Signal transduction pathways associated with ATP-induced proliferation of cell progenitors in the intact embryonic retina.

ATP and ADP induce retinal cell proliferation through activation of PKC and extracellular signal-regulated kinases (ERKs). Here, we characterized the effect of purinergic agonists on the turnover of phosphoinositides and activation of ERKs during development of the chick embryo retina. When intact retinas were incubated with ATP, ADP or UTP, a dose-dependent accumulation of [(3)H]-phosphoinositides was observed (% of control, EC(50): 548+/-20.5%, 0.18 mM; 314+/-53.8%, 0.51 mM; 704+/-139.9%, 0.018 mM, respectively). Only the response promoted by ADP was completely inhibited by the P2 receptor antagonists, PPADS and suramin. All the responses decreased with the progression of retinal development. Western blot assays revealed that ATP, ADP and UTP stimulated the phosphorylation of ERKs in the chick embryo retina very early during development (% of control: 174+/-16; 199+/-16.4 and 206+/-37, respectively). The responses to ADP and UTP were transient and dose-dependent, showing EC(50) values of 0.12 mM and 0.009 mM. The response to ADP was inhibited by the antagonists PPADS and suramin and by U73122 and chelerythrine chloride, which block PLC and PKC, respectively. Conversely, chelerythrine chloride did not block the response induced by UTP. Immunohistochemical analysis revealed that ATP and ADP induced the phosphorylation of ERKs in cells of the neuroblastic layer of retinas from embryos at E8. Our data showed that ATP, ADP and UTP stimulate the turnover of InsPs and promoted the activation of ERKs in the chick embryo retina. ADP, through activation of P2Y(1) receptors, activated ERK pathway through PLC and PKC and UTP, via P2Y(4)-like receptors, induced the phosphorylation of ERKs through a pathway that did not involve PKC.

Análise proteômica comparativa entre plasmas de doadores saudáveis e de pacientes com dengue grave / Comparative proteomic analysis between plasms of patients with dengue hemorrhagic fever and from health donors

O dengue é uma das principais arboviroses humanas e sua patogênese ainda não é bem compreendida. O estudo desta patologia através da abordagem proteômica poderá contribuir para o melhor entendimento da doença, revelando proteínas críticas para os processos celulares envolvidos na infecção pelo vírus Dengue. O objetivo desse trabalho foi comparar os perfis eletroforéticos bidimensionais dos plasmas de pacientes com dengue grave e de doadores saudáveis, identificando proteínas diferencialmente expressas entre estes 2 grupos. Os plasmas foram coletados no Hospital de Clínicas de Niterói (RJ) durante a epidemia de dengue no Estado do Rio de Janeiro em 2001-2002. Na Fase I do trabalho...Na Fase II...Estas foram...como cadeia beta da fibrina, proteína de ligação de vitamina D, vitronectina, componente C3 do complemento, apolipoproteína A-I, haptoglobina, transferrina e hemopexina. Após a combinação dos resultados de 14 géis (7 pacientes e 7 controles), apenas a apolipoproteína A-I apresentou uma diferença estatisticamente significativa, diminuindo de expressão nos plasmas dos pacientes com dengue grave. Na Fase III do estudo, passamos a retirar as 6 proteínas mais abundantes do plasma utilizando a Coluna de Remoção de Múltipla Afinidade e as amostras foram analisadas através da moderna técnica de eletroforese de fluorescência diferencial em gel 2D (DIGE). As imagens dos géis foram comparadas utilizando o software DeCyder Differential Analysis (GE Healthcare) e diversas manchas com expressão diferencial entre os 2 grupos experimentais foram detectadas. Alguns géis de DIGE foram também revelados com Coomassie coloidal e as manchas de interesse foram identificadas como descrito anteriormente. As proteínas que tenderam a aumentar nos plasmas dos pacientes com dengue foram a (alfa)1-glicoproteina ácida, a proteína de ligação de vitamina D, a (alfa)1-antiquimiotripsina, o componente C3 do complemento e o inibidor do componente C1 do complemento; as proteínas que tenderam...