Partial characterization of antagonistic substance produced by a Clostridium butyricum strain

The production of antagonistic substance by bacterium present in the infected root canal system (RCS) probably is an important ecological factor for its successful colonization of the local. The objective of this study was to partially characterize an antagonistic substance produced by a Clostridium butyricum isolated from infected RCS.Production of inhibitory compound was evaluated by the agar double layer diffusion technique using Fusobacterium nucleatum and Bifidobacterium adolescentis as indicator bacteria. The physicochemical and biochemical factors tested for the partial characterization were influence of pH and temperature and susceptibility to the action of some proteolytic enzymes. An inhibition zone was observed against the two indicator strains and acidity and bacteriophage were rejected as responsible for this phenomenon. The inhibitory activity showed to be decreasing in a pH range from 3.5 to 6.5 and being stable at temperatures of 60º, 70º and 100ºC, but completely inactivated when exposed at 121ºC. The antagonistic activity was resistant to the proteolytic action of trypsin, a-chymotrypsin and papain. An antagonistic substance was produced by C. butyricum, which was thermo-resistant and probably of non-protein nature.

A produção de substâncias antagonistas por espécies bacterianas presentes em sistema de canais radiculares (SCR) infectados, tem um papel importante na colonização deste sítio. O objetivo deste estudo foi caracterizar parcialmente a substância antagonista produzida por amostra de Clostridium butyricum isolado de SCR infectados.A produção de substância antagonista foi avaliada pela técnica de difusão em ágar utilizando como bactérias indicadoras Fusobacterium nucleatum e Bifidobacterium adolescentis. Os parâmetros físico-químicos utilizados durante a caracterização parcial foram: pH, estabilidade térmica, susceptibilidade à ação das enzimas tripsina, a-quimiotripsina e papaína. Foi observada zona de inibição contra as duas amostras indicadoras e ainda foi demonstrado que ácidos e bacteriófagos não eram responsáveis por este fenômeno. A atividade inibitória mostrou-se diminuída em uma faixa de pH de 3.5 a 6.5 e estável em temperaturas de 60º, 70º e 100ºC, sendo completamente inativada quando exposta a 121ºC. A atividade antagonista foi resistente à ação das enzimas proteolíticas: tripsina, a-quimiotripsina e papaína. A substância antagonista produzida por C. butyricum é termoresistente e provavelmente de natureza não protéica.

IMPORTÂNCIA DA AVALIAÇÃO CLÍNICA NO DIAGNÓSTICO DE DOENÇA PERIODONTAL EM CÃES DA RAÇA PASTOR ALEMÃO

As doenças periodontais resultam de resposta inflamatória progressiva do hospedeiro ao acúmulo de placa bacteriana, incluindo os metabólitos no dente e nos tecidos gengivais. Assim, avaliou-se, clinicamente, o periodonto de cães da raça Pastor Alemão, levando-se em consideração presença de tártaro, sangramento à sondagem e mobilidade dentária em animais com sítios saudáveis e com doença periodontal. Para isso, utilizaram-se 29 cães,da raça Pastor Alemão, com idade variando de três a seis anos. Clinicamente, 27 (93,10%) cães apresentavam vários sítios com sintomatologia clínica de doença periodontal e somente dois apresentavam sítios saudáveis. Os dentes mais acometidos foram os molares, os pré-molares e os caninos,com sinais clínicos mais intensos nas superfícies dentárias e maior acúmulo de tártaro e placa bacteriana. Os resultados demonstraram a necessidade de se proceder a uma limpeza preventiva dos dentes, para proporcionar maior saúde para os cães. PALAVRAS-CHAVE: Periodonto, cães, dente.

Importância da avaliação clínica no diagnóstico de doença periodontal em cães da raça pastor alemão

As doenças periodontais resultam de resposta inflamatória progressiva do hospedeiro ao acúmulo de placa bacteriana, incluindo os metabólitos no dente e nos tecidos gengivais. Assim, avaliou-se, clinicamente, o periodonto de cães da raça Pastor Alemão, levando-se em consideração presença de tártaro, sangramento à sondagem e mobilidade dentária em animais com sítios saudáveis e com doença periodontal. Para isso, utilizaram-se 29 cães,da raça Pastor Alemão, com idade variando de três a seis anos. Clinicamente, 27 (93,10%) cães apresentavam vários sítios com sintomatologia clínica de doença periodontal e somente dois apresentavam sítios saudáveis. Os dentes mais acometidos foram os molares, os pré-molares e os caninos,com sinais clínicos mais intensos nas superfícies dentárias e maior acúmulo de tártaro e placa bacteriana. Os resultados demonstraram a necessidade de se proceder a uma limpeza preventiva dos dentes, para proporcionar maior saúde para os cães. PALAVRAS-CHAVE: Periodonto, cães, dente.

LEUKOTOXIC ACTIVITY OF ACTINOBACILLUS ACTINOMYCETEMCOMITANS ISOLATED FROM HUMAN AND NON-HUMAN PRIMATES

Actinobacillus actinomycetemcomitans is a clinically relevant periodontopathogenic Gram-negative coccobacillus that produces a leukotoxin of the RTX cytolysin family. In this study, we evaluated the leukotoxic activity of A. actinomycetemcomitans strains isolated from human and marmosets by Trypan blue exclusion and by the chemiluminescence assays. Among eight A. actinomycetemcomitans human strains studied, two (P2.17 and P8.12) were classified as high leukotoxin producers and among eight marmoset strains, one (M22.11) showed high leukotoxin production, as determined by Trypan blue exclusion assay. The reference strains ATCC 29523 and FDC Y4 respectively behaved like moderate and low producers. The chemiluminescence assay was used to evaluate the leukotoxic activity of M22.11 and P2.17 strains submitted to different growth conditions. Leukotoxic activity was detected on cells at the logarithmic phase and was similar under anaerobic and microaerophilic growth conditions. It was greatly reduced when cells were grown at glucose concentrations lower or higher than 0.75% (0.25% and 1.5%) in thioglycolate medium. Leukotoxin production mainly by the M22.11 strain was low in BHI broth, whereas production in TSB medium showed a similar level as in thioglycolate broth medium. Sodium bicarbonate at 10 mM did not affect leukotoxin production.

Actinobacillus actinomycetemcomitans é um cocobacilo Gram negativo, periodontopatógeno clinicamente importante, que produz uma leucotoxina pertencente à família das citolisinas RTX. Neste estudo, avaliou-se a atividade leucotóxica de amostras de A. actinomycetemcomitans isoladas de seres humanos e de calitriquídeos pelos métodos de exclusão de azul de Tripan e quimioluminescência. Duas (P2.17 e P8.12) entre oito amostras de A. actinomycetemcomitans isoladas de seres humanos, e uma (M22.11) entre 8 amostras isoladas de sagüis se apresentaram como altamente produtoras de leucotoxina, como determinado pelo teste de exclusão de azul de Tripan. As amostras de referências de A. actinomycetemcomitans ATCC 29523 e FDC Y4 se comportaram como média e baixa produtoras de leucotoxina, respectivamente. O teste de quimioluminescência foi usado para avaliar a atividade leucotóxica das amostras M22.11 e P2.17 submetidas a diferentes condições de crescimento. A atividade leucotóxica foi detectada em células durante a fase logarítmica e foi similar sob crescimento em anaerobiose e microaerofilia. A atividade leucotóxica foi muito reduzida quando as células foram crescidas em concentrações de glicose mais baixa e mais alta que 0,75% (0,25% e 1,5%), em meio tioglicolato. A produção de leucotoxina, especialmente pela amostra M22.11, foi mais baixa em caldo BHI, enquanto em meio TSB a produção foi em nível similar a aquele em meio tioglicolato. Bicarbonato de sódio 10mM não afetou a produção de leucotoxina.