentration of 418 x106 spermatozoa/mL and 7.3%pathological changes. After the beginning of cooling at 5 °C, the values of motility and vigor decreased over time, with the lowest values found after 48 and 72 hours. The in natura coconut water extender proved to be efficient for cooling canine semen at5 ºC, keeping it for a period of up to 36 hours after harvest, as recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.(AU)

Artificial insemination in bitches contributes to the genetic La inseminación artificial en perras contribuye a la mejora genética de la especie, previene algunas enfermedades de transmisión sexual a través de la cópula y permite la reproducción de animales que no podrían copular de forma natural, ya sea por razones anatómicas, geográficas o de comportamiento. Sin embargo, no siempre es posible utilizar semen fresco, por lo que se requiere un diluyente para enfriarlo y mantenerlo viable durante un cierto período. Por tanto, el objetivo de este trabajo fue analizar semen canino diluido en agua de coco y refrigerado a 5 ºC en diferentes tiempos. Se utilizaron cinco sabuesos brasileños, realizándose tres colectas de semen de cada animal, con intervalos de siete días. Los eyaculados se mantuvieron a una temperatura de 37 ºC y se realizaron análisis macroscópicos (volumen, color, apariencia y olor) y microscópicos (motilidad, vigor, concentración y morfología espermática). Luego, los eyaculados se diluyeron en agua de coco natural a una concentración de 200 millones de espermatozoides/mL y se mantuvieron a una temperatura de 5 °C hasta por 72 horas. A intervalos de seis, doce, veinticuatro, treinta y seis, cuarenta y ocho y setenta y dos horas, se evaluó la motilidad y el vigor de los espermatozoides en las muestras. Los eyaculados frescos tuvieron un volumen promedio de 6,2 mL, color blanco, apariencia acuosa a lechosa, olor "sui generis", motilidad espermática de 89,5%, vigor espermático de 4,3, concentración promedio de 418 x106 espermatozoides/mL y cambios patológicos de 7,3%. Después del inicio del enfriamiento a 5 °C, los valores de motilidad y vigor disminuyeron con el tiempo, encontrándose los valores más bajos a las 48 y 72 horas. El diluyente de agua de coco in natura demostró ser eficaz para enfriar el semen canino a5 ºC, manteniéndolo por un período de hasta 36 horas después de la cosecha, según lo recomendado por el Colegio Brasileño de Reproducción Animal.(AU)

In vitro sperm characteristics and in vivo fertility of sex-sorted and conventional semen in suckled Nelore cows at a traditional schedule for timed-AI with estrus detection / Características espermáticas in vitro e fertilidade in vivo de sêmen convencional e sexado em vacas Nelore pósparto submetidas à IATF tradicional com detecção de estro

The aim of this study was to assess in vitro sperm characteristics and pregnancies/AI (P/AI) of conventional and sex-sorted semen at timed-AI of suckled, multiparous Nelore cows. All cows (n=348) were submitted to a traditional estradiol/progesterone (P4)-based protocol. At 48h after P4-device removal, the estrous behavior was recorded, and AI was performed with conventional or sex-sorted semen from two bulls. The following sperm assessments were performed: CASA, Hyposmotic Test, sperm morphometry and chromatin structure by TB staining. P/AI were reduced (P<0.001) for sex-sorted compared to conventional semen in cows expressing estrus (27vs47%) or not (11vs.37%). Membrane integrity (Bull1: 30.3±9.6 vs. 52.3±12.4%, P=0.01; Bull2: 24.5±3.0 vs. 48.7±1.6%, P=0.006) and sperm concentration (Bulll: 23.2±0.6 vs. 43.0±0.8x10 sperm/mL, P<0.001; Bull2: 25.1+2.8 VS. 42.1±0.7x10 sperm/mL; P<0.001) were reduced in sex-sorted compared to conventional semen, for both bulls. Total and progressive motility were reduced in sex-sorted semen for Bull1 (TM: 49.7±15.9 vs. 94.9±1.9%, P=0.007; PM: 16.7±3.4 vs. 44.1±13.2%, P=0.009) and no differences were detected for Bull2 (TM: 45.0±17.5 vs. 68.2±19.1%, P=0.098; PM: 12.8±4.7 vs. 30.0±13.0%, P=0.065). Sperm ellipticity from sex-sorted was lower than conventional semen for Bull2 (0.306±0.01 vs. 0.342±0.02, P=0.02) and no difference was detected for Bull1 (0.332±0.01 vs. 0.330±0.01, P=0.55). Reduced in vivo fertility was observed for sex-sorted semen, regardless of estrous behavior. In vitro sperm quality of sex-sorted semen was compromised for both bulls, but differently affected for each sire.

O estudo teve como objetivo avaliar características espermáticas in vitro e a taxa de concepção (TC) de sêmen convencional e sexado em um programa de IATF tradicional de vacas Nelore pós-parto. Todas as vacas (n=348) foram submetidas ao mesmo protocolo de IATF à base de estradiol e de progesterona. Após 48 horas da retirada do implante, foi determinada a expressão de estro dos animais e a IA foi realizada com sêmen convencional e sexado de dois touros Angus. As seguintes características espermáticas foram avaliadas: análise computadorizada do sêmen, teste hiposmótico, morfometria espermática e estrutura cromatinica por meio da coloração com azul de toluidina. A TC foi menor (P<0,001) para sêmen sexado comparado ao convencional, em vacas que expressaram estro (27 vs. 47%) e que não apresentaram estro (11 vs. 37%). A integridade da membrana plasmática (Touro 1: 30,319,6 vs. 52,3+12,4%, P=0,010; Touro 2: 24,5+3,0 vs. 48,7±1,6%, P=0,006) e a concentração espermática (Touro 1: 23,2±0,6 vs. 43,0±0,8x10 sperm/mL, P<0,001; Touro 2: 25,1+2,8 vs. 42,1 +0,7x10'sperm/mL, P<0,001) foram menores no sêmen sexado comparado ao convencional, para ambos os touros. Motilidades total e progressiva foram menores no sêmen sexado comparado ao convencional para o Touro 1 (MT: 49,7±15,9 vs. 94,9±1,9%, P=0,007; MP: 16,7+3,4 vs. 44,1+13,2%, P=0,009), enquanto diferenças não foram detectadas no Touro 2 (MT: 45,0±17,5 vs. 68,2±19,1%, P=0,098; MP: 12,8±4,7 vs. 30,0±13,0%, P=0,065). Elipticidade espermática do sêmen sexado foi menor do que do sêmen convencional no Touro 2 (0,306±0,01 vs. 0,342±0,02, P=0,020), mas não houve diferença no Touro 1 (0,332±0,01 vs. 0,330±0,01, P=0,552). Reduzida fertilidade in vivo foi observada para o sêmen sexado em relação ao convencional, independentemente da expressão de cio das vacas. A qualidade seminal in vitro do sêmen sexado foi comprometida para ambos os touros, mas diferentemente afetada para cada reprodutor.

Utilização de cones de polietileno para coleta de sêmen canino / The use of polyethylene cones for canine semen collection

A utilização de um cone de polietileno produzido com luva de palpação retal para grandes animais (SuperFlex®, WalMur, Argentina) acoplado a tubo de centrífuga para coleta de sêmen foi avaliada em 230 cães de 48 diferentes raças. Houve 94,5% de êxito nas coletas sem traumatismo peniano ou perda de sêmen. Para testar a qualidade do sêmen obtido, ejaculados de 10 cães Pastores Alemães foram submetidos a três tratamentos: 1) controle (C); 2) efusão da amostra pela superfície de um fragmento de polietileno (PP); e 3) manutenção de um fragmento de polietileno mergulhado na amostra (CP). Após 10 min de incubação a 37ºC, foram mensuradas a motilidade progressiva (M) e o vigor espermático (V) das amostras. Houve redução significativa de M e V após incubação nos três grupos em relação à amostra inicial, mas M e V foram semelhantes entre os grupos após incubação. O contato do sêmen com o polietileno por curto período (PP) ou por 10 min (CP) não causou efeito deletério sobre a qualidade seminal. Conclui-se ser viável a utilização desse método de coleta de sêmen canino.

The use of a polyethylene cone manufactured with large animal rectal examination glove (SuperFlex®, WalMur, Argentina) attached to a centrifuge tube for collection of semen was evaluated in 230 dogs from 48 different breeds. There was a 94.5% success on collection without penile trauma or semen loss. In order to test the quality of semen collected, ejaculates from 10 German Shepherd dogs were subjected to three treatments: 1) control (C); 2) the sample was flowed through the surface of a polyethylene fragment (PP) and 3) one fragment of polyethylene was kept immersed in the sample (CP). After 10 min of incubation at 37ºC, progressive motility (M) and sperm vigor (V) were measured. There was a significant reduction in M and V on the three groups in relation to the initial sample, but M and V were similar among groups after incubation. The contact of semen with polyethylene for a short period (PP) or for 10 min (CP) did not cause deleterious effects on semen quality. It is concluded that is viable to use semen of dogs collected with the proposed method.

Utilização de cones de polietileno para coleta de sêmen canino / The use of polyethylene cones for canine semen collection

A utilização de um cone de polietileno produzido com luva de palpação retal para grandes animais (SuperFlex®, WalMur, Argentina) acoplado a tubo de centrífuga para coleta de sêmen foi avaliada em 230 cães de 48 diferentes raças. Houve 94,5% de êxito nas coletas sem traumatismo peniano ou perda de sêmen. Para testar a qualidade do sêmen obtido, ejaculados de 10 cães Pastores Alemães foram submetidos a três tratamentos: 1) controle (C); 2) efusão da amostra pela superfície de um fragmento de polietileno (PP); e 3) manutenção de um fragmento de polietileno mergulhado na amostra (CP). Após 10 min de incubação a 37ºC, foram mensuradas a motilidade progressiva (M) e o vigor espermático (V) das amostras. Houve redução significativa de M e V após incubação nos três grupos em relação à amostra inicial, mas M e V foram semelhantes entre os grupos após incubação. O contato do sêmen com o polietileno por curto período (PP) ou por 10 min (CP) não causou efeito deletério sobre a qualidade seminal. Conclui-se ser viável a utilização desse método de coleta de sêmen canino.(AU)

The use of a polyethylene cone manufactured with large animal rectal examination glove (SuperFlex®, WalMur, Argentina) attached to a centrifuge tube for collection of semen was evaluated in 230 dogs from 48 different breeds. There was a 94.5% success on collection without penile trauma or semen loss. In order to test the quality of semen collected, ejaculates from 10 German Shepherd dogs were subjected to three treatments: 1) control (C); 2) the sample was flowed through the surface of a polyethylene fragment (PP) and 3) one fragment of polyethylene was kept immersed in the sample (CP). After 10 min of incubation at 37ºC, progressive motility (M) and sperm vigor (V) were measured. There was a significant reduction in M and V on the three groups in relation to the initial sample, but M and V were similar among groups after incubation. The contact of semen with polyethylene for a short period (PP) or for 10 min (CP) did not cause deleterious effects on semen quality. It is concluded that is viable to use semen of dogs collected with the proposed method.(AU)

Utilização do espermatócrito para estimar a concentração espermática no sêmen da piabanha (Brycon insignis) / Use of spermatocrit to estimate sperm concentration of semen frompiabanha (Brycon insignis)

O objetivo deste trabalho foi verificar a viabilidade da utilização do espermatócrito para estimar a concentração espermática do sêmen de piabanha. Os exemplares (n=29) de piabanha Brycon insignis foram hipofisados, sendo posteriormente realizada a coleta de sêmen. O espermatócrito foi determinado utilizando-se micro-centrífuga de tubos capilares. A concentração espermática foi verificada por contagem em câmara de Neubauer, após diluição. A concentração espermática verificada (média ± desvio padrão) foi de 24,38 ± 3,84 x 10 elevado a 9 espermatozóides / mL, e o espermatócrito foi de 16,14±5,20 %. A equação de regressão: Ý= 14,01.10 elevado a 9 + 0,6428.10 elevdo a 9.X foi significativa (P<0,01) e apresentou R2 ajustado = 0,75. Deste modo, é possível estimar a concentração através da determinação do espermatócrito.(AU)

The aim of this work was to determine the viability of spermatocrit use in Piabanhas sperm concentration estimation. Gametogenesis of piabanha Brycon insignis (n=29) was induced with crude pituitary extract of carp and semen was further collected. The spermatocrit was determined using cappilar tube micro-centrifuge. The sperm concentration was verified by counting in “Neubauer chamber”, after dilution. The verified sperm concentration (mean±standard deviation) was 24,38±3,84x10 involution 9 spermatozoa/mL, and the spermatocrit was 16,14±5,20 %. The regression model: Ý = 14,01.10 involution 9 + 0,6428.10 involution 9.X was significant (P<0,01) and presented adjusted R2 = 0,75. Thus, the estimation of sperm concentration using the spermatocrit is possible.(AU)