Isolation of bovine coronavirus (BCoV) in monolayers of HmLu-1 cells

Isolation of BCoV was performed in monolayers of HmLu-1 cells, using 20 fecal samples from clinical cases of diarrhea in calves. Samples were positive for BCoV by means of hemagglutination / hemagglutination inhibition (HA/HI). Up to the fifth serial passage, 13 of these isolates presented syncytial cytopathic effect, similar to Kakegawa standard strain. When isolates were submitted to seroneutralization with gammaglobulin anti-bovine coronavirus, 8 of them were considered to be positive, once cytopathic effect was neutralized. After titration and seroneutralization in microplates, only three of them were confirmed as positive. The lineage HmLu-1 showed higher permissivity to BCoV isolation, but the low intensity of viral replication demonstrated that new methodologies should be developed for this purpose and then submitted to confirmation of isolation by means of seroneutralization.

A partir de 20 amostras fecais de bezerros, com quadro clínico de diarréia, positivas para BCoV por hemaglutinação/inibição da hemaglutinação (HA/HI), procedeu-se o isolamento viral em monocamadas de células da linhagem HmLu-1. Até a quinta passagem seriada, 13 apresentaram efeito citopático do tipo sincicial, semelhante à amostra padrão Kakegawa de BCoV. Ao serem submetidas a uma reação de soroneutralização com gamaglobulina anti-coronavírus bovino, 8 delas foram consideradas positivas, uma vez que o efeito citopático foi neutralizado. Ao serem tituladas e submetidas à reação de soroneutralização em microplacas, apenas 3 delas puderam ser confirmadas como positivas. As células da linhagem HmLu-1 mostraram-se permissivas para o isolamento de BCoV, todavia a baixa intensidade na replicação viral demonstrou ser necessário o desenvolvimento de novas metodologias para se poder alcançar esse intuito e a confirmação do isolamento por soroneutralização.

Visceral lesion induced experimentally by an artrotropic strain of reovirus in broiler (Gallus gallus) / Lesões viscerais induzidas experimentalmente pela inoculação de uma amostra artrotrópica de reovírus em frangos de corte (Gallus gallus)

This paper describes visceral lesions induced by inoculation of one-day-old broiler chicks with an avian reovirus strain (S-1133) by oral and foodpad routes. The bursa of Fabricius, intestine, liver, spleen and heart of five birds from inoculated and control groups were collected in the periods of 24, 48, 72 hours and at weekly intervals from 1 to 8 weeks post inoculation for histopathological examination. Interstitial myocarditis was observed 48 hours post inoculation, pericarditis and necrotic myocarditis were seen in the first week post inoculation. The pericardium presented lymphoid follicles at 2 weeks post inoculation and in the subsequent periods there was progressive fibrosis seen until 8 weeks post inoculation. In the liver, infiltration of heterophils and mononuclear cells was observed 72 hours post inoculation, followed by degeneration and necrosis of hepatocytes at one week post inoculation. Lymphoid follicles and heterophilic infiltration were seen from 2 to 8 weeks post inoculation. The spleen presented a progressive necrosis from 48 hours to one week post inoculation and at 2 weeks post inoculation hyperplasia lymphoid was observed in the splenic tissue. No lesions were seen in the other examinated organs. Visceral lesions were similar occurring simultaneously in both inoculated groups, nevertheless the lesions were more severe in the group inoculated via footpad

Este trabalho descreve as lesões viscerais induzidas pela inoculação oral e podal de uma amostra artrotrópica de reovírus aviário (S-1133) em pintos de corte de um dia de idade. Realizou-se o exame histopatológico de fragmentos da Bursa de Fabricius, intestinos, fígado, baço e miocárdio utilizando-se cinco aves dos grupos inoculados e do grupo controle, nos períodos de 24, 48, 72 horas e semanalmente até a oitava semana após a inoculação. No miocárdio, observou-se miocardite intersticial 48 horas pós-inoculação, miocardite necrótica e pericardite na primeira semana após a inoculação. Houve no pericárdio, na segunda semana após a inoculação, a formação de folículos linfóides e seu espessamento fibroso em períodos subseqüentes até a oitava semana. No fígado, foi observado um infiltrado inflamatório misto 72 horas após a inoculação e degeneração vacuolar e necrose dos hepatócitos na primeira semana pós-inoculação. Observou-se, ainda, a presença de tecido linfóide ativo e de infiltrado heterofílico na segunda semana após a inoculação, persistindo até o final do experimento. Verificou-se necrose progressiva do tecido esplênico de 48 horas até a primeira semana após a inoculação e a partir da segunda semana observou-se hiperplasia dos folículos linfóides esplênicos. Os demais órgãos examinados não apresentaram alterações. As lesões viscerais foram similares ocorrendo simultaneamente

Articular lesion in experimental infeccion with avian reovirus in broiler (Gallus gallus) / Lesões articulares em frangos de corte (Gallus gallus) na infecção experimental pelo reovírus aviário

This paper describes articular lesions induced by inoculation of one-day-old broiler chicks with an avian reovirus strain (S-1133) by oral and foodpad routes. The hock joint of five birds from inoculated and control groups were collected in the periods of 24, 48, 72 hours and at weekly intervals from 1 to 8 weeks post inoculation for histopathological examination. The first inflammatory changes were seen in tendon sheaths one week post inoculation. On the second week postinoculation there were fibroplasia, formation of lymphoid follicles and sinovial membrane cells hyperplasia, progressive lesions seen until the end of experiment. The articular lesions were similar occurring simultaneously in both inoculated groups, nevertheless the lesions were more severe in the group inoculated via footpad.

Este trabalho descreve as lesões articulares induzidas pela inoculação oral e podal de uma amostra de reovírus aviário (S-1133) em pintos de corte de um dia de idade. Realizou-se o exame histopatológico de fragmentos da articulação tibiotársica utilizando-se cinco aves dos grupos inoculados e grupo controle nos períodos de 24, 48, 72 horas e semanalmente até a oitava semana após a inoculação. A primeira alteração observada foi um infiltrado inflamatório misto nas bainhas tendinosas uma semana após a inoculação. Na segunda semana após a inoculação, houve fibroplasia, formação de folículos linfóides e hiperplasia das células da membrana sinovial, alterações progressivas observadas até o final do período experimental. As lesões articulares foram similares, ocorrendo simultaneamente nos dois grupos inoculados, contudo as alterações foram mais severas no grupo inoculado no coxim plantar.

Identification of enteropathogens from buffalo calves with and without diarrhoea in the Ribeira Valley, State of São Paulo, Brazil / Identificação de enteropatógenos em bezerros búfalos, com e sem diarréia, do Vale do Ribeira, Estado de São Paulo, Brasil

Faecal samples of 106 buffalo calves aged 3 to 45 days were collected sequentially, once a week, during six weeks for parasitologic examination. For bacteriologic and virologic exams, faecal samples were collected from all diarrhoeic and the same amount on non-diarrhoeic calves. Blood samples from calves were collected at 3 to 10 days of age for serum IgG determination. Eimeria spp, Strongyloides papillosus and Toxocara vitulorum were the most common parasites. E. coli, Enterobacter cloacae and Klebsiella pneumoniae were the enteropathogens most frequently found (alone or in association with other microrganisms). Heat-stable (STa) enterotoxin was detected in 5 out of 34 samples of E. coli isolated from diarrhoeic calves. Among the antimicrobials tested susceptibilities to norphloxacin, chloramphenicol and gentamycin were the most common. None of the samples had characteristic rotavirus RNA bands in PAGE-electrophoresis. No association was observed between low levels of IgG and diarrhoea.

Foram avaliados semanalmente, por um período de seis semanas, os exames parasitológicos de amostras fecais, diarréicas e não-diarréicas, de 106 bezerros búfalos, com 3 a 45 dias de idade, provenientes do Vale do Ribeira-SP. Para os exames bacteriológicos e virológicos, foram colhidas amostras fecais de todos os búfalos diarréicos, e igual amostragem de animais sem diarréia. Amostras de sangue foram colhidas dos búfalos neonatos, entre o terceiro e décimo dias de idade, para determinação dos níveis de imunoglobulina G (IgG). Nos exames parasitológicos, verificou-se a maior ocorrência de Eimeria spp, Strongyloides papillosus e Toxocara vitulorum. Dentre os agentes bacterianos, observou-se maior freqüência da Escherichia coli (E. coli), Enterobacter cloacae e Klebsiella pneumoniae (isolados ou em associação). Detectou-se a enterotoxina STa em 5 das 34 amostras de E. coli isoladas de búfalos com diarréia. A norfloxacina, cloranfenicol e gentamicina foram os antimicrobianos mais efetivos frente aos microrganismos isolados. Nenhuma das amostras apresentou bandeamento característico para rotavírus, a partir da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida. Não foi constatada nos animais examinados a associação entre a ocorrência de diarréia e baixos níveis de IgG sérica.

Studies with reovirus isolated from guinea fowls (Numida meleagridis) / Estudos com reovirus isolado de galinha-dangola (Numida meleagridis)

This paper describes some properties of a reovirus isolated from the pancreas and intestines of guinea fowls suffering from a transmissible enteritis. Coronavirus was also recovered from kidneys of the same birds. The guinea fowl reovirus is pathogenic for guinea fowl, duck and chicken embryos, but it does not reproduce by itself the field findings when inoculated in day-old guinea poults, nor was it found to be pathogenic for chicks and ducklings on experimental infection..

Este trabalho descreve algumas propriedades de um reovírus que foi isolado de pâncreas e intestino de galinhasdangolaque padeciam de uma enterite transmissível. Coronavírus foi isolado do rim das mesmas aves. O reovírusde galinhas-dangola é patogênico para embriões de galinha-dangola, de pata e de galinha mas não reproduziu osachados de campo, quando inoculado em angolinhas, e nem foi patogênico para pintos e patinhos inoculados experimentalmente.

Use of therapeutic antirabic serum in the production of conjugate for the direct immunofluorescence of rabies / Emprego de soro anti-rábico terapêutico na produção de conjugado para a reação de imunofluorescência na raiva

A procedure for the production of antirabies fluorescent antibody conjugate using equine therapeutic hyperimmune serum is described. The IgG fraction is rapid and easily purified and after labelled with the fluorochrome. By this procedure, laboratories without facilities to take up the work of raising antirabic serum can obtain high quality conjugates.

Uma metodologia de produção de conjugado imunofluorescente anti-rábico a partir de soro hiperimune equino para fins terapêuticos é descrita. A fração IgG do soro é purificada de forma simples e rápida e posteriormente marcada com o fluoro cromo. Através dessa metodologia, laboratórios que não disponham de infraestrutura para produção de soro hiperimune anti-rábico podem obter conjugados de boa qualidade.