Obtaining microsatellite markers for Pseudoplatystoma reticulatum using heterologous primers / Obtenção de marcadores microssatélites para Pseudoplatystoma reticulatum a partir de primers heterólogos

Studies on genetic composition in fish populations contribute to conservationist practices and inbreeding control in fish stocks. To this end, molecular tools such as microsatellite markers (SSRs) are often used, but they are expensive and time-consuming to develop. A species-specific heterologous marker emerges as an alternative, which can be used in taxonomically related species in a fast way. Our goal was to test SSRs markers of Brachyplatystoma rousseauxi and Pseudoplatystoma punctifer in P. reticulatum in an unprecedented way. For this purpose, DNA was extracted from fragments of the caudal fin of 222 P. reticulatum adults, using a NaCl-based method. Then, DNA samples were amplified by Polymerase Chain Reaction (PCR) using six markers, four from B. rousseauxi (BR38, 47, 51, and 61) and two from P. punctifer (PPU13 and PPU15). Two primers showed non-specific amplification and were disregarded (BR38 and PPU13). In the remaining four primers, the number of alleles per locus varied between two (BR47) to sixteen (BR51), and the average size of alleles was between 142 and 400 bp. Mean effective number of alleles per locus ranged from 10,650 (BR51) to 1,784 (BR47), with null or low-frequency alleles in all studied loci. Observed heterozygosity ranged from 0.299 (BR47) to 0.640 (BR51) and was always lower than the expected heterozygosity. Hardy-Weinberg balance was significant (p < 0.05) in all loci, and inbreeding coefficient (FIS) was always positive. Polymorphic Information Content (PIC) confirmed the efficiency of the markers since they had moderate (BR47) to high levels of information (BR51, BR61, and PPU15). Transferability test showed that the heterologous microsatellite molecular markers, originally for B. rousseauxi and P. punctifer, were efficient in P. reticulatum, producing three primers with high information content. Therefore, these markers can be safely used in future population studies of this species.(AU)

Estudos acerca da composição genética de populações de peixes contribuem para a elaboração de práticas conservacionista, bem como para controle da consanguinidade em estoques de piscicultura. Neste sentido, ferramentas moleculares como os marcadores microssatélites (SSR's) são comumente utilizados, contudo, seu desenvolvimento corresponde a um processo caro e demorado. Surge como alternativa a utilização dos marcadores heterólogos, originalmente desenvolvidos para uma espécie, mas que podem ser utilizados de maneira rápida em outras taxonomicamente relacionadas. O objetivo desta pesquisa foi testar de maneira inédita a utilização de marcadores SSR's de Brachyplatystoma rousseauxi e Pseudoplatystoma punctifer em P. reticulatum. Para tanto, foram extraídas amostras de DNA a partir de fragmentos de nadadeira caudal de 222 indivíduos adultos de P. reticulatum por metodologia a base de NaCl. As amostras foram então amplificadas por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) utilizandose seis marcadores, quatro de B. rousseauxi (BR38, 47, 51 e 61) e dois de P. punctifer (PPU13 e PPU15). Dois primers apresentaram amplificação inespecífica e foram desconsiderados (BR38 e PPU13). Entre os quatro restantes, o número de alelos por locus variou entre dois (BR47) a dezesseis (BR51), com tamanho médio de alelos entre 142 e 400 pb. O número efetivo médio de alelos por locus variou de 10,650 (BR51) à 1,784 (BR47), com alelos nulos ou de baixa frequência presentes em todos os loci estudados. Os valores de heterozigosidade observada variaram de 0,299 (BR47) à 0,640 (BR51), e foram sempre menores que os de heterozigosidade esperada. O Equilíbrio de Hardy-Weinberg foi significativo (P < 0,05) em todos os locus e o coeficiente de endogamia Fis sempre apresentou valores positivos. Os valores de Conteúdo de Informação Polimórfica (PIC) confirmaram a eficiência dos marcadores utilizados, já que possuíram de moderado (BR47) a alto nível de informação (BR51, BR61 e PPU15). O teste de transferibilidade de marcadores moleculares microssatélites heterólogos, originalmente desenvolvidos para B. rousseauxi e P. punctifer em P. reticulatum se mostrou eficiente, produzindo três primers com alto nível de informação, fato que garante sua utilização segura em estudos populacionais futuros voltados à esta espécie.(AU)

Use of natural antioxidants in sous vide tilapia fillet / Uso de antioxidantes naturais no processo sous vide de filé de tilápia (Oreochromis niloticus)

The objective of this study was to evaluate the use of natural antioxidants in tilapia fillets submitted to sous vide process. Four treatments were carried out using different natural antioxidants (Treatment 1 –control, without antioxidant; Treatment 2 –oregano extract; Treatment 3 -rosemary extract and Treatment 4 -basil extract) with six replicates. Analyzes of centesimal composition, microbiological composition and lipid oxidation through Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) were performed. There was a significant difference in moisture content, being higher for treatments with extracts, whereas the control treatment presented higher protein content. The fillets were within microbiological standards recommended by legislation. The values obtained from Malondialdehyde(MDA)/kg demonstrate the efficiency of natural antioxidants added. The use of plant extracts as natural antioxidants in sous vide has been shown to be an alternative to minimize oxidative rancidity of tilapia fillets, increasing shelf life. Thus, it is possible to use rosemary, oregano and basil extracts in the tilapia sous vide process.(AU)

O objetivo deste estudo, foi avaliar o uso de antioxidantes naturais em filés de tilápia submetidos ao processo de Sous vide. Foram elaborados quatro tratamentos com a utilização de diferentes antioxidantes naturais no processo sous vide (Tratamento 1 –controle –sem antioxidante; Tratamento 2 -extrato de orégano; Tratamento 3 -extrato de alecrim e Tratamento 4 -extrato de manjericão), com seis repetições. Foram realizadas análise de composição centesimal, microbiológica e oxidação lipídica através das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Houve diferença significativa para o teor de umidade, sendo maior para os tratamentos com os extratos, enquanto no tratamento controle, os filés apresentaram maior teor de proteína. Os filés estavam dentro do padrão microbiológico recomendado pela legislação. Os valores obtidos de malonaldeído (MDA)/kg demonstram eficiência da utilização dos antioxidantes naturais. A utilização de extratos vegetais como antioxidantes naturais no processo Sous vide, mostrou ser uma alternativa para minimizar a rancidez oxidativa dos filés de tilápia, aumentando a vida de prateleira. Assim, é possível utilizar os extratos de alecrim, orégano e manjericão no processo sous vide de filé de tilápia.(AU)

Use of natural antioxidants in sous vide tilapia fillet / Uso de antioxidantes naturais no processo sous vide de filé de tilápia (Oreochromis niloticus)

The objective of this study was to evaluate the use of natural antioxidants in tilapia fillets submitted to sous vide process. Four treatments were carried out using different natural antioxidants (Treatment 1 –control, without antioxidant; Treatment 2 –oregano extract; Treatment 3 -rosemary extract and Treatment 4 -basil extract) with six replicates. Analyzes of centesimal composition, microbiological composition and lipid oxidation through Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) were performed. There was a significant difference in moisture content, being higher for treatments with extracts, whereas the control treatment presented higher protein content. The fillets were within microbiological standards recommended by legislation. The values obtained from Malondialdehyde(MDA)/kg demonstrate the efficiency of natural antioxidants added. The use of plant extracts as natural antioxidants in sous vide has been shown to be an alternative to minimize oxidative rancidity of tilapia fillets, increasing shelf life. Thus, it is possible to use rosemary, oregano and basil extracts in the tilapia sous vide process.

O objetivo deste estudo, foi avaliar o uso de antioxidantes naturais em filés de tilápia submetidos ao processo de Sous vide. Foram elaborados quatro tratamentos com a utilização de diferentes antioxidantes naturais no processo sous vide (Tratamento 1 –controle –sem antioxidante; Tratamento 2 -extrato de orégano; Tratamento 3 -extrato de alecrim e Tratamento 4 -extrato de manjericão), com seis repetições. Foram realizadas análise de composição centesimal, microbiológica e oxidação lipídica através das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Houve diferença significativa para o teor de umidade, sendo maior para os tratamentos com os extratos, enquanto no tratamento controle, os filés apresentaram maior teor de proteína. Os filés estavam dentro do padrão microbiológico recomendado pela legislação. Os valores obtidos de malonaldeído (MDA)/kg demonstram eficiência da utilização dos antioxidantes naturais. A utilização de extratos vegetais como antioxidantes naturais no processo Sous vide, mostrou ser uma alternativa para minimizar a rancidez oxidativa dos filés de tilápia, aumentando a vida de prateleira. Assim, é possível utilizar os extratos de alecrim, orégano e manjericão no processo sous vide de filé de tilápia.