Region-Specific Decellularization of Porcine Uterine Tube Extracellular Matrix: A New Approach for Reproductive Tissue-Engineering Applications.

The uterine tube extracellular matrix is a key component that regulates tubal tissue physiology, and it has a region-specific structural distribution, which is directly associated to its functions. Considering this, the application of biological matrices in culture systems is an interesting strategy to develop biomimetic tubal microenvironments and enhance their complexity. However, there are no established protocols to produce tubal biological matrices that consider the organ morphophysiology for such applications. Therefore, this study aimed to establish region-specific protocols to obtain decellularized scaffolds derived from porcine infundibulum, ampulla, and isthmus to provide suitable sources of biomaterials for tissue-engineering approaches. Porcine uterine tubes were decellularized in solutions of 0.1% SDS and 0.5% Triton X-100. The decellularization efficiency was evaluated by DAPI staining and DNA quantification. We analyzed the ECM composition and structure by optical and scanning electronic microscopy, FTIR, and Raman spectroscopy. DNA and DAPI assays validated the decellularization, presenting a significative reduction in cellular content. Structural and spectroscopy analyses revealed that the produced scaffolds remained well structured and with the ECM composition preserved. YS and HEK293 cells were used to attest cytocompatibility, allowing high cell viability rates and successful interaction with the scaffolds. These results suggest that such matrices are applicable for future biotechnological approaches in the reproductive field.

Identification of telocytes in the oviduct of the mare.

Telocytes (TCs), a recently discovered special type of stromal cells, have been identified in many organs of many species, including the female and male reproductive system, with proposed multiple potential bio-functions such as homeostasis, immunomodulation, tissue remodeling and regeneration, embryogenesis, angiogenesis and even tumorigenesis. The aim of this study was to investigate the existence, and characteristics of telocytes in normal equine oviduct. To identify them, we used routine light microscopy, non-conventional light microscopy (NCLM), transmission electron microscopy (TEM), and immunohistochemistry. We found that telocytes of the equine oviduct can be recognized in fixed specimens by light microscopy (methylene blue staining), with more details on Epon semi-thin sections (toluidine blue staining) by NCLM, and that they showed positive immunostaining for CD34. The telocytes, with their typical long and moniliform prolongations, formed networks in the stromal space of the submucosa, muscular and serosa layers, particularly in the lamina propia where they were observed in greater quantity. By TEM we have also confirmed the presence of cells ultrastructurally identifiable as telocytes (cells with telopodes alternating podomers and podoms) in the aforementioned locations. Direct intercellular contacts between epithelial cells and neighboring telocytes were evidenced. EIn conclusion, we demonstrated that telocytes are present in the equine oviduct as previously reported in other species. The potential implication of telocytes in multiple potential functions of physiological and pathological processes deserves further investigation.

Uterine Inflammatory Response After Prostaglandin E1 (Misoprostol) Infusion Prebreeding or Immediately After Embryo Flushing in Commercial Donor Mares.

Misoprostol, a synthetic PGE1, is becoming a common therapy for mares with suspected uterine tube obstruction. Recently, there have been concerns that uterine administration of misoprostol induces exacerbated uterine inflammation; however, this has not been critically evaluated. This study aimed to assess the inflammatory response and potential systemic reactions after uterine administration of misoprostol, either during prebreeding or immediately after postembryo flushing. Privately owned embryo donor mares (n = 11) were randomly assigned in a crossover design to receive misoprostol (3 mL +200 µg) or sham (3 mL of lactate Ringer's solution) infusions, bilaterally deposited via deep-horn, at least 72 hours prebreeding (experiment 1) or immediately after embryo flushing (experiment 2). Each mare had one cycle for misoprostol and sham in both experiments and a breeding cycle (no sham or misoprostol) between experiments. Uterine edema, fluid accumulation, and the number of uterine PMN were assessed before each infusion and then daily for 72 hours. Uterine lavage was performed the day after each infusion across groups and experiments. Ovulation was hastened with a GnRH agonist and confirmed at 24 hour-intervals. Mares were bred with semen from one of six stallions per owner's choice. Embryo flushing was performed 8 to 9 days postovulation. In either experiment, misoprostol did not affect uterine edema or fluid accumulation (P > .05). However, both the sham and misoprostol infusions increased the number of PMN up to 48 hours postinfusion in both experiments. Embryo recoveries were similar between sham (45%, 5/11) and misoprostol cycles in experiments 1 (45%, 5/11; P > .05) and 2 (sham, 68%, 7/11; misoprostol, 45%, 5/11; P > .05). In conclusion, misoprostol did not induce exacerbated uterine inflammation in mares or systemic adverse reactions when infused prebreeding or immediately after embryo flushing.

Celioscopy and partial salpingectomy in a pregnant bitch / Celioscopia e salpingectomia parcial em fêmea canina gestante

ABSTRACT: This case report presents a celioscopy procedure followed by partial salpingectomy (PS) in a pregnant bitch referred to elective video assisted ovariohysterectomy. Through celioscopy it was visualized the embryonic vesicles and PS was performed after conversion to minioceliotomy. The puppies were born by eutocic delivery without clinical alterations. The case suggested that short and regular pneumoperitoneum is not deleterious to dog fetus and video surgery could be used in pregnant bitches. PS allows the fetus development and promotes bitch neutering.

RESUMO: Este trabalho relata um caso de celioscopia seguido de salpingectomia parcial (SP) em fêmea canina gestante encaminhada à ovariohisterectomia eletiva videoassistida. Por celioscopia foram identificadas vesículas gestacionais e a SP foi aplicada após conversão para miniceliotomia. Não foram observadas alterações clínicas nos filhotes, os quais nasceram por parto eutócico. Sugere-se que o pneumoperitônio regular por tempo reduzido não seja deletério para fetos caninos e a videocirurgia pode ser aplicada em caninos gestantes. A SP permite a continuidade do desenvolvimento fetal e a esterilização de fêmeas caninas.

Celioscopy and partial salpingectomy in a pregnant bitch / Celioscopia e salpingectomia parcial em fêmea canina gestante

This case report presents a celioscopy procedure followed by partial salpingectomy (PS) in a pregnant bitch referred to elective video assisted ovariohysterectomy. Through celioscopy it was visualized the embryonic vesicles and PS was performed after conversion to minioceliotomy. The puppies were born by eutocic delivery without clinical alterations. The case suggested that short and regular pneumoperitoneum is not deleterious to dog fetus and video surgery could be used in pregnant bitches. PS allows the fetus development and promotes bitch neutering.

Este trabalho relata um caso de celioscopia seguido de salpingectomia parcial (SP) em fêmea canina gestante encaminhada à ovariohisterectomia eletiva videoassistida. Por celioscopia foram identificadas vesículas gestacionais e a SP foi aplicada após conversão para miniceliotomia. Não foram observadas alterações clínicas nos filhotes, os quais nasceram por parto eutócico. Sugere-se que o pneumoperitônio regular por tempo reduzido não seja deletério para fetos caninos e a videocirurgia pode ser aplicada em caninos gestantes. A SP permite a continuidade do desenvolvimento fetal e a esterilização de fêmeas caninas.

Celioscopy and partial salpingectomy in a pregnant bitch / Celioscopia e salpingectomia parcial em fêmea canina gestante

This case report presents a celioscopy procedure followed by partial salpingectomy (PS) in a pregnant bitch referred to elective video assisted ovariohysterectomy. Through celioscopy it was visualized the embryonic vesicles and PS was performed after conversion to minioceliotomy. The puppies were born by eutocic delivery without clinical alterations. The case suggested that short and regular pneumoperitoneum is not deleterious to dog fetus and video surgery could be used in pregnant bitches. PS allows the fetus development and promotes bitch neutering.(AU)

Este trabalho relata um caso de celioscopia seguido de salpingectomia parcial (SP) em fêmea canina gestante encaminhada à ovariohisterectomia eletiva videoassistida. Por celioscopia foram identificadas vesículas gestacionais e a SP foi aplicada após conversão para miniceliotomia. Não foram observadas alterações clínicas nos filhotes, os quais nasceram por parto eutócico. Sugere-se que o pneumoperitônio regular por tempo reduzido não seja deletério para fetos caninos e a videocirurgia pode ser aplicada em caninos gestantes. A SP permite a continuidade do desenvolvimento fetal e a esterilização de fêmeas caninas.(AU)

Reproductive biology, morphology, and morphometry of ovaries and oviducts of Trachemys scripta elegans in Brazilian Cerrado / Biologia reprodutiva, morfologia e morfometriade ovários e ovidutos de Trachemys scripta elegans no Cerrado Brasileiro

Although Trachemys scripta elegans is an exotic species popular as a pet in Brazil, studies on reproductive biology and capacity are non-existent in the Brazilian Cerrado. This study analyzed ovarian and oviduct characteristics and the egg production capacity of T. scripta elegans grown in this biome. The findings will associate with the size of the specimens and the sexual maturity, aiming at comparisons with native and exotic populations, as well as interspecific and contributing to the understanding of its impact on the invaded ecosystems and the establishment of eradication programs. Thus, 39 females had evaluated the body biometry and the morphology and morphometry of the ovaries and oviducts. G2 (N=20): with Class I (>5-10mm) follicles, with Class I and Class II (>10-fold) follicles, 25mm) and G3 (N=9) with Class I, Class II and Class III (>25mm) follicles. Analysis of variance, Scott-Knott's test, and Pearson's correlation analysis showed that there was no significant difference between the groups in body biometry; in the mean gonadosomatic index and gonadal morphometry, only the width of the oviducts in the right antimer and the mass and width in the left antimer were higher in G3, the only one that presented eggs. There was positive and harmonic development between body mass, carapace, and plastron, and gonadal growth occurred concomitantly with body growth, indicating a higher reproductive potential and a positive relationship between the size of the litter and the female litter. The gonadosomatic index proved to be an excellent reproductive indicator, and the ovarian evaluation was a better indicator of sexual maturity than the maximum carapace length. Ovaries were irregular structures, without delimitation between the cortical and medullary regions and filled with vitelogenic follicles of different diameters, atresic follicles, and corpora lutea, which reflected the ovarian complexity of the species and the presence of follicular hierarchy. In the scarce stroma, two germinative beds were observed per ovary and the presence of gaps very close to the follicles and associated with the blood vessels. Analysis of gonadal tissue revealed three types of oocytes according to cytoplasmic characteristics: homogeneous, vesicular or vesicular in the cortex with apparent granules. Oviducts were functional and separated, joining only in the final portion to form the cloaca and subdivided into infundibulum, tuba, isthmus, uterus, and vagina. The structure of the uterine tube was composed of serosa, muscular and mucous, which was full of glands. The presence of eggs in the oviducts indicated that the specimens can reproduce in the Brazilian Cerrado. This study provides necessary and relevant information on the reproductive biology and capacity of T. scripta elegans in the Brazilian Cerrado and can contribute to the understanding of its impact on the invaded ecosystems and the establishment of eradication programs. The extraction of females with capacity can reduce the annual reproductive yield of the species and decrease its effect on local biodiversity.(AU)

Embora Trachemys scripta elegans seja uma espécie exótica popular como animal de estimação no Brasil, estudos sobre biologia e capacidade reprodutivas são inexistentes no Cerrado brasileiro. Este estudo analisou características ovarianas e do oviduto e a capacidade de produção de ovos em T. scripta elegans criadas neste bioma, correlacionando estes achados ao tamanho dos espécimes e a maturidade sexual, visando comparações com populações nativas e exóticas, bem como interespecíficas e contribuir para a compreensão de seu impacto nos ecossistemas invadidos e com o estabelecimento de programas de erradicação. Assim, 39 fêmeas tiveram avaliadas a biometria corporal e a morfologia e morfometria dos ovários e ovidutos. De acordo com o tamanho dos folículos ovarianos as fêmeas foram separadas em G1 (N= 10): com folículos Classe I (>5-10 mm), G2 (N= 20): com folículos Classe I e Classe II (>10-25 mm) e G3 (N= 9) com folículos Classe I, Classe II e Classe III (>25 mm). À análise de variância, teste de Scott-Knott e à análise de correlação de Pearson verificou-se que não houve diferença significativa entre os grupos na biometria corporal; no índice gonadossomático médio e na morfometria gonadal, apenas a largura dos ovidutos no antímero direito e a massa e a largura no antímero esquerdo foram maiores no G3, o único que apresentou ovos. Houve desenvolvimento positivo e harmônico entre massa corporal, carapaça e plastrão e o crescimento gonadal ocorreu concomitante ao crescimento corporal, indicando maior potencial reprodutivo e relação positiva entre o tamanho da ninhada de ovos e o da fêmea. O índice gonadossomático mostrou-se um bom indicador reprodutivo e a avaliação ovariana um melhor indicador da maturidade sexual que o comprimento máximo da carapaça. Ovários foram estruturas irregulares, sem delimitação entre a região cortical e medular e repletos de folículos vitelogênicos de diferentes diâmetros, folículos atrésicos e corpos lúteos, que refletiram a complexidade ovariana da espécie e a presença de hierarquia folicular. No estroma escasso foram observados dois leitos germinativos por ovário e a presença de lacunas muito próximas aos folículos e associadas aos vasos sanguíneos. A análise do tecido gonadal revelou três tipos de oócitos de acordo com as características do citoplasma: homogêneo, vesicular ou vesicular no córtex com grânulos aparentes. Ovidutos eram funcionais e separados, unindo-se apenas na porção final para formar a cloaca e subdividiam-se em infundíbulo, tuba uterina, istmo, útero e vagina. A estrutura da tuba uterina era constituída de serosa, muscular e mucosa, a qual era repleta de glândulas. A presença de ovos nos ovidutos indicou que os espécimes podem se reproduzir no cerrado brasileiro. Este estudo fornece informações básicas e relevantes da biologia e capacidade reprodutivas de T. scripta elegans no Cerrado brasileiro e pode contribuir com a compreensão de seu impacto nos ecossistemas invadidos e com o estabelecimento de programas de erradicação, uma vez que a extração de fêmeas com capacidade reprodutiva pode contribuir com a diminuição do rendimento reprodutivo anual da espécie e diminuir seu efeito sobre a biodiversidade local.(AU)

Reproductive biology, morphology, and morphometry of ovaries and oviducts of Trachemys scripta elegans in Brazilian Cerrado / Biologia reprodutiva, morfologia e morfometriade ovários e ovidutos de Trachemys scripta elegans no Cerrado Brasileiro

Although Trachemys scripta elegans is an exotic species popular as a pet in Brazil, studies on reproductive biology and capacity are non-existent in the Brazilian Cerrado. This study analyzed ovarian and oviduct characteristics and the egg production capacity of T. scripta elegans grown in this biome. The findings will associate with the size of the specimens and the sexual maturity, aiming at comparisons with native and exotic populations, as well as interspecific and contributing to the understanding of its impact on the invaded ecosystems and the establishment of eradication programs. Thus, 39 females had evaluated the body biometry and the morphology and morphometry of the ovaries and oviducts. G2 (N=20): with Class I (>5-10mm) follicles, with Class I and Class II (>10-fold) follicles, 25mm) and G3 (N=9) with Class I, Class II and Class III (>25mm) follicles. Analysis of variance, Scott-Knott's test, and Pearson's correlation analysis showed that there was no significant difference between the groups in body biometry; in the mean gonadosomatic index and gonadal morphometry, only the width of the oviducts in the right antimer and the mass and width in the left antimer were higher in G3, the only one that presented eggs. There was positive and harmonic development between body mass, carapace, and plastron, and gonadal growth occurred concomitantly with body growth, indicating a higher reproductive potential and a positive relationship between the size of the litter and the female litter. The gonadosomatic index proved to be an excellent reproductive indicator, and the ovarian evaluation was a better indicator of sexual maturity than the maximum carapace length.(AU)

Embora Trachemys scripta elegans seja uma espécie exótica popular como animal de estimação no Brasil, estudos sobre biologia e capacidade reprodutivas são inexistentes no Cerrado brasileiro. Este estudo analisou características ovarianas e do oviduto e a capacidade de produção de ovos em T. scripta elegans criadas neste bioma, correlacionando estes achados ao tamanho dos espécimes e a maturidade sexual, visando comparações com populações nativas e exóticas, bem como interespecíficas e contribuir para a compreensão de seu impacto nos ecossistemas invadidos e com o estabelecimento de programas de erradicação. Assim, 39 fêmeas tiveram avaliadas a biometria corporal e a morfologia e morfometria dos ovários e ovidutos. De acordo com o tamanho dos folículos ovarianos as fêmeas foram separadas em G1 (N= 10): com folículos Classe I (>5-10 mm), G2 (N= 20): com folículos Classe I e Classe II (>10-25 mm) e G3 (N= 9) com folículos Classe I, Classe II e Classe III (>25 mm). À análise de variância, teste de Scott-Knott e à análise de correlação de Pearson verificou-se que não houve diferença significativa entre os grupos na biometria corporal; no índice gonadossomático médio e na morfometria gonadal, apenas a largura dos ovidutos no antímero direito e a massa e a largura no antímero esquerdo foram maiores no G3, o único que apresentou ovos. Houve desenvolvimento positivo e harmônico entre massa corporal, carapaça e plastrão e o crescimento gonadal ocorreu concomitante ao crescimento corporal, indicando maior potencial reprodutivo e relação positiva entre o tamanho da ninhada de ovos e o da fêmea. O índice gonadossomático mostrou-se um bom indicador reprodutivo e a avaliação ovariana um melhor indicador da maturidade sexual que o comprimento máximo da carapaça. (AU)

La tuba uterina: desde Herófilo a Horacio Croxatto / The uterine tube: from Herophilus to Horacio Croxatto

Las tubas uterinas (TU) son órganos tubulares fundamentales en la reproducción humana. No obstante, recién a mediados del siglo XVII con las investigaciones de Reinier De Graaf se comienza a develar su verdadera función en la reproducción. En este trabajo se resumen las principales contribuciones de Horacio Croxatto Avoni al conocimiento de la morfología y fisiología de la TU humana. Sus principales aportes tienen relación con la fisiología del transporte del cigoto y los gametos a lo largo de la TU.

The uterine tubes (UT) are fundamental tubular organs in human reproduction. However, it was not until the middle of the 17th century that Reinier De Graaf's research began to reveal its true role in reproduction. In this work the main contributions of Horacio Croxatto Avoni toward the knowledge of the morphology and physiology of the human UT are summarized. Its main contributions are related to the physiology of zygote transport and gametes throughout the UT.

Matrix-assisted laser desorption/ionization imaging mass spectrometry for the spatial location of feline oviductal proteins.

With the purpose of identifying factors involved in early stages of embryo development in the domestic cat, matrix-assisted laser desorption/ionization imaging mass spectrometry (MALDI-IMS) was used for the first time to describe the spatial localization of proteins in the oviducts of queens. Oviducts were obtained from two 2 and 4 years old cross-bred queens, divided into three segments, snap-frozen in liquid nitrogen and then stored at -80°C until use. Next, they were sectioned in a cryostat, fixed on ITO (indium tin oxide) conductive glass slides for MALDI-IMS and serial sections were collected on microscope slides for histology. As confirmed by histology, MALDI-IMS was able to show contrasting protein distributions in the oviductal infundibulum, ampulla and isthmus. Mass spectra were characterized by abundant ions of m/z 1,259, 4,939, 4,960 and 10,626, which have been tentatively attributed to keratin, thymosin ß10, thymosin ß4 and S100, respectively. Keratin and thymosins are involved in the biological response to tissue damage. S100 proteins are calcium-modulated proteins implicated in a variety of cellular activities, including cell differentiation and regulation of cell motility. These results suggest that protein composition differs between segments of the cat oviduct, which corresponds to morphological changes within these sections. Further functional studies could elucidate the effects of these proteins on feline reproductive physiology.

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes / Interação in vitro do herpesvírus bovino tipo 1 com células epiteliais da tuba uterina e oócitos

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.(AU)

Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.(AU)

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.

RESUMO Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes / Interação in vitro do herpesvírus bovino tipo 1 com células epiteliais da tuba uterina e oócitos

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.

Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.

RESUMO Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes / Interação in vitro do herpesvírus bovino tipo 1 com células epiteliais da tuba uterina e oócitos

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.(AU)

Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.(AU)

Histomorfometria e histoquímica da tuba uterina e do útero de ratas púberes e pré-púberes induzidas ao hipertireoidismo / Histomorphometry and histochemistry of the uterine tubes and uterus of puberal and prepuberal rats induced for hyperthyroidism

Foram estudadas a histomorfometria e a atividade secretória das tubas uterinas e do útero de 38 ratas Wistar púberes, distribuídas em quatro grupos: (1) eutireóideo em proestro-estro, (2) hipertireóideo em proestro-estro, (3) eutireóideo em metaestro-diestro e (4) hipertireóideo em metaestro-diestro. Posteriormente, foram utilizadas outras 24 ratas Wistar pré-púberes, com 12 dias de idade, distribuídas em dois grupos: (1) hipertireóideo (n=12) e (2) eutireóideo (n=12). O útero e as tubas uterinas foram colhidos para avaliação histomorfométrica e histoquímica. A altura do epitélio da ampola, tanto no proestro-estro quanto no metaestro-diestro, elevou-se com a administração de tiroxina, tornando-se semelhante à do istmo. O hipertireoidismo aumentou a secreção PAS positiva e de mucossubstâncias ácidas do infundíbulo na fase estrogênica, igualando-a à do istmo. A parede uterina apresentou-se mais espessa na fase estrogênica, resultado da ação conjunta da tiroxina no endométrio e no miométrio. A atividade secretória e a composição do colágeno uterino não diferiram entre tratamentos. Nas ratas pré-púberes, o hipertireoidismo aumentou a espessura do miométrio e da parede uterina, mas não alterou a tuba uterina. O hipertireoidismo em ratas pré-púberes induz modificações significativas somente no útero; após a maturidade sexual, as modificações ocorrem no útero e na tuba uterina em intensidade variável e dependentes da fase do ciclo estral.(AU)

The histomorphometry and the secretory activity of the uterine tubes and uterus of 38 puberal Wistar rats were studied. Rats were divided in four groups: (1) euthyroid in proestrus–estrus, (2) hyperthyroid in proestrus–estrus, (3) euthyroid in metestrus–diestrus and, (4) hyperthyroid in metestrus–diestrus. In other experiment, 24 prepuberal 12-day-old Wistar rats were divided in two groups: (1) hyperthyroid and (2) euthyroid. The uterus and the uterine tubes were collected for histomorphometry and histochemical analyses. The ampulla's epithelial height has risen under the thyroxine treatment in proestrus–estrus as well as in metestrus–diestrus, becoming similar to the isthmus. The hyperthyroidism increased the PAS positive and acid mucosubstances secretions of the infundibulum on the estrogenic phase coming up to the isthmus. The uterine wall in the estrogenic phase was thicker due to the thyroxine action on the endometrium and myometrium. The secretory activity and uterine collagen composition did not differ between treatments. In puberal rats, the hyperthyroidism increased the thickness of the myometrium and the uterine wall, but did not alter the uterine tubes. Hyperthyroidism on prepuberal rats induced significant changes only in the uterus. After sexual maturity, changes in the uterus and uterine tubes were observed with variable intensity and were dependent on the estrous cycle phase.(AU)

Análise histológica e histoquímica de cistos intra-epiteliais de tubas uterinas de novilhas mestiças / Histological and histochemical analysis of intraepithelial cysts of the uterine tubes of crossbred heifers

Tubas uterinas de 21 novilhas mestiças Bos taurus taurus x Bos taurus indicus, em diferentes fases do ciclo estral natural (estro, metaestro e diestro) ou induzido pelo tratamento superovulatório (estro e metaestro superovulados), foram avaliadas quanto à presença de cistos intra-epiteliais e à caracterização histoquímica de seu conteúdo. Verificou-se a ocorrência de cistos intra-epiteliais nas tubas uterinas em todos os animais, mais freqüentes nas regiões do infundíbulo e ampola. Eles ocorreram nos lados direito e esquerdo, ipsi- e contralateral ao ovário ativo (folículo pré-ovulatório ou corpo lúteo), nas fases estrogênica e progesterônica do ciclo. No conteúdo cístico, houve predominância de mucinas neutras e ácidas carboxiladas, sendo as mucinas sulfatadas presentes em menor intensidade, e não se observou glicogênio. Os resultados sustentam a hipótese de que esses cistos formam-se pela fusão de luminações intracitoplasmáticas e/ou vacúolos ciliados do epitélio tubário. (AU)

Uterine tubes from 21 crossbred heifers (Bos taurus taurus × Bos taurus indicus) at different phases of the natural estrus cycle (estrus, metaestrus and diestrus) or submitted to superovulation (superovulated estrus and metaestrus) were evaluated for the presence of intraepithelial cysts and for histochemical labelling of its contents. All studied animals had intraepithelial cysts mainly in the infundibular and ampullary regions. Such cysts were present regardless of the side of the uterine tube, ipsi- or contralateral to the active ovary (preovulatory follicle or corpus luteum) or of the cycle phase (estrogenic or progesteronic). Histochemical analysis revealed that neutral and acid mucins were the major substances found within the cysts. Sulphated mucins were present in low amounts and glycogen was absent. These results suggest that these cysts are probably formed by the fusion of intracytoplasmic lumina and/or ciliated vacuoles of the uterine tube epithelium.(AU)

Aspectos morfológicos da tuba uterina de cutias (Dasyprocta aguti, Mammalia: Rodentia) / Morphological aspects of the uterine tube in agouti (Dasyprocta aguti, Mammalia: Rodentia)

Foi analisada a estrutura da tuba uterina de cutias utilizando-se três fêmeas adultas, oriundas do Núcleo de Estudos e Preservação de Animais Silvestres da Universidade Federal do Piauí. Após anestesia, foi realizada a eutanásia dos animais, em seguida, obtidos fragmentos da tuba uterina correspondentes às regiões cranial, média e caudal. Cortes de 3 a 5m de espessura foram corados pela Hematoxilina/Eosina e analisados e fotografados ao microscópio de luz. Foi evidenciado que, a parede da tuba uterina da cutia apresenta três camadas histologicamente distintas: mucosa, muscular e serosa, caracterizando as regiões infundíbulo, ampola e istmo. A mucosa, revestida por tecido epitelial simples colunar apresentando células ciliadas e não ciliadas, e, com grande quantidade de pregas em diferentes níveis. No epitélio de revestimento da mucosa do istmo, foram observadas áreas com células variando de cúbicas a pavimentosas. A luz do órgão, nas porções cranial e média, mostrase bem maior e mais irregular que na porção caudal. A lâmina própria, constituída de tecido conjuntivo frouxo, desprovida de glândulas, e na região da ampola, torna-se mais estreita e bastante celularizada. A camada muscular, formada por fibras musculares lisas dispostas em uma subcamada circular interna e outra longitudinal externa. A serosa mostra-se bastante vascularizada. As tubas uterinas da cutia guardam muita semelhança com as dos demais mamíferos quanto aos aspectos microscópicos.(AU)

Atividade secretória de tubas uterinas com e sem patologia de porcas adultas nas fases folicular e luteínica / Secretory activity of uterine tubes with and without alterations of sexually mature sows in the folicular and luteal phases~ien

Descrevem-se as características anatomopatológicas e histoquímicas de 124 tubas uterinas de porcas (matrizes) abatidas em matadouros, nas fases folicular e luteínica do ciclo estral. As tubas uterinas foram distribuídas em quatro grupos: LSP- fase luteínica sem patologia tubárica (n=45), LCP- fase luteínica com patologia tubárica (n=19), FSP- fase folicular sem patologia tubárica (n=45) e FCP- fase folicular com patologia tubárica (n=15). Para estudo histoquímico de mucossubstâncias foram utilizadas as colorações de periodic acid Schiff (PAS) com e sem digestão prévia pela amilase salivar e Alcian Blue (AB) em pH 2,5 e 0,4. Utilizou-se a coloração de Ninhidrina-Schiff para evidenciação de proteínas ricas em radicais -NH2. Foram observadas alterações em 34 tubas uterinas. Independente da fase do ciclo estral, as patologias mais comumente encontradas foram os cistos de parede e a metaplasia escamosa. Em menor número foram observados divertículo e adenomiose. A ampola e o infundíbulo foram os segmentos mais afetados. Na fase folicular, o infundíbulo apresentou maior intensidade de secreção de mucossubstâncias neutras e AB 2,5-positivas. Na ampola houve maior intensidade de secreção de mucossubstâncias AB 2,5-positivas, sulfomucinas e de proteínas ricas em radicais -NH2. As patologias não reduziram significativamente a secreção de mucossubstâncias nas regiões adjacentes em nenhum dos segmentos tubáricos, tanto na fase luteínica quanto na folicular. Nas áreas de metaplasia escamosa do epitélio tubárico e nos cistos de parede houve redução da secreção de mucossubstâncias neutras e ácidas.(AU)

The goal of this study was to describe the anatomopathological and histochemical features of uterine tubes from 62 sexually mature sows, in both follicular and luteal phases. The animals were assigned into four groups as follows: the first (LSP) containing sows in the luteal phase without tube pathology (n=45), the second (LCP) with sows in the luteal phase with tube pathology (n=19), the third (FSP) with sows in the follicular phase without tube pathology (n=45) and the fourth (FCP) with sows in the follicular phase with tube pathology (n=15). PAS, Alcian Blue (pH 2.5 and 0.4), and Ninhidrina-Schiff stains were used for the histochemical study. Grossly, 34 uterine tubes presented morphological lesions. Wall cysts and squamous metaplasia were the changes found more frequently in both phases. Ampulla and infundibulum were the segments affected more frequently. In the follicular phase, the infundibulum had a higher secretion intensity of neutral mucosubstances, whereas the ampulla and the infundibulum had a higher secretion intensity of AB 2.5-positive mucosubstances. The ampulla had a higher intensity of sulphomucins and Ninhidrina-Schiff-positive secretions in the follicular phase. The morphologic changes did not correlate with reduction in secretion of mucosubstance in the adjacent areas of the uterine tube in both follicular and luteal phases. There was a reduction in secretion of neutral and acid mucosubstances in areas affected by squamous metaplasia and wall cysts.(AU)

Altura do epitélio da tuba uterina normal e patológica de porcas nas fases folicular e luteínica / Epithelium of the uterine tube of sows in the folicular and lutheal phases

The aim of this work was to perform a morphometric analysis of the uterine tube epithelium of sexually mature sows, with or without pathological changes. The sows were either in follicular or luteal phases. One hundred and twenty-four uterine tubes of sixty-two sows were obtained from slaughterhouses. Sections of the uterine tube, uterus and ovary were processed for morphometrical evaluation. The uterine tubes were divided into four groups. The first (LSP) group was composed by animals in luteal phase without pathological changes (n=45), the second (LCP) by animals in luteal phase with pathological changes (n=19), the third (FSP) by animals in follicular phase without pathological changes (n=45) and the fourth (FCP) by animals in follicular phase with pathological changes (n=15). In the follicular phase (FSP), the ampulla had a higher epithelium, followed by the infundibulum and the isthmus (P<0.05). Tubal epithelium was higher in the animals of FSP and FCP groups when compared to LSP and LCP, suggesting that estrogens influence epithelial height. In the isthmus, there were significant differences between FSP and LSP groups (P<0.05). These results indicate that the porcine uterine tube epithelium changes its height during the estrous cycle. The epithelial height does not appear to be influenced by tubarian pathologies.(AU)