Identifi cation of Mycobacterium avium subspeciesparatuberculosis by PCR techniques and establishment ofcontrol programs for bovine paratuberculosis in dairy herds / Identificación de Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis mediante pruebas dePCR y definición de programa de control de la paratuberculosis bovina en hatos lecheros / Identificação de Mycobacterium avium subespécie paratuberculosis por PCR edefinição do programa de controle da paratuberculose em rebanhos bovinos leiteiros

The aim of this study was to establish the protocol of conventional and real time PCR for amplificationof Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) genome from bovine fecal samples, as a wayto define strategies for establishing a prevention and control program in a dairy herd at the Universidadde Antioquia (Medellín, Colombia). Fecal samples were individually taken of clinical healthy cows orcows with diarrhea bred in a herd enzootic for Johne’s disease, were processed them for culture in liquidMiddlebrook 7H9 media supplemented with mycobactin under two different protocols: with or withoutinhibitors. Fecal samples from clinically healthy cows were used as negative control. Conventional andreal time PCR were performed with MAP DNA obtained of fecal or cultured samples. The MAP- specificIS900 segment was amplified by using the respective forward and reverse primers. DNA isolated from areference MAP strain was used as positive control of PCR. Data were analyzed by descriptive statisticsand simple regression analysis between PCR and culture results were performed. All samples culturedin media with or without mycobactin gave a positive result compatible with MAP growth. However, only13,3% of samples were positive by real time PCR. There was no relationship neither between PCR and culture results, nor between clinical condition of the cow and MAP positivity. These results support theneed combine culture of feces with PCR diagnosis for identification of MAP-excreting cows in a dairyherd. Finally, a strategy of prevention and control of bovine paratuberculosis is proposed for this enzooticherd and for dairy herds in Colombia.

El objetivo de este trabajo fue establecer un sistema de detección y amplificación del Mycobacteriumavium paratuberculosis (MAP) a partir de muestras de materia fecal bovina, mediante el uso de la técnicade PCR en tiempo real, como estrategia de apoyo para el establecimiento de un programa de prevencióndetección y control de la paratuberculosis bovina en el hato lechero de la Universidad de Antioquia. Muestrasde materia fecal fueron tomadas de bovinos provenientes de un hato enzoótico para la enfermedad de Johne,fueron cultivadas en medio de cultivo líquido Middlebrook 7H9 suplementado con micobactina, bajo dosprotocolos de aislamiento: con o sin inhibidores. Como control negativo fue utilizada muestras de materiafecal de bovinos clínicamente sanos. Adicionalmente, con el DNA de las muestras aisladas en cultivo yde las muestras de materia fecal, fueron hechas pruebas de PCR convencional y en tiempo real, para laamplificación del elemento de inserción IS900 del MAP, mediante el uso de cebadores específicos para esteelemento. Como control positivo se utilizó DNA de MAP de una cepa de referencia. Los resultados fueronevaluados mediante estadística descriptiva y la comparación entre el resultado del cultivo y de la pruebade PCR fue evaluado mediante regresión simple. Los resultados del cultivo bacteriológico, mostraron untotal de 15 muestras con crecimiento compatible con MAP, el cual fue verificado por prueba de PCR enel 13.3% de los casos. No hubo correlación entre el resultado de cultivo y la prueba de PCR ni entre elestado clínico y la positividad al MAP. Los resultados confirman la necesidad de combinar el diagnósticomolecular con el cultivo bacteriológico para identificar las vacas positivas en un hato. Finalmente, unaestrategia de prevención y control de la enfermedad aplicable a este hato enzoótico y a los hatos lecherosen Colombia es discutida.

O objetivo deste estudo foi estabelecer um sistema de detecção e amplificação do Mycobacterium aviumparatuberculosis (MAP) a partir de amostras fecais bovinas, utilizando a técnica de PCR em tempo real,como uma estratégia para apoiar o estabelecimento de um programa rastreio para a prevenção e controlede la paratuberculosis bovina no rebanho leiteiro da Universidade de Antioquia. Foram colhidas amostrasde fezes de gado bovino a partir de uma fazenda enzoótica para a doença de Johne, e foram cultivadasem meio de cultura líquida Middlebrook 7H9 suplementado com micobactina, sob dois protocolos deisolamento: com ou sem inibidores. Foram utilizadas como controle negativo amostras fecais de bovinossaudáveis. Além disso, as amostras de DNA isoladas e cultivadas a partir de amostras fecais foramrealizadas testes de PCR convencional e em tempo real, para amplificação elemento de inserção IS900 noMAP. Foi utilizado como controle positivo do teste DNA de uma estirpe de referencia. Os resultados foramavaliados por estatística descritiva e as comparações entre os resultados de cultura e teste PCR foramavaliadas por regressão simple. Os resultados de cultura bacteriológica mostraram 100% de crescimentoem amostras com MAP, que foi verificada por PCR em 13,3% dos casos. Não houve correlação entre oresultado do cultivo e teste PCR ou entre a clínica e a positividade para MAP. Os resultados confirmam anecessidade de combinar o diagnóstico molecular com cultura bacteriológica para identificação positivade vacas em um rebanho. Finalmente, uma estratégia de prevenção e controle da doença aplicável nesterebanho enzoótico e os rebanhos leiteiros e na Colômbia é discutida.

Determinación de concentraciones inhibitorias mínimas a algunos antibióticos de las bacterias aisladas de glándula mamaria bovina en San Pedro de los Milagros, Antioquia / Antibiotic susceptibility of the bacteria isolates from bovine mastitis in San Pedro de los Milagros. 1999. Using minimum inhibitory concentration method

Se evaluó la sensibilidad a un grupo de antibióticos de 37 cepas de microorganismos aislados de glándula mamaria bovina en 1999. Las bacterias correspondían en un 64,9 por ciento a Streptococcus agalactiae, un 18,9 por ciento a Staphylococcus aureus y un 16,2 por ciento a Staphylococcus coagulasa negativo. Por el método de Concentraciones Inhibitorias Mínimas (C.I.M.), se determinó la susceptibilidad de las bacterias antes mencionadas a los siguientes antibióticos: ampicilina, cefazolina, ciprofloxacina, clindamicina, eritromicina, ofloxacina, oxacilina, penicilina G, tetraciclina, trimetoprim / sulfa, vancomicina y prueba para detectar ß-lactamasa. El método utilizado fue el de microdilución (Vitek, biomerieuxÒ) y los datos obtenidos se presentan en forma descriptiva. Los resultados obtenidos para Streptococcus agalactiae mostraron que el 100 por ciento de las cepas evaluadas fueron sensibles a los antibióticos del grupo farmacológico ß-lactámico (ampicilina, cefazolina, penicilina G), en tanto que para el grupo de las tetraciclinas se observó resistencia en el 87 por ciento de los aislamientos. Staphylococcus aureus mostró 100 por ciento de sensibilidad para el grupo de las peniclinas ß-lactamasas resistentes y ßlactamasas protegidas (cefazolina, oxacilina y ampicilina/sulbactam respectivamente), en tanto quepara las penicilinas ß-lactamasas sensibles como la ampicilina y la penicilina G se observó que el 28,6 por ciento de las bacterias fueron sensibles y el 71,4 por ciento fueron resistentes; el 71,4 por ciento de las bacterias Staphylococcus aureus fueron productores de ß-lactamasas. Staphylococcus coagulasa negativo mostró para el grupo de las peniclinas ß-lactamasas resistentes y ß-lactamasas protegidas (cefazolina, oxacilina y ampicilina/sulbactam respectivamente) un 100 por ciento de sensibilidad, mientras que para las penicilinas ß-lactamasas sensibles como la ampicilina y la penicilina G se observó que el 33,3 por ciento de las bacterias fueron sen...

Prevalencia de mastitis en vacas lecheras lactantes en el municipio de San Pedro de los Milagros, Antioquia / Prevalence of mastitis in milking cows in San Pedro de los Milagros, Antioquia, Colombia

En el período comprendido entre julio – septiembre de 1999, se realizó un muestreo de leche en el municipio de San Pedro de los Milagros, con el fin de medir la prevalencia de mastitis en la zona por medio de California Mastitis Test (CMT). El muestreo comprendió un grupo de 112 vacas lactantes escogidas al azar, provenientes de 15 veredas, a las cuales se les realizó C.M.T. por cuarto. A las vacas positivas o con un resultado sospechoso se les tomó muestra de leche para realizar recuento celular, cultivo y antibiograma. Los datos obtenidos se presentan en forma descriptiva; fue utilizada la prueba estadística chi cuadrado, para medir el grado de asociación de algunas variables. La prevalencia de mastitis por cuarto en el municipio fue de 12.3 por ciento (55 cuartos con resultado igual o mayor a trazas). Entre los cuartos afectados del total de los muestreados, el resultado del CMT más frecuentemente hallado fue el de dos cruces con un 4.4 por ciento. En los cuartos muestreados para cultivo, la bacteria más frecuentemente aislada fue Streptococcus agalactiae, seguida de Estafilococo coagulasa negativo y Staphylococccus aureus con un 47 por ciento, 14,6 por ciento, y 13 por ciento respectivamente. En el antibiograma realizado se encontró que del total de muestras positivas a Str. agalactiae un 19.3 por ciento mostró resistencia a la penicilina. La prevalencia de mastitis por cuarto en la zona no fue muy alta, si se tiene en cuenta que un porcentaje importante de productores no está realizando las mínimas medidas de higiene al ordeño como lavado y secado de la ubre (57.1 por ciento) y la desinfección postordeño (42.9 por ciento). Aunque las bacterias aisladas son las más frecuentemente reportadas en otros trabajos realizados en nuestro país y en resultados aislados reportados por clínicos de campo de la misma zona, es importante resaltar la resistencia que están adquiriendo las bacterias, para nuestro caso el Str. agalactiae a la penicilina; sin embargo...