Resynchronization improves reproductive efficiency of suckled Bos taurus beef cows subjected to spring-summer or autumn-winter breeding season in South Brazil.

The objective of the present study was to evaluate the effect of estrus resynchronization (RE) after the first Timed Artificial Insemination (TAI) protocol on reproductive efficiency of suckled Bos taurus beef cows (n = 1052; Angus and Brangus) subjected to two different breeding season (BS) in Rio Grande do Sul, Brazil. In experiment 1, cows were maintained in native pasture on conventional BS (spring-summer), and in experiment 2, cows were maintained in a grazing area cultivated in an integrated crop-livestock system on modified BS (autumn -winter). Experiment 1 cows (n = 92) were randomly distributed in two reproductive managements: 1) TAI at the first day of the BS (Day 0), followed by natural service (NS) on day 10 until the end of the BS (TAI + NS; n = 45) or, 2) TAI on day 0, followed by RE 22 days after the first TAI and then followed by NS on day 42 until the end of the BS (TAI + RE22 + NS; n = 47). Experiment 2 cows (n = 960) were subjected to one of four reproductive managements: 1) only NS for 90 days of the BS (NS; n = 266); 2) TAI on day 0, followed by NS on day 10 until the end of the BS (TAI + NS; n = 200); 3) TAI on day 0, followed by RE 22 days after the first TAI and then followed by NS on day 42 until the end of the BS (TAI + RE22 + NS; n = 249) or, 4) TAI on day 0, followed by RE 30 days after the first TAI and then followed by NS on day 50 until the end of the BS (TAI + RE30 + NS; n = 245). In experiment 1, conception rate after first TAI was similar for treatments TAI + NS (42%, 19/45) and TAI + RE22 + NS (48%, 23/47; P = 0.4107). Total pregnancy rates at day 60 of the BS were 55.6% and 66.6% for TAI + NS and TAI + RE22 + NS, respectively (P = 0.006). In experiment 2, only 3% of the females submitted to NS were pregnant 30 days after the onset of BS, a lower rate compared to other groups (TAI + NS = 40%; TAI + RE22 + NS = 39.8%; TAI + RE30 + NS = 40%; P < 0.001). At 70 days of the BS, the groups TAI + RE22 + NS and TAI + RE30 + NS obtained greater pregnancy rate (66.3% and 69.4%, respectively) than other groups (NS = 16.9%; TAI + NS = 48%; P < 0.001). Pregnancy rate at the end of BS was greater in RE groups (TAI + RE22 + NS = 81.5%; TAI + RE30 + NS = 83.7%) than the NS (45.1%) or TAI + NS (71%). In conclusion, resynchronization increases pregnancy rate per AI (P/AI) and reproductive efficiency of suckled Bos taurus beef cows during spring-summer or autumn-winter breeding season in natural pasture or cultivated pasture, respectively.

Viability of Pony Stallion Semen in Different Temperature and Dilution

Background: Artificial insemination and transport of cooled semen has been routinely used in equine industry in the past 20 years. However, more investigations are needed regarding the methods for long time storage in pony stallion semen. The effect of dilution and cooling temperature on pH, sperm motility, membrane integrity and mitochondrial activity were investigated before and after cooling of stallion semen.Materials, Methods & Results: Two ejaculates each from nine Brazilian ponies were diluted in a nonbuffered powder milk extender cooled at 5C or 15C for 48 h using three different dilutions (1:1, 1:2 or 1:3). Data were assessed by analysis of variance and the rate comparison was performed using the Duncan test. Samples diluted 1:1 at 5oC or 15C showed higher pH values (7.63 ± 0.34 e 7.57 ± 0.27) and lower progressive motility (10.3 ± 11.05, 17.08 ± 9.95). All samples cooled at 15C also showed lower incidence of morphologically altered spermatozoa (1:1 = 55.84%; 1:2 = 51.84%; 1:3 = 49.95%) [P 0.01]. Mitochondrial activity was higher on the 1:3 dilution (0.86 ± 0.19 nm) at 5C and on the 1:1 (0.89 ± 0.23 nm), 1:2 (0.93 ± 0.2 nm) and 1:3 (0.92 ± 0.2 nm) dilutions at 15C. Progressive motility was higher when semen was diluted 1:3 and cooled at 15C (42.22 ± 12.38; P 0.05). Considering mitochondrial activity, similar results were observed when different dil

Viability of Pony Stallion Semen in Different Temperature and Dilution

Background: Artificial insemination and transport of cooled semen has been routinely used in equine industry in the past 20 years. However, more investigations are needed regarding the methods for long time storage in pony stallion semen. The effect of dilution and cooling temperature on pH, sperm motility, membrane integrity and mitochondrial activity were investigated before and after cooling of stallion semen.Materials, Methods & Results: Two ejaculates each from nine Brazilian ponies were diluted in a nonbuffered powder milk extender cooled at 5C or 15C for 48 h using three different dilutions (1:1, 1:2 or 1:3). Data were assessed by analysis of variance and the rate comparison was performed using the Duncan test. Samples diluted 1:1 at 5oC or 15C showed higher pH values (7.63 ± 0.34 e 7.57 ± 0.27) and lower progressive motility (10.3 ± 11.05, 17.08 ± 9.95). All samples cooled at 15C also showed lower incidence of morphologically altered spermatozoa (1:1 = 55.84%; 1:2 = 51.84%; 1:3 = 49.95%) [P 0.01]. Mitochondrial activity was higher on the 1:3 dilution (0.86 ± 0.19 nm) at 5C and on the 1:1 (0.89 ± 0.23 nm), 1:2 (0.93 ± 0.2 nm) and 1:3 (0.92 ± 0.2 nm) dilutions at 15C. Progressive motility was higher when semen was diluted 1:3 and cooled at 15C (42.22 ± 12.38; P 0.05). Considering mitochondrial activity, similar results were observed when different dil

Viability of Pony Stallion Semen in Different Temperature and Dilution

Background: Artificial insemination and transport of cooled semen has been routinely used in equine industry in the past 20 years. However, more investigations are needed regarding the methods for long time storage in pony stallion semen. The effect of dilution and cooling temperature on pH, sperm motility, membrane integrity and mitochondrial activity were investigated before and after cooling of stallion semen.Materials, Methods & Results: Two ejaculates each from nine Brazilian ponies were diluted in a nonbuffered powder milk extender cooled at 5C or 15C for 48 h using three different dilutions (1:1, 1:2 or 1:3). Data were assessed by analysis of variance and the rate comparison was performed using the Duncan test. Samples diluted 1:1 at 5oC or 15C showed higher pH values (7.63 ± 0.34 e 7.57 ± 0.27) and lower progressive motility (10.3 ± 11.05, 17.08 ± 9.95). All samples cooled at 15C also showed lower incidence of morphologically altered spermatozoa (1:1 = 55.84%; 1:2 = 51.84%; 1:3 = 49.95%) [P 0.01]. Mitochondrial activity was higher on the 1:3 dilution (0.86 ± 0.19 nm) at 5C and on the 1:1 (0.89 ± 0.23 nm), 1:2 (0.93 ± 0.2 nm) and 1:3 (0.92 ± 0.2 nm) dilutions at 15C. Progressive motility was higher when semen was diluted 1:3 and cooled at 15C (42.22 ± 12.38; P 0.05). Considering mitochondrial activity, similar results were observed when different dil

Viability of Pony Stallion Semen in Different Temperature and Dilution

Background: Artificial insemination and transport of cooled semen has been routinely used in equine industry in the past 20 years. However, more investigations are needed regarding the methods for long time storage in pony stallion semen. The effect of dilution and cooling temperature on pH, sperm motility, membrane integrity and mitochondrial activity were investigated before and after cooling of stallion semen.Materials, Methods & Results: Two ejaculates each from nine Brazilian ponies were diluted in a nonbuffered powder milk extender cooled at 5C or 15C for 48 h using three different dilutions (1:1, 1:2 or 1:3). Data were assessed by analysis of variance and the rate comparison was performed using the Duncan test. Samples diluted 1:1 at 5oC or 15C showed higher pH values (7.63 ± 0.34 e 7.57 ± 0.27) and lower progressive motility (10.3 ± 11.05, 17.08 ± 9.95). All samples cooled at 15C also showed lower incidence of morphologically altered spermatozoa (1:1 = 55.84%; 1:2 = 51.84%; 1:3 = 49.95%) [P 0.01]. Mitochondrial activity was higher on the 1:3 dilution (0.86 ± 0.19 nm) at 5C and on the 1:1 (0.89 ± 0.23 nm), 1:2 (0.93 ± 0.2 nm) and 1:3 (0.92 ± 0.2 nm) dilutions at 15C. Progressive motility was higher when semen was diluted 1:3 and cooled at 15C (42.22 ± 12.38; P 0.05). Considering mitochondrial activity, similar results were observed when different dil

Viability of Pony Stallion Semen in Different Temperature and Dilution

Background: Artificial insemination and transport of cooled semen has been routinely used in equine industry in the past 20 years. However, more investigations are needed regarding the methods for long time storage in pony stallion semen. The effect of dilution and cooling temperature on pH, sperm motility, membrane integrity and mitochondrial activity were investigated before and after cooling of stallion semen.Materials, Methods & Results: Two ejaculates each from nine Brazilian ponies were diluted in a nonbuffered powder milk extender cooled at 5C or 15C for 48 h using three different dilutions (1:1, 1:2 or 1:3). Data were assessed by analysis of variance and the rate comparison was performed using the Duncan test. Samples diluted 1:1 at 5oC or 15C showed higher pH values (7.63 ± 0.34 e 7.57 ± 0.27) and lower progressive motility (10.3 ± 11.05, 17.08 ± 9.95). All samples cooled at 15C also showed lower incidence of morphologically altered spermatozoa (1:1 = 55.84%; 1:2 = 51.84%; 1:3 = 49.95%) [P 0.01]. Mitochondrial activity was higher on the 1:3 dilution (0.86 ± 0.19 nm) at 5C and on the 1:1 (0.89 ± 0.23 nm), 1:2 (0.93 ± 0.2 nm) and 1:3 (0.92 ± 0.2 nm) dilutions at 15C. Progressive motility was higher when semen was diluted 1:3 and cooled at 15C (42.22 ± 12.38; P 0.05). Considering mitochondrial activity, similar results were observed when different dil

Transporte de oócitos bovinos em meio de maturação sem controle de atmosfera gasosa

Oocytes (n=1177) aspirated from 2 to 8mm follicles obtained from bovine slaughterhouse ovaries (11 replications) were randomly distributed in four treatments. Oocytes were matured for 24h with modified TCM-199 Earle salts, plus 25mM bicarbonate, 25 mM HEPES, rFSH-h, Estrus Cow Serum (ECS), and piruvate at 39ºC, in incubator with 5% CO2 and saturated humidity (Control Group, n=296) or exposed to a simulated transport for 6 (T6, n=286), 12 (T12, n=294) or 18h (T18, n=301) in maturation medium containing TCM + HEPES, in a 39ºC water bath, with the same components used in the Control Group, but with 1mM bicarbonate. At the conclusion of each transport period, oocytes were transferred to dishes with maturation medium to reach 24h in incubator, under the same conditions described for the Control group. Fertilization was accomplished during 18h, with the same temperature and gaseous atmosphere, in FERT-TALP plus heparin. The insemination dose was 1x106 spermatozoa/mL, sorted by swim-up. Presumptive zygotes were cultured in SOF medium + 5% ECS for 8 days, in incubator at 39ºC using gasified bags with 5% CO2, 5% O2 and 90% N2. Cleavage rates did not differ between treatments. Embryonic development rates at D7 were similar for Control (20.9%), T6 (19.2%) and T12 (21.4%) groups, with a reduction (P 0.05) for group T18 (12.3%) when compared to Control and T12 groups. At D9, there was a lower production of expanded plus hatched blastocysts in T18 (P 0.05), without difference (P>0.05) in hatched blastocyst rate. The average number of cells of hatched blastocysts was similar (P>0.05) in Control (136), T6 (125.5) and T12 (126.8) groups. These results indicate the possibility of transporting bovine oocytes in maturation medium containing TCM + HEPES, without controlled gaseous atmosphere environment, at 39ºC, for up to 12 hours. This technique offers a practical and efficient alternative for the transport of bovine oocytes for in vitro production of bovine embryos (IVP).

Oócitos (n=1177) bovinos obtidos da aspiração de folículos com diâmetro entre 2 e 8mm, de ovários de matadouro foram divididos aleatoriamente em quatro tratamentos com 11 repetições. Os oócitos foram maturados por 24h em TCM-199 Sais de Earle, acrescido de 25mM de bicarbonato de sódio, 25mM de HEPES, rFHS-h, Soro de Vaca em Estro (SVE) e piruvato, em estufa a 39ºC, com 5% de CO2 em ar e umidade saturada (Grupo Controle, n=296) ou, submetidos ao transporte simulado por 6 (T6, n=286), 12 (T12, n=294) ou 18h (T18, n=301) em meio de maturação TCM+HEPES, em banho-maria a 39ºC, com os mesmos componentes utilizados para o Grupo Controle, porém com apenas 1mM de bicarbonato. Decorrido cada período de transporte, os mesmos foram transferidos para placas com meio de maturação, completando o período de 24h em estufa, nas mesmas condições do Grupo Controle. O período de fecundação foi de 18h em condições semelhantes de temperatura e atmosfera gasosa, em FERT-TALP acrescido de heparina, sendo a dose inseminante de 1x106 espermatozóides/mL, selecionados por migração ascendente. Os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOF + 5% SVE por 8 dias, em estufa a 39ºC, em bolsas gaseificadas com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2. Na avaliação da clivagem, não houve diferença entre os tratamentos. As taxas de desenvolvimento embrionário no dia 7 foram semelhantes para os grupos Controle (20,9%), T6 (19,2%) e T12 (21,4%), com uma redução (P 0,05) observada no grupo T18 (12,3%), em relação aos grupos Controle e T12. No dia 9, o T18 apresentou uma menor (P 0,05) produção de blastocistos expandidos mais eclodidos, em relação aos demais grupos, embora não tenha sido observada diferença (P>0,05) na taxa de eclosão. O número médio de células dos blastocistos eclodidos não diferiu (P>0,05) entre os grupos Controle (136), T6 (125,5) e T12 (126,8). Esses resultados indicam a possibilidade do transporte de oócitos bovinos em meio de maturação TCM+HEPES, sem controle da atmosfera gasosa, a 39ºC, pelo período de até 12h. Esta técnica oferece uma alternativa prática e eficiente para o transporte dos oócitos bovinos destinados à produção in vitro de embriões bovinos (PIV).

Produção in vitro de embriões bovinos com soro de égua ou de vaca em estro com ou sem a adição de LH/FSH

A thousand two hundread and seventy-one oocytes were allocated in four treatments, in order to evaluate the influence of the addition of FSH and LH on in vitro production of bovine embryos, with oestrous cow serum (OCS) or mare´s serum obtained at the first day of estrus (OMS). In all treatments oocytes were matured with TCM199 + 5.95mg/ml Hepes and 0.025mg/ml sodium pyruvate and 2.2mg/ml of sodium bicarbonate, supplemented with 10% OMS (ES), 10% of OCS (VS), 10% of OMS + LHb + rFSHh (EH) and 10% of OCS + LHb + rFSHh (VH). All the treatments groups were matured in a controlled incubator at 39ºC with 5% CO2 and saturated humidity for 22-24h. IVF was performed in TALP-FERT for 18-20h, with a pool of Bos taurus semen selected by swim up procedure in TALP-SPERM with 1x106 spermatozoa/ml dose, and cultured for 8 days under SOF medium + 5% OMS (ES and EH) or OCS (VS and VH). The 72% of cleavage rate obtained for treatment VH and 61% obtained in the VS group were significantly less (p 0.05) than treatments EH (80%), ES (80%). Blastocyst rates at D7 after insemination for treatments ES (32%), EH (28%) and VH (27%) were significantly superior than the 20% obtained on VS group (p 0.05). Evaluations at D9 demonstrated higher blastocyst rates in treatment ES (31%) and EH (29%) when compared with treatment VS (22%), but no differences were detected when compared to the VH (24%). These results suggest that the utilization of OCS, the supplementation with FSH and LH renders an increase on blastocyst rates and, that the utilization of MS, even without FSH and LH, shows similar results as those obtained with OCS plus hormones.

Mil duzentos e setenta e um oócitos foram divididos em 4 tratamentos com a finalidade de se avaliar a influência da adição de LH e FSH na produção in vitro de embriões bovinos com soro de vaca em estro (SVE) ou soro de éguas obtido no 1º dia do estro (SE). Independente do tratamento os oócitos foram maturados com TCM199 + 5,95mg/ml de Hepes, 0,025mg/ml de piruvato de sódio e 2,2mg/ml de bicarbonato de sódio, sendo adicionado 10% de soro de égua (ES), 10% de SVE (VS), 10% de soro de égua + 0,5mg/ml de hormônio luteinizante bovino (LHb) + 0,01UI/ml de hormônio folículo estimulante recombinante humano-rFSHh (EH) e 10% SVE + LHb + rFSHh (VH). Os oócitos assim tratados, foram maturados em estufa com 5% de CO2 a 39ºC sob umidade saturada por 22-24h. Depois, foram fecundados em TALP-FERT por 18-20h e cultivados por 8 dias em meio SOF + 5% de SE (ES e EH) ou SVE (VS e VH). As taxas de clivagem de 72% obtidas no grupo VH (229/316) e 61% no grupo VS (193/315) foram significativamente menores (p 0,05) que as dos grupos ES (80% - 254/317) e EH (80% - 257/323). A produção de embriões (blastocistos iniciais, blastocistos, blastocistos expandidos e eclodidos) no D7 após a inseminação para os grupos ES (32%), EH (28%) e VH (27%), foi significativamente superior aos 20% obtidos no VS (p 0,05). No D9, verificou-se uma diferença significativa (p 0,05) entre os grupos ES (31%) e EH (29%) quando comparados com o grupo VS (22%), mas não houve diferença quando comparamos com o VH (24%). A taxa de eclosão em D9 foi de 11% (ES), 11% (EH), 10% (VS) e 5% (VH). Não houve diferença entre as médias do número de células dos embriões (Blastocistos expandidos e eclodidos) obtidos no D9. Conclui-se, com estes resultados que, para a obtenção de taxas regulares de blastocistos, não seja necessária a adição de hormônios quando se utilize o soro de égua, e que os hormônios devam ser adicionados quando se utilize soro de vaca.

Transporte-maturação de oócitos bovinos em palhetas

A demanda pela aspiração folicular associada à produção in vitro de embriões, no Brasil, aumentou com o objetivo de acelerar o ganho genético do rebanho bovino. A técnica, no entanto, apresenta limitações, especialmente relacionadas ao tempo e às condições de transporte dos oócitos até o laboratório. Para avaliar o uso de palhetas de 0,25mL no transportematuração simulado, complexos cumulus-oócitos (CCO) de vacas de frigorífico foram maturados in vitro. No experimento I, efetuou-se a maturação em meio TCM-199, em placas de 4 poços, em estufa a 38,5C, 5%CO2, por 24h (grupo controle) e em palhetas, em meio TCM-Hepes, mantidas por 6h em banho-maria (grupo BM) ou garrafa térmica (grupo T), a 38,5C. Nestes dois grupos, a maturação foi completada em placas, por 18h, nas mesmas condições do grupo controle. No experimento II, simulouse o transporte em palhetas, em meio TCM-Hepes, a 38,5ºC, por 24h, em estufa (grupo palheta). O grupo controle foi semelhante ao do experimento I. A fecundação (=D0) foi efetuada em meio TALP-Fert, por 18h, e o cultivo foi efetuado em meio SOFaaci, por 8 dias, em ambos os experimentos. As taxas de blastocistos em D7, no experimento I, foram semelhantes (P>0,05) para os grupos controle (31%;97/312), BM (21%;64/301) e T (31%;94/298). No experimento II, não houve diferença (P>0,05) nas taxas de blastocistos em D7 entre os grupos controle (30%;44/145) e

Produção in vitro de embriões bovinos com soro de égua ou de vaca em estro com ou sem a adição de LH/FSH

A thousand two hundread and seventy-one oocytes were allocated in four treatments, in order to evaluate the influence of the addition of FSH and LH on in vitro production of bovine embryos, with oestrous cow serum (OCS) or mare´s serum obtained at the first day of estrus (OMS). In all treatments oocytes were matured with TCM199 + 5.95mg/ml Hepes and 0.025mg/ml sodium pyruvate and 2.2mg/ml of sodium bicarbonate, supplemented with 10% OMS (ES), 10% of OCS (VS), 10% of OMS + LHb + rFSHh (EH) and 10% of OCS + LHb + rFSHh (VH). All the treatments groups were matured in a controlled incubator at 39ºC with 5% CO2 and saturated humidity for 22-24h. IVF was performed in TALP-FERT for 18-20h, with a pool of Bos taurus semen selected by swim up procedure in TALP-SPERM with 1x106 spermatozoa/ml dose, and cultured for 8 days under SOF medium + 5% OMS (ES and EH) or OCS (VS and VH). The 72% of cleavage rate obtained for treatment VH and 61% obtained in the VS group were significantly less (p 0.05) than treatments EH (80%), ES (80%). Blastocyst rates at D7 after insemination for treatments ES (32%), EH (28%) and VH (27%) were significantly superior than the 20% obtained on VS group (p 0.05). Evaluations at D9 demonstrated higher blastocyst rates in treatment ES (31%) and EH (29%) when compared with treatment VS (22%), but no differences were detected when compared to the VH (24%). These results suggest that the utilization of OCS, the supplementation with FSH and LH renders an increase on blastocyst rates and, that the utilization of MS, even without FSH and LH, shows similar results as those obtained with OCS plus hormones.

Mil duzentos e setenta e um oócitos foram divididos em 4 tratamentos com a finalidade de se avaliar a influência da adição de LH e FSH na produção in vitro de embriões bovinos com soro de vaca em estro (SVE) ou soro de éguas obtido no 1º dia do estro (SE). Independente do tratamento os oócitos foram maturados com TCM199 + 5,95mg/ml de Hepes, 0,025mg/ml de piruvato de sódio e 2,2mg/ml de bicarbonato de sódio, sendo adicionado 10% de soro de égua (ES), 10% de SVE (VS), 10% de soro de égua + 0,5mg/ml de hormônio luteinizante bovino (LHb) + 0,01UI/ml de hormônio folículo estimulante recombinante humano-rFSHh (EH) e 10% SVE + LHb + rFSHh (VH). Os oócitos assim tratados, foram maturados em estufa com 5% de CO2 a 39ºC sob umidade saturada por 22-24h. Depois, foram fecundados em TALP-FERT por 18-20h e cultivados por 8 dias em meio SOF + 5% de SE (ES e EH) ou SVE (VS e VH). As taxas de clivagem de 72% obtidas no grupo VH (229/316) e 61% no grupo VS (193/315) foram significativamente menores (p 0,05) que as dos grupos ES (80% - 254/317) e EH (80% - 257/323). A produção de embriões (blastocistos iniciais, blastocistos, blastocistos expandidos e eclodidos) no D7 após a inseminação para os grupos ES (32%), EH (28%) e VH (27%), foi significativamente superior aos 20% obtidos no VS (p 0,05). No D9, verificou-se uma diferença significativa (p 0,05) entre os grupos ES (31%) e EH (29%) quando comparados com o grupo VS (22%), mas não houve diferença quando comparamos com o VH (24%). A taxa de eclosão em D9 foi de 11% (ES), 11% (EH), 10% (VS) e 5% (VH). Não houve diferença entre as médias do número de células dos embriões (Blastocistos expandidos e eclodidos) obtidos no D9. Conclui-se, com estes resultados que, para a obtenção de taxas regulares de blastocistos, não seja necessária a adição de hormônios quando se utilize o soro de égua, e que os hormônios devam ser adicionados quando se utilize soro de vaca.

Transporte de oócitos bovinos em meio de maturação sem controle de atmosfera gasosa

Oocytes (n=1177) aspirated from 2 to 8mm follicles obtained from bovine slaughterhouse ovaries (11 replications) were randomly distributed in four treatments. Oocytes were matured for 24h with modified TCM-199 Earle salts, plus 25mM bicarbonate, 25 mM HEPES, rFSH-h, Estrus Cow Serum (ECS), and piruvate at 39ºC, in incubator with 5% CO2 and saturated humidity (Control Group, n=296) or exposed to a simulated transport for 6 (T6, n=286), 12 (T12, n=294) or 18h (T18, n=301) in maturation medium containing TCM + HEPES, in a 39ºC water bath, with the same components used in the Control Group, but with 1mM bicarbonate. At the conclusion of each transport period, oocytes were transferred to dishes with maturation medium to reach 24h in incubator, under the same conditions described for the Control group. Fertilization was accomplished during 18h, with the same temperature and gaseous atmosphere, in FERT-TALP plus heparin. The insemination dose was 1x106 spermatozoa/mL, sorted by swim-up. Presumptive zygotes were cultured in SOF medium + 5% ECS for 8 days, in incubator at 39ºC using gasified bags with 5% CO2, 5% O2 and 90% N2. Cleavage rates did not differ between treatments. Embryonic development rates at D7 were similar for Control (20.9%), T6 (19.2%) and T12 (21.4%) groups, with a reduction (P 0.05) for group T18 (12.3%) when compared to Control and T12 groups. At D9, there was a lower production of expanded plus hatched blastocysts in T18 (P 0.05), without difference (P>0.05) in hatched blastocyst rate. The average number of cells of hatched blastocysts was similar (P>0.05) in Control (136), T6 (125.5) and T12 (126.8) groups. These results indicate the possibility of transporting bovine oocytes in maturation medium containing TCM + HEPES, without controlled gaseous atmosphere environment, at 39ºC, for up to 12 hours. This technique offers a practical and efficient alternative for the transport of bovine oocytes for in vitro production of bovine embryos (IVP).

Oócitos (n=1177) bovinos obtidos da aspiração de folículos com diâmetro entre 2 e 8mm, de ovários de matadouro foram divididos aleatoriamente em quatro tratamentos com 11 repetições. Os oócitos foram maturados por 24h em TCM-199 Sais de Earle, acrescido de 25mM de bicarbonato de sódio, 25mM de HEPES, rFHS-h, Soro de Vaca em Estro (SVE) e piruvato, em estufa a 39ºC, com 5% de CO2 em ar e umidade saturada (Grupo Controle, n=296) ou, submetidos ao transporte simulado por 6 (T6, n=286), 12 (T12, n=294) ou 18h (T18, n=301) em meio de maturação TCM+HEPES, em banho-maria a 39ºC, com os mesmos componentes utilizados para o Grupo Controle, porém com apenas 1mM de bicarbonato. Decorrido cada período de transporte, os mesmos foram transferidos para placas com meio de maturação, completando o período de 24h em estufa, nas mesmas condições do Grupo Controle. O período de fecundação foi de 18h em condições semelhantes de temperatura e atmosfera gasosa, em FERT-TALP acrescido de heparina, sendo a dose inseminante de 1x106 espermatozóides/mL, selecionados por migração ascendente. Os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOF + 5% SVE por 8 dias, em estufa a 39ºC, em bolsas gaseificadas com 5% CO2, 5% O2 e 90% N2. Na avaliação da clivagem, não houve diferença entre os tratamentos. As taxas de desenvolvimento embrionário no dia 7 foram semelhantes para os grupos Controle (20,9%), T6 (19,2%) e T12 (21,4%), com uma redução (P 0,05) observada no grupo T18 (12,3%), em relação aos grupos Controle e T12. No dia 9, o T18 apresentou uma menor (P 0,05) produção de blastocistos expandidos mais eclodidos, em relação aos demais grupos, embora não tenha sido observada diferença (P>0,05) na taxa de eclosão. O número médio de células dos blastocistos eclodidos não diferiu (P>0,05) entre os grupos Controle (136), T6 (125,5) e T12 (126,8). Esses resultados indicam a possibilidade do transporte de oócitos bovinos em meio de maturação TCM+HEPES, sem controle da atmosfera gasosa, a 39ºC, pelo período de até 12h. Esta técnica oferece uma alternativa prática e eficiente para o transporte dos oócitos bovinos destinados à produção in vitro de embriões bovinos (PIV).

Transporte-maturação de oócitos bovinos em palhetas

A demanda pela aspiração folicular associada à produção in vitro de embriões, no Brasil, aumentou com o objetivo de acelerar o ganho genético do rebanho bovino. A técnica, no entanto, apresenta limitações, especialmente relacionadas ao tempo e às condições de transporte dos oócitos até o laboratório. Para avaliar o uso de palhetas de 0,25mL no transportematuração simulado, complexos cumulus-oócitos (CCO) de vacas de frigorífico foram maturados in vitro. No experimento I, efetuou-se a maturação em meio TCM-199, em placas de 4 poços, em estufa a 38,5C, 5%CO2, por 24h (grupo controle) e em palhetas, em meio TCM-Hepes, mantidas por 6h em banho-maria (grupo BM) ou garrafa térmica (grupo T), a 38,5C. Nestes dois grupos, a maturação foi completada em placas, por 18h, nas mesmas condições do grupo controle. No experimento II, simulouse o transporte em palhetas, em meio TCM-Hepes, a 38,5ºC, por 24h, em estufa (grupo palheta). O grupo controle foi semelhante ao do experimento I. A fecundação (=D0) foi efetuada em meio TALP-Fert, por 18h, e o cultivo foi efetuado em meio SOFaaci, por 8 dias, em ambos os experimentos. As taxas de blastocistos em D7, no experimento I, foram semelhantes (P>0,05) para os grupos controle (31%;97/312), BM (21%;64/301) e T (31%;94/298). No experimento II, não houve diferença (P>0,05) nas taxas de blastocistos em D7 entre os grupos controle (30%;44/145) e

Transporte-maturação de oócitos bovinos em palhetas

A demanda pela aspiração folicular associada à produção in vitro de embriões, no Brasil, aumentou com o objetivo de acelerar o ganho genético do rebanho bovino. A técnica, no entanto, apresenta limitações, especialmente relacionadas ao tempo e às condições de transporte dos oócitos até o laboratório. Para avaliar o uso de palhetas de 0,25mL no transportematuração simulado, complexos cumulus-oócitos (CCO) de vacas de frigorífico foram maturados in vitro. No experimento I, efetuou-se a maturação em meio TCM-199, em placas de 4 poços, em estufa a 38,5C, 5%CO2, por 24h (grupo controle) e em palhetas, em meio TCM-Hepes, mantidas por 6h em banho-maria (grupo BM) ou garrafa térmica (grupo T), a 38,5C. Nestes dois grupos, a maturação foi completada em placas, por 18h, nas mesmas condições do grupo controle. No experimento II, simulouse o transporte em palhetas, em meio TCM-Hepes, a 38,5ºC, por 24h, em estufa (grupo palheta). O grupo controle foi semelhante ao do experimento I. A fecundação (=D0) foi efetuada em meio TALP-Fert, por 18h, e o cultivo foi efetuado em meio SOFaaci, por 8 dias, em ambos os experimentos. As taxas de blastocistos em D7, no experimento I, foram semelhantes (P>0,05) para os grupos controle (31%;97/312), BM (21%;64/301) e T (31%;94/298). No experimento II, não houve diferença (P>0,05) nas taxas de blastocistos em D7 entre os grupos controle (30%;44/145) e

Genetic variability in the brazilian criollo horse breed

Allelic frequencies of 7 blood groups and 8 protein systems were determined in 6 herds of Criollo horse breed raised in Rio Grande do Sul, Brazil. Analysis of these frequencies showed a significant isolation component (Fst = 0.0866; p 0.01) and construction of dendogram using Nei´s D confirmed this difference among the 6 herds. The highest values measuring genetic variability on 15 blood types were average heterozygosity: 0.4631; total number of alleles: 87 and probability of exclusion: 98%. When all herds were considered together, the inbreeding level (Fis) was zero. These results indicate that the Criollo horses have a large genetic variability.

As freqüências alélicas de sete sistemas de grupos sangüíneos e oito sistemas protéicos foram determinadas em seis rebanhos de cavalos Crioulos criados no Rio Grande do Sul, Brasil. A análise destas freqüências indicou que os rebanhos apresentaram um significativo componente devido ao isolamento (Fst = 0,0866; p 0,01) e esta diferença foi confirmada a partir do dendograma construído, utilizando-se a distância de Nei. Na medição da variabilidade genética, utilizando os 15 sistemas de tipagem sangüínea, os valores mais altos encontrados foram heterozigose média: 0.4631; número total de alelos :87 e probabilidade de exclusão de um parentesco indicado: 98%. Quando todas os rebanhos foram considerada na análise, o nível de endocruzamento (Fis) foi zero. Estes resultados indicam que os cavalos Crioulos apresentam ampla variabilidade genética.

Genetic variability in the brazilian criollo horse breed

Allelic frequencies of 7 blood groups and 8 protein systems were determined in 6 herds of Criollo horse breed raised in Rio Grande do Sul, Brazil. Analysis of these frequencies showed a significant isolation component (Fst = 0.0866; p 0.01) and construction of dendogram using Nei´s D confirmed this difference among the 6 herds. The highest values measuring genetic variability on 15 blood types were average heterozygosity: 0.4631; total number of alleles: 87 and probability of exclusion: 98%. When all herds were considered together, the inbreeding level (Fis) was zero. These results indicate that the Criollo horses have a large genetic variability.

As freqüências alélicas de sete sistemas de grupos sangüíneos e oito sistemas protéicos foram determinadas em seis rebanhos de cavalos Crioulos criados no Rio Grande do Sul, Brasil. A análise destas freqüências indicou que os rebanhos apresentaram um significativo componente devido ao isolamento (Fst = 0,0866; p 0,01) e esta diferença foi confirmada a partir do dendograma construído, utilizando-se a distância de Nei. Na medição da variabilidade genética, utilizando os 15 sistemas de tipagem sangüínea, os valores mais altos encontrados foram heterozigose média: 0.4631; número total de alelos :87 e probabilidade de exclusão de um parentesco indicado: 98%. Quando todas os rebanhos foram considerada na análise, o nível de endocruzamento (Fis) foi zero. Estes resultados indicam que os cavalos Crioulos apresentam ampla variabilidade genética.

Produção in vitro de embriões bovinos com soro de égua em diferentes fases do estro

A produção in vitro de embriões (PIV) bovinos é atrativa pelo baixo custo de produção, uso na clonagem de células somáticas e embriões, produção de vacas transgênicas e na pesquisa básica. As proteínas acrescidas aos meios de cultivo parecem ser um dos principais fatores limitantes nas diferentes fases da produção, e são representadas, em primeira instância, por materiais de origem biológica que fornecem aos embriões nutrientes e outros fatores pouco conhecidos. Este trabalho avaliou o uso do soro de égua, obtido em diferentes fase do estro na PIV. Complexos cumulus-oócitos (CCO) obtidos de ovários bovinos em matadouro foram maturados por 22-24h, em estufa (5% de CO2 , umidade saturada e 39oC) em TCM-199 + HEPES + LHb + rFSHh com 10% de soro de égua coletado no primeiro dia de estro (T1), 24-48h antes da ovulação (T2) e 24-48h pós-ovulação (T3), servindo como controle (C) o mesmo meio com soro de vaca em estro. Os CCO foram fecundados em TALP-FERT sob as mesmas condições e cultivados em fluido sintético de oviduto (SOF) + 5% do soro dos T1, T2, T3 ou C, por 8 dias, sob óleo mineral. A taxa de clivagem foi similar entre os tratamentos. A produção de blastocistos no D7 nos tratamentos (T1=21%, T2=21% e T3=20%) foi maior (P

Vitrification of oocytes and in vitro produced bovine embryos exposed to cytochalasin B / Vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro e expostos à citocalasina B

In this study, the influence of cytochalasin B on the survival and development after vitrification of oocytes and in vitro produced (IVP) bovine blastocysts was evaluated. In the Experiment I, 956 oocytes were matured for 22h and were immediately vitrified (Vitri treatment) or exposed for 15-20 minutes, to 7.5µg/ml (CB7.5Vitri treatment) or 45µg/ml (CB45Vitri treatment) cytochalasin B solutions, before vitrification. After 30 seconds of exposure to SV1 [400µl TCM-Hepes with 10% fetal serum (SF), 50µl ethylene glycol (EG) and 50µl DMSO], and 20 seconds to SV2 (300µl trehalose 1,0M + 20% SF, 100µl EG and 100µl DMSO) solutions, the oocytes were vitrified in Open Pulled Straws (OPS). The rewarming was performed at 37-38ºC in two steps of 5 minutes each, into 0.3 and 0.15M trehalose solutions, respectively. There was no difference (P>;0.05) in the cleavage and embryo rates between Vitri, Cito7.5Vitri and Cito45Vitri treatments, which were inferior to control group (P;0.05), which were lower than those observed in the Control group (P 0.05). The results show that, independently of dose studied (7.5 or 45mg/ml), cytochalasin B has not a beneficial effect to the vitrification of oocytes and IVP bovine blastocysts.

Foi avaliada a influência da citocalasina B na vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro. No Experimento I, 956 oócitos foram maturados por 22h, sendo imediatamente vitrificados (tratamento Vitri) ou expostos por 15 a 20 minutos, à solução com 7,5µg/mL (tratamento CB7,5Vitri) ou 45µg/mL (tratamento CB45Vitri) de citocalasina B, antes da vitrificação. Após 30 segundos de exposição à SV1 [400µl TCM-Hepes com 10% soro fetal (SF), 50µl etilenoglicol (EG) e 50µl DMSO], e 20 segundos à SV2 (300µl trealose 1,0M + 20% SF, 100µl EG e 100µl DMSO), os oócitos foram vitrificados em palhetas estiradas (OPS). O reaquecimento foi realizado a 37-38ºC em duas etapas de 5 minutos cada, em trealose 0,3M e 0,15M. Não houve diferenças (P>;0,05) nos percentuais de clivagem e desenvolvimento embrionário entre os tratamentos Vitri, Cito7,5Vitri e Cito45Vitri, os quais foram inferiores (P;0,05) no percentual de re-expansão e eclosão entre os grupos Vitri e CB45Vitri, os quais foram inferiores (P 0,05) ao grupo controle. Os resultados indicam que, independentemente da dose utilizada, a exposição a citocalasina B não produz efeito benéfico na vitrificação de oócitos ou blastocistos bovinos produzidos in vitro.

Produção in vitro de embriões bovinos com soro de égua em diferentes fases do estro

A produção in vitro de embriões (PIV) bovinos é atrativa pelo baixo custo de produção, uso na clonagem de células somáticas e embriões, produção de vacas transgênicas e na pesquisa básica. As proteínas acrescidas aos meios de cultivo parecem ser um dos principais fatores limitantes nas diferentes fases da produção, e são representadas, em primeira instância, por materiais de origem biológica que fornecem aos embriões nutrientes e outros fatores pouco conhecidos. Este trabalho avaliou o uso do soro de égua, obtido em diferentes fase do estro na PIV. Complexos cumulus-oócitos (CCO) obtidos de ovários bovinos em matadouro foram maturados por 22-24h, em estufa (5% de CO2 , umidade saturada e 39oC) em TCM-199 + HEPES + LHb + rFSHh com 10% de soro de égua coletado no primeiro dia de estro (T1), 24-48h antes da ovulação (T2) e 24-48h pós-ovulação (T3), servindo como controle (C) o mesmo meio com soro de vaca em estro. Os CCO foram fecundados em TALP-FERT sob as mesmas condições e cultivados em fluido sintético de oviduto (SOF) + 5% do soro dos T1, T2, T3 ou C, por 8 dias, sob óleo mineral. A taxa de clivagem foi similar entre os tratamentos. A produção de blastocistos no D7 nos tratamentos (T1=21%, T2=21% e T3=20%) foi maior (P

Produção in vitro de embriões bovinos com soro de égua em diferentes fases do estro

A produção in vitro de embriões (PIV) bovinos é atrativa pelo baixo custo de produção, uso na clonagem de células somáticas e embriões, produção de vacas transgênicas e na pesquisa básica. As proteínas acrescidas aos meios de cultivo parecem ser um dos principais fatores limitantes nas diferentes fases da produção, e são representadas, em primeira instância, por materiais de origem biológica que fornecem aos embriões nutrientes e outros fatores pouco conhecidos. Este trabalho avaliou o uso do soro de égua, obtido em diferentes fase do estro na PIV. Complexos cumulus-oócitos (CCO) obtidos de ovários bovinos em matadouro foram maturados por 22-24h, em estufa (5% de CO2 , umidade saturada e 39oC) em TCM-199 + HEPES + LHb + rFSHh com 10% de soro de égua coletado no primeiro dia de estro (T1), 24-48h antes da ovulação (T2) e 24-48h pós-ovulação (T3), servindo como controle (C) o mesmo meio com soro de vaca em estro. Os CCO foram fecundados em TALP-FERT sob as mesmas condições e cultivados em fluido sintético de oviduto (SOF) + 5% do soro dos T1, T2, T3 ou C, por 8 dias, sob óleo mineral. A taxa de clivagem foi similar entre os tratamentos. A produção de blastocistos no D7 nos tratamentos (T1=21%, T2=21% e T3=20%) foi maior (P

Laparoscopic approach of the mare as an aid in reproductive assisted technology / Abordagem laparoscópica na égua como meio auxiliar nas técnicas de reprodução assistida

Laparoscopy is a poorly explored tool for equine assisted reproduction techniques, despite its use in man, zoo and domestic animals. This study had the objective to evaluate the possibility and offer basis for cannulation of the oviduct and its future application in gamete and embryo transfer programs in this species. Seventeen standing laparoscopies were accomplished in ten mares, each ovary approached from its ipsolateral flank. After identification of the uterine tube, the infundibulum was gently tractioned and a catheter advanced in direction of the abdominal ostium of the uterine tube to the ampulla where 250 µL of culture medium (Dulbecco"s - PBS) were deposited. The laparoscopic technique associated with assisted reproduction in the mare can be considered pioneer and have the potential of lowering costs with maintenance of receptors by taking advantage of repetitive cycles, which is impossible by means of the conventional approach through laparotomy. This cost is one of the main obstacles for the commercial application of assisted reproduction techniques in horses.

A laparoscopia é uma ferramenta pouco explorada nas técnicas assistidas da reprodução em eqüinos, ao contrário do que já ocorre com o homem, animais de zoológicos e domésticos. Este estudo objetivou verificar a possibilidade de oferecer bases para a canulação do oviduto e sua futura aplicação em programas de transferência de gametas e embriões nesta espécie. Foram realizadas 17 laparoscopias em 10 éguas mantidas em estação onde cada ovário foi abordado pelo flanco ipsolateral. Após identificação da tuba uterina, o infundibulum foi gentilmente tracionado e um cateter avançado em direção ao óstio abdominal da tuba uterina para a ampola, onde foram depositados 250 µl de meio de cultivo (Dulbecco"s - PBS). A utilização da técnica laparoscópica em reprodução assistida na égua pode ser considerada pioneira e tem o potencial de diminuir os custos de manutenção de receptoras através do aproveitamento de ciclos repetidos, o que não é possível pela abordagem convencional através de laparotomia. Este custo é um dos principais entraves à aplicação comercial das técnicas assistidas da reprodução em eqüinos.