RESUMO
Objetivou-se no presente estudo realizar purificação parcial da proteína binder of sperm protein1 (BSP1), proteína de 15 kDa presente nos fluidos das glândulas vesiculares de bovinos, por meio deprecipitação com sulfato de amônio. O fluido seminal foi extraído das glândulas vesiculares obtidas dedez touros bos indicus em abatedouro comercial de Fortaleza, Ceará. As glândulas foram transportadas eprocessadas no Laboratório de Fisiologia Animal da Universidade Federal do Ceará. Foi utilizado umcoquetel inibidor de proteases, com posterior centrifugação. Um pool de todas as amostras foiarmazenado a -20 ºC e uma alíquota foi reservada para determinar a concentração de proteína. Para aprecipitação de proteínas, foram adicionadas diferentes concentrações de sulfato de amônio. Foramrealizados SDS-PAGE e Western blot com anticorpo específico. Obtivemos a presença de BSP1. Foiobservada presença da proteína em todas as frações, porém, a fração 40-60% foi a que apresentou a maiorconcentração de BSP1, em média 98%. A técnica utilizada foi altamente eficaz e a purificação dessasproteínas possibilita uma melhoria na qualidade seminal in vitro e pode ser utilizada para obtenção deamostras altamente enriquecidas de BSPs, além de avaliar o potencial de fertilidade de reprodutores.(AU)
The objective of the present study was to partially purify binder of sperm protein 1 (BSP1)protein, a 15 kDa protein present in bovine vesicular gland fluids, by precipitation with ammoniumsulfate. Seminal fluid was extracted from the vesicular glands obtained from ten bos indicus bulls in acommercial slaughterhouse in Fortaleza, Ceará. The glands were transported and processed at theAnimal Physiology Laboratory of the Federal University of Ceará. A protease inhibitor cocktail wasused, with subsequent centrifugation. A pool of all samples was stored at -20 ° C and an aliquot was setaside to determine protein concentration. For protein precipitation, different concentrations ofammonium sulfate were added. SDS-PAGE and Western blot were performed with specific antibody. Weobtained the presence of BSP1. Protein presence was observed in all fractions, however, the 40-60%fraction presented the highest BSP1 concentration, on average 98%. The technique used was highlyeffective and the purification of these proteins allows an improvement in seminal quality in vitro and canbe used to obtain highly enriched samples of BSPs, besides evaluating the fertility potential of breeders.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Bovinos , Sêmen/química , Sêmen/citologia , Sulfato de Amônio , Bovinos/fisiologia , Fármacos para a FertilidadeRESUMO
Objetivou-se no presente estudo realizar purificação parcial da proteína binder of sperm protein1 (BSP1), proteína de 15 kDa presente nos fluidos das glândulas vesiculares de bovinos, por meio deprecipitação com sulfato de amônio. O fluido seminal foi extraído das glândulas vesiculares obtidas dedez touros bos indicus em abatedouro comercial de Fortaleza, Ceará. As glândulas foram transportadas eprocessadas no Laboratório de Fisiologia Animal da Universidade Federal do Ceará. Foi utilizado umcoquetel inibidor de proteases, com posterior centrifugação. Um pool de todas as amostras foiarmazenado a -20 ºC e uma alíquota foi reservada para determinar a concentração de proteína. Para aprecipitação de proteínas, foram adicionadas diferentes concentrações de sulfato de amônio. Foramrealizados SDS-PAGE e Western blot com anticorpo específico. Obtivemos a presença de BSP1. Foiobservada presença da proteína em todas as frações, porém, a fração 40-60% foi a que apresentou a maiorconcentração de BSP1, em média 98%. A técnica utilizada foi altamente eficaz e a purificação dessasproteínas possibilita uma melhoria na qualidade seminal in vitro e pode ser utilizada para obtenção deamostras altamente enriquecidas de BSPs, além de avaliar o potencial de fertilidade de reprodutores.
The objective of the present study was to partially purify binder of sperm protein 1 (BSP1)protein, a 15 kDa protein present in bovine vesicular gland fluids, by precipitation with ammoniumsulfate. Seminal fluid was extracted from the vesicular glands obtained from ten bos indicus bulls in acommercial slaughterhouse in Fortaleza, Ceará. The glands were transported and processed at theAnimal Physiology Laboratory of the Federal University of Ceará. A protease inhibitor cocktail wasused, with subsequent centrifugation. A pool of all samples was stored at -20 ° C and an aliquot was setaside to determine protein concentration. For protein precipitation, different concentrations ofammonium sulfate were added. SDS-PAGE and Western blot were performed with specific antibody. Weobtained the presence of BSP1. Protein presence was observed in all fractions, however, the 40-60%fraction presented the highest BSP1 concentration, on average 98%. The technique used was highlyeffective and the purification of these proteins allows an improvement in seminal quality in vitro and canbe used to obtain highly enriched samples of BSPs, besides evaluating the fertility potential of breeders.