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1.
J Magn Reson ; 275: 38-45, 2017 Feb.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-27992783

RESUMO

Site-directed spin labeling for EPR- and NMR spectroscopy has mainly been achieved exploiting the specific reactivity of cysteines. For proteins with native cysteines or for in vivo applications, an alternative coupling strategy is required. In these cases click chemistry offers major benefits by providing a fast and highly selective, biocompatible reaction between azide and alkyne groups. Here, we establish click chemistry as a tool to target unnatural amino acids in vitro and in vivo using azide- and alkyne-functionalized spin labels. The approach is compatible with a variety of labels including reduction-sensitive nitroxides. Comparing spin labeling efficiencies from the copper-free with the strongly reducing copper(I)-catalyzed azide-alkyne click reaction, we find that the faster kinetics for the catalyzed reaction outrun reduction of the labile nitroxide spin labels and allow quantitative labeling yields within short reaction times. Inter-spin distance measurements demonstrate that the novel side chain is suitable for paramagnetic NMR- or EPR-based conformational studies of macromolecular complexes.


Assuntos
Química Click/métodos , Espectroscopia de Ressonância de Spin Eletrônica/métodos , Marcadores de Spin/síntese química , Alcinos/química , Azidas/química , Catálise , Cobre/química , Reação de Cicloadição , Cisteína/química , Cinética , Espectroscopia de Ressonância Magnética , Modelos Moleculares , Conformação Molecular , Óxidos de Nitrogênio/química
2.
Sci Rep ; 6: 21953, 2016 Feb 24.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-26905416

RESUMO

Genetically modified cattle are important for developing new biomedical models and for an improved understanding of the pathophysiology of zoonotic diseases. However, genome editing and genetic engineering based on somatic cell nuclear transfer suffer from a low overall efficiency. Here, we established a highly efficient one-step multiplex gene transfer system into the bovine genome.


Assuntos
Animais Geneticamente Modificados , Proteínas de Bactérias/genética , Elementos de DNA Transponíveis , Genoma , Proteínas Luminescentes/genética , Plasmídeos/química , Transgenes , Transposases/genética , Animais , Proteínas de Bactérias/metabolismo , Blastocisto/fisiologia , Bovinos , Transferência Embrionária/métodos , Feminino , Fertilização in vitro , Expressão Gênica , Técnicas de Transferência de Genes , Engenharia Genética , Proteínas Luminescentes/metabolismo , Masculino , Microinjeções , Microscopia de Fluorescência , Oócitos/citologia , Oócitos/crescimento & desenvolvimento , Oócitos/metabolismo , Plasmídeos/metabolismo , Transposases/metabolismo
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