Protease production and molecular characterization of a protease dipeptidyl-aminopeptidase gene from different strains of Sordaria fimicola / Produção de protease e caracterização molecular de um gene de protease - DPAP (dipeptidil-aminopeptidase) de diferentes cepas de Sordaria fimicola

The current research was designed to reach extracellular protease production potential in different strains of Sordaria fimicola which were previously obtained from Dr. Lamb (Imperial College, London) from North Facing Slope and South Facing Slope of Evolution Canyon. After initial and secondary screening, two hyper-producers strains S2 and N6 were selected for submerged fermentation and cultural conditions including temperature, pH, incubation period, inoculum size, substrate concentration, and different carbon and nitrogen sources were optimized for enzyme production. S2 strain showed maximum protease production of 3.291 U/mL after 14 days of incubation at 30 °C with 7 pH, 1% substrate concentration and 1 mL inoculum, While N6 strain showed maximum protease production of 1.929 U/mL under fermentation optimized conditions. Another aim of the present research was to underpin the biodiversity of genetics and post-translational modifications (PTMs) of protease DPAP (peptidyl-aminopeptidase) in Sordaria fimicola. Five polymorphic sites were observed in amino acid sequence of S. fimicola strains with reference to Neurospora crassa. PTMs prediction from bioinformatics tools predicted 38 phosphorylation sites on serine residues for protease peptidyl-aminopeptidase in S1 strain of S. fimicola while 45 phosphorylation sites on serine in N7 strain and 47 serine phosphorylation modifications were predicted in N. crassa. Current research gave an insight that change in genetic makeup effected PTMs which ultimately affected the production of protease enzyme in different strains of same organism (S. fimicola). The production and molecular data of the research revealed that environmental stress has strong effects on the specific genes through mutations which may cause genetic diversity. S. fimicola is non- pathogenic fungus and has a short life cycle. This fungus can be chosen to produce protease enzyme on a commercial scale.

A pesquisa atual foi projetada para alcançar o potencial de produção de protease extracelular em diferentes cepas de Sordaria fimicola que foram previamente obtidas do Dr. Lamb (Imperial College, Londres) de North Facing Slope e South Facing Slope de Evolution Canyon. Após a triagem inicial e secundária, duas cepas hiperprodutoras S2 e N6 foram selecionadas para fermentação submersa e condições culturais, incluindo temperatura, pH, período de incubação, tamanho do inóculo, concentração de substrato, e diferentes fontes de carbono e nitrogênio foram otimizadas para produção de enzima. A cepa S2 apresentou produção máxima de protease de 3,291 U/mL após 14 dias de incubação a 30 °C com pH 7, concentração de substrato de 1% e inóculo de 1 mL, enquanto a cepa N6 apresentou produção máxima de protease de 1,929 U/mL em condições otimizadas de fermentação. Outro objetivo da presente pesquisa foi sustentar a biodiversidade da genética e modificações pós-tradicionais (PTMs) da protease DPAP (peptidil-aminopeptidase) em Sordaria fimicola. Cinco sítios polimórficos foram observados na sequência de aminoácidos de cepas de S. fimicola com referência a Neurospora crassa. A previsão de PTMs a partir de ferramentas de bioinformática previu 38 locais de fosforilação em resíduos de serina para protease peptidil-aminopeptidase na cepa S1 de S. fimicola, enquanto 45 locais de fosforilação em serina na cepa N7 e 47 modificações de fosforilação de serina foram previstas em N. crassa. A pesquisa atual deu uma ideia de que a mudança na composição genética afetou os PTMs que, em última análise, afetaram a produção da enzima protease em diferentes cepas do mesmo organismo (S. fimicola). A produção e os dados moleculares da pesquisa revelaram que o estresse ambiental tem fortes efeitos sobre genes específicos por meio de mutações que podem causar diversidade genética. S. fimicola é um fungo não patogênico e tem um ciclo de vida curto. Esse fungo pode ser escolhido para produzir enzima protease em escala comercial.

Study of digestive enzymes in marine fish, Terapon jarbua, from Pakistan / Estudo de enzimas digestivas em peixes marinhos Terapon jarbua, do Paquistão

Current analysis were performed to investigate the activity of various digestive enzymes, such as lipases, proteases and amylases in gut and their relationship to the other morphometric variables in a wild marine fish, Terapon jarbua. The descriptive data of the studied traits included fish weight, fish total length, gut weight, gut length, relative gut length, relative gut mass, Fulton's condition factor, standard length and Zihler's index. Gut length showed positive correlation with fish total length and gut weight, relative gut length (RGL) showed positive correlation with gut length. Relative gut mass (RGM) also showed positive correlation with total length (TL), gut weight (GW) and gut length (GL). Fulton's condition factor showed positive correlation with fish weight, while negative correlation with fish total length and relative gut mass. Standard length displayed positive correlation with gut weight and gut length while, it showed negative correlation with Fulton's factor. Zihler's Index displayed positive correlation with gut length, RGL and Zihler's RGM while, while showed negative correlation with Fulton's factor and fish weight. Lipase showed negative correlation with gut weight. Amylase and protease activity have no correlation with other studied traits. Lipase activity displayed negative significant correlation with gut weight. Lipase activity showed significantly negative effect on gut-weight. Amylase activity on y-axis (PC2) contributed 13% in variation but not significantly correlated with first two principal components. It showed non-significant negative correlation with fish weight, fish length and Fulton's factor while positive but not-significant correlation with other traits. Protease has positive and non-significant correlation with fish weight, RGL, Fulton's factor, lipase and amylase while non-significant negative correlation with all other traits.

No presente estudo, as análises atuais foram realizadas para investigar a atividade de várias enzimas digestivas, como lipases, proteases e amilases no intestino e sua relação com as outras variáveis morfométricas em um peixe marinho selvagem denominado "Terapon jarbua". Os dados descritivos das características estudadas incluíram o peso e o comprimento total do peixe, o peso e o comprimento do intestino, o comprimento e a massa relativos do intestino, o fator de condição de Fulton, o comprimento padrão e o índice de Zihler. O comprimento do intestino apresentou correlação positiva com o comprimento total e o peso do intestino dos peixes, o comprimento relativo do intestino (RGL) mostrou correlação positiva com o comprimento do intestino. A massa relativa do intestino (RGM) também apresentou correlação positiva com comprimento total (TL), peso do intestino (GW) e comprimento do intestino (CG). O fator de condição de Fulton apresentou correlação positiva com o peso do peixe, enquanto correlação negativa com o comprimento total do peixe e a massa relativa do intestino. O comprimento padrão apresentou correlação positiva com o peso e o comprimento do intestino, enquanto apresentou correlação negativa com o fator de Fulton. O índice de Zihler apresentou correlação positiva com o comprimento do intestino, RGL e RGM de Zihler, enquanto apresentou correlação negativa com o fator de Fulton e o peso do peixe. A lipase mostrou correlação negativa com o peso do intestino. A atividade de amilase e protease não tem correlação com outras características estudadas. Já a atividade da lipase apresentou correlação negativa em relação ao peso do intestino. A atividade da lipase mostrou um efeito significativamente negativo no peso do intestino. A atividade da amilase no eixo y (PC2) contribuiu com 13% na variação, mas não se correlacionou significativamente com os dois primeiros componentes principais, demonstrando correlação negativa e não significativa em relação ao peso e comprimento e fator de Fulton, enquanto correlação positiva, mas não significativa com outras características. A protease tem correlação positiva e não significativa com o peso do peixe, RGL, fator de Fulton, lipase e amilase, enquanto correlação negativa não significativa com todas as outras características.

Studies on bioaccumulation patterns, biochemical and genotoxic effects of copper on freshwater fish, Catla catla: an in vivo analysis / Estudos sobre padrões de bioacumulação, efeitos bioquímicos e genotóxicos do cobre em peixes de água doce, Catla catla: uma análise in vivo

During present study, the copper (Cu) mediated oxidative stress was measured that induced DNA damage by concentrating in the tissues of fish, Catla catla (14.45±1.24g; 84.68±1.45mm) (Hamilton,1822). Fish fingerlings were retained in 5 groups for 14, 28, 42, 56, 70 and 84 days of the exposure period. They were treated with 2/3, 1/3, 1/4 and 1/5 (T1-T4) of 96h lethal concentration of copper. Controls were run along with all the treatments for the same durations. A significant (p < 0.05) dose and time dependent concentration of Cu was observed in the gills, liver, kidney, muscles, and brain of C. catla. Among organs, the liver showed a significantly higher concentration of Cu followed by gills, kidney, brain, and muscles. Copper accumulation in these organs caused a significant variation in the activities of enzymes viz. superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and peroxidase (POD). The SOD activity varied significantly in response to the exposure time of Cu as 56 > 70 > 42 > 84 > 28 > 14 days while CAT activity exhibited an inverse relationship with the increase in Cu concentration. POD activity showed a significant rise with an increase in Cu exposure duration. Comet assay exhibited significant DNA damage in the peripheral erythrocytes of Cu exposed C. catla. Among four exposure concentrations, 2/3rd of LC50 (T1) caused significantly higher damage to the nuclei compared to control. Increased POD and SOD activity, as well as a decrease in CAT activity in response to Cu, demonstrates the involvement of a protective mechanism against reactive oxygen species (ROS), whereas increased ROS resulted in higher DNA damage. These above-mentioned molecular markers can be efficiently used for the biomonitoring of aquatic environments and conservation of edible fish fauna.

Durante o presente estudo, o estresse oxidativo mediado pelo cobre (Cu) foi medido que induziu danos ao DNA por concentração nos tecidos de peixes, Catla catla (14,45 ± 1,24g; 84,68 ± 1,45mm) (Hamilton, 1822). Os alevinos foram retidos em 5 grupos por 14, 28, 42, 56, 70 e 84 dias do período de exposição. Eles foram tratados com 2/3, 1/3, 1/4 e 1/5 (T1-T4) de 96h de concentração letal de cobre. Os controles foram executados junto com todos os tratamentos para as mesmas durações. Uma significativa (p <0,05) concentração dependente do tempo e da dose de Cu foi observada nas brânquias, fígado, rim, músculos e cérebro de C. catla. Entre os órgãos, o fígado apresentou uma concentração significativamente maior de cobre, seguido por guelras, rins, cérebro e músculos. O acúmulo de cobre nesses órgãos causou uma variação significativa nas atividades das enzimas viz. superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e peroxidase (POD). A atividade de SOD variou significativamente em resposta ao tempo de exposição de Cu como 56> 70> 42> 84> 28> 14 dias, enquanto a atividade de CAT exibiu uma relação inversa com o aumento na concentração de Cu. A atividade POD mostrou um aumento significativo com um aumento na duração da exposição ao Cu. O ensaio do cometa exibiu dano significativo ao DNA induzido por Cu nos eritrócitos periféricos de C. catla. Entre as quatro concentrações de exposição, 2/3 do LC50 (T1) causou danos significativamente maiores aos núcleos em comparação com o controle. O aumento da atividade de POD e SOD, bem como uma diminuição na atividade de CAT em resposta ao Cu, demonstra o envolvimento de um mecanismo protetor contra espécies reativas de oxigênio (ROS), enquanto o aumento de ROS resultou em maior dano ao DNA. Esses marcadores moleculares mencionados acima podem ser usados ​​de forma eficiente para o biomonitoramento de ambientes aquáticos e conservação da ictiofauna comestível.

Morpho-physiological and phytohormonal changes during the induction of adventitious root development stimulated by exogenous IBA application in Magnolia biondii Pamp / Alterações morfofisiológicas e fito-hormonais durante a indução do desenvolvimento radicular adventício estimulado pela aplicação exógena do AIB em Magnolia biondii Pamp

Magnolia biondii Pamp is an important ornamental tree species widely grown and used as a rootstock in the propagation of different Magnolia varieties. In the current studies, anatomical, physiological and endogenous hormones were studied to check the effect of IBA 750 mg/L on the adventitious rooting and to provide theoretical and technical support for the propagation of Magnolia biondii Pamp through stem cuttings. Two thousand stem cuttings were prepared and divided into two groups i.e., IBA treated cuttings and water control. For the evaluation of antioxidant enzyme activities, and endogenous hormones levels, samples were collected on the day of planting and each 5th day and further steps were carried out in the laboratory according to the protocols and proper precautions. For the anatomical observations, samples were collected on the 13th, 15th, and 17th day for IBA treated cuttings while 21st, 23rd, and 25th day for control. Collected samples were preserved in the FAA solution and further observations were carried out in the laboratory. Anatomical observations showed that it took 13 days for the differentiation of root primordia to the appearance of young adventitious roots in IBA treated cuttings, while it took 21 days to develop primordia in the control. Antioxidant enzyme activities involved in ROS were significantly higher in the IBA treated cuttings compared to control. POD showed a peak on the 13th day before the emergence of roots in IBA treated cuttings while it showed a peak on the 21st day in the control. PPO showed a peak on the 21st day in the IBA treated cuttings while it showed a peak on the 29th day in the control. SOD showed a peak on the 17th day in IBA treated cuttings, while it showed a peak on the 25th day in the control. Exogenous application of IBA enhanced the endogenous IAA and GA3 levels compared to CK, while it reduced the levels of ABA continuously at the time of rooting and then increased gradually. Inclusively, our study suggests that IBA 750 mg/L is efficient for the rooting of Magnolia biondii Pamp cuttings, as it enhanced the process of antioxidant enzyme activities, endogenous hormones levels and reduced the time of root formation which is evident from the anatomical observations.

Magnolia biondii Pamp é uma importante espécie de árvore ornamental muito cultivada e utilizada como porta-enxerto na propagação de diferentes variedades de Magnolia. Nos estudos atuais, hormônios anatômicos, fisiológicos e endógenos foram estudados para verificar o efeito do AIB na dose de 750 mg / L no enraizamento adventício e fornecer suporte teórico e técnico para a propagação de M. biondii Pamp por meio de estacas. Duas mil estacas foram preparadas e divididas em dois grupos, ou seja, tratadas com AIB e controle de água. Para a avaliação das atividades das enzimas antioxidantes e dos níveis de hormônios endógenos, as amostras foram coletadas no dia do plantio e a cada 5 dias, enquanto as demais etapas foram realizadas em laboratório de acordo com os protocolos e os devidos cuidados. Para as observações anatômicas, as amostras foram coletadas no 13º, 15º e 17º dias para estacas tratadas com AIB e no 21º, 23º e 25º dias para o controle. As amostras coletadas foram preservadas em solução FAA, e outras observações foram realizadas em laboratório. Observações anatômicas mostraram a necessidade de 13 dias para a diferenciação dos primórdios radiculares até o aparecimento de raízes adventícias jovens em estacas tratadas com AIB e de 21 dias para o desenvolvimento dos primórdios no controle. As atividades das enzimas antioxidantes envolvidas nas ROS foram significativamente maiores nas estacas tratadas com AIB em comparação com o controle. A POD apresentou pico no 13º dia antes da emergência das raízes nas estacas tratadas com AIB, enquanto no 21º dia apresentou pico no controle. A PPO teve pico no 21º dia nas estacas tratadas com AIB e no 29º dia no controle. A SOD apresentou pico no 17º dia nas estacas tratadas com AIB e no 25º dia no controle. A aplicação exógena de AIB aumentou os níveis endógenos de IAA e GA3 em relação ao controle, enquanto reduziu os níveis de ABA continuamente no momento do enraizamento e, em seguida, aumentou gradativamente. Inclusive, nosso estudo sugere que o AIB na dose de 750 mg / L é eficiente para o enraizamento de estacas de M. biondii Pamp, visto que potencializou o processo de atividades de enzimas antioxidantes e os níveis de hormônios endógenos, além de reduzir o tempo de formação de raízes, o que fica evidente nas observações anatômicas.

Testing for the ability to modify antibiotics of Panus tigrinus 8/18 Lentinus strigosus 1566 laccase / Teste de capacidade para modificar antibióticos a partir da lacase de Panus tigrinus 8/18 e Lentinus strigosus 1566

In advanced biotechnology, the utilization of enzymes to achieve new or modified compounds with antibacterial, fungicidal, and anti-cancer specifications is crucial. Mushroom lactases are a hopeful biocatalyst for the synthesis and modification of different compounds. They are an accessible and inexpensive enzyme for the preparation of reaction objects and have recently received attention. Laccase purification was performed from basidiomycete Lentinus strigosus (LS) in several stages: Stage 1. On ion-exchange chromatography on TEAE Servacell 23 (400 ml), two distinctly separated laccase activity peaks were observed, eluted from the carrier at 0.21 and 0.27 M NaCl. In order to reduce the loss of enzymes, all fractions with laccase activity were collected, concentrated, and desalted using an ultrafiltration cell (Amicon, United States) with a UM-10 membrane. Stage 2. The resulting preparation with laccase activity was applied to a Q-Sepharose column (60 ml). Two well-separated peaks with laccase activity were obtained during the elution: laccase I (0.12 M NaCl) and laccase II (0.2 M NaCl). Stage 3. In the course of further purification of both enzymes, carried out on anion-exchange carrier Resource Q (6 ml), a broken gradient was used: 0 - 10%, 10 - 20%, and 20 - 100% with 1M NaCl. Stage 4. Both laccase I and laccase II, obtained after Resource Q, were desalted, concentrated to 1 ml each, and applied to a Superdex 75 gel filtration column. As a result, two laccases were obtained in a homogeneous form.

Na biotecnologia moderna, o uso de enzimas para obter compostos novos ou modificados com propriedades antibacterianas, antifúngicas e anticancerígenas é crucial. Lactases de cogumelos são biocatalisadores promissores para síntese e modificação de diferentes compostos, por serem enzimas baratas e disponíveis para a preparação de componentes de reação, e vem recebendo a devida atenção recentemente. A purificação da lacase foi realizada a partir do basidiomiceto Lentinus strigosus em vários estágios: Etapa 1 - na cromatografia de troca iônica em TEAE Servacell 23 (400 ml), foram observados dois picos de atividade da lacase distintamente separados, com eluição do transportador a 0,21 e 0,27 M de NaCl. Para reduzir a perda de enzimas, todas as frações com atividade de lacase foram coletadas, concentradas e dessalinizadas em uma célula de ultrafiltração (Amicon, Estados Unidos) com membrana UM-10; Etapa 2 - a preparação resultante com atividade de lacase foi aplicada a uma coluna Q-Sepharose (60 ml). Durante a eluição, foram obtidos dois picos bem separados com atividade de lacase: lacase I (NaCl 0,12 M) e lacase II (NaCl 0,2 M); Etapa 3 - no decurso da purificação adicional de ambas as enzimas, realizada no Recurso Q de transportador de troca aniônica (6 ml), um gradiente quebrado foi usado: 0-10%, 10-20% e 20-100% com NaCl 1M; Etapa 4 - tanto a lacase I como a lacase II, obtidas após o Recurso Q, foram dessalinizadas e concentradas para 1 ml cada e aplicadas a uma coluna de filtração em gel Superdex 75. Como resultado, duas lacases foram obtidas de forma homogênea.

Studies on bioaccumulation patterns, biochemical and genotoxic effects of copper on freshwater fish, Catla catla: an in vivo analysis

Abstract During present study, the copper (Cu) mediated oxidative stress was measured that induced DNA damage by concentrating in the tissues of fish, Catla catla (14.45±1.24g; 84.68±1.45mm) (Hamilton,1822). Fish fingerlings were retained in 5 groups for 14, 28, 42, 56, 70 and 84 days of the exposure period. They were treated with 2/3, 1/3, 1/4 and 1/5 (T1-T4) of 96h lethal concentration of copper. Controls were run along with all the treatments for the same durations. A significant (p 0.05) dose and time dependent concentration of Cu was observed in the gills, liver, kidney, muscles, and brain of C. catla. Among organs, the liver showed a significantly higher concentration of Cu followed by gills, kidney, brain, and muscles. Copper accumulation in these organs caused a significant variation in the activities of enzymes viz. superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and peroxidase (POD). The SOD activity varied significantly in response to the exposure time of Cu as 56 > 70 > 42 > 84 > 28 > 14 days while CAT activity exhibited an inverse relationship with the increase in Cu concentration. POD activity showed a significant rise with an increase in Cu exposure duration. Comet assay exhibited significant DNA damage in the peripheral erythrocytes of Cu exposed C. catla. Among four exposure concentrations, 2/3rd of LC50 (T1) caused significantly higher damage to the nuclei compared to control. Increased POD and SOD activity, as well as a decrease in CAT activity in response to Cu, demonstrates the involvement of a protective mechanism against reactive oxygen species (ROS), whereas increased ROS resulted in higher DNA damage. These above-mentioned molecular markers can be efficiently used for the biomonitoring of aquatic environments and conservation of edible fish fauna.

Resumo Durante o presente estudo, o estresse oxidativo mediado pelo cobre (Cu) foi medido que induziu danos ao DNA por concentração nos tecidos de peixes, Catla catla (14,45 ± 1,24g; 84,68 ± 1,45mm) (Hamilton, 1822). Os alevinos foram retidos em 5 grupos por 14, 28, 42, 56, 70 e 84 dias do período de exposição. Eles foram tratados com 2/3, 1/3, 1/4 e 1/5 (T1-T4) de 96h de concentração letal de cobre. Os controles foram executados junto com todos os tratamentos para as mesmas durações. Uma significativa (p 0,05) concentração dependente do tempo e da dose de Cu foi observada nas brânquias, fígado, rim, músculos e cérebro de C. catla. Entre os órgãos, o fígado apresentou uma concentração significativamente maior de cobre, seguido por guelras, rins, cérebro e músculos. O acúmulo de cobre nesses órgãos causou uma variação significativa nas atividades das enzimas viz. superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e peroxidase (POD). A atividade de SOD variou significativamente em resposta ao tempo de exposição de Cu como 56> 70> 42> 84> 28> 14 dias, enquanto a atividade de CAT exibiu uma relação inversa com o aumento na concentração de Cu. A atividade POD mostrou um aumento significativo com um aumento na duração da exposição ao Cu. O ensaio do cometa exibiu dano significativo ao DNA induzido por Cu nos eritrócitos periféricos de C. catla. Entre as quatro concentrações de exposição, 2/3 do LC50 (T1) causou danos significativamente maiores aos núcleos em comparação com o controle. O aumento da atividade de POD e SOD, bem como uma diminuição na atividade de CAT em resposta ao Cu, demonstra o envolvimento de um mecanismo protetor contra espécies reativas de oxigênio (ROS), enquanto o aumento de ROS resultou em maior dano ao DNA. Esses marcadores moleculares mencionados acima podem ser usados de forma eficiente para o biomonitoramento de ambientes aquáticos e conservação da ictiofauna comestível.

Morpho-physiological and phytohormonal changes during the induction of adventitious root development stimulated by exogenous IBA application in Magnolia biondii Pamp

Abstract Magnolia biondii Pamp is an important ornamental tree species widely grown and used as a rootstock in the propagation of different Magnolia varieties. In the current studies, anatomical, physiological and endogenous hormones were studied to check the effect of IBA 750 mg/L on the adventitious rooting and to provide theoretical and technical support for the propagation of Magnolia biondii Pamp through stem cuttings. Two thousand stem cuttings were prepared and divided into two groups i.e., IBA treated cuttings and water control. For the evaluation of antioxidant enzyme activities, and endogenous hormones levels, samples were collected on the day of planting and each 5th day and further steps were carried out in the laboratory according to the protocols and proper precautions. For the anatomical observations, samples were collected on the 13th, 15th, and 17th day for IBA treated cuttings while 21st, 23rd, and 25th day for control. Collected samples were preserved in the FAA solution and further observations were carried out in the laboratory. Anatomical observations showed that it took 13 days for the differentiation of root primordia to the appearance of young adventitious roots in IBA treated cuttings, while it took 21 days to develop primordia in the control. Antioxidant enzyme activities involved in ROS were significantly higher in the IBA treated cuttings compared to control. POD showed a peak on the 13th day before the emergence of roots in IBA treated cuttings while it showed a peak on the 21st day in the control. PPO showed a peak on the 21st day in the IBA treated cuttings while it showed a peak on the 29th day in the control. SOD showed a peak on the 17th day in IBA treated cuttings, while it showed a peak on the 25th day in the control. Exogenous application of IBA enhanced the endogenous IAA and GA3 levels compared to CK, while it reduced the levels of ABA continuously at the time of rooting and then increased gradually. Inclusively, our study suggests that IBA 750 mg/L is efficient for the rooting of Magnolia biondii Pamp cuttings, as it enhanced the process of antioxidant enzyme activities, endogenous hormones levels and reduced the time of root formation which is evident from the anatomical observations.

Resumo Magnolia biondii Pamp é uma importante espécie de árvore ornamental muito cultivada e utilizada como porta-enxerto na propagação de diferentes variedades de Magnolia. Nos estudos atuais, hormônios anatômicos, fisiológicos e endógenos foram estudados para verificar o efeito do AIB na dose de 750 mg / L no enraizamento adventício e fornecer suporte teórico e técnico para a propagação de M. biondii Pamp por meio de estacas. Duas mil estacas foram preparadas e divididas em dois grupos, ou seja, tratadas com AIB e controle de água. Para a avaliação das atividades das enzimas antioxidantes e dos níveis de hormônios endógenos, as amostras foram coletadas no dia do plantio e a cada 5 dias, enquanto as demais etapas foram realizadas em laboratório de acordo com os protocolos e os devidos cuidados. Para as observações anatômicas, as amostras foram coletadas no 13º, 15º e 17º dias para estacas tratadas com AIB e no 21º, 23º e 25º dias para o controle. As amostras coletadas foram preservadas em solução FAA, e outras observações foram realizadas em laboratório. Observações anatômicas mostraram a necessidade de 13 dias para a diferenciação dos primórdios radiculares até o aparecimento de raízes adventícias jovens em estacas tratadas com AIB e de 21 dias para o desenvolvimento dos primórdios no controle. As atividades das enzimas antioxidantes envolvidas nas ROS foram significativamente maiores nas estacas tratadas com AIB em comparação com o controle. A POD apresentou pico no 13º dia antes da emergência das raízes nas estacas tratadas com AIB, enquanto no 21º dia apresentou pico no controle. A PPO teve pico no 21º dia nas estacas tratadas com AIB e no 29º dia no controle. A SOD apresentou pico no 17º dia nas estacas tratadas com AIB e no 25º dia no controle. A aplicação exógena de AIB aumentou os níveis endógenos de IAA e GA3 em relação ao controle, enquanto reduziu os níveis de ABA continuamente no momento do enraizamento e, em seguida, aumentou gradativamente. Inclusive, nosso estudo sugere que o AIB na dose de 750 mg / L é eficiente para o enraizamento de estacas de M. biondii Pamp, visto que potencializou o processo de atividades de enzimas antioxidantes e os níveis de hormônios endógenos, além de reduzir o tempo de formação de raízes, o que fica evidente nas observações anatômicas.

Testing for the ability to modify antibiotics of Panus tigrinus 8/18 Lentinus strigosus 1566 laccase

Abstract In advanced biotechnology, the utilization of enzymes to achieve new or modified compounds with antibacterial, fungicidal, and anti-cancer specifications is crucial. Mushroom lactases are a hopeful biocatalyst for the synthesis and modification of different compounds. They are an accessible and inexpensive enzyme for the preparation of reaction objects and have recently received attention. Laccase purification was performed from basidiomycete Lentinus strigosus (LS) in several stages: Stage 1. On ion-exchange chromatography on TEAE Servacell 23 (400 ml), two distinctly separated laccase activity peaks were observed, eluted from the carrier at 0.21 and 0.27 M NaCl. In order to reduce the loss of enzymes, all fractions with laccase activity were collected, concentrated, and desalted using an ultrafiltration cell (Amicon, United States) with a UM-10 membrane. Stage 2. The resulting preparation with laccase activity was applied to a Q-Sepharose column (60 ml). Two well-separated peaks with laccase activity were obtained during the elution: laccase I (0.12 M NaCl) and laccase II (0.2 M NaCl). Stage 3. In the course of further purification of both enzymes, carried out on anion-exchange carrier Resource Q (6 ml), a broken gradient was used: 0 - 10%, 10 - 20%, and 20 - 100% with 1M NaCl. Stage 4. Both laccase I and laccase II, obtained after Resource Q, were desalted, concentrated to 1 ml each, and applied to a Superdex 75 gel filtration column. As a result, two laccases were obtained in a homogeneous form.

Resumo Na biotecnologia moderna, o uso de enzimas para obter compostos novos ou modificados com propriedades antibacterianas, antifúngicas e anticancerígenas é crucial. Lactases de cogumelos são biocatalisadores promissores para síntese e modificação de diferentes compostos, por serem enzimas baratas e disponíveis para a preparação de componentes de reação, e vem recebendo a devida atenção recentemente. A purificação da lacase foi realizada a partir do basidiomiceto Lentinus strigosus em vários estágios: Etapa 1 - na cromatografia de troca iônica em TEAE Servacell 23 (400 ml), foram observados dois picos de atividade da lacase distintamente separados, com eluição do transportador a 0,21 e 0,27 M de NaCl. Para reduzir a perda de enzimas, todas as frações com atividade de lacase foram coletadas, concentradas e dessalinizadas em uma célula de ultrafiltração (Amicon, Estados Unidos) com membrana UM-10; Etapa 2 - a preparação resultante com atividade de lacase foi aplicada a uma coluna Q-Sepharose (60 ml). Durante a eluição, foram obtidos dois picos bem separados com atividade de lacase: lacase I (NaCl 0,12 M) e lacase II (NaCl 0,2 M); Etapa 3 - no decurso da purificação adicional de ambas as enzimas, realizada no Recurso Q de transportador de troca aniônica (6 ml), um gradiente quebrado foi usado: 0-10%, 10-20% e 20-100% com NaCl 1M; Etapa 4 - tanto a lacase I como a lacase II, obtidas após o Recurso Q, foram dessalinizadas e concentradas para 1 ml cada e aplicadas a uma coluna de filtração em gel Superdex 75. Como resultado, duas lacases foram obtidas de forma homogênea.

In silico inhibition of urease and CagA enzymes as targets against helicobacter pylori: an overview on capes 2022 database / Inibição in silico das enzimas urease e CagA como alvo contra helicobacter pylori: uma visão geral no banco de dados da capes 2022 / Inhibición in silico de las enzimas urease y CagA como objetivos contra helicobacter pylori: una resumen de la base de datos capes 2022

The proliferation, adaptive capability, and action of the Helicobacter pylori bacterium in the human stomach make it a worldwide public health issue. This bacterium is associated with gastrointestinal diseases such as stomach cancer. Adding to this challenge is the emergence of multi-drug-resistant and pan-drug-resistant pathogens among gram-negative bacteria, a category to which Helicobacter pylori belongs, making the elimination of this microorganism a daunting task. Therefore, there is an urgent need for the development of new treatment strategies to address this issue, and one potential way is the in silico method, specifically Computer-Aided Drug Design (CADD), which suggests new starting points in the search for innovative therapies and can be combined with traditional research methods (in vitro, in vivo, and ex-vivo). In this context, this review, utilizing data from the Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) database, provides an overview of the various proposals discussed in 2022 that focus on the inhibition of proteins favorable to the colonization, virulence, and pathogenicity of H. pylori using in silico methods. Thus, several articles were inspected in the CAPES database. With a focus on molecular docking and/or molecular dynamics, pharmacokinetics, drug-like characteristics, and toxicity, 15 articles were identified that indicated the most studied enzymes in 2022 were urease and CagA. Furthermore, it was observed that the nature of the compounds used in inhibition was diverse - essential oils, flavonoids, pyrazolines, benzimidazoles, tetrahydropyrimidines, and benzothiazoles. All of these compounds were found to have the potential to be anti-urease and/or anti-CagA agents.

A proliferação, capacidade adaptativa e ação no estômago humano da bactéria Helicobacter pylori, torna-a um problema de saúde pública a nível mundial. Esta bactéria é associada a doenças gastrointestinais, como o câncer de estômago. Somado a isso, o surgimento de patógenos multirresistentes e pan-resistentes a medicamentos entre bactérias gram-negativas, categoria à qual a Helicobacter pylori encontra-se, torna a eliminação desse micro-organismo desafiadora. Assim, há uma urgente necessidade do desenvolvimento de novas estratégias de tratamento para enfrentar esse problema, e uma possível saída é o método in silico, especificamente Computer-Aided Drug Design (CADD), que sugere novos pontos de partida na busca novas terapias e pode ser combinado aos métodos tradicionais de pesquisa (in vitro, in vivo, e ex-vivo). Neste contexto, esta revisão, utilizando a base de dados da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), fornece um panorama geral das diferentes propostas discutidas em 2022 que abordam a inibição de proteínas favoráveis à colonização, virulência e patogenicidade de H. pylori utilizando métodos in silico. Assim, diversos artigos foram inspecionados no banco de dados CAPES. Com foco em ancoragem molecular e/ou dinâmica molecular, farmacocinética, características drug-likeness e toxicidade, foram identificados 15 artigos que indicaram que as enzimas mais estudas em 2022 foram a urease e cagA. Além disso, foi observado que a natureza dos compostos utilizados na inibição era variada - óleos essenciais, flavonóides, pirazolinas, benzimidazóis, tetrahidropirimidinas e benzotiazóis. Todos esses compostos mostraram ser potenciais anti-urease e/ou anti-CagA.

La proliferación, capacidad adaptativa y acción de la bacteria Helicobacter pylori en el estómago humano la convierten en un problema de salud pública a nivel mundial. Esta bacteria está asociada con enfermedades gastrointestinales como el cáncer de estómago. A esto se suma el surgimiento de patógenos resistentes a múltiples fármacos y completamente resistentes entre las bacterias gram-negativas, una categoría a la que pertenece Helicobacter pylori, lo que dificulta aún más la eliminación de este microorganismo. Por lo tanto, existe una urgente necesidad de desarrollar nuevas estrategias de tratamiento para abordar este problema, y una posible vía es el método in silico, específicamente el Computer-Aided Drug Design (CADD), que sugiere nuevos puntos de partida en la búsqueda de terapias innovadoras y puede combinarse con métodos de investigación tradicionales (in vitro, in vivo y ex vivo).En este contexto, esta revisión, utilizando datos de la base de datos de la Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), ofrece una visión general de las diversas propuestas discutidas en 2022 que se centran en la inhibición de proteínas favorables a la colonización, virulencia y patogenicidad de H. pylori utilizando métodos in silico. Así, varios artículos fueron inspeccionados en la base de datos de la CAPES. Con un enfoque en el acoplamiento molecular y/o la dinámica molecular, la farmacocinética, las características similares a las de los fármacos y la toxicidad, se identificaron 15 artículos que indicaban que las enzimas más estudiadas en 2022 fueron la ureasa y la CagA. Además, se observó que la naturaleza de los compuestos utilizados en la inhibición era diversa: aceites esenciales, flavonoides, pirazolinas, bencimidazoles, tetrahidropirimidinas y benzotiazoles. Se descubrió que todos estos compuestos tenían el potencial de ser agentes antiureasa y/o anti-CagA.

Análisis molecular y filogenético del genotipo F de Chlamydia trachomatis aislados en México en 2011 / Molecular and phylogenetic analysis of the F genotype of Chlamydia trachomatis isolated in Mexico in 2011

Resumen Antecedentes: Chlamydia trachomatis es la bacteria que se detecta con mayor frecuencia en las infecciones de transmisión sexual. Se han identificado 20 genotipos de C. trachomatis mediante el gen ompA y varias genovariantes mediante el análisis de polimorfismo de un solo nucleótido (SNP). En México, el genotipo F es el más frecuente. Objetivo: Identificar la existencia de subtipos del genotipo F. Método: Se analizaron siete cepas del genotipo F de C. trachomatis aisladas en 2011, mediante secuenciación de nucleótidos y mapeo con enzimas de restricción. Resultados: El análisis de SNP mostró dos cepas con el mismo SNP en el nucleótido 288 (C288T), mientras que con enzimas de restricción se identificó una variante con diferente RFLP (polimorfismo de la longitud de fragmentos de restricción) cuando se tratan con la mezcla de enzimas HinfI y TaqI. Conclusión: En México se encuentran dos subtipos del genotipo F y solo las enzimas de restricción HinfI y TaqI pueden identificar la existencia de uno de estos genotipos F.

Abstract Background: Chlamydia trachomatis is the most frequently identified bacterium in sexually transmitted infections. Twenty C. trachomatis genotypes have been determined using the ompA gene and several genovariants by single nucleotide polymorphism (SNP) analysis. In Mexico, the F genotype is the most frequent. Objective: To identify subtypes of the F genotype. Method: Seven C. trachomatis genotype F strains isolated in 2011 were analyzed by nucleotide sequencing and restriction enzyme mapping. Results: SNP analysis showed two strains with the same SNP at nucleotide 288 (C288T), while with res-triction enzymes, a variant with different RFLP (restriction fragment length polymorphism) was identified when treated with the mixture of HinfI and TaqI enzymes. Conclusion: In Mexico, there are two subtypes of F, and only with restriction enzymes HinfI and TaqI can identify one of the genovariants of the F genotype.

Reserve mobilization and secondary metabolites during seed germination and seedling establishment of the tree Erythrina velutina (Fabaceae) / Movilización de reservas y metabolitos secundarios durante la germinación de semillas y el establecimiento de plántulas del árbol Erythrina velutina (Fabaceae)

Introduction: The lack of knowledge on seed germination and seedling establishment is a main constraint for the restoration of degraded areas, including the tropical dry forest known as Caatinga. Objective: To assess reserve and secondary metabolite mobilization during seed germination and seedling establishment in Erythina velutina. Methods: We scarified, disinfected, imbibed, sown between towel paper, and incubated seeds under controlled conditions. We hydroponically cultivated seedlings in a greenhouse. We harvested cotyledons at seed imbibition, radicle protrusion, hypocotyl emergence, apical hook formation and expansion of cordiform leaves, first trifoliate leaf, and second trifoliate leaf. Results: Seeds contained approximately 20 % starch, 14.5 % storage proteins, 11.6 % neutral lipids, and 5.7 % non-reducing sugars on a dry weight basis. Soluble sugars were mainly consumed from hypocotyl emergence to apical hook formation, while major reserves were mobilized from apical hook formation to expansion of first trifoliate leaf. Enzymatic activity increased from mid to late seedling establishment, causing the mobilization of starch, oils, and proteins. Terpenoid-derivatives, flavonoids, phenolic acids, and alkaloids were detected. Flavonoids and phenolic acids were present at almost all stages and terpenoid-derivatives disappeared at expansion of cordiform leaves. Conclusion: Soluble sugars support early seedling growth, while starch, oils and proteins are simultaneously mobilized from mid to late establishment by amylases, lipases, and acid proteases. The cotyledons contain secondary metabolites, which may act in seedling defense. High content of reserves and presence of secondary metabolites in the cotyledons could enable E. velutina seedlings endure stress, validating their use in the restoration of degraded areas.

Introducción: La falta de conocimiento sobre la germinación de semillas y el establecimiento de plántulas es una de las principales limitaciones para la restauración de áreas degradadas, incluido el bosque seco tropical conocido como Caatinga. Objetivo: Evaluar la movilización de reservas y metabolitos secundarios durante estas etapas de desarrollo en Erythina velutina. Métodos: Las semillas fueron escarificadas, desinfectadas, embebidas, sembradas entre toallas de papel e incubadas bajo condiciones controladas. Cultivamos las plántulas hidropónicamente en un invernadero. Recolectamos los cotiledones en la imbibición de la semilla, la protrusión de la radícula, la emergencia del hipocótilo, la formación del gancho apical y la expansión de las hojas cordiformes, la primera y segunda hoja trifoliada. Resultados: Las semillas contenían 20 % de almidón, 14.5 % de proteínas de almacenamiento, 11.6 % de lípidos neutros y 5.7 % de azúcares no reductores en peso seco. Los azúcares solubles se consumieron desde la emergencia del hipocótilo hasta la formación del gancho apical. Las principales reservas se movilizaron desde la formación del gancho apical hasta la expansión de la primera hoja trifoliada. La actividad enzimática aumentó desde la mitad hasta el final del establecimiento de las plántulas, movilizando almidón, aceites y proteínas. Se detectaron derivados de terpenoides, flavonoides, ácidos fenólicos y alcaloides. Los flavonoides y los ácidos fenólicos estuvieron en casi todas las etapas y los derivados terpenoides desaparecieron en la expansión de las hojas cordiformes. Conclusión: Los azúcares solubles apoyan el crecimiento temprano de las plántulas; el almidón, los aceites y las proteínas se movilizan simultáneamente desde el establecimiento medio hasta el final por amilasas, lipasas y proteasas ácidas. Los cotiledones contienen metabolitos secundarios, que pueden actuar en la defensa de las plántulas. El alto contenido de reservas y los metabolitos secundarios en los cotiledones podría permitir que las plántulas de E. velutina toleren estrés, validando su uso en la restauración de áreas degradadas.

Aislamiento enzimático de protoplastos a partir del mesófilo de vitroplantas de Gynerium sagittatum Aubl. Beauv. cv. "Criolla"

Gynerium sagittatum es una gramínea ampliamente utilizada en la costa Caribe colombiana como fuente de fibra natural para la elaboración de artesanías, particularmente por la comunidad Zenú. En la presente investigación se evaluó el efecto de diferentes concentraciones de enzimas: celulasa y macerozima a diferentes tiempos de incubación y sus interacciones en el aislamiento de protoplastos. Los protoplastos se obtuvieron del mesófilo foliar de vitroplantas de G. sagittatum expuesto a combinaciones enzimáticas de celulasa (1.5 y 2.0%), con macerozima (0.3, 0.6 y 0.9%), durante 3, 6 y 9 horas de incubación, para un total de 18 tratamientos con 5 réplicas cada uno. Los mayores números de protoplastos aislados correspondieron a T18 (2.0% celulasa, 0.9% macerozima), T12 (2.0% de celulasa, 0.3% macerozima), T3 (1.5% de celulasa, 0.3% de macerozima) y T6 (1.5% de celulasa, 0.6% de macerozima) por 9 horas de incubación cada uno, con valores de 88.625, 83.000, 75.000 y 53.375 protoplastos/mL respectivamente. El tiempo de incubación fue significativo en el aislamiento de los protoplastos (p<0.05). Las predicciones entre factores mostraron que una interacción de 2.0% de celulasa y 0.9% de macerozima permite obtener 44.302 protoplastos/mL, mientras que las interaciciones tiempo de incubación-celulasa y tiempo de incubación-macerozima mostraron que es posible obtener 72.073 y 71.212 protoplastos/mL con 2.0% de celulasa y 0.9% macerozima por 9 horas de incubación cada una respectivamente. Los resultados indican que la aplicación de estas enzimas permite obtener cantidades considerables de protoplastos de G. sagittatum a partir de explantes cultivados in vitro.

Gynerium sagittatum is a graminaceous plant widely used in the Caribbean coast of Colombia as a natural fiber source for the elaboration of handicrafts, particularly by the Zenú community. In the present investigation, the effect of different concentrations of cellulase and macerozyme enzymes at different incubation times and their interaction in the isolation of protoplasts was evaluated. Protoplasts were obtained from leaf mesophyll of G. sagittatum vitroplants exposed to enzymatic combinations of cellulase (1.5 and 2.0%), with macerozyme (0.3, 0.6 and 0.9%), for 3, 6 and 9 hours of incubation, for a total of 18 treatments with 5 replicates each. The highest numbers of isolated protoplasts corresponded to T18 (2.0% cellulase, 0.9% macerozyme), T12 (2.0% cellulase, 0.3% macerozyme), T3 (1.5% cellulase, 0.3% macerozyme) and T6 (1.5% cellulase, 0.6% macerozyme); at 9 hours incubation. The protoplast number for these treatments were: 88.625, 83.000, 75.000 and 53.375 protoplasts/mL respectively. Incubation time was significant in the isolation of protoplasts (p<0.05). The predictions between the factors showed that with an interaction of 2.0% cellulase and 0.9% macerozyme it is possible to obtain 44.302 protoplasts/mL, likewise, the incubation time-cellulase and incubation time-macerozyme interactions showed that it is possible to obtain 72.073 and 71.212 protoplasts/mL with 2.0% cellulase and 0.9% macerozyme for 9 hours of incubation respectively. The results indicate that the use of these enzymes and time, allows the isolation of of protoplasts from G. sagittatum in vitro plants.

Different phytase levels and energy densities in broiler diets on performance, nutrient digestibility, and bone integrity from 28 to 35 days of age / Diferentes níveis de fitase e de densidades energéticas em dietas de frangos de corte sobre desempenho, digestibilidade de nutrientes e integridade óssea de 28 a 35 dias de idade

The study was carried out with the objective of evaluating the effects of using phytase levels at different energy densities in the diet of broilers, from 28 to 35 days of age. The experimental diets contained increasing levels of apparent metabolizable energy corrected for nitrogen balance and different levels of phytase. Growth performance variables, nutrient digestibility, as well as variables related to bone integrity were examined. Diets containing 500 FTU/kg in combination with 3150kcal.kg-1 of AMEn resulted in better growth performance. Supplementation with 500 and 1000 FTU/kg in the diets provide better coefficients of apparent and ileal digestibility of calcium and phosphorus, but negatively influence the deposition of calcium, phosphorus, dry matter, and ash in the tibia, in addition to adversely affecting the breakage and area of these bones in broilers. Bone length and the levels of magnesium and zinc present in the tibias were not influenced by the energy and phytase levels of the diets. There is no interaction between the different energetic densities and the phytase doses in the variables analyzed in the studied period. Increasing the energy density of diets resulted in improved apparent and ileal digestibility for most nutrients.

O estudo foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos da utilização de níveis de fitase em diferentes densidades energéticas na dieta de frangos de corte, no período de 28 a 35 dias de idade. As dietas experimentais contiveram níveis crescentes de energia metabolizável aparente corrigida para balanço de nitrogênio e diferentes níveis de fitase. Foram avaliadas variáveis de desempenho zootécnico, digestibilidade de nutrientes e variáveis relacionadas à integridade óssea. Dietas contendo 500 FTU/kg de fitase em combinação com 3150kcal.kg-1 de EMAn resultam em melhor desempenho zootécnico. A suplementação com 500 e 1000 FTU/kg nas dietas propicia melhores coeficientes de digestibilidade aparente e ileal do cálcio e do fósforo, mas influencia negativamente na deposição de cálcio, fósforo, matéria seca e cinzas das tíbias, além de afetar adversamente a quebra e a área desses ossos em frangos de corte. O comprimento do osso e os níveis de magnésio e zinco presentes nas tíbias não são influenciados pelos níveis energéticos e de fitase das dietas. Não há interação entre as diferentes densidades energéticas e as doses de fitase nas variáveis analisadas no período estudado. O aumento da densidade energética das dietas resulta em melhora na digestibilidade aparente e ileal para a maioria dos nutrientes.

VIH/SIDA en embarazadas: evaluación hematológica e inmunológica y peso de sus neonatos / HIV/AIDS in pregnant women: hematological and immunological evaluation and weight of their neonates

Objetivo: Determinar la incidencia de infección por virus de inmunodeficiencia humana y el efectos sobre el peso del neonato, en embarazadas que acuden al Hospital Universitario de Caracas. Métodos: Se incluyeron las gestantes seropositivas para infección por virus de inmunodeficiencia humana. Se practicó Elisa para infección por virus de inmunodeficiencia humana, Webstern blot, hematología y química, linfocitos CD3, CD4 y CD8 por citometría, carga viral, se registró el peso de 204 neonatos y el esquema de tratamiento recibido. Resultados: La frecuencia de infección por virus de inmunodeficiencia humana en gestantes aumentó desde el año 2000; la mayoría ocurre durante el tercer trimestre. El 68,55 % de las gestantes en segundo y tercer trimestre presentaron hemoglobina mayor a 11 g y el 31,45 % tuvo hemoglobina de 7 a 10 g. La relación CD4/CD8 estuvo disminuida. Los niveles de CD4 del segundo trimestre fueron más bajos en pacientes con hemoglobina entre 7 y 10 gramos. Esta relación no se vio en el tercer trimestre, quizás por el grado de supresión viral por el tratamiento; las madres del 95,7 % de los neonatos con bajo peso al nacer recibieron terapia antirretroviral combinada, no hubo neonatos con bajo peso al nacer hijos de madres que recibieron monoterapia. Conclusión: La prevalencia de infección por virus de inmunodeficiencia humana fue 1,6 %. La prevalencia de anemia fue de 31,45 %. La relación CD4/CD8 estaba disminuida. Hubo 11,3 % de neonatos con bajo peso al nacer, en 95,7 % las madres recibieron terapia antirretroviral combinada(AU)

Objective: To determine the incidence of infection by human immunodeficiency virus and the effects on the weight of the newborn, in pregnant women who attend the University Hospital of Caracas. Methods: Seropositive pregnant women for human immunodeficiency virus infection were included. Elisa was performed for human immunodeficiency virus infection, Websternblot, hematology and chemistry, CD3, CD4 and CD8 lymphocytes by cytometry, viral load, the weight of 204 neonates and the treatment scheme received were recorded. Results: The frequency of infection by human immunodeficiency virus in pregnant women has increased since the year 2000; most occur during the third trimester. 68.55% of pregnant women in the second and third trimester had hemoglobin greater than 11 g and 31.45% had hemoglobin between 7 and 10 g. The CD4/CD8 ratio was decreased. Second trimester CD4 counts were lowest in patients with hemoglobin between 7 and 10 grams. This relationship was not seen in the third trimester, perhaps because of the degree of viral suppression by treatment; mothers of 95.7% of low birth weight infants received combination antiretroviral therapy, there were no low birth weight infants born to mothers who received monotherapy. Conclusion: The prevalence of human immunodeficiency virus infection was 1.6%. The prevalence of anemia was 31.45%. The CD4/CD8 ratio was decreased. There were 11.3% of neonates with low birth weight, in 95.7% the mothers received combination antiretroviral therapy(AU)

Sugarcane yeast (Saccharomyces cerevisiae) and ß-mannanase enzyme in broilers' diets / Levedura de cana-de-açúcar (Saccharomyces cerevisiae) e enzima ß-mananase em dietas para frangos de corte

Our objective was to evaluate the effect of supplementing ß-mannanase enzyme, with and without sugarcane yeast (Saccharomyces cerevisiae), on broiler chickens aged 1-21 days. The study used 720 one-day-old male Cobb chicks in a randomized design, with six treatments and six replications of 20 birds each. The treatments were: basal diet (BD), BD + ß-mannanase (100 g/t), 7% sugarcane yeast (SY), SY + ß-mannanase (80 g/t), SY + ß-mannanase (100 g/t), and SY + ß-mannanase (120 g/t). Zootechnical results (animal performance) were evaluated during the pre-starter (1 to 7 day-old) and starter (1 to 21 day-old) phases, as well as small intestine morphometry (duodenum, jejunum, and ileum) and diets' economic viability. Data were subjected to variance analysis using the SAS software, and the means were compared by the Student Newman Keuls (SNK) test. In the pre-starter phase, treatments with YD + ß-mannanase (80, 100, and 120 g/t) showed the best feed conversion averages. In the starter phase, chickens consuming the basal diet (BD) and BD + ß-mannanase showed better average weights, weight gains, and feed conversion rates. For intestinal morphometry, shallower ileal crypts were observed in the treatment with YD + ß-mannanase (120 g/t) compared to the basal diet, and wider ileal villi were observed in the treatment with YD + ß-mannanase (100 g/t) compared to the diet with YD + ß-mannanase (80 g/t). The thickness of the muscular wall in the duodenum was lower in chickens consuming BD compared to BD + ß-mannanase (100 g/t), higher in YD and supplementation with 100 g/t compared to 80 and 120 g/t in the jejunum, and higher in diets with ß-mannanase supplementation compared to BD and YD in the ileum. For economic viability, adding 7% sugar cane yeast, with or without enzyme, increased the average feed cost and cost index, and reduced the economic efficiency index. Based on the zootechnical results, YD + ß-mannanase (120 g/t) is recommended for the pre-starter and starter phases. However, using sugar cane yeast with or without ß-mannanase enzyme supplementation is not economically viable in the 1- to 21-day period.

Objetivou-se avaliar o efeito da suplementação da enzima ß-mananase com e sem levedura de cana de açúcar (Saccharomyces cerevisiae) para frangos de corte 1 a 21 dias de idade. Utilizou-se 720 pintos de corte de um dia de idade, machos, da linhagem Cobb, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado com seis tratamentos e, seis repetições de 20 aves cada. Os tratamentos foram: Dieta basal (DB); DB + ß-mananase (100 g/t); DB + 7% de levedura de cana-de-açúcar (DL); DL + ß-mananase (80 g/t); DL + ß-mananase (100 g/t); DL + ß-mananase (120 g/t). Avaliou-se o desempenho zootécnico na fase pré-inicial (1 a 7) e na fase inicial (1 a 21 dias de idade), a morfometria do intestino delgado (duodeno, jejuno e íleo) e, a viabilidade econômica da ração. Os dados foram submetidos à análise da variância do programa SAS e as médias foram comparadas pelo teste de Student Newmann Keuls (SNK). Na fase pré-inicial, os tratamentos com DL + ß-mananase (80, 100 e 120 g/t) apresentaram as melhores médias de conversão alimentar. Na fase inicial, aos frangos que consumiram à dieta basal (DB) e DB + ß-mananase apresentaram peso médio, ganho de peso e conversão alimentar melhores. Para a morfometria intestinal, criptas ileais mais rasas foram observadas no tratamento com DL+ ß-mananase (120 g/t) em relação a dieta basal e vilos ileais mais largos foram observados no tratamento com DL+ ß-mananase (100 g/t) em relação a dieta com DL+ ß-mananase (80 g/t). A espessura da parede muscular, no duodeno, foi menor nos frangos que consumiram a DB em relação a DB + ß-mananase (100 g/t), no jejuno, foi maior na DL e na suplementação com 100 g/t em relação a 80 e 120 g/t e no íleo, foi maior nas dietas com suplementação de ß-mananase em relação a DB e DL. Para a viabilidade econômica, a adição de 7% de levedura de cana-de-açúcar, com ou sem enzima proporcionaram aumento do custo médio de ração e índice de custo, e redução do índice de eficiência econômica. Com base nos resultados zootécnicos recomenda-se DL + ß-mananase (120g/t) para a fase pré-inicial e inicial. Contudo, o uso de levedura de cana-de-açúcar com e sem suplementação da enzima ß-mananase não é economicamente viável no período de 1 a 21 dias.

Tracking of thermal microbial shock proteins and genomic variation of Bacillus cereus due to some abiotic stresses / Rastreamento de proteínas de choque microbiano térmico e variação genômica de Bacillus cereus devido a alguns estresses abióticos

Bacillus cereus is considered the most potent bacterial strain in terms of the increment in induced proteins during thermal treatment at 52 °C for 90 min. Protein production in food-born microorganism (Bacillus cereus) recovered from contaminated food was investigated in response to heat shock treatment. Bacterial tolerance towards pH, salinity, and temperature at various levels was also investigated. Heat-shock proteins (HSPs) produced when exposed to 52 °C for up to 60 minutes led to significant differences (30%) above the untreated control (37 °C), and the maximum difference was recorded at 52°C at 90 minutes. ISSR detected a higher number of bands/primer than RAPD (13.7 vs. 12.7, respectively), and more polymorphic bands (10.7 vs. 8.4 bands/primer, respectively). The untreated bacterial strain did not grow at pH levels lower than 3, whereas the thermally treated strain grew significantly at pH two. A consistent increase in HSPs was observed, with a gradual increase in salinity of less than 16%. Surprisingly, the gradual increase in temperature did not induce tolerance against higher temperatures. However, a significant growth rate was noticed in response to heat-shocked treatments. The untreated Bacillus cereus demonstrated antibiotic resistance to gentamycin and clindamycin (1.54 and 1.65 cm, respectively), much lower than the corresponding inhibition areas with preheat-treated test pathogen which were recorded (2.37 and 2.49 cm, respectively).

Bacillus cereus é considerada a cepa bacteriana mais potente em termos de incremento de proteínas induzidas durante o tratamento térmico a 52 °C por 90 min. A produção de proteínas em microorganismos de origem alimentar (Bacillus cereus) recuperados de alimentos contaminados foi investigada em resposta ao tratamento de choque térmico. A tolerância bacteriana ao pH, salinidade e temperatura em vários níveis também foram investigadas. Proteínas de choque térmico (HSPs) produzidas quando expostas a 52 °C por até 60 minutos levaram a diferenças significativas (30%) acima do controle não tratado (37 °C), e a diferença máxima foi registrada a 52 °C em 90 minutos . O ISSR detectou um maior número de bandas/iniciador do que o RAPD (13,7 vs. 12,7, respectivamente) e mais bandas polimórficas (10,7 vs. 8,4 bandas/iniciador, respectivamente). A cepa bacteriana não tratada não cresceu em níveis de pH abaixo de 3, enquanto a cepa tratada termicamente cresceu significativamente em pH dois. Observou-se aumento consistente de HSPs, com aumento gradual da salinidade inferior a 16%. Surpreendentemente, o aumento gradual da temperatura não induziu tolerância a temperaturas mais altas. No entanto, uma taxa de crescimento significativa foi observada em resposta aos tratamentos de choque térmico. O Bacillus cereus não tratado demonstrou resistência antibiótica à gentamicina e clindamicina (1,54 e 1,65 cm, respectivamente), muito menor do que as áreas de inibição correspondentes com patógeno de teste pré-tratado que foram registradas (2,37 e 2,49 cm, respectivamente).

Physiological and biochemical changes induced by Qiangdi nano-863 biological assistant growth apparatus during rice seed priming under temperature stress / Alterações fisiológicas e bioquímicas induzidas pelo aparelho de crescimento assistente biológico Qiangdi nano-863 durante o priming de sementes de arroz sob estresse de temperatura

A huge amount of rice cultivation and consumption occur in Asia particularly in Pakistan and China. However, multiple abiotic stresses especially high and low-temperature proved to be a substantial threat for rice production ultimately risks for food security. To overcome various types of abiotic stress; seed priming is among the effective approaches to improve the rice seed germination and growth vigor. Therefore, the present study was planned to evaluate physiological and biochemical modifications in Chinese and Pakistani rice varieties by Qiangdi 863 biological assistant growth apparatus nano treated water (NTW), Osmo priming Calcium chloride (CaCl2), redoxpriming hydrogen peroxide (H2O2) and hormonal priming by Salicylic acid (SA) under temperature stress conditions. The experiment was performed with completely randomize design conditions. Five rice varieties, nomenclature as Zhongzoa 39, (Chinese rice variety) KSK 133, KS 282, Super basmati and PK 1121 aromatic (Pakistani rice variety) were sown under low temperature (LT) (17ºC), optimal temperature (OT) 27ºC and high temperature (HT) 37ºC conditions. The present study indicated that nanopriming were the most effective treatments increased Germination Energy Percentage (GEP) (96.1, 100, 100%), Speed of Germination (SG) (27.2, 35.45, 37.1), Final Germination Percentage (FGP) (98.2, 99.1, 99.4%), Seedling Dry Weight Biomass (DWB) (0.1, 0.137, 0.14g), Total Chlorophyll Content (0.502, 13.74, 15.21), antioxidant enzymes Superoxide Dismutase (SOD)(3145, 2559, 3345 µg-1FWh-1), Catalase (CAT) (300, 366, 3243 µg-1FWh-1) and decreased Malondialdehyde (MDA) (6.5, 12.2, 6.5 µmol g-1 FW) for Zhongzao 39 and KSK 133 rice varieties under low (LT+NTW), optimal temperature (OP+NTW) and high temperature (HT+NTW) stress., Therefore, nano-priming is recommended to cope with the high and low-temperature stress conditions along with improved productivity of rice.(AU)

Cultivo e consumo de arroz ocorrem em grandes quantidades na Ásia, particularmente no Paquistão e na China. No entanto, vários estresses abióticos, especialmente de alta e baixa temperatura, provaram ser uma ameaça considerável para a produção de arroz, em última análise, riscos para a segurança alimentar. Para superar vários tipos de estresse abiótico, o priming de sementes está entre as abordagens eficazes que melhoram a germinação e o vigor de crescimento das sementes de arroz. Portanto, o presente estudo foi planejado para avaliar as modificações fisiológicas e bioquímicas em variedades de arroz chinês e paquistanês por Qiangdi 863, aparelho assistente biológico de crescimento com água nanotratada (NTW), Osmopriming cloreto de cálcio (CaCl2), peróxido de hidrogênio redox (H2O2) e priming hormonal por ácido salicílico (SA) em condições de estresse de temperatura. O experimento foi realizado em condições de delineamento inteiramente ao acaso. Cinco variedades de arroz, nomenclaturas como Zhongzoa 39 (variedade de arroz chinês), KSK 133, KS 282, Super basmati e PK 1121 aromático (variedade de arroz do Paquistão) foram semeadas sob baixa temperatura (LT) (17 ºC), temperatura ótima (OT) 27 ºC e condições de alta temperatura (HT) 37 ºC. O presente estudo indicou que nanocondicionamento foi o tratamento mais eficaz: aumento da porcentagem de energia de germinação (GEP) (96,1%, 100%, 100%), velocidade de germinação (SG) (27,2, 35,45, 37,1), porcentagem de germinação final (FGP) (98,2%, 99,1%, 99,4%), biomassa de peso seco de mudas (DWB) (0,1 g, 0,137 g, 0,14 g), conteúdo total de clorofila (0,502, 13,74, 15,21), enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) (3145, 2559, 3345 µg-1FWh- 1), catalase (CAT) (300, 366, 3243 µg-1FWh-1) e malondialdeído diminuído (MDA) (6,5, 12,2, 6,5 µmol g-1 FW) para as variedades de arroz Zhongzao 39 e KSK 133 sob baixo (LT + NTW), temperatura ótima (OP + NTW) e estresse de alta temperatura [...].(AU)

Thermo-resistant enzyme-producing microorganisms isolated from composting / Microrganismos produtores de enzimas termo-resistentes isolados de compostagem

Organo-mineral fertilizers supplemented with biological additives are an alternative to chemical fertilizers. In this study, thermoresistant microorganisms from composting mass were isolated by two-step procedures. First, samples taken at different time points and temperatures (33 days at 52 ºC, 60 days at 63 ºC, and over 365 days at 26 ºC) were pre-incubated at 80 oC for 30 minutes. Second, the microbial selection by in vitro culture-based methods and heat shock at 60 oC and 100 oC for 2h and 4h. Forty-one isolates were able to grow at 60 °C for 4h; twenty-seven at 100 °C for 2h, and two at 100 °C for 4h. The molecular identification by partial sequencing of the 16S ribosomal gene using universal primers revealed that thirty-five isolates were from eight Bacillus species, one Brevibacillus borstelensis, three Streptomyces thermogriseus, and two fungi (Thermomyces lanuginosus and T. dupontii). Data from amylase, phytase, and cellulase activity assays and the enzymatic index (EI) showed that 38 of 41 thermo-resistant isolates produce at least one enzyme. For amylase activity, the highest EI value was observed in Bacillus licheniformis (isolate 21C2, EI= 4.11), followed by Brevibacillus borstelensis (isolate 6C2, EI= 3.66), Bacillus cereus (isolate 18C2, EI= 3.52), and Bacillus paralicheniformis (isolate 20C2, EI= 3.34). For phytase, the highest EI values were observed for Bacillus cereus (isolate 18C2, EI= 2.30) and Bacillus licheniformis (isolate 3C1, EI= 2.15). Concerning cellulose production, B. altitudinis (isolate 6C1) was the most efficient (EI= 6.40), followed by three Bacillus subtilis (isolates 9C1, 16C2, and 19C2) with EI values of 5.66, 5.84, and 5.88, respectively, and one B. pumilus (isolate 27C2, EI= 5.78). The selected microorganisms are potentially useful as a biological additive in organo-mineral fertilizers and other biotechnological processes.(AU)

Os fertilizantes organo-minerais suplementados com aditivos biológicos são uma alternativa aos adubos químicos. Neste estudo, microrganismos termoresistentes foram isolados de compostagem por procedimentos de duas etapas. Inicialmente, as amostras tomadas em diferentes períodos e temperaturas (33 dias a 52 ºC, 60 dias a 63 ºC e mais de 365 dias a 26 ºC) foram pré-incubadas a 80 oC por 30 minutos. Posteriormente, a seleção microbiana foi conduzida por métodos baseados em cultura in vitro e choque térmico a 60 oC e 100 oC por 2h e 4h. Quarenta e um isolados foram capazes de crescer a 60 °C por 4h; vinte e sete a 100 °C por 2h e dois a 100 °C por 4h. A identificação molecular por sequenciamento parcial do gene ribossomal 16S usando primers universais revelou que trinta e cinco isolados eram de oito espécies de Bacillus, um Brevibacillus borstelensis, três Streptomyces thermogriseus e dois fungos (Thermomyces lanuginosus e T. dupontii). Os dados dos ensaios de atividade de amilase, fitase e celulase e o índice enzimático (IE) mostraram que 38 dos 41 isolados termorresistentes produziram pelo menos uma enzima. Para a atividade da amilase, o maior valor de IE foi observado em Bacillus licheniformis (isolado 21C2, IE = 4,11), seguido por Brevibacillus borstelensis (isolado 6C2, IE = 3,66), Bacillus cereus (isolado 18C2, IE = 3,52) e Bacillus paralicheniformis (isolado 20C2, IE = 3,34). Para a fitase, os maiores valores de IE foram observados para B. cereus (isolado 18C2, IE = 2,30) e B. licheniformis (isolado 3C1, IE = 2,15). Em relação à produção de celulose, B. altitudinis (isolado 6C1) foi o mais eficiente (IE = 6,40), seguido por três Bacillus subtilis (isolados 9C1, 16C2 e 19C2) com valores de IE de 5,66, 5,84 e 5,88, respectivamente, e um B. pumilus (isolado 27C2, IE = 5,78). Pode-se inferir que os microrganismos selecionados são potencialmente úteis como aditivos biológicos em fertilizantes organo-minerais e outros processos biotecnológicos.(AU)

Modulating the production of xylanase by Bacillus pumilus BS131 through optimization using waste fiber sludge / Modulando a produção de xilanase por Bacillus pumilus BS131 por meio da otimização usando lodo de fibra residual

In recent days, cheapest alternative carbon source for fermentation purpose is desirable to minimize production cost. Xylanases have become attractive enzymes as their potential in bio-bleaching of pulp and paper industry. The objective of the present study was to identify the potential ability on the xylanase production by locally isolated Bacillus pumilus BS131 by using waste fiber sludge and wheat bran media under submerged fermentation. Culture growth conditions were optimized to obtain significant amount of xylanase. Maximum xylanase production was recorded after 72 hours of incubation at 30 °C and 7 pH with 4.0% substrate concentration. In the nutshell, the production of xylanase using inexpensive waste fiber sludge and wheat-bran as an alternative in place of expensive xylan substrate was more cost effective and environment friendly.(AU)

Nos últimos dias, a fonte alternativa de carbono mais barata para fins de fermentação é desejável para minimizar o custo de produção. As xilanases têm se tornado enzimas atraentes como seu potencial no biobranqueamento da indústria de papel e celulose. O objetivo do presente estudo foi identificar a capacidade potencial na produção de xilanase por Bacillus pumilus BS131 isolado localmente usando lodo de fibra residual e farelo de trigo em meio de fermentação submersa. As condições de crescimento da cultura foram otimizadas para obter uma quantidade significativa de xilanase. A produção máxima de xilanase foi registrada após 72 horas de incubação a 30 °C e pH 7 com concentração de substrato de 4,0%. Resumindo, a produção de xilanase usando lodo de fibra residual de baixo custo e farelo de trigo como uma alternativa no lugar do substrato de xilano caro foi mais econômica e ecológica.(AU)

Vias de produção de GDP-fucose em Arthropoda

O processo de glicosilação de proteínas nos seres vivos é uma etapa pós-traducional de extrema importância, dado que é a partir dela que muitas proteínas adquirem características estruturais essenciais para o seu funcionamento. A L-fucose é um açúcar muito importante nesses processos e compõe inúmeros oligossacarídeos fucosilados que estão anexados às proteínas de seres vivos. Para tanto, a L-fucose estará pronta para compor glicanos apenas em sua forma nucleotídeo ativada - GDP-fucose. Para síntese deste açúcar há duas vias enzimáticas conhecidas em organismos, são chamadas de via salvage - que apresenta as enzimas fucose- quinase (FK) e GDP-fucose pirofosforilase (PP) - e via de novo - que apresenta as enzimas GDP-manose 4,6 desidratase (GMD) e GDP-fucose sintase (FX). Este trabalho realiza investigações destas vias de produção de GDP-fucose em Arthropoda, partindo da espécie de aranha N. cruentata e estendendo para os demais grupos do Filo. Análises de alinhamentos das sequências de aminoácidos das enzimas FK, PP, GMD e FX foram realizadas, buscando observar a preservação ou substituição de resíduos de atividade catalítica e de ligação ao substrato e cofatores. A árvore de máxima verossimilhança a partir das enzimas da via salvage, mostra a proximidade filogenética das FKs com a enzima única de dupla função, fucose-quinase/GDP-fucose pirofosforilase (FKP), da bactéria B. fragilis, o que traz indícios de como se deu a evolução dessa rota enzimática nos seres vivos. Os resultados mostram que a via salvage de produção de GDP-fucose encontra-se ausente no subfilo Hexapoda, mas presente em Arachnida e Crustacea. Já a via de novo está presente em todos os grupos de Arthropoda cujas informações de transcriptomas encontram-se depositadas nos bancos de dados públicos.